全面性癫癎伴高热惊厥附加症基因定位及GABRA6基因测序研究

目的　对全面癫伴高热惊厥附加症 (GEFS )家系进行基因定位 ,并对候选基因进行测序研究。方法　用连锁分析的方法对GEFS 家系进行研究 ;设计GABRA6外显子 内含子交界处全部 9对内含子引物 ,采用Sanger双脱氧链终止法 ,对GABRA6PCR测序。 结果　在 5 q34区域最大LOD值 3.815。GABRA6基因测序显示外显子 8有一C/G多态性。结论　GEFS 症致病基因在 5 q34区域取得了肯定的连锁关系。在该研究的两家系未发现GABRA6基因突变 ;所显示的单个碱基多态性对其他癫家系的连锁分析及其他癫综合征分子遗传学机制的研究均有意义     

良性家族性婴儿惊厥一家系基因定位及钾离子通道基因测序研究

目的：对一良性家族性婴儿惊厥家系进行基因定位，并对候选基因钾离子通道基因KCNQ2进行测序分析。方法：共抽取14例血样，包括全部9例患者。同时对家系全部成员行脑电图、全身及神经系统检查。在19qD19S245至D19S250间选择6对微卫星标记进行连锁分析。KCNQ2基因外显子测序引物序列采用Biervert等所报道的序列。结果：该家系两点间连锁结果排除了与19q及8q24连锁的可能。在20q13.3(D20S480)最大LOD值为0.60（外显率90%）。染色体单体型分析提示可能与20q13.3连锁。KCNQ2基因测序发现外显子6有一C/T杂合突变多态性，外显子17有1个A/C错义多态性，内含子14人一4个碱基插入多态性。结论：该家系的连锁结果排除了与19q的连锁可能，提示BFIC的遗传多态性。该家系所发现的多态性变化对其他癫痫家系的连锁分析及其他癫综合征分子遗传学机制的研究，均有重要意义。     

全面性癫癎伴热性惊厥附加症家系GABRB2基因测序研究

目的对全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS )侯选基因GABRB2进行测序研究。方法设计GABRB2外显子-内含子交界处内含子引物,采用PCR直接测序法,对一GEFS 家系GABRB2编码区全部11个外显子进行测序分析。结果患儿GABRB2基因外显子2,mRNA第133个碱基发现一新的C/G多态性。结论该家系未发现GABRB2基因编码区的突变;所显示的mRNA的单个碱基多态性对以后其他癫家系的连锁分析及GABRB2 mRNA、基因功能研究均有重要意义。     

全面性癫痫伴热性惊厥附加症6家系SCN1B基因突变筛查

目的探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系SCN1B基因突变情况。方法共收集GEFS＋家系6个,采集40份外周血,并取健康对照组外周血50份。提取基因组DNA,设计7对引物,进行聚合酶链反应（PCR）扩增,琼脂糖凝胶电泳,选取符合条件的PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行单链构象多态性分析,对个别PCR产物进行双向测序。结果6个先证者和50名健康对照进行SCN1B的5对外显子筛选时,均未发现异常带出现。6个先证者的PCR产物测序结果与基因组序列相比对,也未发现碱基改变。结论全面性癫痫伴热性惊厥附加症是一种复杂综合征,本组家系中未发现SCN1B基因突变,GEFS^＋具有遗传异质性。     

Kartagener综合征DNAI1、DNAH5基因研究

目的寻找Kartagener综合征患儿DNAI1、DNAH5基因突变位点,初步探讨Kartagener综合征的遗传机制。方法2006年12月至2007年3月在首都医科大学附属北京儿童医院临床确诊的4例Kartagener综合征患儿和其中2个家族成员的外周血中提取DNA,并对DNAI1基因的所有20个外显子、DNAH5基因的外显子34、50、63、76、77进行PCR扩增,对扩增产物进行直接测序,测序结果与正常序列比对。结果未发现DNAI1基因外显子、DNAH5基因外显子34、50、63、76、77及相邻内含子剪接位点的突变。结论在研究的4例Kartagener综合征患儿和2个家族中未发现DNAI1基因外显子、DNAH5基因外显子34、50、63、76、77及相邻内含子剪接位点的突变。     

黏多糖贮积症Ⅱ型一家系IDS基因分析及产前诊断

目的 确定黏多糖贮积症Ⅱ型(Mucopolysaccharidosis type Ⅱ,MPS Ⅱ)一家系的致病基因突变,并对高危胎儿进行产前诊断.方法 应用聚合酶链反应和直接测序的方法,对先证者、胎儿及部分家系成员艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,IDS)基因的所有外显子及其与内含子交界处序列进行检测;对测序发现的性质未知的碱基改变采用高效液相色谱技术(denatruring high-performance liquid chromatography,DHPLC)在正常人群中进行筛查.结果 检测到先证者IDS基因3个碱基改变:5号外显子c.684A>G,6号外显子c.851C>T,7号外显子c.892C>T;先证者母亲和外祖母的IDS基因存在c.684A>G杂合改变,c.851C>T杂合改变及c.892C>T杂合改变;100例家系外正常男性未发现IDS基因5号外显子c.684A>G和6号外显子c.851C>T的碱基改变;胎儿基因型与先证者相同.结论 IDS基因c.892C>T突变是该MPS Ⅱ患者的主要致病原因;产前诊断证明胎儿为男性患病胎儿.     

2例神经退行性变伴脑铁沉积症5型患儿临床及遗传学分析

目的探讨神经退行性变伴脑铁沉积症5型(NBIA5)患儿的临床及遗传学特征。方法分析2例NBIA5患儿临床表现及影像学结果,并用全外显子检测技术对患儿及家系进行WDR45基因测序。结果患儿分别为10个月男性和3岁10个月女性,均有全面性发育迟缓。1例有疑似癫痫发作史,MRI提示脑实质进行性萎缩;另1例有癫痫病史,MRI提示双侧苍白球T2WI及T2Flair上信号稍高。基因测序显示均存在WDR45基因突变,1例为未见报道的第6外显子c.276-c 277 insC移码突变,另1例为已有报道的第3外显子c. 19 CT提前终止;2例患儿父母均为WDR45野生型。结论 WDR45全外显子基因测序结合病史及MRI可诊断NBIA5。     

全面性癫痫伴热性惊厥附加症研究进展

全面性癫痫伴热性惊厥附加症（GEFS^＋）是国际抗癫痫联盟新近提出的一种新的癫痫综合征。GEFS^＋的发作形式具有惊人的异质性，既可呈典型的热性惊厥，也可为热性惊厥附加症（FS^＋），还可为FS^＋伴失神发作、FS^＋伴肌阵挛发作、FS^＋伴失张力发作、FS^＋伴颞叶癫痫及更为严重的肌阵挛站立不能性癫痫和婴儿严重肌阵挛性癫痂等发作形式。在家系分析的基础上，目前GEFS^＋的遗传学研究主要集中在基因定位方面，许多研究表明GEFS^＋与编码电压依赖性Na^＋通道的基因（SCN1A、SCN1B、SCN2A）和γ-氨基丁酸（GABA）受体基因（GABRG2、GABRD）的突变有关。现就GEFS^＋的概念、临床表现、遗传学研究、诊断等进行综述，旨在提高对本病的认识。     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良的基因诊断研究

目的 探讨应用连锁分析和基因测序方法对X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(Xinked spondylepiphyseal dysplasia tarda,SEDL)进行基因诊断的可行性。方法 利用与SEDL基因毗邻的微卫星遗传标记DXSl6多态性对一个SEDL大家系的21名成员进行连锁分析,确定与该家系SEDL致病基因连锁的DXSl6等位基因型,对家系中的年轻女性和年幼男性进行基因诊断。为探讨连锁分析诊断的准确性,随后对SEDL基因编码外显子3—6进行PCR扩增产物双向直接测序以确定导致该家系发病的SEDL基因突变型,通过检测致病基因对待诊对象进行直接诊断。结果 21名家系成员的连锁分析结果显示与致病基因连锁的DXSl6是D2等位基因,6位待诊对象中IVt4、IVl9、IV21、V7各有一个DXSl6D2等位基因,表明她们是携带者;而IV23和V4不具有与致病基因连锁的DXSl6等位基因,表明她(他)们是正常人。对21名成员的DNA测序证实该家系的致病突变是首次发现的SEDL基因第2内含子剪接受体处IVS2-2A→C突变。待诊对象IVl4、IVl9、IV21、V7携带该突变,IV23和V4基因型正常。基因测序和连锁分析的诊断结果完全一致。结论 连锁分析用于SEDL基因诊断简便、快速、花费少、与基因测序方法一样准确,解决了长期以来SEDL症状前患者和潜在女性携带者无法诊断的难题,有重要的临床价值。     

转录辅助调节因子HCFC1突变致罕见X连锁甲基丙二酸尿症CblX型一家系报告

目的探讨X连锁甲基丙二酸尿症CblX家系的临床及基因特点。方法回顾性分析1例经血液及尿液分析发现甲基丙二酸尿症,并采用靶向捕获二代测序进行HCFC1基因分析诊断的X连锁甲基丙二酸尿症患儿的临床资料。结果患儿,男,于2月龄时出现抽搐,智力运动障碍,5月龄时表现癫痫、重度发育落后,尿甲基丙二酸、血液丙酰肉碱增高,血浆总同型半胱氨酸增高,符合甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症。甲基丙二酸尿症相关常染色体基因分析未见突变,X染色体转录辅助调节因子HCFC1第3外显子存在c.344C??T(p.Ala115Val)半合子突变,证实为CblX型甲基丙二酸尿症。患儿父母健康,曾有一子生后重度智力、运动障碍,合并难治性癫痫,于6月龄夭折。患儿母亲携带相同的突变,尿液可检出少量甲基丙二酸,血浆同型半胱氨酸轻度增高。患儿父亲未携带突变。结论以新一代测序技术首次确诊我国1例X连锁CblX型甲基丙二酸尿症家系。     

全面性癫(间)伴热性惊厥附加症的分子遗传学研究进展

全面性癫痫伴热性惊厥附加症（GEFS^＋）是一种常见的全面性癫痫综合征，该综合征由离子通道基因突变所引起。目前，发现与GEFS^＋相关的离子通道有2个，其中1个是电压门控钠通道，它编码SCN1B、SCN1A和SCN2A基因；另1个是配体门控γ-氨基丁酸（GABA）的受体，它编码GABRG2和GABRD基因。研究GEFS^＋的分子遗传学特点有助于癫痫的基因诊断及开发新的抗癫痫药物。     

常染色体显性局灶节段肾小球硬化一家系INF2基因及临床特征

目的 分析1个常染色体显性局灶节段肾小球硬化（AD-FSGS）家系的临床特征及可能的致病基因。方法 调查1个中国AD-FSGS家系,收集临床资料,绘制家系图谱,并对家系中所有成员进行尿液筛查,并留取其外周血,对其中尿液筛查异常的2个家庭7名成员进行ACTN4、TRPC6和INF2基因所有外显子,以及WT1基因外显子8和9直接测序。生物信息学初步分析突变位点对蛋白结构和功能的影响。结果该家系共有4代,27名成员,现有成员23名。发病者5例,女性3例,男性2例,平均发病年龄26.9岁。临床资料分析显示,该家系临床特点符合AD-FSGS诊断。7名成员中未发现ACTN4、TRPC6基因所有外显子和WT1基因外显子8、9有致病性突变,其中5例发病者INF2基因外显子8均有纯合缺失突变,缺失的碱基为CCCCACCCCCAC（c.1249delCCCCACCCCCAC,p.T420_P423del）,缺失在外显子8第274～285位点,该位点突变既往未见报道。c.1249delCCCCACCCCCAC位于INF2表达分子inverted formin 重要的Diaphanous抑制结构域（DID）编码区。结论 INF2基因外显子8上的杂合缺失突变可能是该家系AD-FSGS患者的致病原因,c.1249delCCCCACCCCCAC是引起AD-FSGS的一种新型突变。     

全面性癫伴热性惊厥附加症2家系GABRG2基因突变分析

目的收集2个全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系,分析中国人GEFS+的遗传特点。并对2个GEFS+家系进行GABRG2基因突变检测,以期发现新的突变位点。方法对参与本研究的2个GEFS+家系成员在知情自愿的情况下参与调查、体检和血样本采集。另取20名健康体检儿童作为对照。对先证者及患者和健康对照组GABRG2基因全部9个外显子进行测序。将患者基因组各外显子片段测序结果与GenBank中的正常序列和健康对照组外显子片段测序结果通过互联网(BLAST)进行比对分析。结果 GEFS+2个家系成员共40份外周血中均未发现K289M、R43Q、Q351X、IVS6+2T→G、R139G、W390X等6种已知突变位点,仅在外显子5第40碱基处发现1个已知C/T多态性。结论 GABRG2基因很可能不是我国汉族人群GEFS+家系主要的致病基因,其与国外报道的GEFS+的主要致病基因存在种族及地域差异。     

涎酸贮积症一家系报告

目的探讨涎酸贮积症的临床特点及致病基因。方法回顾分析一家系涎酸贮积症的临床资料及基因检测结果。结果先证者为13岁女童,7岁时出现肢体疼痛,随后出现进行性视力下降及抽搐发作;有共济失调体征;眼底检查提示视神经萎缩;视诱发电位显示双眼P 100潜伏期明显延长。先证者哥哥有类似表现。应用PCR方法对NEU1基因的外显子及其外显子-内含子连接区域进行扩增,采用DNA直接测序对此基因行突变检测。发现先证者及其哥哥均携带NEU1基因c.239 CT(p.P 80 L)和c.544 AG(p.P 80 L)复合杂合突变,分别来自其表型正常母亲和父亲,均为已报道的致病突变。结论明确涎酸贮积症家系的NEU1基因致病突变。     

T型钙通道基因CACNA1H是儿童失神癫痫的易感基因

目的 在既往工作的基础上，进一步明确T型钙通道CACNA1H基因是否为儿童失神癫痫(CAE)的易感基因。方法 本组48例，分别来源于北京大学第一医院、首都医科大学附属北京儿童医院、首都儿科研究所附属医院以及山西省儿童医院。对本组患儿进行T型钙通道CACNAlH基因外显子6-12及其相邻的部分内含子PCR产物测序，寻找突变。96个正常对照来自同一地区的无关个体，均无癫痫病史或遗传病家族史。结果 共发现13个单核苷酸多态性，还发现4个突变位点只在CAE中出现，其中2个为错义突变：G773D和HS15Y，均为杂合突变。突变H515Y是新发现的错义突变，患儿从其母亲接受该突变。G773D在第3个CAE家系中发现相同的突变，本例从其父亲接受该突变。结论 T型钙通道CACNA1H基因很可能是CAE的易感基因。     

全面性癫痫伴热性惊厥附加症一家系随访分析

目的探讨全面性癫痫伴热性惊厥附加症（GEFS^＋）的临床意义。方法回顾性分析GEFS^＋一家系的临床发作情况，作详细体格检查。进行脑电图、24h动态脑电监测，部分患者作头颅CT检查。结果先证者Ⅳ12以抽搐频发3d入院，生后8个月开始高热惊厥（FS）。此次发作为无热性频发全面性强直一阵挛发作。该家系5代共36人。其中有14例患者；男8例，女6例；年龄4岁5个月～82岁，除Ⅰ2发作类型不详外，Ⅱ2、Ⅲ1、Ⅲ4、Ⅲ6、Ⅳ1、Ⅳ11、Ⅳ17、Ⅴ2为FS，Ⅳ2、Ⅳ12、Ⅳ13、Ⅳ14为FS^＋，Ⅴ1为FS^＋和失神发作。除Ⅳ13、Ⅳ14。目前予丙戊酸镁治疗外，其他患者已减量停药或未用药，均无发作。全家系成员智能发育、全身及神经系统检查均正常。3例行头颅CT检查，均正常。结论GEFS^＋为常染色体显性遗传性疾病，具有显著遗传异质性和表型异质性。认识该综合征对诊断和鉴别诊断儿童时期癫痫具有重要的临床意义。     

全面性癫(痫)伴热性惊厥附加症2家系GABRG2基因突变分析

目的 收集2个全面性癫(痫)伴热性惊厥附加症( GEFS+)家系,分析中国人GEFS+的遗传特点.并对2个GEFS+家系进行GABRG2基因突变检测,以期发现新的突变位点.方法 对参与本研究的2个GEFS+家系成员在知情自愿的情况下参与调查、体检和血样本采集.另取20名健康体检儿童作为对照.对先证者及患者和健康对照组GABRG2基因全部9个外显子进行测序.将患者基因组各外显子片段测序结果与GenBank中的正常序列和健康对照组外显子片段测序结果通过互联网(BLAST)进行比对分析.结果 GEFS+2个家系成员共40份外周血中均未发现K289M、R43Q、Q351X、IVS6+ 2T→G、R139G、W390X等6种已知突变位点,仅在外显子5第40碱基处发现1个已知C/T多态性.结论 GABRG2基因很可能不是我国汉族人群GEFS+家系主要的致病基因,其与国外报道的GEFS+的主要致病基因存在种族及地域差异.     

7个血友病A家系基因型与临床表型分析

目的 确定各家系凝血因子Ⅷ(F Ⅷ)基因突变类型,了解基因突变与临床表型的关系。方法 对7 个家系患者进行活化部分凝血酶原时间(APTT)及凝血因子Ⅷ凝结活性(F Ⅷ :C)检测,再采用PCR 方法对7 个血友病A家系患者进行内含子22、内含子1 倒位检测,对检测结果阴性患者采用直接测序法确定基因突变类型,并对家系相关成员进行相应位点的扩增与测序。结果 8 例血友病A患者APTT 为91.6~131 s,F Ⅷ :C 为0.8%~2%,基因检测结果显示8 例患者中未检出内含子22 倒位,仅检出1 例内含子1 倒位。余7 例血友病A 患者中,共检出5 种基因型,其中6例位于外显子14,1例位于外显子23,均为单碱基突变;有1 例检出基因型为p.His1202LeufsX16(c.3666delA),经检索为新突变。结论 F Ⅷ突变热点区域位于外显子14,新突变p.His1202LeufsX16 的发现丰富了F Ⅷ基因突变数据库。     

良性家族性婴儿惊厥家系KCNQ2基因新突变

目的 分析电压门控钾离子通道基因KCNQ2与1个良性家族性婴儿惊厥（benign familial infantile convulsions,BFIC）家系的关系,探讨BFIC的分子遗传机制。方法 1个中国陕西地区4代BFIC家系,采集41名家系成员及家系外75名健康对照的血样,采用PCR扩增、DNA直接测序技术进行KCNQ2基因突变分析,采用多聚酶链反应-单链构象多态性进行基因型和表型共分离研究。结果 PCR—DNA直接测序在先证者第5号外显子发现KCNQ2基因杂合突变G812T,导致KCNQ2蛋白孔区一个甘氨酸被缬氨酸替代（G271V）,这个位置的甘氨酸在KCNQ家族进化上高度保守。此突变与以前发现的良性家族性新生儿惊厥（benign familial neonatal convulsion,BFNC）家系KCNQ3突变（G3IOV）是同一位置相同的氨基酸改变。家系中其他患儿均检出与先证者相同的突变,而家系内参加本研究的健康人和家系外75名健康对照未出现这种突变。结论 KCNQ2基因突变可能是部分BFIC的分子发病机制,KCNQ2基因G812T突变是国内外未曾报道过的新突变,进一步开展G812T突变的功能研究有助于理解BnC及其他原发件癫痫的分子发病机理．     

全面性癫痫伴热性惊厥附加症及其相关基因γ-氨基丁酸A型受体γ2亚单位基因变异研究进展

全面性癫痫伴热性惊厥附加症（GEFS^＋）是常染色体显性遗传且具有遗传及表型异质性。近年来利用聚合酶链反应（PCR）、单链构型多态性分析（SSGP）等多种方法研究发现，其与γ-氨基丁酸A型（GABAA）受体γ2亚单位基因（GABRG2）变异密切相关，通过不同途径，最终导致癫痫的发生。