卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

华支睾吸虫重组蛋白应用于ABC-ELISA检测特异性循环抗体的研究

目的 评价重组蛋白在华支睾吸虫病诊断上的价值，探索以重组蛋白替代天然抗原用于ELISA等血清学方法诊断华支睾吸虫感染的可能性。方法 分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CysB)与华支睾吸虫成虫可溶性抗原(CAA)，以ABC-ELISA检测华支睾吸虫病、其它寄生虫感染及健康人血清特异性IgG．比较两种抗原用于检测的敏感性与特异性。结果 共检测了112份华支睾吸虫感染血清，使用重组抗原CysB与成虫粗抗原CAA的阳性检出率分别为92．9％(104／112)及94．6％(106／112)；分别检测健康人血清56例、日本血吸虫病血清20例及肺吸虫病血清10例．对于两种抗原，华支睾吸虫特异性IgG检测阴性率均相同．上述三类血清的阴性率分别为96．5％(54／56)、95％(19／20)及90％(9／10)。结论 华支睾吸虫重组蛋白CysB用于血清特异性抗体检测具有较高的敏感性及特异性，与成虫可溶性抗原(CAA)的诊断应用价值相近，有望成为应用于华支睾吸虫病诊断的替代抗原之一。     

免疫球蛋白检测在华支睾吸虫病诊断上的应用价值

华支睾吸虫病是我区主要寄生虫病之一。以往诊断此病主要依靠粪检,近年来,血清学检测技术已应用于华支睾吸虫病的诊断。为了评价各类免疫球蛋白在华支睾吸虫病诊断中的应用价值,1990年5月,我们应用ELISA法同时检测华支睾吸虫病人血清中的特异性IgG、IgM和IgA抗体.现将结果报告如下。材料、方法和结果一、可溶性蛋白抗原的制备:从实验感染的家兔肝胆管内获取华支睾吸虫成虫,用     

Dipstick法检测斯氏狸殖吸虫病血清抗体的建立及应用

目的 建立简便的斯氏狸殖吸虫病Dipstick快速诊断法。方法 以纯化的斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD为诊断抗原，胶体金标记的羊抗人IgC为显色剂，建立Dipstick快速诊断方法；检测斯氏狸殖吸虫病患者血清58例，日本血吸虫病患者血清32例。华支睾吸虫病患者血清23例，健康者血清28例。结果 检测58例斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体．其阳性率为98、3％（57／58），分别检测健康者血清28例、日本血吸虫病患者血清32倒和华支睾吸虫病患者血清23例，前者均为阴性，后两者的交叉反应率分别为3.1％（1／32）和0％（0／23）。结论 斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD Dipstick快速诊断法具有较高的敏感性和特异性，简便快捷，勿须特殊仪器设备，是一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IcG抗体较好的免疫诊断方法。     

两个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因克隆、表达与定性

目的寻找对华支睾吸虫病诊断有效的抗原基因,以便生物合成并研究其应用价值.方法选取两个Genbank已报告的基因序列AF271091(CysA)及AF093242(CysB)分别克隆与表达融合蛋白,亲和层析纯化后进行免疫定性.结果CysA与CysB均获得成功克隆与表达,Western blot分析显示CysA与华支睾吸虫病阳性血清有强反应,与日本血吸虫病阳性血清只有很弱的交叉反应,而CysA与华支睾吸虫感染血清无反应.免疫组化显示,被表达的两个半胱氨酸蛋白酶在华支睾吸虫体内的免疫定位无显著不同,主要在成虫肠道及虫卵.结论成功表达的两个半胱氨酸蛋白酶中,CysB针对华支睾吸虫病血清有良好的抗原活性,值得视为诊断抗原候选做进一步的研究.     

三种吸虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应性及其表位研究

采用免疫标记技术（ＴＥＳ一ＩＥＳＴ、ＡＷＡ一ＩＥＳＴ和ＴＥＳ一ＩＦＡＴ）及酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）对卫氏并殖吸虫，华支睾吸虫和姜片虫成虫可溶性抗原与日本血吸虫卵和成虫可溶性抗原之间的交叉反应性及其表位分子基础进行了研究。７１０份上述３种吸虫病人血清与日本血吸虫抗原之间的交叉反应率分别为３．９％（１０／２５９），４．２％（１１／２６１）和３．２％（６／１９０）．用ＥＬＩＢ对上述吸虫组分抗原分析结果表明，卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫和姜片虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应表位分子量分别为９７～７６ｋｕ，４０～１４．５ｋｕ和１０６～１４ｋｕ，华支睾吸虫和姜片虫成虫抗原之间显示６７～１４ｋｕ，范围的交又反应表位分子量。本研究为今后纯化抗原，提高血清学方法的特异性和敏感性，提供了重要依据。     

rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨rsj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值.方法 利用纯化的rsj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立Immunogold-IgG-Dot-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照.比较检测结果.结果 rsj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的阳性检出率均为100%,特异性分别为97.67%和95.35%;SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病血清均存在不同程度的交叉反应.结论 纯化的rSi26-Si32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原.     

酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断华支睾吸虫病的观察

酶联免疫吸附试验是用酶结合的抗体或抗原,分别检测可溶性抗原或抗体的方法,它具有高度的特异性和敏感性,已被应用于内分泌学、免疫病理学以及细菌、病毒、寄生虫病的血清学诊断新技术,国外从1974年Voller等对疟疾、血吸虫病、旋毛虫病及锥虫病等进行检测,国内对血吸虫病、猪囊虫抗体的研究亦有报告,对华支睾吸虫病检测国内尚无资料。华支睾吸虫     

抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

本文用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫的BALB/c小鼠与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞。该4株荜克隆抗体与华支睾吸虫成虫抗原作ELISA,结果均为阳性。经交叉试验(ELISA法)证明与日本血吸虫成虫抗原,虫卵抗原和卫氏并殖吸虫成虫抗原均呈阴性反应。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定除3F_7株为IgG_1外,其余3株均属IgM。初步试用3F_7株单克隆抗体作ELISA双抗体法检测人体华支睾吸虫循环抗原。     

华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位

目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。     

ISOLATION OF SOME ANTIGENS FROM SCHISTOSOMA JAPONICUM AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE

Six kinds of antigens from the eggs and adult worms of schistosoma japonicum were isolated. They included adult microsomal antigen (JAMA), aqueous soluble egg antigen (SEA), urea-soluble egg antigen (JEU) and its further fractionated products (JECt-D. They were analyzed by sodium polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), enzyme-linked immuno- electro-transfer blot (EITB) and kinetic-dependent enzyme-linked immunosorbent assay (K-ELISA). They were quantitatively assayed by K-ELISA for specific antigenic activities against sera of 39 patients with schistosomiasis japonica. The sera of patients with diseases other than schistosomiasis and 10 healthy adults were tested simultaneously as control. JEC:} was antigenically more active (A A460/min X 10-j than other antigens. Determinatin of the specific antibody (IgG) levels of S. japonicum by using JEC:i, etc as diagnostic antigens in 30 chronic patients re- vealed that the level of anti-JEC:: antibody was the highest (11.7_0.7A A460/min X 10-j. EITB test showed tbat only JEC:; exhibited no cross reactivity with sera from patients with parago nimiasis and clonorchiasis sinensis, and that all posi- tive bands of JEC; disappeared in patients cured of chronic schistosomiasis. These findings suggest that JEC:; might become a more satisfactory antigen in the serodiagnosis of schistosomiasis japonica.     

rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值研究

目的研究rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)Immunogold-Dipstick法检测慢性日本血吸虫病患者血清,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊性棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作为对照,比较两种抗原检测抗体效果的差异。结果该法检测慢性日本血吸虫病的敏感性和特异性分别为92.50%和97.67%,诊断该病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为97.37%、93.33%和95.18%,并且与其他疾病患者血清均无交叉反应。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。     

旋毛虫成囊前期幼虫17 000抗原组分的免疫诊断价值

目的研究旋毛虫成囊前期幼虫抗原(PELA) 17 000组分的免疫诊断价值.方法应用聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和转印技术分离PELA 17 000蛋白组分,用ELISA检测实验感染旋毛虫的Wistar大鼠和旋毛虫病患者血清抗体,并以PELA和成囊期幼虫抗原(ELA)为对照.结果对于感染旋毛虫的大鼠,17 000组分和PELA的首次血清阳性反应出现在感染后第10 d,而ELA则在感染后第14 d,其差异具有统计学意义(P<0.05);对48份旋毛虫病患者血清,17 000抗原的阳性率为95.8%, PELA和ELA的阳性率均为100%,3种抗原之间差异均无统计学意义(P>0.05).17 000抗原与其他寄生虫病患者及健康人血清无反应,而PELA和ELA均与肺吸虫病、鞭虫病患者血清有反应,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论与PELA和ELA相比,PELA 17 000组分对旋毛虫病的早期诊断具有更大的价值.     

卫氏肺吸虫重组抗原的制备及初步应用研究

目的：纯化重组细菌Pw-1／pRSET B／BL21的表达产物肺吸虫重组抗原，复性后以ELISA法检测肺吸虫病患者、其他寄生虫病患者和正常人血清，评价其敏感性、特异性和应用前景。方法：通过分步洗涤及透析对细菌重组蛋白进行初步纯化．进一步做快速液相层析纯化，比较前后两法的纯化效果。初步纯化产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白抗原(以下简称重组抗原)。用该重组抗原，以ELISA法检测肺吸虫、血吸虫、肝吸虫、囊虫和包虫病患者以及正常人血清中相应抗体，并与卫氏肺吸虫粗抗原做比较。结果：经分步洗涤及透析纯化后的重组抗原纯度已较高，快速液相层析进一步纯化效果不明显。以初步纯化后经复性的重组抗原进行ELISA法检测肺吸虫病患者血清，敏感性为91．07％，与其他寄生虫病患者和正常人血清均无交叉反应；粗抗原检测肺吸虫病患者血清敏感性虽为100％，但与其他寄生虫病患者和正常人血清交叉反应率分别为：血吸虫病11．43％，肝吸虫病4．84％，囊虫病3．22％，包虫病5．88％，正常人为2．5％。结论：研究制备的重组抗原应用于肺吸虫病的免疫诊断特异性较高。     

旋毛虫肌蚴可溶性抗原与日本血吸虫病患者血清的交叉反应

应用ＥＬＩＢ技术观察旋毛虫肌蚴抗原（ＴｓＭＬＳＡ）与６种寄生虫病人血清的交叉反应，结果表明：ＴｓＭＬＳＡ中３１～１００ＫＤａ，内的蛋白大部分被急性血吸虫颊人血清所识别，而慢性血吸虫病人血清仅识别其中的４４／４５，５１／５３，６２／６４及１００ＫＤａ蛋白，小于６０ＫＤａ者可与丝虫病，钩虫病，蛔虫病和肝吸虫病人血清呈不同程度的交叉反应，以前三者为最明显，４５ＫＤａ蛋白可被部分正常人血清识别，提示，旋毛     

斑点免疫金银染色法诊断华支睾吸虫病的研究

应用斑点免疫银染色法检测35例华支睾吸虫病人血清中抗体，同时检测35例正常人血清。血清稀释度1：20、1：40和1：80，35例病人血清阳性率100％，正常人血清均为阴性。10例血吸虫病人血清检测无交叉反应，但10例肺吸虫病人血清中4例为阳性反应。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。