补肾活血方对小鼠自身免疫性卵巢功能衰退的防治作用

目的：探讨补肾活血中药对小鼠自身免疫性卵巢功能早衰（premature ovarian failure．POF）的防治怍用。 方法：以BALB／c雌性小鼠卵巢组织制备卵巢抗原，皮下和两后脚掌多点注射免疫同种雌性小鼠建立卵巢早衰模型。分别在第1次免疫以及第3次免疫后给予补肾活血中药，灌服中药后分析阴道脱落细胞涂片．酶联龟疫法检测外周血雌二醇（estradiol，E2）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone．FSH）以及黄体生成素（1uteinizing hormone，LH）浓度。 结果：POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润，外周血FSH和LH升高,E2下降明显（P〈0.05）；而补肾活血中药能减少POF小鼠外周血FSH和LH含量，提高体内E2水平。早期预防比岳期治疗用药作用显著。 结论：补肾活血中药主要通过纠正紊乱的生殖内分泌轴，恢复部分卵巢功能，对免疫性卵巢早衰具育防治作用。     

抗衰复巢颗粒对卵巢早衰大鼠性激素水平影响

目的观察抗衰复巢颗粒对卵巢早衰（POF）大鼠的性激素的影响和卵巢组织形态学的变化。方法采用出生第9日龄SD雌性大鼠幼鼠,连续腹腔注射14天环磷酰胺8 mg/（kg.d）的造模,导致卵巢早衰。随机分为4组,放免法检测雌二醇水平（E2）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）。并进行大鼠卵巢组织形态学观察。结果实验研究表明,中药复方抗衰复巢颗粒对实验性卵巢早衰大鼠模型有性激素调节作用,对早衰的卵巢组织有恢复作用。能提高体内E2水平,减缓POF大鼠外周血FSH升高。结论中药复方抗衰复巢颗粒主要通过纠正紊乱的生殖内分泌轴和恢复部分卵巢功能,对卵巢早衰发挥防治作用。     

抗卵巢抗体的检测对卵巢早衰的诊断价值

目的：探讨抗卵巢抗体（AoAb）的检测在卵巢早衰（POF）诊断中的临床应用价值。方法：用酶联免疫吸附（ELISA）间接法测定AoAb。结果：POF患血清中AoAb阳性率显高于正常妇女组（P＜0．01）。结论：检测患血清中的AoAb对POF具有重要辅助诊断价值。尤其可应用于血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）正常的间歇性卵巢早衰的诊断。     

免疫性卵巢早衰小鼠生殖能力的研究

目的：探讨补肾复方左归丸对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠动情周期、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、受孕率的影响。方法：以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗,以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照,观察动情周期、受孕率,ELISA法检测外周血清FSH、E2水平。结果：模型组小鼠动情周期紊乱,FSH增高,E2降低,受孕率低下。左归丸各剂量组动情周期时间延长,但仍有规律性变化。FSH升高及E2降低均不明显,受孕率也低下。结论：模型组卵巢功能损伤、破坏。左归丸能改善、保护卵巢功能,但对受孕率改善不明显。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢Fas、Fas—L表达的影响

目的：探讨免疫性卵巢早衰小鼠（POF）卵巢Fas、Fas-L蛋白的表达及补肾复方左归丸的影响。方法：以小鼠透明带3为抗原，皮下多点注射免疫BALB／C雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗，以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照，免疫组化法检测卵巢卵泡、间质Fas、FasL蛋白的表达。结果：POF小鼠大、小卵泡Fas蛋白表达均明显减少，小卵泡、间质FasL表达均明显增强。左归丸各剂量组大、小卵泡Fas表达明显增强；左归丸低剂量组间质Fas表达也增强，小卵泡FasL表达减弱；左归丸高剂量组问质Fas表达也均增强，与模型组相比差异显著。结论：POF小鼠Fas／FasL系统平衡失调，B细胞凋亡减弱，抗体聚集，抑制免疫应答的效应减低，导致对卵巢的免疫性损伤，卵巢功能的破坏、衰竭。补肾中药复方左归丸可通过调节Fas／FasL系统平衡，调节免疫反应及细胞毒性淋巴细胞功能，促进B细胞凋亡，抑制抗体聚集，减轻卵巢免疫炎性反应，改善卵巢功能。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠性激素的影响

目的 观察左归丸对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠外周血抗透明带抗体(AZpAb)、FSH、E₂水平变化的影响,进一步揭示中药补肾养血活血法在调节卵巢功能方面的作用机制。方法 以小鼠透明带3所合成透明带多肽为免疫原,免疫SPF级BALB/C雌性小鼠,建立小鼠免疫性POF模型,随机分为模型组、左归丸高、中、低剂量组,强的松组、己烯雌酚组和对照组,共灌胃给药4周。采用ELISA法检测外周血FSH及E₂、AZpAb值。结果 FSH、AZpAb组间的比较测定值都有显著性差异;各用药组之间对正常组及模型组比较：己烯雌酚组的FSH值有极显著的意义,左归丸高、低剂量组的E2值有显著的意义,左归丸高、中、低剂量组及己烯雌酚组的AZpAb值都有极显著的意义。结论 左归丸能使阴虚小鼠外周血中雌二醇含量增加,减缓POF小鼠外周血FSH的升高,抑制AZpAb产生,改善POF小鼠卵巢免疫性炎症的损伤。     

育肾养血方治疗卵巢早衰的实验研究

目的 探讨全国名老中医朱南孙教授的经验方--育肾养血方治疗卵巢早衰的疗效及作用机制.方法 采用75只性周期规律的雌性Wistar大鼠的卵巢组织制备卵巢抗原;另取50只大鼠随机分成正常组(n=10)和模型组(n=40).模型组采用卵巢抗原皮下注射自身免疫法建立卵巢早衰大鼠模型,造模成功后再分为四组(n=10):中药中、高剂量组(灌服中药复方)、西药对照组(灌服己烯雌酚)、模型对照组(灌服等量生理盐水);正常组为空白对照组(不造模仅灌服等量生理盐水),均连续2周.治疗结束后经腹主动脉采血,留取卵巢组织标本.采用ELISA法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡激素(FSH)水平,免疫组织化学法检测卵巢抑制素B(InhB)蛋白阳性表达水平,观察卵巢、子宫湿重变化及组织学改变.结果 育肾养血方能提高卵巢早衰大鼠血清E2水平和降低FSH水平;但与模型对照组比较,西药对照组的E2和FSH水平、中药高剂量组的FSH水平差异均有统计学意义(P＜0.05).与模型对照组比较,西药对照组和中药中、高剂量组大鼠卵巢lnhB蛋白表达均显著增加(P＜0.01);卵巢内淋巴细胞浸润减轻,各级卵泡数增多,卵巢和子宫的湿重增加.结论 育肾养血方可以促进卵巢早衰大鼠的卵泡生长,增加InhB和E2的分泌,恢复受损卵巢的内分泌功能.     

育肾养血方治疗卵巢早衰的实验研究

目的探讨全国名老中医朱南孙教授的经验方——育肾养血方治疗卵巢早衰的疗效及作用机制。方法采用75只性周期规律的雌性Wistar大鼠的卵巢组织制备卵巢抗原;另取50只大鼠随机分成正常组(n=10)和模型组(n=40)。模型组采用卵巢抗原皮下注射自身免疫法建立卵巢早衰大鼠模型,造模成功后再分为四组(n=10):中药中、高剂量组(灌服中药复方)、西药对照组(灌服己烯雌酚)、模型对照组(灌服等量生理盐水);正常组为空白对照组(不造模仅灌服等量生理盐水),均连续2周。治疗结束后经腹主动脉采血,留取卵巢组织标本。采用ELISA法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡激素(FSH)水平,免疫组织化学法检测卵巢抑制素B(InhB)蛋白阳性表达水平,观察卵巢、子宫湿重变化及组织学改变。结果育肾养血方能提高卵巢早衰大鼠血清E2水平和降低FSH水平;但与模型对照组比较,西药对照组的E2和FSH水平、中药高剂量组的FSH水平差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,西药对照组和中药中、高剂量组大鼠卵巢InhB蛋白表达均显著增加(P<0.01);卵巢内淋巴细胞浸润减轻,各级卵泡数增多,卵巢和子宫的湿重增加。结论育肾养血方可以促进卵巢...     

卵巢表达的kisspeptin/kiss1r系统在卵巢早衰发生过程中的作用

目的 探讨卵巢表达的kisspeptin/kiss1r系统在卵巢早衰小鼠模型中的表达变化及发挥的作用.方法 选用6周龄雌性balb/c小鼠,随机分为正常组、对照组和POF组,其中POF组腹腔注射环磷酰胺(70 mg/kg,0.01% DMSO),对照组腹腔注射等量的0.01% DMSO.1周后,酶联免疫吸附法检测3组小鼠血清中E2、FSH水平,HE染色观察卵巢的形态学改变,免疫组化检测小鼠卵巢中kisspeptin/kiss1r的表达变化,masson法检测小鼠卵巢中纤维情况.结果 ELISA结果显示与对照组相比,POF模型组小鼠血清中E2水平明显减少,而FSH水平显著升高.POF组小鼠卵巢中生长卵泡数量明显减少,卵泡中颗粒细胞的层数明显减少,闭锁卵泡数量明显增加;除卵巢间质外,卵泡内有大量的胶原纤维存在.免疫组化结果显示与对照组相比,POF小鼠卵巢次级卵泡中 kisspeptin/kiss1r系统的阳性细胞数明显减少.结论 POF小鼠卵巢表达的kisspeptin可能通过降低卵泡对FSH的敏感性,大量的初级卵泡被募集,最终使卵母细胞耗竭.     

补肾疏肝法对卵巢早衰模型小鼠的作用研究

目的 探讨补肾疏肝中药复方对实验性的卵巢早衰(POF)的防治作用.方法 将自身免疫性POF模型小鼠分为模型组和中药治疗组,治疗组在3次免疫后连续灌服中药复方,分析灌服中药后阴道脱落细胞涂片,外周血雌二醇(E2)浓度及受试动物卵巢滤泡和黄体数改变情况.结果 中药治疗组小鼠体内血清E2水平均比模型组高.卵巢组织形态学分析显示,中药治疗组生长滤泡和黄体数均比模型组明显增加(P<0.05).结论 补肾疏肝中药复方可使卵巢内残存的少数滤泡得以复苏,恢复部分卵巢功能.     

调经汤治疗卵巢早衰的药效学研究

目的:观察调经汤对卵巢早衰大鼠卵巢功能的影响。方法:将60只雌性成熟未交配Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、阳性药物(雌二醇)对照组、调经汤高、中、低剂量组,腹腔注射顺铂溶液制作大鼠卵巢早衰动物模型,观察大鼠动情周期、血清性激素FSH、E2和LH的变化及卵巢组织的病理改变。结果: 模型组和阳性药物对照组大鼠无稳定的动情周期,调经汤高、中剂量组逐渐恢复规律的动情周期。模型组血清E2水平含量降低,血清FSH和LH含量均升高,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,调经汤高中低剂量组血清FSH水平含量明显降低、E2含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);血清LH含量水平降低,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠卵巢萎缩,卵泡生长少,闭锁卵泡增加,部分被纤维组织代替,黄体数量少,子宫内膜明显变薄。调经汤高、中、低剂量组能不同程度的增多卵泡数量和黄体数目,子宫内膜也有所增厚。结论:调经汤能有效改善顺铂诱导的模型大鼠卵巢功能。     

补肾活血方对于重组猪组织卵透明带4抗原建立的自免疫性卵巢功能早衰小鼠的治疗作用

Objective: To investigate the efficacy and mechanism of Bushen Huoxue Recipe (补肾活血方, BHR) in the treatment of murine autoimmune premature ovarian failure (POF). Methods: The recombinant porcine zona pellucida 4 (pZP4) was expressed in E. coli BL21 (DE3) strain within prokaryotic plasmid pET28a (+), purified by Ni-affinity chromatography and verified by Western blot. Murine autoimmune POF model was established by immunization with pZP4 of female BALB/c mice. Fifty POF mice were randomly divided into 5 groups, which were respectively given low (3.75 mg/kg), moderate (7.5 mg/kg), and high dose (15.0 mg/kg) of BHR by gastrogavage once daily for 20 days, with 17-β-estradiol (0.13 mg/kg) and normal saline as positive and negative control. Estrous cycles were analyzed through vaginal smears, serum estradiol (E2) levels, and anti-pZP4 antibody titers were detected by ELISA. The proliferative responses in vitro of spleen lymphocytes to pZP4 antigen restimulation were measured by [3H]-thymidine incorporation, and the histomorphology changes of ovary were evaluated by optical microscope. Results: The purified pZP4 was visible as a single lane with 14.4 kD in SDS-PAGE and Western blot. The murine POF model with lengthening estrous cycles, decreased levels of serum E2, high titers of serum anti-pZP4 antibody, and reduced ovarian follicles and corpus lutea were established by immunization with recombinant pZP4. Treatment with moderate and high dosage BHR significantly increased ovarian follicles and reduced the proliferation of spleen lymphocytes to the pZP4 antigen of POF mice (P<0.05). However, only the high dosage BHR administration significantly improved the estrous cycles, elevated the serum E2 levels (P<0.01), and decreased the serum anti-pZP4 antibody titers of model mice (P<0.05). Conclusions: The recombinant pZP4 could evoke the antigen-specific immune response in mice and induce the autoimmune ovarian injury. It has been demonstrated that BHR was able to increase the serum E2 levels and protect ovarian functions from the autoimmune injury in murine POF model.     

花生四烯酸对小鼠卵泡衰老的影响

目的:研究花生四烯酸(arachidonic acid,AA)对小鼠卵泡发育的影响,探讨AA与卵巢早衰的关系?方法:10% AA饲料喂食4周龄ICR雌鼠,4个月后观察小鼠子宫卵巢重量?卵巢组织脂肪酸分析?卵巢组织学改变?结果:10%AA组与对照组相比子宫卵巢体重下降;脂肪酸分析结果显示10%AA组卵巢n-6/n-3不饱和脂肪酸比值增大;光镜下,10%AA组可见卵巢退行性黄体增多?间质纤维化?卵巢闭锁卵泡所占比例增加?结论:喂食10%AA饲料可引起小鼠卵巢衰老?     

外源性雌激素及二仙汤对雷公藤多苷诱导大鼠卵巢早衰防治作用的比较研究

目的：比较外源性雌激素和二仙汤对雷公藤多苷诱导的卵巢早衰的防治作用。方法：将雌性sD大鼠随机分为空白对照组、模型组、雌激素组和二仙汤组。应用雷公藤多苷制备卵巢早衰大鼠病理模型,空白组与模型组均灌胃给予生理盐水,雌激素组和二仙汤组分别灌胃给予雌激素和二仙汤。干预21d后,检测大鼠子宫、卵巢和肾上腺脏器系数,应用放免法检测血清雌激素（E2）、黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）的水平。结果：外源性雌激素能够显著增加子宫、卵巢和肾上腺脏器系数（P〈0．05,P〈0．01）,能够恢复卵巢早衰大鼠E2水平（P〈0．05）,而LH和FSH无明显变化;二仙汤组大鼠卵巢和肾上腺脏器系数显著增加（P〈0．05,P〈0．01）,子宫脏器系数和血清性激素水平无明显变化。结论：外源性雌激素能够改善雷公藤多苷片诱导的卵巢早衰,疗效优于二仙汤。     

GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗对小鼠卵巢功能的影响

目的 探究促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂和经血源性干细胞（MenSCs）联合治疗对小鼠卵巢功能的影响。方法 将45只SPF级实验小鼠随机分为Control组（腹腔注射生理盐水）、POF组（腹腔注射120 mg·kg-1·d-1 CTX）、MenSC+POF组（CTX损伤处理后注射移植含2×106 MenSCs的细胞悬浮液）、GnRHa+POF组（造模前14 d注射丙氨瑞林0.1 mg·kg-1·d-1,第15天开始CTX注射）、MenSC+POF+GnRHa组（按MenSC+CTX组和GnRHa+CTX组方案联合用药）,每组9只。HE染色观察小鼠卵巢组织病理变化情况,ELISA法检测小鼠血清中黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）和雌二醇（E2）的含量水平,Western blot检测小鼠卵巢颗粒细胞中KI-67、Bcl-2、BAX、caspase 9、caspase 3、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、p-PI3K、PI3K、p-Akt及Akt蛋白的表达情况。结果 与Control组相比,POF组小鼠卵巢纤维化明显,闭锁卵泡数增多,血清中LH和FSH的含量水平极升高（P<0.01）,AMH和E2含量水平降低（P<0.01）,BAX、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3蛋白表达水平升高（P<0.01）,KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平降低（P<0.01）;与POF组比较,GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可抑制小鼠卵巢闭锁卵泡的产生,降低小鼠血清中LH和FSH的含量水平（P<0.01）,提高AMH和 E2的含量水平（P<0.05或P<0.01）,抑制小鼠卵巢颗粒细胞中BAX、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白的表达（P<0.05或 P<0.01）,促进KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论 GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可能通过上调PI3K-Akt信号通路表达,减少卵巢闭锁卵泡的产生,提高小鼠卵巢的储备功能,从而达到对卵巢修复和保护的目的。     

不同治法方药治疗小鼠自身免疫性卵巢功能衰退的比较研究

目的：比较补肾法、活血法、疏肝法对小鼠自身免疫性卵巢功能衰退（premature ovarian failure,POF）的干预作用。方法：以BALB／C雌性小鼠卵巢组织制备卵巢抗原。皮下和两后脚掌多点注射免疫同种雌性小鼠建立自身免疫性卵巢功能衰退模型。六味地黄丸、少腹逐瘀颗粒及柴胡疏肝丸分别治疗3周后,酶联免疫吸附测定法检测血清雌二醇（estradiol,E2）、卵泡刺激素（follicle—stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、催乳素（prolactin,PRL）、睾酮（testosterone,T）以及抗卵巢抗体和抗透明带抗体。结果：模型组小鼠血清FSH、LH较正常组明显升高,E2显著下降（P〈0．05）,PRL、T含量与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;模型组小鼠抗卵巢抗体阳性率为84．2％,抗透明带抗体阳性率为78．9％。与正常组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。六味地黄丸显著下调小鼠血清FSH、LH水平,提高E2含量（P〈0．05）;而抗卵巢抗体及抗透明带抗体仅有下降趋势,与模型组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。少腹逐瘀颗粒组小鼠血清FSH、LH含量有下降趋势,E2含量稍有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）;其抗卵巢抗体和抗透明带抗体阳性率与模型组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。柴胡疏肝丸组小鼠抗卵巢抗体和抗透明带抗体阳性率,与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。各种治疗对血清PRL和T含量无明显影响。结论：补肾中药可以显著改善自身免疫性卵巢功能衰退小鼠生殖内分泌轴功能,活血及疏肝中药可以调整自身免疫性卵巢功能衰退小鼠体液免疫功能。     

菟丝子总黄酮对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用

[目的]探讨菟丝子总黄酮通过卵泡刺激素(FSH)-环磷酸腺苷(cAMP)信号轴对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用.[方法]从68只雌性SD大鼠中抽取10只为正常组,其余构建卵巢储备功能减退模型.将成功建模的48只大鼠随机分为抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组,每组12只.抑制剂组灌胃H-890.1 ...     

PTH缺乏经细胞外钙介导卵巢血管生成障碍而致生殖能力降低

目的:探讨甲状旁腺素(PTH)缺乏引起生殖功能降低的机制.方法:使用组织学,免疫组织化学和Western blot的方法比较分析了同窝4个月PTH基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠分别给予正常钙(1%)、低钙(0.01%)及高钙饮食(2%)后生殖能力、卵巢成熟卵泡数量、黄体形成及血管生成的差异.结果:与同窝野生型雌性小鼠(PTH+/+)相比,正常饮食PTH基因敲除纯合子小鼠(PTH-/-)生殖能力下降,成熟卵泡数量及黄体生成减少,卵巢血管发生减少;低钙饮食PTH-/-表现为完全不孕,成熟卵泡数量进一步减少和黄体缺失,卵巢血管发生减少更为明显;而高钙饮食PTH-/-生殖能力、成熟卵泡数量、黄体形成及血管发生均恢复正常.结论:PTH缺乏经细胞外钙介导卵巢血管生成障碍而致生殖能力降低.