急性非淋巴细胞白血病与急性淋巴细胞白血病细胞差异蛋白质组分析

目的本研究利用蛋白质组学的方法分析急性非淋巴细胞白血病(ANLL)与急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞的蛋白质表达谱的差异,为了解两系别的生物学和临床特征的差别提供分子基础。方法利用二维凝胶电泳方法分别分离来源于25例ANLL和20例ALL患者细胞的蛋白质,用MALDI-TOF-MS生物质谱和电喷雾质谱(ESI-MS/MS)对ANLL和ALL的差异蛋白质进行鉴定分析。结果本研究获得ANLL和ALL的差异表达蛋白质谱,其中首次报道了髓系相关蛋白8和14不仅可以作为区别ANLL和ALL的分子标志,还可以区分ANLL细胞分化阶段,Op18、热休克蛋白27等在ANLL和ALL中差异表达的蛋白将为区分ANLL和ALL提供新的分子标志。结论这些差异蛋白将有助于了解ANLL和ALL间临床和生物学特征差异的分子机制。     

热休克蛋白90α、70、27mRNA在急性白血病细胞中表达的研究

运用RNA分子杂交的方法,观察了热休克蛋白(heat shock protein,HSP)90α、70、27在22例白血病病人细胞,正常血细胞及K562红白血病细胞系中的表达。结果表明:16例白血病病人中,4例急性淋巴细胞白血病(ALL),6例急性非淋巴白血病(ANLL)、1例慢性粒细胞白血病急变期(慢粒急变)和2例骨髓增生异常综合征(MDS)血细胞呈现HSP27高水平表达,较正常血细胞显著增多,ALL(5例)与ANLL(7例)白血病细胞HSP27表达水平无明显改变。检测了7例白血病细胞HSP70的表达水平,除1例ALL及1例MDS明显升高外,其余5例(包括1例ALL,3例ANLL和1例慢粒急变)显著低于正常血细胞。17例白血病病人细胞(包括9例ANLL、5例ALL、2例慢粒急变和1例MDS)HSP90α表达水平均升高,明显高于正常。结果提示:白血病细胞HSP90α表达水平的升高可能与白血病细胞活跃异常增殖有关,而HSP27基因的高表达可能不是某种急性白血病的特殊标志。     

急性淋巴细胞白血病中hMSH2 mRNA及突变型P53蛋白的表达

为了探讨hMSH2mRNA及突变型P53蛋白表达与急性淋巴细胞白血病发病的关系,采用寡核苷酸探针原位杂交技术及免疫细胞化学技术检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓单个核细胞的滴片hMSH2mRNA和突变型P53蛋白的表达。结果显示:ALL组hMSH2mRNA表达百分比低于对照组,分别为(32.88±11.46)%和(64.22±8.51)%,两组比较有显著性差异(P<0.05);ALL组突变型P53蛋白表达百分比高于对照组,分别为(29.25±9.45)%和(12.63±6.66)%,两组比较有显著性差异(P<0.05);ALL组、对照组中hMSH2的mRNA表达百分比与突变型P53蛋白表达百分比呈负相关(r值为-0.45,P<0.05)。结论:hMSH2基因表达缺失及P53蛋白突变可能参与ALL的发生和发展;hMSH2mRNA表达缺失与突变型P53蛋白的高表达共同促进了ALL的发生。     

急性白血病患者血清sICAM-1的水平变化及其意义

目的探讨急性白血病患者血清可溶性细胞间粘附分子 - 1(sICAM 1)的水平变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验法 (ELLSA)测定 5 0例急性白血病患者的血清sICAM 1含量 ,比较其水平在不同病理状态下的变化。结果初诊治疗前的急性淋巴细胞白血病 (ALL)、急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)、不缓解或复发ALL及ANLL患者的血清sICAM 1测定值分别为 (10 5 8± 114) μg/L、(10 0 8± 84) μg/L、(885± 146 ) μg/L、(910± 174) μg/L ,与完全缓解或部分缓解组ALL组 (5 6 7± 15 5 ) μg/L、ANLL的 (493± 76 ) μg/L及正常对照组的 (5 78± 16 8) μg/L相比 ,其差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1) ;而处于相同病理状态的ALL与ANLL患者血清sICAM 1水平比较 ,其差异未见显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论血清sICAM 1含量升高与急性白血病的化疗效果及预后不良有关     

急性白血病细胞端粒酶活性与细胞周期的关系

本研究探讨急性白血病细胞端粒酶活性与细胞周期的关系。采用聚合酶链反应 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA)检测了 14 8例急性白血病病人和 36例正常对照的细胞端粒酶活性 ,其中急性非淋巴细胞白血病 (ANLL) 92例 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 5 6例 ;同时对 16例急性白血病患者和 4例正常对照用流式细胞术测定了细胞周期。结果发现 :①急性白血病患者细胞的端粒酶阳性率为 71.6 % (10 6 14 8) ,显著高于对照组 5 .6 % (2 36 ) ,其中复发组患者端粒酶阳性率为 88.9% (32 36 ) ,初治组 81.3% (6 1 75 ) ,二者显著高于完全缓解组 35 .1% (13 37) ,P <0 .0 5。ANLL 92例 ,端粒酶阳性率为 71.7% (6 6 92 ) ,ALL 5 6例 ,端粒酶阳性率为 71.4 % (40 5 6 ) ,二者之间无显著性差异。②端粒酶阳性组与阴性组细胞周期各期细胞数无显著性差异。结论 :端粒酶激活在急性白血病中极为普遍 ,且端粒酶阳性率的高低与急性白血病病期相关 ,它可能是急性白血病发展过程中白血病细胞增殖旺盛的分子标志。端粒酶活性的表达与各期细胞数无明显相关 ,提示端粒酶活性的表达还受其它生物学因素的调控。     

急性淋巴细胞白血病患者血清PTK7 mRNA和蛋白表达水平及其临床意义

本研究旨在检测不同亚型急性淋巴细胞性白血病患者血清PTK7 mRNA和蛋白的表达水平,探讨其诊断的临床价值.选择2012年5月-2014年4月在本院诊断为急性淋巴细胞白血病（ALL）患者,按照纳入和排除标准共纳入136例患者,按照细胞形态学将他们分成L1组（n=42）、L2组（n=45）和L3组（n=49）,另外选择48例正常儿童为对照组.使用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中PTK7 mRNA转录水平,采用Westem blot检测血清中PTK7蛋白表达量.结果表明,L1组PTK7转录水平显著高于正常组（P=0.000）.L2组PTK7转录水平显著高于L1组（P =0.000）.L3组与L2组之间无显著性差异（P =0.123）.L1组患者PTK7蛋白水平显著高于正常组（仁1.564,P=0.000）,L2组PTK7蛋白水平显著高于L1组（t=1.437,P=0.003）,L3组PTK7蛋白水平与L2组比较无显著差异（t=0.821,P=0.312）.结论：血清PTK7蛋白表达检测具有诊断ALL的潜在临床价值,但对ALL分型不具有型特异性.     

抗凋亡基因survivin在急性白血病细胞表达及其临床意义

目的　探讨急性白血病 (AL)原代细胞survivin基因表达及其与AL疗效的关系。方法　应用RT PCR方法检测 50例初发AL患者survivin基因mRNA表达。结果　AL细胞survivinmRNA阳性率为 82 .0 % (50例中 41例 )。survivinmRNA阳性表达在急性淋巴细胞白血病细胞 (89.5 % )较在急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)细胞 (75 .0 % )稍多见 ,但均高于正常对照组 (33 .3 % ) ,P值分别 <0 .0 1 ,<0 0 5。在 2 2例ANLL患者白血病细胞中 ,survivinmRNA表达阴性者接受 1个疗程化疗后骨髓缓解(BMR)率 (83 .3 % )明显高于阳性者 (2 5 .0 % ,P =0 .0 2 3) ;1 3例ANLL患者接受高三尖杉酯碱和阿糖胞苷联合治疗 ,survivinmRNA阴性表达者BMR率 (1 0 0 .0 % )高于阳性表达者 (2 7.3 % ) ;survivin/ β actin >0 .6者BMR率低。结论　survivin基因在AL细胞高表达 ,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一     

急性淋巴细胞性白血病DNA含量与细胞增殖活性的临床意义

目的　探讨DNA检测对急性淋巴细胞性白血病 (ALL)诊断和治疗的临床意义。方法　应用流式细胞术检测了 35例急性淋巴细胞性白血病患者骨髓细胞DNA含量 (DI)、倍体和细胞增殖活性 (PI)。结果　ALL异倍体检出率为 5 1 4 % ( 18 35 ) ,其中亚二倍体 8例 ,超二倍体 10例 ;ALL组骨髓细胞G0 G1%高于对照组 (P <0 0 5 ) ,而S %、PI值明显低于对照组 (P <0 0 5 )。结论　DNA含量检测和倍体分析对急性淋巴细胞性白血病的诊断、治疗是很有价值的临床生物学指标 ,有助于白血病的准确、客观诊断和判断预后     

伴有髓系抗原表达的儿童急性淋巴细胞白血病临床分析

部分急性淋巴细胞白血病 (ALL)在表达淋系抗原的同时兼有髓系抗原表达 ,称为伴髓系抗原表达的ALL(My ALL)。我们对 6 9例儿童ALL免疫表型、临床特点及治疗结果进行回顾性分析 ,以确定儿童ALL中髓系抗原表达的临床意义。对象和方法1　研究对象　 1991年 2月～ 2 0 0 1年 9月我院收治儿童ALL初发患者 112例 ,进行免疫分型检查的 6 9例。年龄 2 .5个月～ 14岁 ,中位年龄 5 .4岁。所有病例根据临床表现和骨髓形态学确诊为ALL ,骨髓细胞过氧化酶 (POX)染色均为阴性 ,符合文献 [1]标准。按上述标准 ,高危 (HR ALL)患者 2 7例 ,标危 (…     

白血病中FHIT基因的异常表达和缺失

FHIT基因位于染色体 3p14 .2 ,实验室的研究证实FHIT基因具有抑癌基因活性。FHIT基因异常表达或表达缺失出现在多种实体肿瘤和造血系统恶性疾病。为了探讨白血病细胞中FHIT基因的异常表达及意义 ,采用巢式RT PCR法对急性髓性白血病 (AML)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)、慢性粒细胞白血病 (CML)以及骨髓增生异常综合症 (MDS)、慢性淋巴细胞白血病 (CLL)、骨髓瘤 (MM )等不同类型白血病患者FHIT基因转录本进行检测 ,并对FHIT基因转录本进行序列测定。 98份血液系统恶性疾病患者的骨髓或外周血标本中AML 38例 ,ALL16例 ,CML 34例 ,其它恶性血液病 10例。全部患者经骨髓细胞形态检查 ,诊断符合FAB诊断标准。肝素抗凝骨髓或外周血 2 - 3ml,分离单个核细胞 ,取 5× 10 7个细胞 ,用RTIZOL 试剂一步法提取细胞总RNA ,行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。回收目的片段 ,克隆到PGEM T载体 ,进行序列测定。结果表明 :在 5 5 / 98(5 6 % )的被检测病例有FHIT基因的异常表达 ,在AML、ALL和CML异常表达的发生率分别为 2 2 / 38(5 8% ) ,9/ 16(5 6 % )和 19/ 34(5 6 % )。正常骨髓或外周血标本未见有FHIT基因的异常表达。 4 3/ 98(44 % )的患者表达正常转录本 (Ⅰ型 ) ,4 0 / 98(41% )的患者同时表达正常转录本和异常     

白血病人外周血白细胞c-myc原癌基因表达及其意义

应用DNA和RNA斑点杂交技术,对30例白血病患者外用血白细胞中c-myc原癌基因的扩增水平及其中17例的表达水平进行分析,结果发现:①在30例白血病仅发现c-myc原癌基因有限程度的扩增(最高2～4倍),仅1例达到4倍的扩增。②在各类型白血病中不同的病例,c-myc表达水平差异很大,一般急性白血病表达程度相对较高,而慢性白血病表达程度较低。③对17例同时检测了c-myc扩增水平及表达水平的研究发现,扩增的程度、水平与表达无相关性。④各型白血病中c-myc表达量与外周血白血病细胞(原 早或原 幼)百分比可能有一定关系。     

eIF4E在白血病中的表达及其临床意义

本研究旨在比较eIF4E在正常人和白血病患者中的表达水平,了解eIF4E是否在白血病的发生和发展中起到一定的作用。收集10例正常人和76例白血病患者的外周血细胞标本,76例患者包括39例急性髓系白血病,15例慢性髓系白血病和22例急性淋巴细胞白血病,分离标本中的白细胞,分别通过实时定量PCR和Western blot检测eIF4E在mRNA和蛋白质水平的表达变化。结果表明,就eIF4E mRNA绝对表达水平而言,在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及慢性髓系白血病急变期,其表达增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05);在慢性髓系白血病慢性期,其表达水平无明显改变,在慢性髓系白血病加速期,其表达水平虽有所上调,但与正常对照无显著性差异。就eIF4E mRNA相对表达水平而言,在慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及除M4、M5之外的急性髓系白血病中,其表达均无显著性变化。eIF4E蛋白质表达在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病加速期和急变期中均有不同程度的增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05)。结论:虽然eIF4EmRNA相对表达水平在大多数白血病中并无显著性改变,但是eIF4E mRNA绝对表达水平及其蛋白质水平在大多数白血病中均显著性上调。因此推测,eIF4E可能对白血病的发生和发展起到一定的作用,以它为靶点治疗白血病,尤其是复发和难治性白血病,可能是一条有希望的途径。     

人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究

为了研究人端粒重复序列结合因子（TRF1）蛋白质在急性白血病（AL）及正常骨髓组织中的表达水平，AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系，定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平，并应用经倍比稀释的TRF1^33-277纯化蛋白质作为定量标准，建立以抗TRF1^33-277单克隆抗体的定量Western blot的方法，而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平；另外，应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性，以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系。结果表明：20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低，差异具有显著性（P〈0．01）；急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低，但差异无统计学意义（P〉0．05）；化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高，但仍低于正常（P〈0．01）；化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高，差异具有显著性（P〈0．01）；AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人（P〈0．05）和首次缓解者（P〈0．01）；初发未治时，ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者，但差异无统计学意义（P〉0．05）。TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关（P〈0．001）。结论：TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低．且与疗效及端粒酶活性相关。     

急性白血病五种血浆凝血因子测定及临床意义

目的 探讨急性白血病(AL)血浆凝血因子V、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、X活性(FV：c，FⅦ：c，FⅧ：c，FⅨ：c和FX：c)的变化。方法 采用COAG—MATE—XM型血凝自动分析仪测定36例AL患者(ANLL28例，ALL8例)五种凝血因子活性水平，并与30例正常人作对照。结果 ①AL患者FV：c，FⅦ：c，Ⅷ：c和FX：c大多降低，ANLL较ALL更显著；②组间比较：高危组FⅧ：c、FX：c降低；出血组FV：c、FⅦ：c、FⅧ：c和FX：c降低；缓解组FV：c、FⅦ：c、FⅧ：c和FX：c升高，前三项已恢复正常水平。结论 检测上述凝血因子水平对AL病情和预后判断有一定意义。     

儿童肿瘤及急性白血病中ICAM-1(CD54)的表达及在CIK细胞免疫治疗中的临床意义

本研究旨在探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1,CD54)在初诊儿童肿瘤及急性白血病细胞上的阳性表达率,以了解其分布规律及其临床意义。采用免疫组织化学方法检测46例儿童实体瘤的病理组织切片ICAM-1的阳性率,通过流式细胞仪检测60例儿童急性白血病细胞上ICAM-1的阳性率。儿童实体瘤包括淋巴瘤10例,肝母细胞瘤3例,神经母细胞瘤6例,横纹肌肉瘤2例,尤文氏肉瘤6例,纤维肉瘤2例,原始神经外胚层肿瘤5例,肾母细胞瘤11例,骨肉瘤1例;急性白血病包括急性淋巴细胞白血病(ALL)20例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL)40例(M1 6例、M2 7例、M3 7例、M4 15例、M5 5例)。结果表明,儿童肿瘤组中3例肝母细胞瘤ICAM-1全部阳性,而在淋巴瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤及尤文氏肉瘤阳性率不高,纤维肉瘤、肾母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤患儿中未见ICAM-1表达。急性白血病组中ALL的ICAM-1阳性率为55%,ANLL的M1、M2、M3型ICAM-1的阳性率为65%,M4、M5型为50%。结论:ICAM-1在儿童肿瘤、急性白血病细胞上的表达呈一定变异性,其在肝母细胞瘤及ANLL(M1、M2和M3)上阳性率高,而在纤维肉瘤、肾母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤等中不表达。     

白血病患者血清IL-8的测定

目的：探讨血清白细胞介素８（ＩＬ－８）变化在白血病中的意义。方法：采用平似酶联免疫吸附法测定了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）,２５例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）,１１例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）慢性期血清ＩＬ－８浓度。结果：ＡＬＬ、ＡＮＬＬ和ＣＭＬ患者血清ＩＬ－８水平显著高于正常对照组,ＡＬＬ与ＡＮＬＬ患者无显著性差异,急性单细胞白血病组水平显著高于急粒白细胞病（Ｍ１￣Ｍ３）组,治疗有铲的     

Netrin-1在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及意义

目的:研究Netrin-1蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中的表达及其与临床指标的相关性,并探讨其可能的调控机制。方法:采用ELISA法检测48例ALL患儿(初诊、复发)外周血血清中Netrin-1的表达水平,并分析其与27例非恶性血液病患儿对照样本表达水平的差异,进而分析ALL外周血Netrin-1水平与临床指标的相关性。体外培养ALL细胞Jurkat、Molt-4、SUP-B15和Raji,经不同浓度重组人Netrin-1蛋白处理后,用Transwell法检测细胞的侵袭能力;CCK-8法测定Netrin-1对细胞增殖的作用;采用Western blot检测FAK、Erk1/2、PI3K、Akt等信号通路关键蛋白的表达及其磷酸化水平。结果:ALL患儿外周血中Netrin-1的表达量显著高于对照组(P<0.05)。随着Netrin-1表达水平的上调,WBC水平(r=-0.290,P<0.05)呈下降趋势,Plt水平(r=0.483,P<0.05)呈上升趋势,且与年龄、Hb水平、骨髓幼稚细胞比例无显著相关性;Netrin-1浓度在25-50 ng/ml水平时,Netrin-1水平与WBC(r=0.886,P<0.05)呈正相关;WBC>50×10^9/L和Plt<20×10^9/L的患儿Netrin-1表达水平显著降低(P=0.042,P=0.001);Netrin-1的表达水平在危险度分级中具有显著性差异(P=0.017),与低危组与中危组相比,高危组Netrin-1的表达水平显著提高;Netrin-1在性别、肝脾淋巴结肿大、MRD、复发、染色体异常等分组中的表达水平均无显著性差异;Netrin-1对4种细胞的侵袭能力有促进作用(P<0.05),随着Netrin-1浓度的提高,细胞数有先增加后降低的趋势,且均在Netrin-1浓度为100 ng/ml时,侵袭下室的细胞数最高;Netrin-1浓度为25 ng/ml时,4种细胞存活率显著增加(P<0.05),其中SUP-B15细胞在浓度为100 ng/ml时,细胞存活率最高;4种细胞存活率呈现低浓度升高及高浓度降低的趋势;Western blot结果显示,Netrin-1使FAK、Erk1/2、PI3K、Akt等信号通路关键分子磷酸化水平提高(P<0.05)。结论:ALL患儿血清中存在Netrin-1的异常表达,Netrin-1可能通过增加白血病细胞的增殖、侵袭能力来影响ALL的发生发展,可能成为ALL的危险因素或生物治疗中的潜在靶点。     

吲哚胺2,3-二氧化酶在人急性单核细胞白血病(M5)和急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其抑制剂1-甲基色氨酸的治疗作用

本研究旨在探讨吲哚胺2,3-二氧化酶（IDO）在白血病细胞中的表达和作用。应用间接免疫荧光染色光法检测人急性单核细胞白血病（M5）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的细胞内吲哚胺2,3-二氧化酶的表达情况,并以小鼠急性淋巴细胞白血病细胞系L1210建立白血病小鼠模型以观察吲哚胺2,3-二氧化酶抑制剂1-甲基色氨酸是否具有抑制白血病细胞生长的作用。结果表明：M5和ALL的白血病细胞中吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率分别为29.4±11.2%和24.7±7.96%,而对照组的外周血单个核细胞中吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率仅为3±1.2%;两个白血病组与正常对照组在吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率方面的差异均有显著的统计学意义（P〈0.05）,而M5与ALL组之间在吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率方面无显著性差异（P〉0.05）;1-甲基色氨酸（1-MT）治疗的白血病小鼠与对照组比较,肿瘤消退,生存期延长（P〈0.05）,部分治疗小鼠达到无病长期生存（注射肿瘤细胞后生存期超过3个月）。结论：人急性单核细胞白血病（M5）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的细胞均表达吲哚胺2,3-二氧化酶,1-甲基色氨酸对白血病小鼠有一定的治疗作用。