梁金菇多糖对人脐血单个核细胞生成白介素-2的影响

[目的]研究梁金菇多糖(LJPS)对脐血单个核细胞(CBMC)分泌白细胞介素-2(IL-2)和IL-2mRNA表达的影响,探讨梁金菇多糖的增强免疫和抗肿瘤活性,为中国栽培的梁金菇药用价值的开发提供实验依据。[方法]采用放射性免疫法检测LJPS对CBMC分泌IL-2的影响,并应用RT-PCR法检测LJPS对CBMCIL-2mRNA表达的影响。[结果]LJPS单独或与植物血凝素(PHA)联合应用均能够促进CBMC分泌内源性IL-2(P<0.05和P<0.01),分泌高峰为48h左右,并且两者均能促进CBMCIL-2mRNA的表达,表达高峰为24h左右。[结论]梁金菇多糖能够促进CBMC内源性IL-2的分泌及IL-2mRNA的表达。     

梁金菇多糖促脐血单个核细胞增值活化的分子机制研究

目的:研究梁金菇多糖(liangjin mushroom polysaccha-ride,LJPS)对人脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMC)增殖活化的机制,为我国开发LJPS的药用价值提供理论依据。方法:采用流式细胞仪检测法方法观察了LJPS对CBMC作用后对CD33+细胞(髓系干细胞)的增殖作用,并采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从mRNA水平对其增值活化的机理进行了探讨。结果:LJPS本身不能促进粒-单系祖细胞(CFU-GM)的生成,最佳浓度的LJPS刺激的CBMC上清液对CD33+细胞具有增殖作用,增殖高峰为第7天,其CD33+细胞数为培养前的6.9倍。LJPS可诱导CBMC表达粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA,从第6小时即开始表达,表达高峰为第24小时,其mRNA的量为对照组的23.9倍。结论:LJPS具有促造血的功能,其本身虽无GM-CSF活性,但其可通过刺激CBMC增殖活化,诱导细胞表达GM-CSFmRNA,间接促进CFU-GM的形成和髓系干细胞(CD33+细胞)的增殖从而调节造血功能。     

梁金菇多糖影响造血功能的实验研究

目的:研究梁金菇多糖(LJPS)对造血功能的影响。方法:采用粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)琼脂半固体培养法观察 LJPS 刺激的脐血单个核细胞(CBMC)上清液对脐血 CFU-GM 形成的作用,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,从 mRNA 水平对其机理进行探讨。结果:LJPS 刺激的脐血单个核细胞上清液可促进脐血中 CFU-GM 的生成,最佳浓度为1μg/ml,与空白组比较差异有显著性(P< 0.01)。LJPS 对 CFU-GM 的生成没有直接作用,但可诱导 CBMC 表达 GM-CSF mRNA。结论:LJPS 具有促造血的功能。     

梁金菇多糖对脐血单个核细胞增殖活化的研究

姬松茸Agaricus blazei系菌类植物的地上菌丝体,属于担子菌纲,原产于巴西,又名梁金菇。日本的姬松茸多糖具有抗肿瘤、抗突变、促进免疫、促进造血,保护肝脏[1]等功能。为了进一步探讨移植国内后的梁金菇多糖对造血功能的影响,本实验采用从脐带采集的脐血,其中含有丰富的干细胞和祖细胞,研究了梁金菇多糖对脐血单个核细胞的增殖活化作用。1材料1·1药物制备梁金菇(LJPS)由福州华胜食品有限公司提供,经中国科学院植物研究所梁峥研....     

红花多糖对人PBMC增殖活性及分泌细胞因子的影响

[目的]探讨红花多糖(SPS)对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及PBMC诱生细胞因子的影响。[方法]采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,检测PBMC的增殖活性及白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平。[结果]SPS对PBMC增殖有促进作用,以1.25g/L和0.625g/L剂量组增殖活性增加明显(P0.05);红花多糖(SPS)各组IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(P0.05),而各组TNF-α的水平无显著性差异。[结论]SPS可促进PBMC的增殖,提高IL-2和IFN-γ水平,增强免疫功能。     

胎盘因子对机体细胞免疫功能的调节作用

紫河车,出自《本草纲目》。又名混沌衣、人胞。有补气、养血、温肾、益精之功效。近年来对胎盘及其制剂的研究已日益受到重视。本文在观察了胎盘因子(PF)对T淋巴细胞的增殖影响的基础上,应用CTLL细胞株作为指示细胞以及碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色对诱导的外周血单个核细胞(PBMC)IL-2产生以及IL-2R的表达进行了研究。材料与方法一、胎盘因子制备:按文献进行。二、人外周血单个核细胞分离:取正常献血者新     

黄芪成分F3增强低剂量白介素Ⅱ诱导LAK细胞的细胞毒效应

在对黄芪免疫调节有效成分 F3的研究过程中发现:(1)F3加入100u/ml 白介素Ⅱ(rIL-2),其所诱导的 LAK 细胞对人类黑色素瘤 A375P 的杀伤率可达80%,与1000u/ml rIL-2单独使用时的效果(76%)相似,减少 rIL-2用量的90%。(2)使用 F3后,所需 LAK细胞数量减少50%。提示运用其他生物反应调节剂(BRMs)来增强 rIL-2所诱导的 LAK 细胞杀伤活性是一个值得探索的方向。     

梁金菇多糖诱导K562细胞凋亡的研究

目的 :探讨梁金菇多糖对K562细胞凋亡的影响及其机制。方法 :应用集落形成实验观察梁金菇多糖对K562细胞增殖的影响 ,细胞形态学、DNA凝胶电泳等检测细胞凋亡 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)检测凋亡相关基因FasmRNA的表达。结果 ;梁金菇多糖能明显抑制K562细胞的增殖 ,促进细胞凋亡 ,细胞凋亡率的增加呈剂量依赖性。Fas基因的表达与K562细胞凋亡呈正相关。结论 :梁金菇多糖具有抑制K562细胞增殖、诱导其凋亡的作用 ,Fas基因表达的上调可能是梁金菇多糖诱导细胞凋亡的机制之一。     

白附子混悬液对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用的免疫调节机制研究

[目的]研究白附子混悬液对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用,探讨其抗肿瘤作用的免疫学机制。[方法]采用H22荷瘤小鼠模型为研究对象,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测小鼠血清中白介素-2(IL-2)和白介素-4(IL-4)水平;用流式细胞术(FACS)法分析对CD4+,CD8+T细胞的调节作用。[结果]白附子混悬液能够上调荷瘤小鼠血清IL-2细胞因子的表达,降低IL-4水平,可以使CD4+T细胞表达升高,CD8+T细胞表达降低。[结论]白附子混悬液能够通过调节荷瘤机体异常免疫功能状态而发挥抗肿瘤作用。     

补骨脂单体成分对体外培养成骨细胞和破骨细胞分化的影响

[目的]研究补骨脂单体成分异补骨脂素、异补骨脂查尔酮对体外培养破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)及成熟破骨细胞形成数目、体外培养成骨细胞增殖与分化的影响。[方法]体外采用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞前体细胞,考察异补骨脂素、异补骨脂素查尔酮对破骨细胞前体细胞在分化过程中其标志性酶TRACP的活性和成熟破骨细胞产生数目的影响。对硝基苯磷酸盐法(PNPP法)测定破骨细胞TRACP活性,TRACP细胞染色法鉴定并检测成数破骨细胞数目。酶消化法体外培养新生小鼠成骨细胞,(CCK-8)(cell counting kit-8)法检测两成分对成骨细胞增殖的影响,磷酸苯二钠法测定两成分对成骨细胞标志性酶碱性磷酸酶(ALP)的影响。[结果]体外成功培养小鼠破骨细胞和成骨细胞,两细胞强表达各自的标志性酶TRACP和ALP。异补骨脂查尔酮在0.05μmol/L浓度下对成熟破骨细胞的形成有显著抑制作用。异补骨脂素在0.1μmol/L浓度下对成骨细胞增殖有显著促进作用。[结论]补骨脂单体成分异补骨脂素对成骨细胞有促进作用、异补骨脂查尔酮对破骨细胞有抑制作用,提示补骨脂可能作为抗骨质疏松或骨吸收的药物。     

地榆总皂苷对巨核祖细胞增殖分化及相关受体表达的影响

目的:观察地榆总皂苷(DYS)对Baf3细胞和32D细胞的促增殖和分化作用,以及对IL-3受体和干细胞因子受体c-kit表达水平的影响。方法:培养依赖IL-3生长的Baf3细胞和32D细胞,在加或不加IL-3条件下,用质量浓度为5,10,20,30,40 mg·L-1的DYS分别处理细胞24,48,72,96 h后,采用CCK8方法检测细胞增殖;并用Giemsa染色检测细胞分化;另以RT-PCR方法检测DYS对Baf3细胞IL-3受体及对32D细胞c-kit表达水平的影响。结果:DYS单独处理细胞48 h,明显促进Baf3细胞和32D细胞增殖;与对照细胞比较,DYS处理32D细胞呈现成簇生长并形成许多大的细胞团;在加入IL-3的条件下,DYS也能明显增强IL-3的促细胞增殖作用。此外,DYS高浓度单独处理32D细胞可明显诱导多倍体巨核细胞数增加,促进巨核细胞分化。在mRNA水平,DYS单独处理细胞也能明显上调IL-3受体和c-kit的表达。结论:地榆总皂苷单独作用能促使2种巨核祖细胞的增殖和分化,其作用与上调IL-3受体和c-kit表达水平有关。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C通路的影响

目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中蛋白激酶C(PKCζ)-细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型,测定细胞增殖活度,免疫细胞化学法检测PKCζ与ERK1/2表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组细胞增殖活度显著增高,PKCζ与ERK1/2表达显著高于对照组(均P<0.01).中、高剂量川芎嗪组的细胞增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01),PKCζ与ERK1/2表达亦明显低于AngⅡ组(P<0.01),与低剂量川芎嗪组相比亦有显著差异,说明川芎嗪的抑制作用具有量-效关系.结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PKCζ-ERK1/2通路有关.     

蛭元方对血小板加剧的类风湿关节炎滑膜炎症和增生的影响

目的:观察蛭元方对血小板加剧的类风湿关节炎( rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜细胞炎症和增生反应的影响.方法:将常规培养的大鼠类纤维母样滑膜细胞株RSC364随机分为正常对照组、RA模型组、活化血小板干预组和蛭元方干预组.在不同浓度TNF-α诱发的大鼠RA滑膜细胞模型的基础上,以牛Ⅱ型胶原蛋白刺激血小板活化,用蛭元方含药血清作用于活化血小板干预下的RA模型细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测RSC364细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的生成量和P-选择素的表达情况,采用MTT比色法观察RSC364细胞增殖的情况.结果:①牛Ⅱ型胶原蛋白活化血小板5h时,血小板表达P-选择素最多;②在不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)存在下,RA模型组RSC364细胞培养上清中IL-6和IL-8的生成量均增加,与同一浓度的正常对照组相比均有显著性差异(P＜0.05);RSC364细胞增殖率也明显高于正常对照组(P＜0.05),并呈现剂量依赖性;③与RA模型组相比,活化血小板干预组RSC364细胞生成IL-6和IL-8的量均明显增加(P＜0.05和P＜0.01),滑膜细胞增殖率显著升高(P＜0.05);④与血小板干预组相比,蛭元方干预组RSC364细胞的IL-6和IL-8生成量均显著降低(P＜0.05和P＜0.01),增殖率亦有明显下降(P＜0.05),同时P-选择素的表达量显著降低(P＜0.05).结论:活化血小板能加剧RA滑膜细胞的炎症和增生反应;蛭元方能有效缓解血小板对RA大鼠滑膜炎症及增生的促进作用,其机制可能与抑制P-选择素的表达有关.     

黄芩素上调miR-625-5p表达干预支气管哮喘小鼠的机制研究

目的:探讨黄芩素调控miR-625-5p表达对支气管哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移及炎性因子的影响。方法:培养小鼠原代ASMCs细胞,作为对照组,重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖,作为PDGF组; 分别采用10、20、40 μmol/L的黄芩素处理PDGF诱导ASMCs细胞。将miR-NC、miR-625-5p转染至PDGF诱导的ASMCs细胞,作为PDGF+miR-NC、PDGF+miR-625-5p组; 将anti-miR-NC、anti-miR-625-5p转染至PDGF诱导ASMCs细胞,以40 μmol/L的黄芩素处理,作为PDGF+anti-miR-NC+40 μmol/L组、PDGF+anti-miR-625-5p+40 μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖; Transwell实验检测细胞迁移; 酶联免疫吸附实验检测细胞IL-4、IL-6、IL-8水平; 实时荧光定量PCR检测细胞miR-625-5p表达水平。结果:与对照组比较,PDGF组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05); 与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,PDGF组细胞miR-625-5p表达显著降低(P<0.05); 与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞miR-625-5p表达显著升高(均P<0.05)。与PDGF+miR-NC组比较,PDGF+miR-625-5p组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与PDGF+anti-miR-NC+40 μmol/L组比较,PDGF+anti-miR-625-5p+40 μmol/L组细胞miR-625-5p表达水平显著降低,细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-625-5p表达抑制支气管哮喘小鼠的细胞增殖率、迁移率以及炎性因子水平。     

淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞作用的影响

目的:探讨淫羊藿素(ICT)对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法::以在37℃、5％ CO2培养箱培养的人乳腺癌MCF-7为研究对象,用不同浓度的淫羊藿素单独作用及与雌二醇联合作用,测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并检测该过程中雌激素受体ERα的表达情况.结果:当ICT浓度大于1×10-10mol·L-1时单独使用能促进ERα阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖,能诱导ERα基因的表达;淫羊藿素与雌二醇联合作用抑制MCF-7细胞增殖,抑制ERα的表达.结论:淫羊藿素与雌二醇联合作用具有抑制E2诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用;淫羊藿素与雌二醇联合作用可抑制ERα基因的表达.     

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??OBJECTIVE To determine the immunosuppressive activity of a novel benzothiazole derivative BD759 on T cell proliferation and its potential mode of action. METHODS T cell proliferation, CD25 expression and cell cycle distribution were measured by flow cytometer. Cytokine levels, including IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A and IFN-??, were determined by ELISA. RESULTS BD759 significantly inhibited human T cell proliferation, stimulated either by anti-CD3/anti-CD28 monoclonal antibodies or by an alloantigen, in a dose-dependent manner with IC₅₀ values of (3.5??0.7) and (3.3??0.9) ??mol??L^-1, respectively. No obvious cytotoxic effects of BD759 were observed on human resting na??ve T cells and peripheral blood mononuclear cells in our experimental conditions. Furthermore, BD759 did not inhibit CD25 expression or IL-2, IL-4 and IL-10 secretion, but inhibited IL-6, IL-17A and IFN-?? production and induced cell cycle arrest at the G₀/G₁ phase in activated T cells. CONCLUSION These data indicate that BD759 has no effect on T cell activation, but induces T cell cycling arrest at G₀/G₁ phase. BD759 also inhibits the secretion of inflammatory cytokines, such as IL-6, IL-17A and IFN-gamma. Thus, BD759 has the potential to be used as a lead compound for the design and development of new immunosuppressants for treating autoimmune diseases and preventing graft rejection.     

大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用

目的 观察大黄(庶虫)虫丸经旁分泌途径对大鼠肝星状细胞增殖及其表达TGF-β_1 基因的影响. 方法采用Nycodenz 分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CCl_4 损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC).在制备正常鼠血清和大黄(庶虫)虫丸药物血清的基础上,将它们分别加入KC 培养板内作用48 h 后制备成正常鼠KC 条件培养液(NKCCM)和损伤鼠KC 条件培养液(KCCM).将NKCCM 和KCCM 作用于活化的HSC 24 h 后,采用MTT 法和3H-TdR 掺入法检测HSC 增殖的变化;采用半定量RT-PCR 法扩增TGF-β_1 mRNA 以检测HSC 表达TGF-β_1 基因的情况. 结果旁分泌组各组的HSC 增殖幅度及TGF-β_1 基因的相对表达量较正常对照组NKCCM 组均明显增加(P<0.05或0.01).同时旁分泌组中,含药血清作用的5%,10%和20% KCCM 组较无药物血清作用的0% KCCM 组HSC 的增殖能力及TGF-β_1 基因的相对表达量则下降,且随药物浓度的升高逐渐降低,其组间差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大黄(庶虫)虫丸可明显抑制经旁分泌途径活化的大鼠HSC 的增殖及TGF-β_1 基因的表达,且其抗肝纤维化效应与药物剂量间存在一定的依赖关系.     

Paeoniflorin inhibits function of synoviocytes pretreated by rIL-1α and regulates EP4 receptor expression

Ethnopharmacological relevance

To investigate the effect of the Paeoniflorin (Pae), a main active component of total glucosides of paeony (TGP) extracted from the root of Paeonia lactiflora, on regulation of synoviocytes cultured from rats collagen-induced arthritis (CIA) in vitro.

Materials and methods

CIA was induced in male Sprague-Dawley rats immunized with chicken type II collagen (CCII) in Freund's complete adjuvant. The levels of interleukin-1 (IL-1), tumor necrosis factor α (TNF-α), prostaglandin E₂ (PGE₂) and cyclic adenosine monophosphate (cAMP) were measured by radioimmunoassay. The proliferation responses was determined by the 3-(4,5-2dimethylthiazal-2yl) 2,5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT) assay. Expression of E-prostanoid (EP₄) receptor was detected by Western blotting technique.

Results

Treatment of Pae (2.5, 12.5, 62.5 μg/ml) significantly decreased the production of IL-1 and TNF-α. Recombinant interleukin-1 (rIL-1α) (10 ng/ml) apparently stimulated synoviocyte, thymocyte and splenocyte proliferation, and Pae (12.5, 62.5 μg/ml) inhibited abnormal proliferation responses stimulated by rIL-1α. Moreover, rIL-1α time- and concentration-dependently increased production of PGE₂. The production of PGE₂ produced by synoviocytes from CIA rats significantly inhibited by administration of Pae (12.5, 62.5 μg/ml). rIL-1α (10 ng/ml) decreased cAMP of synoviocytes cells treated for 24 h. Similarly rIL-1α (0.1, 1, 10 ng/ml) induced a concentration-dependent decrease in the production of cAMP at 24 h. Pae (12.5, 62.5 μg/ml) increased the production of cAMP in synoviocytes. The immunoblot, Pae (12.5, 62.5 μg/ml) apparently increased the expression of EP₄ receptor in synoviocytes stimulated by rIL-1α (10 ng/ml).

Conclusions

The present study indicates that Pae might exert its anti-inflammatory effects through suppressing synoviocytes function and regulating immune cells responses in CIA rats, which might be associated with its ability to up-regulate the E-prostanoid (EP₄) receptor protein expression and modulate intracellular cAMP level.     

地榆总皂苷促造血细胞增殖效应研究

目的 观察地榆总皂苷对3种造血细胞Baf3/Mp1、UT-7和NSF-60的促增殖效应.方法 分别培养依赖血小板生成素(TPO)、红细胞生成素(EPO)和粒细胞集落生长因子(G-CSF)生长的Baf3/Mp1、UT-7和NSF-60细胞,在加或不加细胞因子条件下,用不同质量浓度地榆总皂苷处理细胞72 h后,采用MTT法检测3种细胞的增殖;采用RT-PCR法检测3种细胞因子受体表达水平的变化.结果 地榆总皂苷单独处理细胞72 h,明显促进Baf3/Mp1细胞和NSF-60细胞增殖,但不影响UT-7细胞生长;在TPO和G-CSF存在条件下,地榆总皂苷能分别增强两种细胞因子的促细胞增殖作用.此外,地榆总皂苷能明显增强Baf3/Mp1细胞TPO受体表达,对NSF-60细胞G-CSF受体表达没有影响.结论 地榆总皂苷具有单独或协同细胞因子的促造血细胞增殖作用,其促增殖作用与上调TPO受体的表达有关.