枸杞多糖抗实验性肝癌作用及对VEGF表达与分泌的影响

目的 观察枸杞多糖对实验性肝癌小鼠模型肿瘤细胞VEGF表达及分泌的影响,进一步探讨枸杞多糖的抗肿瘤作用机制。方法 枸杞多糖连续灌胃治疗两周后,LSAB免疫组织化学方法观察肿瘤模型组、LBP不同剂量组肿瘤组织VEGF表达情况,在小鼠脱颈处死前眼球放血,ELISA双抗体夹心法检测各组血清中VEGF水平。结果 枸杞多糖不同剂量均可降低肿瘤组织中VEGF的表达,其中高剂量组与肿瘤模型组间差异具显著性。同样枸杞多糖高剂量组可下调血清中VEGF水平。结论 枸杞多糖的抑瘤作用可能与抑制了肿瘤细胞VEGF因子的产生,从而减少了肿瘤间质中微血管的形成有关。     

原花青素对高糖环境下人视网膜内皮细胞增殖及VEGF表达的影响

探索原花青素(PC)对体外高糖环境下培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖及其VEGF表达的影响。利用MTT比色法检测HRCECs增殖;蛋白质免疫印迹法测定VEGF表达。结果显示:与低糖组比较,高糖组HRCECs数量明显增多,表达量升高;不同浓度原花青素(200,400,600,800 μg/mL)可抑制高糖组HRCECs的增殖,高糖组VEGF表达并存在浓度和时间依赖性。与低糖组比较,高糖组HRCECs VEGF。结果表明,原花青素可抑制高糖诱导的体外培养的HRCECs增殖。     

高糖诱导血管内皮细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的观察高糖对血管内皮细胞表达结缔组织生长因子（connective tissue growth faeotr, CTGF）的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（human umibilical vein endotheial cells,HUVECs）,分别在含正常葡萄糖（5．5mM）、高糖（25mM葡萄糖）、25mM甘露醇及高糖加转化生长因子β1（transforming frowth factorβ1,TGFβ1）中和抗体的培养基中培养24、48或72小时,并在相应时间点收集细胞总RNA及总蛋白。分别用半定量RT-PCR及Western Blot方法检测CTGFmRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常葡萄糖培养及25mM甘露醇对照组相比,高糖刺激24小时后,HUVECs的CTGFmRNA及蛋白表达水平均显著增加,并且这种作用持续到48小时。TGFβ1的中和抗体能部分阻断高糖的这种刺激作用。结论高糖能诱导HUVECs表达CTGF,而内皮细胞CTGF的表达增加可能是高糖参与动脉粥样硬化等心血管疾病发生的机制之一。     

过表达SIRT1对高糖诱导RVECs细胞的影响及对VEGF和PEDF表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子-1(SIRT1)对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(RVECs)增殖、凋亡的影响.方法:构建SIRT1过表达慢病毒载体,感染体外培养的RVECs细胞.实验分3组:(1)正常对照组(NG组):不处理;(2)高糖组(HG组):33 mmol/L葡萄糖处理;(3)SIRT1过表达慢病毒组(SIRT1组):33 mmol/L葡萄糖处理,同时转染SIRT1过表达慢病毒.采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测细胞SIRT1、血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的表达.采用噻唑蓝比色法和原位末端标记法(TUNEL)检测细胞增殖、凋亡情况.结果:与NG组较,HG组细胞SIRT1表达降低,VEGF和PEDF表达增加,细胞增殖率增加、凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与HG组比较,SIRT1组细胞SIRT1表达增加,VEGF和PEDF表达降低,细胞增殖率降低、凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.05).Pearson分析显示,SIRT1表达与VEGF和PEDF呈负相关(r=-0.814,P=0.005;r=-0.593,P=0.029).结论:过表达SIRT1能够抑制高糖诱导的RVECs细胞增殖、促进凋亡,并下调细胞VEGF和PEDF表达.     

高糖环境对血管内皮细胞增殖和氧化应激的影响

目的探讨不同浓度的葡萄糖对体外培养的ECV-304细胞增殖和氧化应激的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞,用浓度为5.5mmol/L(正常对照组)、15mmol/L(HG15组)、25mmol/L(HG25组)、35mmol/L(HG35组)、45mmol/L(HG45组)的葡萄糖培养液分别干预培养48、72和96h。采用MTT法检测不同干预组的细胞增殖能力;硫代巴比妥酸盐法测定细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;采用二硫代双硝基苯甲酸比色法测定细胞中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。结果随着葡萄糖浓度和暴露时间的增加,细胞增殖明显被抑制,细胞内GSH含量显著降低,与正常对照组比较各组细胞间差异有统计学意义(P<0.01)。同时,高浓度葡萄糖组MDA含量显著增加,与正常对照组比较各组细胞间差异有统计学意义(P<0.01)。结论葡萄糖可以明显抑制体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞增殖,并造成显著的细胞内氧化应激,并且随着葡萄糖浓度的升高和暴露时间的延长,上述效应呈现出向严重发展的趋势。     

牛磺酸对高糖刺激Mller细胞VEGF和TauT表达的影响

目的通过检测高糖和牛磺酸培养对大鼠视网膜Muller细胞中血管内皮细胞生长因子（vascularen—dothelialgrowthfactor,VEGF）和牛磺酸转运蛋白（taurinetransporter,TauT）表达的影响,探讨牛磺酸保护糖尿病引起视网膜损伤的机制。方法实验分6组,分别是正常对照组、牛磺酸对照组、高糖模型组、低、中、高剂量牛磺酸处理高糖组。用免疫细胞荧光双标鉴定Muller细胞,RT-PCR和免疫细胞荧光双标检测Muller细胞中VEGF和TauT的表达。结果体外25mmol／L高糖培养使Muller细胞VEGFmRNA及蛋白表达增加。10mmol／L牛磺酸可有效抑制高糖诱导的VEGF上调表达（P〈O．05）;高糖诱导Muller细胞中TauT表达抑制,引起TauTmR—NA及蛋白表达明显下降。牛磺酸干预可上调Muller细胞中TauT的表达（P〈0．05）,提高细胞内外牛磺酸的转运能力。结论体外高糖培养诱导Muller细胞VEGF表达增加,TauT表达下降。牛磺酸通过降低VEGF表达、提高牛磺酸转运能力达到保护视网膜的作用。该实验结果可为牛磺酸用于糖尿病早期视网膜病变的防治提供重要的实验依据。     

枸杞多糖对高糖诱导衰老小鼠角膜上皮细胞增殖的影响

目的：观察不同剂量枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的衰老小鼠角膜上皮(MCE)细胞增殖的影响。方法：采用含有不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、12.5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L)的杜氏改良Eagle培养基(DMEM)孵育MCE细胞48 h,用MTT检测不同葡萄糖浓度对MCE细胞增殖的影响。建立高糖损伤模型，用不同浓度(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml)的LBP处理葡萄糖损伤的MCE细胞48 h,观察MCE细胞增殖情况。结果：在用25 mmol/L的葡萄糖浓度处理MCE细胞，细胞增殖最强(P<0.01),葡萄糖浓度为200 mmol/L时，MCE细胞增殖力最低(P<0.01)。在所建立的高糖损伤模型(葡萄糖200 mmol/L)中LBP 200μg/ml促进MCE细胞增殖作用最强(P<0.05)。结论：一定浓度的葡萄糖可抑制MCE细胞增殖，LBP可保护高糖损伤的MCE细胞，促进其增殖。     

枸杞多糖对高糖干预的人晶状体上皮细胞中SIRT1及SIRT6表达的影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对高糖干预的人晶状体上皮(HLEB3)细胞中沉默信息调节因子1(SIRT1)及沉默信息调节因子6(SIRT6)表达水平的影响。方法 将对数生长期的HLEB3细胞随机分为对照组(CON组,5.5 mmol·L^-1)、高糖组(HG组,55.5 mmol·L^-1)、HG+12.5 mg·L^-1LBP组、HG+25 mg·L^-1LBP组、HG+50 mg·L^-1LBP组,培养24 h后,分别用相应培养基干预48 h,用显微镜观察各组细胞的形态及密度变化;采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的存活率;采用免疫荧光法对各组细胞中SIRT1和SIRT6蛋白进行定位检测;采用Western blot法测定各组细胞中SIRT1与SIRT6蛋白的表达水平。结果 光镜下观察发现,CON组HLEB3细胞主要呈梭形贴壁生长,HG组细胞形态呈不规则状,细胞密度降低;与HG组相比,HG+12.5 mg·L^-1LBP组、HG+25 mg·L^-1     

香菇多糖对荷瘤小鼠VEGF的表达影响

目的：探讨香菇多糖的不同给药剂量对小鼠S180肉瘤生长和转移的作用.方法：采用动物移植性肿瘤实验观察香菇多糖对小鼠体内肿瘤细胞生长的影响,用RT-PCR技术测得,香菇多糖高、中、低不同剂量对荷瘤小鼠体内VEGFmRNA的表达情况,分析该药物的作用机制.结果：香菇多糖对S180肉瘤生长的抑制率以中剂量为佳;并且能够抑制S180荷瘤小鼠外周血血清中VEGFmRNA表达,从而降低其含量.结论：香菇多糖对S180肉瘤的生长和转移有很强的抑制作用.     

羟基红花黄色素A对高糖作用下恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞迁移及VEGF表达的影响

目的 研究羟基红花黄色素A（HSYA）对高糖作用下恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞（RF/6A）迁移的影响,探讨HSYA抑制视网膜脉络膜新生血管内皮细胞的作用机制。方法 采用细胞划痕修复实验和半定量RT-PCR方法,检测HSYA对正常和高糖作用下RF/6A迁移和VEGF表达的影响。结果 HSYA在18 mg/L,37 mg/L,73mg/L浓度对高糖（22mmol/L）诱导下RF/6A细胞有显著抑制作用,而对正常糖（5mmol/L）下RF/6A细胞无显著抑制作用;与正常糖组比较高糖组VEGF明显表达,而加HSYA组VEGF表达降低。结论 一定浓度的HSYA对高糖诱导下RF/6A细胞有显著抑制作用,其可能机制为HSYA抑制血管内皮细胞VEGF表达。     

β-榄香烯对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞活力及血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的 探讨β-榄香烯对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞(RPE)活力及对细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响.方法 体外培养人RPE细胞株ARPE-19,取对数生长期细胞分为对照组、高渗组、高糖组、高糖+不同浓度β-榄香烯组(β-榄香烯浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μ...     

微RNA-140-5p靶向调节血管内皮生长因子表达对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成的影响

目的 探讨微RNA(miR)-140-5p靶向调节血管内皮生长因子(VEGF)表达对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRECs)增殖、迁移和管腔形成的影响。方法 将对数生长期hRECs细胞分为正常对照组、高糖组、miR-140-5p组、阴性对照(NC)组、高糖+miR-140-5p组。正常对照组和高糖组细胞不做任何转染，miR-140-5p组和高糖+miR-140-5p组细胞转染miR-140-5p模拟物(miR-140-5p mimics),NC组细胞转染阴性对照模拟物(mimics NC)。高糖组和高糖+miR-140-5p组细胞用含30 mmol·L^-1葡萄糖的培养基制备高糖模型。应用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组细胞中miR-140-5p表达水平，噻唑蓝法检测各组细胞增殖能力，Transwell法检测各组细胞迁移能力，管腔形成实验检测各组细胞成管能力，Western blot法检测各组细胞中VEGF蛋白的表达。将40只Sprague Dawley大鼠随机分成正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病+NC组、糖尿病+miR-140-5p组，每组10只。除正常对...     

外源性FGF-2对高糖环境下内皮祖细胞功能的影响

目的 观察外源碱性成纤维细胞生长因子-2（basic fibroblast growth factor-2, FGF-2）对高糖环境下内皮祖细胞（endothelial progenitor cells, EPCs）功能的影响。方法 体外分离和培养小鼠EPCs,并采用流式细胞分析和免疫荧光染色进行细胞鉴定,分别在高糖（30mmol/L）和高糖（30mol/L）+FGF-2（30、50、100、150、300ng/mL）条件下干预培养,正常EPCs作为空白对照组,TUNEL检测细胞凋亡,Transwell小室和基质胶在体外观察EPCs的迁移和成管能力;Western印迹法检测活化β-catenin和总β-catenin的表达,构建小鼠后肢缺血模型,分别注射空白组、正常组、高糖组及高糖+FGF2（150ng/mL）组EPCs,使用激光多普勒血流仪观察小鼠缺血后肢血流恢复情况。结果 高糖组EPCs比空白对照组凋亡率显著增高（P＜0.01）,迁移和血管形成能力显著降低（P＜0.01）;高糖+FGF-2组EPCs与高糖组相比,细胞凋亡显著减少（P＜0.05）,迁移和血管形成能力显著增强（P＜0.05）,且在150ng/mL FGF-2时效果最强(P＜0.01）。Western印迹法分析表明,高糖组较空白对照组活化β-catenin/总β-catenin显著下降（P＜0.01）,而高糖+FGF-2组与高糖组相比则显著升高（P＜0.05）。体内实验显示,高糖组小鼠缺血后肢较正常组血流恢复显著减少,而高糖+FGF-2组较高糖组显著增加。结论 外源性FGF-2处理可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥对高糖下受损EPCs的功能修复作用。     

高糖和缺氧对体外培养视网膜M üller细胞VEGF表达的影响

目的 :观察体外培养兔视网膜 Müller细胞在高糖和缺氧条件下血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。方法 :采用免疫细胞化学、原位杂交和ELISA方法对高糖和缺氧条件下体外培养兔视网膜 Müller细胞 VEGF的表达进行定性定量测定。结果 :高糖能刺激 VEGF表达 ,且通过转录水平调节 ,这种调节呈时间和剂量依赖性。 Co Cl2 能造成 Müller细胞不完全缺氧 ,刺激 VEGF的分泌。结论 :Müller细胞在高糖、缺氧条件下 VEGF表达增强 ,VEGF表达水平的升高可能是高糖及缺氧条件下促进糖尿病视网膜病变的因素之一。     

迷迭香酸对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用

目的探讨迷迭香酸对高糖诱导下人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用。方法将人视网膜血管内皮细胞按培养方案分为对照组、迷迭香酸组、高糖组、联合组。Transwell法观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA检测各组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blotting法与qRT-PCR技术检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)与凋亡相关蛋白Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(BAX)的表达水平。结果迷迭香酸组与对照组各项指标差异均无显著性(P＞0.05)。与对照组比较,高糖组人视网膜血管内皮细胞迁移能力及细胞凋亡水平显著增加,炎症指标IL-6、IL-8与TNF-α的含量增加,VEGF、Caspase-3、BAX蛋白及mRNA水平增加,Bcl-2蛋白及mRNA水平降低(P＜0.05)。与高糖组比较,联合组迁移细胞数量、细胞凋亡水平、IL-6、IL-8与TNF-α的含量、VEGF、Caspase-3与BAX的蛋白及mRNA水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA水平增加(P＜0.05)。结论迷迭香酸可抑制高糖环境下人视网膜血管内皮细胞的迁移及凋亡状态,其机制可能与调控VEGF有关。     

高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌VEGF的影响及氟伐他汀的干预作用

目的:观察氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响?方法:体外培养HPMCs,同步化48 h后,分组如下:正常对照组?HGPDS组?HGPDS+Flu组?单纯Flu组?倒置显微镜观察各组细胞形态,RT-PCR法检测各组VEGF的mRNA表达,Western blot检测各组VEGF蛋白的表达?结果:与正常对照组相比,在HGPDS作用下,48 h后细胞由铺路石样转变为长梭形,1 × 10-6 mol/L Flu可部分逆转HPMCs的形态改变?与正常对照组相比,在HGPDS作用下,人腹膜间皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达明显增多(P < 0.05),并呈时间依赖性,VEGF mRNA和蛋白分别在HGPDS干预后12 h和48 h达高峰(P < 0.05)?Flu可明显抑制HGPDS诱导的VEGF的表达(P < 0.05),并呈浓度依赖性?结论:适当浓度的Flu可以抑制HGPDS刺激体外培养人腹膜间皮细胞VEGF表达增加?     

高糖环境对浅二度烫伤创面VEGF表达及创面血管化的影响

目的 建立糖尿病大鼠浅二度烫伤模型和不同浓度的高葡萄糖体外培养体系,研究高糖环境对促血管化生长因子的表达及创面血管化的影响.方法 ①90只清洁级SD大鼠分为对照组和STZ诱导的速发型糖尿病组,两组同时形成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别取烫伤后第1、3、7、10、14天创面皮肤组织样本,测定糖含量、FGF-2、血管内皮生长因子(VEGF)表达,检测微血管密度.②人脐带静脉内皮细胞分别在正常环境及30、50 mmol/L葡萄糖中培养7 d, ELISA法检测内皮细胞释放VEGF水平.结果 糖尿病组大鼠烫伤创面组织局部糖含量及VEGF表达均明显高于对照组,而其微血管密度显著低于对照组;体外培养的血管内皮细胞,高糖组释放VEGF水平显著低于正常环境组.结论 在糖尿病浅二度烫伤创面愈合过程中,存在促血管化生长因子高表达与血管内皮细胞低反应性的分离现象.     

高糖环境对浅二度烫伤创面VEGF表达及创面血管化的影响

目的建立糖尿病大鼠浅二度烫伤模型和不同浓度的高葡萄糖体外培养体系,研究高糖环境对促血管化生长因子的表达及创面血管化的影响。方法①90只清洁级SD大鼠分为对照组和STZ诱导的速发型糖尿病组,两组同时形成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别取烫伤后第1、3、7、10、14天创面皮肤组织样本,测定糖含量、FGF-2、血管内皮生长因子(VEGF)表达,检测微血管密度。②人脐带静脉内皮细胞分别在正常环境及30、50mmol/L葡萄糖中培养7d,ELISA法检测内皮细胞释放VEGF水平。结果糖尿病组大鼠烫伤创面组织局部糖含量及VEGF表达均明显高于对照组,而其微血管密度显著低于对照组;体外培养的血管内皮细胞,高糖组释放VEGF水平显著低于正常环境组。结论在糖尿病浅二度烫伤创面愈合过程中,存在促血管化生长因子高表达与血管内皮细胞低反应性的分离现象。