茶碱对小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及其作用机理

为探讨茶碱对神经元凋亡的影响及其作用机理,建立小脑颗粒神经元的低钾凋亡模型,用ＤＮＡ凝胶电泳、ＦＤＡ染色和放射免疫等方法,发现经不同浓度茶碱（１～２０ｍｍｏｌ／Ｌ）处理,低钾培养的小脑颗粒神经元存活率相应提高２２％～１００％,量效关系有高度显著性（Ｐ＜０．０１）,ＥＣ５０＝２．９７ｍｍｏｌ／Ｌ;经茶碱（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）处理的细胞,其ＤＮＡ凝胶电泳带没有“梯子”状分布;与不同浓度茶碱（５～８０ｍｍｏｌ／Ｌ）在ＣＯ２培养箱孵育１５ｍｉｎ,小脑颗粒神经元内ｃＡＭＰ均升高,且是剂量依赖性的。认为茶碱对撤去极化浓度氯化钾诱发小脑颗粒神经元的凋亡有保护作用,此作用产生除与其升高小脑颗粒神经元内ｃＡＭＰ有关外,还有其它机理。     

针刺镇痛与大鼠全脑cAMP和cGMP含量变化之间的关系

目的：探讨针刺镇痛与脑cAMP和cGMP含量变化之间的关系。方法：运用放射免疫分析法（RIA）测定大鼠电针前后,全脑组织中cAMP和cGMP含量的变化。结果：电针30min提高大鼠痛阈的同时,使全脑cAMP含量显著降低（P＜0．05）。结论：中枢环核苷酸可能参与针刺镇痛。     

侧脑室注射cAMP和ATP对大鼠睡眠的影响

运用多导睡眠描记(PSG)观察了Wistar大鼠侧脑室注射环磷酸腺苷(cAMP)和三磷酸腺苷(ATP)对睡眠的影响。cAMP可使觉醒(W)减少,深慢波睡眠(SWS_2)、慢波睡眠(SWS)和总睡眠时间(TST)增加,SWS_2潜伏期缩短而发作频率增加,SWS发作频率降低而发作持续时间延长,但cAMP的作用仅持续1h。ATP引起的睡眠变化出现较迟,直到第4h才引起W减少和TST增加。结果表明中枢运用外源性cAMP不仅减少觉醒和增加慢波睡眠,还使睡眠加深、睡眠质量改善;ATP也有明显的促睡眠效应。提示中枢cAMP和ATP参与睡眠—觉醒周期的调节。     

血浆和脑区中cAMP,cGMP含量与大鼠脑缺血损伤关系

了解环一磷酸腺苷、环一磷酸鸟苷含量的变化与脑缺血，再灌注损伤和功能恢复间的关系。方法：以大鼠卤血管阻断为模型，采用放兔法测定不同状态下血浆和皮层、海马、纹状体中ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ的含量。结果：ｃＡＭＰ在各脑区和血浆中的含量，缺血组、再灌组、腺苷和Ｎ＾６－环乙烷基腺苷给药组分别与对照组相比均无显性变化（Ｐ〉０．０５），ｃＧＭＰ的血浆含量由对照组的５．３２±１．３５ｐｍｏｌ／ｍｌ增高至再灌组的１８．     

胃癌患者血浆及癌组织中cAMP含量消长的研究

本文测定切除胃癌20例癌组织cAMP含量明显低于其切断端非癌胃粘膜cAMP含量,差异显著(P>0.05)。健康成人27例血浆中cAMP含量21.84nmol/L,胃癌患者21例血浆cAMP 8.24nmol/L,差异非常显著。(P<0.01),cAMP含量与胃癌恶性程度呈负相关关系。提示胃癌的发生与cAMP降低有内在联系,检测血浆中cAMP含量可估计胃癌的恶性程度和预后。     

周围神经缺血与神经元凋亡

周围神经缺血将导致缺血部位神经纤维退行性变 ,缺血部位在轴突 ,但同时不可避免波及相关背根节神经元和脊髓运动神经元 ,造成一定数量的神经细胞变性及死亡[1-4] 。最近的研究显示 ,神经损伤后其相关神经元胞体死亡过程与凋亡密切相关 [5] 。1　细胞凋亡的研究概况细胞凋亡又称程序性细胞死亡 (PCD) ,是指为维持机体正常生理功能 ,维持内环境稳定 ,在基因控制下细胞自主的有序性死亡 ,是自然界、生物界重要的生命现象之一。生物体内环境的稳定不但依赖细胞的增殖和分化 ,也依赖于细胞的凋亡 ,以清除机体内衰老、损伤及变性的细胞。凋亡是…     

杏仁核微量注射cAMP和ATP对大鼠睡眠和觉醒的影响

目的：观察杏仁核内微量注射环磷酸腺苷和腺苷三磷酸（ＡＴＰ）的睡眠和觉醒的影响。方法：多导睡眠描记。结果：ｃＡＭＰ可减少觉醒（Ｗ），缩短入睡潜伏期（ＳＷＳ１），增加慢波睡眠（ＳＷＳ）和总睡眠时间（ＴＳＴ）；ＡＴＰ对睡眠无显著影响。结果：外源性ｃＡＭＰ可促进睡眠，抑制觉醒，杏仁核是睡眠－觉醒周期调节的重要部位。     

癫痫与神经元凋亡调控

癫痫是一种神经元发作性异常放电引起的、以反复痫样发作为特征的临床症候群。癫痫持续状态（statual epilepticus,SE）导致脑损伤的发病率日益增高,严重影响到病人的健康和生活质量。国内流行病学调查资料显示癫痫发病率接近1‰,而患病率约为4‰～9‰。癫痫病因错综复杂,至今尚未完全阐明。在人类颞叶癫痫患者及各种SE模型中（电点燃或化学点燃、局部或系统给予致痫剂等）,     

电针对大鼠全脑cAMP和cGMP含量的影响

运用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定大鼠电针前后全脑ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量的变化。结果显示：电针在提高大鼠痛阈的同时,使全脑ｃＡＭＰ含量显著降低（Ｐ〈０．０５）,提示中枢环核苷酸可能参与针刺镇痛。     

TEA敏感型钾电流在gp120引起的海马神经元损伤中的作用

目的:探讨gp120对TEA敏感型钾电流的作用以及该电流在gp120引起神经元损伤中的作用。方法 :分离怀孕18d SD大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象,分为对照组和gp120处理组,利用全细胞膜片钳的方法记录外向延迟钾电流的变化,通过MTT和TUNEL的方法分别观察gp120处理后神经元的活力和凋亡情况。Western blot观察Kv2.1钾通道的蛋白表达变化以及在TEA敏感型钾电流中的贡献度。结果:gp120能引起外向钾电流明显增大,具有浓度依赖性,其中TEA敏感型成分参与了外向钾电流的增大。此外,MTT和TUNEL实验发现,gp120能引起神经元活力的下降和凋亡,而钾通道抑制剂TEA能缓解由gp120引起的细胞损伤。进一步实验表明,gp120可上调TEA敏感型成分中Kv2.1钾通道的表达,且其特异性抑制剂Gx TX-1E能显著抑制神经元中TEA敏感型钾电流成分。结论:TEA敏感型钾电流参与了gp120引起的神经元损伤过程,其重要组成成分Kv2.1通道蛋白上调,提示该通道蛋白可能参与了gp120引起的细胞损伤。     

外向钾电流在谷氨酸引起的神经元损伤中的作用

目的:探讨谷氨酸通过(NMDA)受体对外向钾电流的影响以及引起神经元损伤的作用机制?方法:以分离出的孕18 d SD大鼠胎鼠的皮层神经元作为实验对象,分为对照组和谷氨酸处理组,利用全细胞膜片钳的方法记录外向钾电流的变化,通过细胞形态学和TUNEL的方法分别观察谷氨酸处理后神经元的损伤情况?结果:谷氨酸能明显引起外向钾电流的增大,而NMDA受体抑制剂MK-801明显抑制由谷氨酸引起的外向钾电流的增大?形态学以及TUNEL实验研究表明,谷氨酸明显引起神经元的损伤(P < 0.01),而MK-801?钾通道抑制剂TEA以及高浓度的外钾溶液能明显减缓由谷氨酸引起的细胞损伤(P < 0.01)?结论:外向钾电流参与了谷氨酸引起的神经元的损伤,但其机制仍需进一步的探讨?     

CRH对培养下丘脑神经元胞浆内cAMP和Ca2+变化的影响

目的 研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone，CRH)对下丘脑神经元胞浆内cAMP浓度和Ca^2 的调节作用。方法 取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元，采用PTI(Photon technology international，PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca^2 ]i)变化的影响，放射免疫方法测定神经元内cAMP含量。结果 正常对照组的下丘脑神经元[Ca^2 ]i和cAMP含量较低，外源性CRH刺激后，[Ca^2 ]i立即升高，神经元胞浆内cAMP生成明显增加；CP-154526可明显抑制CRH(10^-6～mol／L)刺激的下丘脑神经元[Ca^2 ]i和cAMP的生成增加。结论 cRH可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元，使神经元[Ca^2 ]i和cAMP含量明显增加，在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的CRH可能起了重要作用。     

大鼠脊髓损伤后神经细胞损伤与Caspase-3关系的研究

目的探讨大鼠脊髓损伤与凋亡促进因子Caspase-3之间的关系。方法SD大鼠24只,脊髓损伤后取损伤脊髓标本,应用HE染色、免疫组织化学和Caspase-3mRNA原位杂交,TUNEL染色,观察脊髓损伤区神经元损伤变化与Caspase-3表达之间的关系。结果脊髓损伤后5h可监测到Caspase-3免疫组化阳性细胞(10.2个/高倍视野),22～48h时达高峰(21.5～24.2个/高倍视野)。Caspase-3mRNA原位杂交阳性表达始于5h(6.66个/高倍视野),24h达高峰(14.55～18.22个/高倍视野),二者均在72h后呈明显下降趋势。损伤后24h,可监测到TUNEL阳性细胞,持续至72h。Caspase-3mRNA与Caspase-3呈正相关,相关系数为0.716(P<0.05).4～16h受损神经原形态基本正常,24￣48h细胞凋亡特征明显,72h后,几乎所有神经元形态呈现严重变化。结论大鼠脊髓损伤后神经元发生一系列形态变化,其演变规律与凋亡促进因子Caspase-3有密切相关性。     

JNK抑制剂及NAC对氧糖剥离后复氧复糖所致脊髓神经元损伤的保护作用

目的:初步探讨JNK(The c-Jun NH-terminal kinase)抑制剂及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对脊髓神经细胞氧糖剥夺复糖复氧的保护作用。方法:离体脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧损伤(oxggen-glucose deprivation/regain,OGD/R)模型建立。随机分组:A组对照组(n=6);B组JNK抑制剂组(n=6);C组NAC处理组(n=6)。分别于脊髓神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)4 h后,再复氧复糖4、12、24 h,应用MTT法检测细胞凋亡。结果:成功建立OGD/R模型;脊髓神经元OGD/R后,B组和C组MTT各时间点吸光值均高于A组,但B组和C组间差异不显著。结论:JNK抑制剂及NAC能有效抑制体外培养的脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧所引起的凋亡。     

硫辛酸对神经细胞老化过程中细胞凋亡的抑制作用

目的 分析硫辛酸对神经细胞老化进程中细胞凋亡的影响.方法 以无血清培养液培养大鼠神经母细胞瘤细胞,建立实验性神经细胞老化模型.建模后细胞随机分为实验组和对照组,分别以含100 μmol/L硫辛酸无血清培养液和单纯无血清培养液培养,于培养第5、10、15天时,运用MTT法检测细胞存活率,AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 与对照组比较,培养第5、10、15天时实验组细胞存活率显著升高,分别为(212.48±12.26)% us (100.00±14.80)%、(200.55±28.33)% us (75.45±10.79)%和(96.81±14.50)% us (28.54±3.14)%;细胞凋亡率则明显降低,分别为(8.60 4±1.96)% us(21.46±1.08)%、(18.6 4±0.60)% us (30.38±3.25)%和(28.20±3.83)% us(47.87±5.60)%;两组间细胞存活率和凋亡率比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论 硫辛酸可抑制神经细胞老化过程中的细胞凋亡,提高细胞存活率.     

ATF2在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡中的作用

目的 探讨bZip家族蛋白ATF2在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时的作用及机制.方法 体外培养小脑颗粒神经元,用含5mM KCl的无血清培养基(简称为低钾或5K)处理诱导凋亡,Western blot检测ATF2和c-Jun蛋白的表达及磷酸化水平;免疫耗竭检测ATF2是否主要与c-Jun形成复合物;转染小分子干扰RNA检测沉默ATF2与c-Jun表达对神经元凋亡的影响.结果 低钾刺激使ATF2和c-Jun磷酸化水平增加;ATF2主要与c-Jun形成复合物.分别沉默ATF2或c-Jun表达能抑制神经元凋亡(P＜0.05),且抑制凋亡程度没有差异(P＞0.05).结论 低钾条件下,ATF2主要通过与c-Jun形成复合物促进小脑颗粒神经元凋亡.     

细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的研究进展

细胞凋亡是指机体细胞在正常生理或病理状态下发生的一种自发的程序化死亡过程,细胞凋亡途径的失控会引发相关疾病。目前认为,细胞凋亡是动脉粥样硬化病变的独立危险因素。动脉粥样硬化斑块内细胞过度凋亡,在促进不稳定斑块形成的过程中起着重要的作用。本文就血管内皮细胞、血管平滑肌细胞及巨噬细胞凋亡与动脉粥样硬化的关系及细胞凋亡对粥样斑块稳定性影响方面的研究作一综述。     

镁对N-甲基-D-天冬氨酸诱导离体海马神经元凋亡的作用

目的研究硫酸镁对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导海马神经元凋亡的影响。方法离体培养出生3d以内的SD大鼠海马神经元7d后,用NMDA诱导神经细胞凋亡,分别于处理前、后用硫酸镁处理。用Hoechst33258作凋亡形态学的判定,用MTT法作细胞生存率情况的测定。结果与对照组相比,硫酸镁能抑制NMDA诱导神经细胞凋亡,在缺氧处理前后不同时间使用硫酸镁对细胞凋亡的影响有显著差别。结论镁离子对NMDA诱导的海马神经元凋亡有保护作用。