拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者HBV P基因区codon 550变异及临床研究

目的 研究慢性乙型肝炎患者服用拉米犬定后乙肝病毒YMDD变异情况．同时探索引起YMDD变异的影响因素。方法 选取136例应用拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者，ELISA检测HBeAg，抗HBe：PCR检测HBV DNA浓度，通过HBV codon 550特异性PCR扩增确定YVDD及YIDD变异情况。结果 79例疗程达52周者出现变异12例．同时YVDD及YIDD变异2例(2．5％)，57例疗程达104周者出现变异16例，同时YVDD及YIDD变异4例。治疗前HBeAg阳性82例中YMDD变异17例，抗HBe阳性54例中YMDD变异17例。结论 拉米夫定引起YVDD及YIDD变异是耐药的原因．YMDD变异与发生HBV前C区变异无关系．而与治疗前HBVDNA浓度有关。     

慢性乙肝患者HBV DNA载量与YMDD自然变异之间的相关性

目的探讨未经任何抗病毒药物治疗的慢性乙肝患者HBV DNA载量与YMDD自然变异之间的关系。方法筛选51例未经任何抗病毒药物治疗的慢性乙肝患者,检测HBV DNA载量与YMDD变异情况。结果 51例标本中检出YMDD变异株13例（25.5%）,其中YIDD变异1例,YVDD变异7例,共生变异（YIDD＋YVDD）5例;未检出YMDD变异株38例（74.5%）。结论未经任何抗病毒药物治疗的慢性乙肝患者存在YMDD自然变异,其自然变异的发生率与HBV DNA载量呈正相关。     

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组，特别处理芯片载体，用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择30例服用拉米夫定后，HBV DNA转阴(＜500copies／m1)，68周后又反跳≥500copies／ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBV DNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBV DNA反跳病人中，基因芯片测得HBV YMDD变异21例，其中YVDD变异11例，YIDD变异10例。HBV DNA PCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G，使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)，6例核苷酸A669变为C，氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸；核苷酸G743变为T，使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸。(氨基酸基序TM—DD变为YIDD)。其中有3例伴有核苷酸T781变为C，使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异，与PCR直接测序法比较，准确率达100％。     

拉米夫定治疗后YMDD变异对临床的影响与对策

目的:探讨慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗过程中YMDD变异与临床相关因素分析。方法采用美国罗氏Lightcycler荧光定量核酸分析仪,检测181例YMDD变异患者。结果YMDD变异后其表现形式多样,以YIDD变异率最高98例(54.1%),其次是YVDD42例(23.1%),依次为其它部位变异21例(11.6%),YIDD+YVDD7例(3.9%),YMDD+YVDD变异6例(3.3%),YMDD+YIDD5例(2.8%),YIDD+YVDD+其他2例(1.1%)。YMDD变异发生率与拉米夫定用药后HBVDNA转阴时间有关,HBVDNA3个月内转阴者,发生YMDD变异率最少,9个月内HBVDNA转阴者发生YMDD变异率最高。YMDD变异后,HBVDNA载量越高,ALT水平越高,P<0.05。结论了解上述各种检测结果可提示临床医生,有目的的进行观察,随访和早期合理用药。     

乙型肝炎病毒基因突变检测分析

目的：检测乙型肝炎患者HBV基因突变，为临床治疗乙型肝炎联合用药或单一用药提供实验室依据。方法：采用Roche LightCycler^TM荧光PCR定量分析仪，应用FQ—PCR技术进行乙肝病毒基因突变(YMDD)及HBV—DNA的检测。结果：经半年以上的临床治疗观察，拉米夫定加胸腺肽联合用药组20例乙肝患者未检测出YMDD变异株，用药后HBV—DNA和ALT检测指标分别随治疗的进度拷贝数降低和恢复正常；而单一服用拉米夫定药物治疗组37例乙肝患者，检测出发生YMDD变异有8例，阳性率22％，其中YIDD型6例，YVDD型2例，HBV—DNA和ALT检测结果的反跳分别占5．4％和8．1％。结论：乙型肝炎病毒耐药基因突变的检测有助于临床有效治疗。     

慢性乙型肝炎患者治疗前后乙型肝炎病毒YMDD突变情况分析

目的采用Taqman荧光探针技术对慢性乙型肝炎(乙肝)患者血清中乙肝病毒P基因区550位点的突变情况进行检测,对该院慢性乙肝患者乙肝病毒YMDD突变情况进行调查,为指导临床使用拉米夫定对乙肝患者进行治疗提供重要的参考依据。方法 2013年2~12月选取HBV DNA定量在2.00E+03 IU以上的慢性乙肝患者186例,其中90例未经过治疗(未治疗组),96例使用拉米夫定治疗1年以上(治疗组)。其血清采用聚合酶链式反应结合Taqman荧光探针技术,分C、I、V三组,分别对总HBV DNA(包括野生型和突变型DNA),YIDD突变DNA,YVDD突变DNA进行检测。结果 186例慢性乙肝患者中发生P基因区变异者共87例,其中治疗组患者发生YIDD变异9例(9.4%),发生YVDD变异36例(37.5%),YIDD和YVDD同时变异6例(6.2%);未治疗组患者发生YIDD变异6例(6.7%),发生YVDD变异24例(26.7%),YIDD和YVDD同时变异6例(6.7%)。两组患者YIDD变异、YVDD变异及YIDD和YVDD同时变异发生情况比较,差异均无统计学意义(χ2=0.011、0.156、0.206,P>0.05)。结论经过拉米夫定治疗的患者乙肝病毒P基因区发生变异的频率高,但未经治疗的慢性乙肝患者体内的乙肝病毒也可自然发生P基因区的变异,故在治疗前及治疗中进行耐药基因的检测对指导临床治疗用药具有重要意义。     

乙型肝炎病毒对拉米夫定耐药的临床研究

目的：探讨拉米夫定对乙型肝炎病人抗病毒效果及YMDD变异株的发生情况。方法：观察拉米夫定治疗前及治疗3个月、6个月、9个月肝功能（ALT）及免疫学指标的变化，并采用PCR微板核酸杂交ELISA技术检测HBV DNA含量及YMDD变异株（包括YIDD及YVDD突变株）。结果：47例HBV DNA阳性的乙肝病人口服拉米夫定治疗9个月后74％的病人血清HBV DNA水平转阴（＜1pg/ml血清），伴有ALT水平正常。有17％的病人出现HBeAg血清转移（e抗原转阴、e抗体转阳）。另有15％病人单纯HBeAg阳转阴。共有19％的病人出现YMDD变异株，分别于服药前3个月后1例，服药6个月后3例，服药9个月后又5例。其中有3例病人在服药期间出现YMDD耐药株，经加大拉米夫定用药3个月后，YMDD耐药株消失。仅1 例病人加大用药剂量后耐药株不消失。结论：口服拉米夫定9月，大多数病人血清HBV DNA转阴（＜1pg/ml），17％部分病人出现e抗原血清转移；19％的病人出现YMDD耐药。而e抗原血清转移绝大多数发生于HBV DNA低于100pg/ml血清的病人。     

乙型肝炎病毒基因突变检测分析

目的:检测乙型肝炎患者HBV基因突变,为临床治疗乙型肝炎联合用药或单一用药提供实验室依据.方法:采用Roche LightCycler TM荧光PCR定量分析仪,应用FQ-PCR技术进行乙肝病毒基因突变(YMDD)及HBV-DNA的检测.结果:经半年以上的临床治疗观察,拉米夫定加胸腺肽联合用药组20例乙肝患者未检测出YMDD变异株,用药后HBV-DNA和ALT检测指标分别随治疗的进度拷贝数降低和恢复正常;而单一服用拉米夫定药物治疗组37例乙肝患者,检测出发生YMDD变异有8例,阳性率22%,其中YIDD型6例,YVDD型2例,HBV-DNA和ALT检测结果的反跳分别占5.4%和8.1%.结论:乙型肝炎病毒耐药基因突变的检测有助于临床有效治疗.     

乙型肝炎病毒YMDD变异与乙型肝炎的治疗

拉米夫定是目前公认的治疗乙型肝炎的三种有效药物之一,短期内可使乙型肝炎病毒DNA水平下降,肝功能恢复正常,肝纤维化程度得到改善。拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的主要缺陷之一是耐药性的产生,而乙型肝炎病毒(HBV)对拉米夫定的耐药主要是由HBV的YMDD基序及附近的氨基酸变异引起的。本文对拉米夫定耐药率及其机制、YMDD变异株的生物学特性、YMDD变异株对其他核苷类抗病毒药物的敏感性等方面的研究进展进行概述。     

慢性乙型肝炎拉米夫定治疗中YMDD变异的预后

目的 探讨拉米夫定抗病毒治疗中出现YMDD变异的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患的预后及其临床转归。方法 对口服拉米夫定(100mg／天)后7～54个月出现HBV DNA由阴转阳的41例慢乙肝患的血清，采用DNA双向测序检测YMDD变异株，并同步进行HBV DNA定量、HBeAg定量及肝功能检测。结果 41例中YMDD变异株20例，YMDD野生株21例，变异率为48．78％。结论 YMDD变异株与野生株相比较，变异株的病毒复制活性较低。对于肝脏代偿功能差的患，出现YMDD变异后不能轻易停用拉米夫定，否则易造成停药后肝功能衰竭。     

乙型肝炎X蛋白与乙型肝炎病毒标志物定量及HBVDNA检测的关系研究

目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清X蛋白含量、HBVDNA、前S1抗原(Pre-S1)、乙型肝炎病毒标志物(HB-VM),探讨他们之间的关系,评估其在HBV感染中的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎患者血清中X蛋白,PreS1;时间分辨法定量测定HBVM,FQ-PCR定量检测HBVDNA。乙型肝炎X蛋白对疾病的影响。结果肝炎组患者的X蛋白阳性率高于健康对照组,肝癌组X蛋白阳性率高于肝炎组,乙型肝炎DNA测定值阳性X蛋白阳性率高于阴性,HBeAg抗原阳性中X蛋白的检出率也高于阴性,并且差异均有统计学意义。结论乙型肝炎X蛋白在疾病监测中有一定的临床意义,并且对病毒的复制有影响。     

前S1抗原在CHB检测中的意义

目的验证前S1抗原在HBV组合检测中的价值。方法收集门诊同步检测HBVDNA、HBVM、ALT／AST的288份血清,应用ELISA方法检测前s1抗原。结果288份血清中男175份,女113份,中位年龄36．89岁,均为CHB。其中pre-S1Ag（＋）197份（68．4％）,HBVDNA〉5．0E＋2copy／ml 161份（55．9％）,eAg（＋）71份（24．6％）,eAg（-）186份（64．58％）,ALT／AST〉42／50u／ml、ALT〉40u／ml64份（22．2％,AST〉50u／Inl60份（20．8％）。分P．S1Ag（＋）和P—S1Ag（-）两组,在P—S1Ag（＋）组中HBVDNA〉界值124例占62．9％,HBeAg阴性118份占59．8％占优势：分析HBVDNA阳性率和病毒血症水平P—S1Ag（＋）和P-s1Ag（-）在低于界值时各为35．2％和63．6％,在低于10^3 copy／ml时各为56．9％和81．7％,在10^5-10^8copy／ml时各为33％和14．3％;两组差异有统计学意义。结论P-S1Ag阳性在慢性乙肝中eAg阴性预疗病毒复制,协助诊断预后。     

2108例HBsAg阴性献血者HBV感染状况的分析

目的检测HBsAg阴性献血者HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc及HBVDNA。探讨加强对献血者隐匿性乙型肝炎检出的必要性及输血安全的重要性。方法收集2108例志愿献血的血液样本,酶联免疫吸附法（ELISA）检测其乙型肝炎五项标志物;核酸扩增及检测技术检测HBVDNA。结果 2108例献血者中,共有42份血清呈HBVDNA阳性,检出率达2.08%。其中,HBsAg（＋）、HBcAb（＋）组占4.35%（1/23）;HBsAb（＋）、HBeAb（＋）,HBcAb（＋）组占8.16%（8/98）;HBsAb（＋）组为2.00%（13/651）;HBeAg（＋）、HBeAb（＋）组占8.00%（4/50）;HBeAb（＋）组占4.67%（5/107）;五项血清标志物均为阴性的一组为1.05%（11/1052）。结论联合检测献血者乙型肝炎五项标志物和HBVDNA,有助于提高隐匿性乙型肝炎检出率,并可增加临床输血的安全性。     

乙肝E抗原阳性产妇卵巢组织中HBV cccDNA阳性的相关因素分析

目的检测人卵巢组织中HBV cccDNA,寻找人卵细胞为HBV靶细胞的证据。方法使用RT-PCR法测定33例慢性乙肝剖宫产手术产妇的卵巢组织HBV DNA、HBV cccDNA含量;同时检测孕妇的肝功能、HBV标志物与HBV DNA定量。结果产妇卵巢组织的HBV cccDNA与血清HBV DNA定量存在明显正相关性。其正相关因素为外周血HBsAg和HBV DNA定量(r=0.335),负相关因素为孕妇谷丙转氨酶水平(ALT,r=-0.360)及谷草转氨酶水平(AST,r=-0.347)。结论卵巢组织是HBV的靶器官,并可在其中复制。卵巢组织HBV cccDNA的存在与外周血HBV DNA载量、卵巢组织的HBV DNA载量和ALT、AST水平密切相关。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV DNA及血清标志物的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒前S1抗原（PreS1-Ag）与乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）、HBVDNA的关系及其临床应用价值.方法 采用采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定乙肝血清标志物和乙肝病毒PreS1;采用荧光实时定量PCR法测定HBV DNA,并对检测结果进行比较分析.结果 在乙型肝炎患者中,HBV DNA和PreS1-Ag的阳性检出率差异无统计学意义,两者具有良好相关性;PreS1抗原在HBeAg（＋）组中检出率（80.3%）和HBeAg（-）组中检出率（56.3%）,差异有统计学意义;部分HBeAg阴性患者仍存在病毒的复制;若以HBV DNA定量≥103拷贝/ml为病毒复制的诊断标准,HBV DNA阳性患者HBeAg和PreS1的阳性检出率分别为51.5%和70.9%,两者差异有统计学意义.结论 HBV DNA和PreS1-Ag有较高的符合率,可作为HBV感染与复制的良好指标,PreS1-Ag较HBeAg更稳定地反应了HBV复制的情况,可作为乙型肝炎新的检测手段和新的标志物.     

乙肝携带者血清HBVDNA浓度对乳汁HBVDNA的影响

目的探讨乙型肝炎病毒携带产妇血清HBVDNA浓度对哺乳的影响。方法选择乙肝携带产妇145例,采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对产妇血清HBVDNA与乳汁HBVDNA的进行检测,并将产妇血清HBVDNA浓度分级,分析产妇血清不同HBVDNA浓度级对乳汁HBVDNA阳性率。结果当产妇血清HBVDNA〈500copies/ml时,74例产妇的乳汁中检出HBVDNA阳性为零,当产妇血清HBVDNA浓度500～1e^6copies/ml时,30例产妇乳汁中检出HBVDNA阳性为3例,阳性率为10%（3/30）,当产妇血清HBVDNA浓度为≥1e^6copies/ml时,41例产妇乳汁中检出HBVDNA阳性为36例,阳性率为87.8%（36/41）。结论当产妇血清HBVDNA浓度达到或超过1e^6copies/ml时,乳汁中HBVDNA阳性率大幅度增加;而当产妇血清HBVDNA浓度小于1e^6copies/ml时,乳汁中HBVDNA检出率低。     

联合检测preS1和HBcAg在慢性乙肝患者中的临床价值

目的：探讨联合检测preS1和HBcAg（均为HBV核酸相关抗原,nucleic acids related antigen,HBVNRAg）在慢性乙肝患者诊疗过程中的临床价值。方法：对568例慢性乙型肝炎患者血清及486例正常对照血清采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）进行DNA定量检测,酶联免疫吸附试验（ELISA）进行preS1和HBcAg（结果以HBVNRAg表示）的联合检测,同时检测HBV DNA、HBV—M、ALT、AST。结果：在568例慢性乙肝患者的血清标本中,HBV NRAg检出率为98．3％,HBeAg的检出率为37．4％,前者明显高于后者,差异有统计学意义（P〈0．05）。1054份血清标本中,HBVNRAg阳性组较阴性组,ALT、AST检出率明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：联合检测preS1和HBcAg的HBVNRAg在筛选HBV感染及判断HBV复制方面具有较高的临床价值。     

肝癌患者肝组织HBV复制状态分析

目的了解肝癌患者HBV复制情况。方法对100例肝癌患者行HBV标记物检测。取其中10例肝组织行HBVcccDNA检查。结果肝癌患者抗HBe阳性率为71%,血清抗HBe阳性者血清HBV DNA<103拷贝/mL者占66.4%,明显高于血清HBeAg阳性者(16.7%,P<0.05);抗HBe阳性患者HBV DNA>107拷贝/mL占5.7%,明显低于HBeAg阳性患者的33.7%(P<0.05)。HBeAg阳性患者HBV DNA载量为6.8lg拷贝/mL,抗HBe阳性者HBV DNA载量为3.2lg拷贝/mL;送检的10例肝组织中,HBV DNA为阳性,HBVcccDNA阳性者6例。结论肝癌患者抗HBe阳性率高,肝组织仍可检出HBVcccDNA。     

血清乙肝病毒标志物和免疫球蛋白、补体水平的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎患者血清HBV标志物和免疫球蛋白、补体间的相关性。方法 205份血清用ELISA法检测HBV标志物，免疫比浊法测定IgG、IgA、 IgM和C3、C4。结果 （1）乙肝病毒感染过程中免疫球蛋白增加，补体水平下降；HBsAg阳性特别是同时伴有HBeAg阳性时，IgG、IgA水平的增高及C4水平下降最为显著。（2）抗HBs阳性血清的免疫球蛋白、补体水平与对照组差异无显著意义，而抗HBe、抗HBc阳性血表的免疫球蛋白增加，补体水平下降。结论 乙肝病毒血清标志物的存在及类型影响机体的免疫球蛋白和补体水平。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV DNA及血清标志物的关系

Objective To investigate the clinical significance and relationship of preS1, HBV DNA and HBV-M. Methods PreS1 and HBV-M was detected by ELISA method,and HBV DNA was detected by PCR. Then the results were analyzed. Results In HBV patients,the positive rates of preS1 and HBV DNA had no statistically significant ,they had fine dependability. The detection rate of preS1 in HBeAg(+) group(80.3%) and HBeAg(+)group( 56.3% ) had statistically significant. In some patients,though HBeAg had become negative, HBV still replicated. In HBV DNA replicated patients(≥103 copies/ml) ,the detection rate of HBeAg and preS1 were 51.5% and 70.9% ,they had statistically significant. Conclusion HBV DNA and PreS1 had fine dependability,preSl could reflect the replication of HBV sensitively than HBeAg,it could be used as a reliable new marker of HBV replication in vivo.