恶性疟原虫4个分离株的体外培养

为了筛选在体外培养中能形成成熟配子体的虫株,以建立恶性疟原虫蚊期和红外期实验模型,我们于1990年在云南南部疟疾流行区从4个病人分离出4个恶性疟原虫分离株,暂定名为B-1(Burma-1),FCC-901/YN,FCC-902/YN,FCC-903/YN,并进行了体外培养观察。     

恶性疟原虫青蒿素抗疟药抗性研究进展

疟疾是由疟原虫感染引起的一种传染病,是全球最重要的公共卫生问题之一。世界卫生组织（WHO）推荐以青蒿素为基础的联合疗法（artemisinin-based combination therapies, ACTs）作为疟疾流行地区的非复杂性恶性疟的一线治疗。青蒿素及其衍生物的应用在降低全球疟疾发病率方面发挥了不可或缺的作用。但近年来,青蒿素类药物抗性的出现与扩散使全球疟疾的控制与消除面临巨大挑战。目前,与青蒿素抗药性关系最为密切的是恶性疟原虫第13号染色体上K13基因的突变,但近些年不断有研究表明K13并不能解释所有的青蒿素抗性。本文综述近年来恶性疟原虫对青蒿素产生抗性研究领域的相关研究进展,包括青蒿素抗药性的定义、检测方法、抗性相关的分子标记等。此外,本文所讨论的某些问题仍存在争议,还需深入研究。     

恶性疟原虫体外培养的同步化方法

本文就恶性疟原虫体外培养的同步化方法加以综述,主要对恶性疟原虫的同步化方法,如传统的浓度分离法、渗透压分离法、Percoll梯度法、温度周期法、阿非迪霉素法,及近几年发展起来的磁性分离法及流式细胞分析仪法进行了介绍.     

体外培养恶性疟原虫的实验报告

<正>疟原虫属真球虫目(Eucoccidiida)、疟原虫科(Plasmodidae)、疟原虫属(Plasmodium),是疟疾(malaria)的病原体疟原虫通过被感染的蚊虫叮咬传播疟疾。这种传染病每年夺去大约100万人的性命,导致4亿人感染。     

恶性疟原虫青蒿素和哌喹耐药的流行现状及机制研究进展

恶性疟原虫是全球范围内危害重大的寄生虫类传染病病原体之一。青蒿素是抗疟药的首选药物,目前已在多个国家和地区发现恶性疟原虫对青蒿素及其与哌喹联合用药耐受性。研究已经发现与青蒿素耐药性有关的基因突变,但哌喹耐药性的机制仍有待进一步研究。本文就近年恶性疟原虫对青蒿素及哌喹耐药的流行现状和分子机制研究进展作一综述。     

4℃保存的红细胞在恶性疟原虫体外培养中的寿命观察

本文报道4C保存的红细胞,在恶心疟原虫体外培养中,通过红细胞感染率、疟原虫生长发育及血液质量的观察,结果表明红细胞寿命可长达75d。提示红细胞可以延长使用至50d。     

恶性疟原虫体外抑制实验方法的改进

以恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9免疫兔血清为待测血清,将起始原虫率从1%降至0.2%～0.5%,采用2种方法作对比,即一组每24 h更换培养液、加入免疫血清,另一组72 h内不更换培养液也不加免疫血清试验方法.培养至72 h,涂片,油镜下计数,计算原虫感染率和抑制率.结果2组的抑制率相近,经统计分析无显著差异.测定不同剂量抗原免疫血清的抑制率,结果显示抑制率与免疫血清中特异抗体滴度呈正相关,2种方法的结果无显著差异.研究表明通过降低起始原虫率可将常规体外抑制实验由需每天换液改为72 h不换液.     

海南省东方市恶性疟原虫对氯喹敏感性的体外检测

目的：检测海南省东方市东方地区恶性疟原虫对氯喹的敏感性。方法：采用WHO标准的体外微量法。结果：1986--1987年和1999--2001年，分别检测恶性疟患102例和101例，抗性率为63．73％和71．29％。IC50分别为1．08和1．10pmol/μl血，平均完全抑制裂殖体形成的药物浓度为6．19和5．57pmol/μl血。结论：当地恶性疟原虫对氯喹抗性仍然比较严重。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶（GDH）与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白，测定重组蛋白的免疫活性。方法：采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫（海南株）GDH基因，双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达，重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清，并用琼脂双向扩散法检测效价，ELISA、Westernblotting检测重组抗原的免疫活性。结果：获到了重组表达的抗原蛋白，表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应，并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答，免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1：16。结论：恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

青蒿素对恶性疟配子体感染性的影响

将２７例携带恶性疟配子体的患者，分为Ａ、Ｂ、Ｃ３组，Ａ组日服青蒿素１２００ｍｇ共５天，Ｂ组顿服甲氟喹７５０ｍｇ，Ｃ组顿服甲氟喹７５０ｍｇ＋伯氨喹４５ｍｇ。服药后按计划逐日取血观察配子体密度变化，同时观察配子体对大劣按蚊的感染情况。结果显示：Ａ组服药后４、７、１４和２ｌ天配子体密度和按蚊感染率下降非常显著，７天以后配子体感染性明显下降；Ｂ组７、１４和２１天配子体密度显著减少，１４天和２ｌ天配子体感染性和按蚊感染率下降非常明显；Ｃ组９例４天时有５例配子体消失，全部不能感染蚊媒。说明青蒿素对恶性疟配子体感染性有抑制作用，在阻断恶性疟传播途径方面的作用明显优于甲氟喹。     

恶性疟原虫红内期的体外培养及其影响因素

液氮内保存的FCC—1株恶性疟原虫红内期用蜡烛缸—平皿法体外连续培养40天。疟原虫复苏后培养的第3天原虫密度开始上升.第11天达到最高峰,其中一皿的红细胞含虫率高达20.56%。影响恶性疟原虫体外培养的有关因素如RPMI—1640培养液,血清和红细胞,本文进行了讨论。     

恶性疟原虫红内期在体外存活时间的实验观察

目的 观察恶性疟原虫红内期在体外存活时间，分析其培养虫血的感染活力。方法 采用Tragers等常规体外培养方法，待恶性疟原虫体外连续培养的原虫率达到15％～20％时，吸取含虫血于保存液置4℃贮存，以后每天吸取少量虫血培养，24h观察原虫生长情况。结果 恶性疟原虫血4℃贮存2d疟原虫减虫率80．6％，10d几乎为100％；11d已未发现疟原虫。结论 估算体外培养的恶性疟原虫红内期在体外4℃贮存，存活时间不超过11d。     

疟疾双重PCR检测方法的建立和初步应用研究

目的 建立一种适合于我国恶性疟、间日疟和两混合感染地区,一次性检测人体内或蚊体内的恶性疟原虫(P.f.)和间日疟原虫(P.v,)的双重聚合酶链反应(PCR)法。方法 根据疟原虫红内期SSUrRNA基因特定片段,设计合成3条寡核苷酸特异引物,在一个反应体系中,同时检测P.f．与P．v.的双重PCR技术,操作方法按PCR常规。结果 从P.f.和P．v．感染血样中,分别扩增出274bp和412bp的特异片段,检出水平达1-5个虫／μl血,而人基因组DNA、约氏疟原虫、伯氏疟原虫均未见扩增条带;但食蟹猴疟原虫(P．c,)与P.v．相似,在412bp可见扩增条带。经对采自不同疟区发热待查病人的滤纸干血滴和确诊疟疾病人的静脉血检测,344例血样中,检出阴性112例、P.f．109例、P.v.l114例、P．f. P.v.9例,阳性率67．4％;比常规镜检的阳性率66．3％稍高,尤以检出P．f． P．v．感染病例高。分别检测人工感染P.f．与P.v.各10只大劣按蚊的阳性唾腺,均被检出同种的阳性结果。结论一次性检测P．f.DNA与P.v.DNA的双重PCR法,敏感性高,特异性强,稳定性好,具有简化操作、提高工效、降低耗费的优点。对发热待查病人诊断和蚊媒感染疟原虫调查,以及疟疾病原学的检测质控方面,均有实用价值。     

大观霉素与其他4种抗生素体外抗淋球菌活性比较

目的：比较大观霉素与其他4种抗生素对临床分离淋球菌的体外抗菌活性。方法采用琼脂稀释法测定淋球菌株抗生素的最小抑茵浓度（ MIC）,按WH0西太区淋球菌耐药性监测统一标准判断敏感性。用纸片酸度定量法检测产B一内酰胺酶淋球菌菌株。结果本研究共测定493株淋球菌,大观霉素对淋球菌的敏感性为100%,其MIC50和MIC90均为16μg/ml,对产B一内酰胺酶淋球菌,大观霉素的MIC50和MIC90也为16μg/ml,均比耐药标准低8倍;其次为头孢曲松,虽未检出耐药株但中敏检出l64株（33.3%）;抗淋球菌活性最差的是青霉素,耐药率为89.0%;环丙沙星和四环素的耐药率也较高,分别为88.2%和85.6%。青霉素、四环素和环丙沙星的MIC。及MIC。均已超过耐药标准,尤其是青霉素最严重,其MIC50和MIC90均超过耐药标准的4倍和l28倍。结论大观霉素对淋球菌具有强大的抗菌活性,头孢曲松对淋球菌的抗菌活性也较高,两者可作为治疗淋病的首选药物,大观霉素对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高,提示这3种抗生素对淋病的治疗作用差。     

小连翘内生真菌种群分布及其抗菌性研究

目的 分析小连翘(Hyperioums sampsonii Hance)内生真菌的分布特征和抗菌活性.方法 采用内生菌分离法分离菌株,双培养法对峙试验测定其抗菌性.结果 从小连翘的根、茎、叶等不同的器官中分离得到81株内生真菌,经形态学分类鉴定分属于4个目,5个科,26个属,其中头孢霉属(Cephalosporium sp.)和丝核菌属(Rhizoctonia sp.)为优势菌群.不同部位内生真菌的类型、数量和分布存在差异,根部有31株,分属于12属;茎部有12株,分属于10属;叶部有38株,分属于13属.通过平板对峙实验发现,从小连翘所分离的内生真菌中54.32%对某些植物病原真菌有拮抗活性.结论 小连翘内生真菌及其代谢产物中具有潜在活性物质,值得深入研究.