树脂单体对人牙龈成纤维细胞增殖活性和乳酸脱氢酶活性影响的体外研究[英]／Issa Y…∥Dent Mater．

树脂修复体在口腔内由于受机械作用和化学侵蚀，其残余单体以及其他成分如引发剂或促进剂等缓慢释放，引起机体的不良反应。本研究通过测定人牙龈成纤维细胞的增殖活性(MTT分析)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性来分析复合树脂单体的细胞毒性浓度。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牙龈卟啉单胞菌细菌毒力抑制作用的体外研究

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对牙龈卟啉单胞菌(Por-phyromonas gingivalis,P.gingivalis)体外抑菌活性及EGCG对P.gingivalis诱导人牙龈成纤维细胞(human gingi-val fibroblasts...     

正畸改性流动树脂的体外研究

目的:为了增加正畸粘接剂的抗菌性,减少正畸患者的龋白斑发生,现将季铵盐单体甲基丙烯酸十六烷基二甲胺(DMAHDM)以不同浓度梯度加入到流动树脂中作为一种正畸改性粘接剂,以期该种改性粘接剂在满足正畸临床粘接要求的前提下获得更好的抗菌效果.方法:将DMAHDM以质量分数为0％、3％、5％、7.5％加入到3M Z350XT流动树脂中分别记为A组(0％DMAHDM+3M),B组(3％DMAHDM+3M)C组(5％DMAHDM+3M)和D组(7.5％DMAHDM+3M),并在离体牙上粘接托槽.测试托槽剪切粘结强度(shear bond strength,SBS),建立变形链球菌生物膜模型,扫描电镜观察菌斑粘附量,MTT法测得生物膜代谢活性A值来评价改性粘接剂的抗菌性能.结果:抗剪切强度分析,各组间SBS值差异有统计学意义(P=0.001),A组与B组差异无统计学意义(P=0.600),A组与C组、D组差异有统计学意义(P<0.05),C组与D组差异无统计学意义(P=0.530),与A、B组相比,C、D组SBS值下降.抗菌性能的检测,各组菌斑代谢活性(A值)差异有显著性(P=0.000),B、C、D组的抗菌效果均优于A组,C组优于B组,D组优于C组.扫描电镜观察,D组粘接剂的试件表面细菌粘附量最少.结论:在3M Z350XT流动树脂中添加7.5％DMAHDM抗菌剂作为正畸改性粘接剂,但仍能够满足正畸临床粘接的要求且抗菌效果显著,具有一定的临床应用价值.     

环孢素A和肿瘤坏死因子α对人牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的 研究环孢素A(cyclosporinA)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对体外培养人牙龈成纤维细胞增殖的影响,探讨牙龈炎症与药物性牙龈增生的关系及环孢素A所致牙龈增生的相关机制.方法用原代培养的方法获取5名健康人的牙龈成纤维细胞,体外培养、传代后取其中1个生长良好的组织块4～8代细胞用于实验.按以下条件进行实验分组:A组:空白对照组;B1组:10 μg/L环孢素A,B2组:50 μg/L环孢素A,B3组:250 μg/L环孢素A,B4组:1250 μg/L环孢素A;C组:5μg/L TNF-α; D1组:10 μg/L环孢素A+5μg/L TNF-α,D2组:50 μg/L 环孢素 A+5μg/L TNF-α,D3组:250 μg/L环孢素A+5μg/L TNF-α,D4组:1250 μg/L环孢素A+ 5 μg/L TNF-α.将条件培养液分别作用于牙龈成纤维细胞,培养3、5、7d后用甲基噻唑基四唑法测定细胞的增殖情况.结果不同质量浓度的环孢素A作用于成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,A值下降,其中B1、B2、B3组与A组相比差异无统计学意义,B4组与A组相比差异具有统计学意义(P =0.001);5μg/L的TNF-α作用于成纤维细胞可以刺激细胞的增殖,A值(0.542)与A组(0.441)相比显著升高(P＜0.01).环孢素A和TNF-α共同作用于成纤维细胞后,D1、D2、D3组A值均较A组升高,但均较C组显著降低(P＜0.05).D4组细胞增殖显著增加,与C组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).结论环孢素A对成纤维细胞的增殖无促进作用,高浓度时可抑制细胞的增殖;TNF-α可以促进成纤维细胞的增殖;高浓度环孢素A与TNF-α共同作用于成纤维细胞可促进成纤维细胞增殖,提示在一定浓度下环孢素A可能放大了TNF-α刺激成纤维细胞增殖的效应.     

树脂基托浸出物及降低其浸出量的方法

在树脂聚合反应中,单体甲基丙烯酸甲酯转换并不完全,基托内仍有残余甲基丙烯酸甲酯存在。在浸泡基托的液体中,可检测到甲基丙烯酸、甲醛、苯甲酸、邻苯二甲酸、苯甲酸苯酯、双环己基邻苯二甲酸酯、酞酸丁二酯、水杨酸苯酯和过氧化苯甲酰等成分。甲基丙烯酸甲酯及其派生物不但对牙龈成纤维细胞、牙髓细胞和牙周膜细胞等原代细胞的细胞膜完整性和细胞功能有一定影响,还影响谷胱甘肽、细胞因子和生长因子的表达。甲基丙烯酸甲酯单体的聚合程度直接影响材料的表面硬度、光洁度、拉伸强度、挠曲强度、抗疲劳度以及耐磨性、尺寸和颜色稳定性,加速唾液中某些酶对聚合物的降解和细菌在基托表面的滋生。提高聚合物粉液比,水浸泡,适当延长聚合周期或升高加热温度,聚合树脂热处理,添加聚乙烯纤维,添加交联剂,表面抛光,紫外线活化的涂层材料,适宜的活化剂质量浓度,可降低残余甲基丙烯酸甲酯水平。     

Adper Prompt自酸蚀粘结剂对人牙龈成纤维细胞的毒性分析

目的 分析Adper Prompt(AP)自酸蚀粘结剂对人牙龈成纤维细胞的毒性作用。方法 用MTT法测定人牙龈成纤维细胞在Adper Prompt自酸蚀粘结剂不同浓度稀释液中培养4 d、7 d的吸光度(A)值,计算细胞相对增殖率(RGR),并结合流式细胞仪测定不同浓度稀释液中培养4 d后的人牙龈成纤维细胞不同增殖周期时相的DNA百分含量,计算细胞增殖指数百分比,来评估AP的细胞毒性。结果 随作用时间和浓度的改变,Adper Prompt对细胞的毒性发生变化。时间越长,浓度越大,细胞相对增殖率(RGR)越小,细胞增殖指数百分比越小。结论 Adper Prompt自酸蚀粘结剂在体外对人牙龈成纤维细胞有一定程度的细胞毒性,在操作过程中应采取措施保护牙龈组织。     

二十碳五烯酸对人牙龈成纤维细胞生物学活性及炎症因子表达的影响

目的:探索二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性及炎症因子表达的作用.方法:分别通过活-死细胞染色、免疫荧光染色、流式细胞术观察EPA对HGFs细胞活性、形态、细胞周期的影响,采用牙龈卟啉单胞菌(P...     

20~40nm银的体外生物安全性研究

目的:本课题组之前的实验结果提示纳米银具有强有力的杀菌作用,本实验将探讨纳米银的体外生物安全性。方法:将人牙龈成纤维细胞与0.1%、0.5%、1.0%、1.5%和2%的纳米银-PLGA载体共同培养一定的时间,利用MTT法检测人牙龈成纤维细胞的增殖情况,并在骨向诱导培养基条件下分析人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性。结果:与对照组相比,人牙龈成纤维细胞的增殖情况在不同浓度的纳米银-PLGA组未出现明显减少,各组间也无明显差异。在骨向诱导培养条件下,人牙龈成纤维细胞表现出一定碱性磷酸酶活性,并且该活性未收到各浓度纳米银的影响。结论:本研究所采用的20~40nm银对人牙龈成纤维细胞具有良好的体外生物安全性。     

Bis-GMA/TEGDMA树脂水解产物分析

目的检测Bis-GMA/TEGDMA树脂片经去离子水浸泡后的水解产物。方法 Bis-GMA/TEGDMA单体加入CQ/DMAEMA后光照聚合制备树脂片,将树脂片经37℃恒温去离子水浸泡24 h,其中在1h、3 h、6 h和24 h四个时间点各取1 mL浸泡液,用乙酸乙酯萃取、旋蒸,通过高效液相色谱质谱法(HPLC/MS)检测分析,确定树脂水解产物。结果树脂片的水解产物为双酚A-二甘油醚(Bis-GMA-2MA)、双酚A-二氧代丙基醚(Bis-GMA-2MA-2H2O)、单甲基丙烯酸二缩三乙二醇酯(TEGDMA-MA)和二缩三乙二醇(TEGDMA-2MA)。结论 Bis-GMA/TEGDMA树脂片经去离子水浸泡后树脂可发生水解,水解产物及残余Bis-GMA/TEGDMA树脂单体可析出并释放到去离子水中。     

牙齿外伤钛固定夹板浸提液对人牙龈成纤维细胞生物学性能的影响

目的:观察牙齿外伤钛固定夹板(titanium trauma splint,TTS)浸提液对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)生物学性能的影响,为临床应用提供理论依据。方法:分离、培养鉴定人牙龈成纤维细胞,将牙齿外伤钛固定夹板浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养基中,通过倒置显微镜观察细胞形态学改变、MTT法细胞毒性实验和细胞凋亡实验,观察牙齿外伤钛固定夹板浸提液对人牙龈成纤维细胞生物学性能的影响。结果:牙齿外伤钛固定夹板浸提液对人牙龈成纤维细胞的形态无明显改变,其增殖和凋亡的影响较正常人牙龈成纤维细胞相比无明显细胞毒性,不引起细胞凋亡。结论:牙齿外伤钛固定夹板具有良好的生物安全性,有一定的临床应用前景。     

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨.方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞.在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒克满整个胞浆内.在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱.牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞.牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性.结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞.牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞.     

内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶的影响

目的观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶-1,3量的影响,探讨基质金属蛋白酶在牙周炎致病机制中的可能作用。方法通过改良酶消化组织块法进行牙龈成纤维细胞的原代培养,用内毒素对其进行刺激,运用MTT法观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性的影响,通过免疫组化法检测内毒素对牙龈成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1,3的影响。结果MTT结果显示,低浓度内毒素在短期内可以促进牙龈成纤维细胞的增殖,但随着时间的延长,也表现为对细胞的毒性作用,抑制其增殖;高浓度内毒素抑制牙龈成纤维细胞的增殖;免疫组化研究结果表明,未受LPS刺激的牙龈成纤维细胞MMP-1,3表达弱阳性,受刺激后阳性表达增强,在12h时达到顶峰,且MMP-3的整体表达较MMP-1弱。结论LPS可以影响牙龈成纤维细胞的增殖活性;LPS可以促进牙龈成纤维细胞对基质金属蛋白酶的分泌,加快牙周细胞外基质的降解,加速牙周炎的进程。     

重组质粒pcDNA3/sTNFR(p55)转染牙龈成纤维细胞的瞬时表达检测

目的检测重组质粒pcDNA3/sTNFR(p55)对人牙龈成纤维细胞的转染效率及瞬时表达。方法人牙龈成纤维细胞体外原代培养并传代,重组质粒用脂质体包裹介导进行体外转染。双抗体夹心ELISA法对重组质粒在人牙龈成纤维细胞中表达产物的含量进行检测。结果人可溶性肿瘤坏死因子受体[sTNFR(p55)]在基因转染24 h后开始表达,72 h最高,转染组细胞培养液和冻融液中sTNFR(p55)表达量均高于对照组(P<0.05),1周后表达逐渐减弱,2周后仍有少量表达。结论重组质粒pcDNA3/sTNFR(p55)在人牙龈成纤维细胞系中具有表达功能,并且在细胞外及细胞内均具有特异性表达产物。     

人釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG在人牙龈成纤维细胞表达的研究

目的　研究釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A -AMG在人牙龈成纤维细胞 (GFB)中的表达 ,为牙周再生的基因治疗奠定基础。方法　采用酶解 -组织块法体外培养得到人牙龈成纤维细胞 ,用釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG瞬时转染牙龈成纤维细胞 ,分别在第 4 8小时、第 5天、第 7天、第 14天收集细胞及细胞液 ,经ELISA连续测定釉原蛋白的表达。结果　转染后 4 8小时即检测到表达产物 ,表达量在第 5天和第 7天达到高峰 ,持续到第 14天仍可检测到釉原蛋白的表达。结论　实验结果为利用牙龈成纤维细胞为靶细胞 ,将釉原蛋白基因直接导入牙龈成纤维细胞内实现牙周再生的体内基因治疗奠定了基础     

DHA对人牙龈成纤维细胞生物学活性及炎症因子表达的作用

目的 探索二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性及炎症因子表达的作用.方法 分别采用活死细胞染色法、荧光染色法、流式细胞术观察DHA对细胞活性、细胞形态、细胞周期的影响;DHA预处理HGFs后,利用...     

体外培养人牙周牙髓相关细胞中釉原蛋白的表达

目的:观察釉原蛋白(amelogenin,Am)基因在体外培养的人牙龈上皮细胞及口腔外胚间充质来源细胞(人牙龈成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和人牙髓细胞)中的表达.方法:采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测培养细胞中釉原蛋白mRNA的表达.采用蛋白质免疫印迹技术检测培养细胞中釉原蛋白的表达.结果:培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞中均未检测到釉原蛋白及其mRNA的表达.结论:体外培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞不表达釉原蛋白基因.     

血管内皮细胞对牙周组织细胞迁移的影响

目的: 通过血管内皮细胞与牙周组织细胞的复合培养模拟牙周组织再生环境, 研究血管内皮细胞对牙周组织细胞迁移的影响, 为明确血管内皮细胞在牙周组织再生过程中的作用奠定基础。方法: 应用原代培养的血管内皮细胞, 在Transwell嵌套中实现与人牙周膜成纤维细胞、牙龈成纤维细胞间的复合培养。分别以Transwell嵌套滤膜下腔面24 h的细胞数量检测垂直迁移能力, 以划痕实验后0、8、16和24 h计数划痕区域的细胞数量检测水平迁移能力, 以玻片试验及计算机辅助图像处理软件计算实验第1、4和7天细胞覆盖创面的面积检测覆盖创面能力, 并均与单独培养的2种牙周组织细胞作为对照。采用SPSS13.0软件包对实验结果进行统计学分析。结果: 血管内皮细胞存在时, 2种牙周细胞在垂直和水平方向的迁移量均显著高于单独培养组(P<0.01), 且牙周膜成纤维细胞垂直向的迁移量显著高于牙龈成纤维细胞(P<0.01), 但其水平迁移量在实验24 h时则显著低于牙龈成纤维细胞(P<0.01);在血管内皮细胞共存条件下, 2种牙周细胞创面覆盖能力在实验第7天高于对照组, 且牙周膜成纤维细胞的创面覆盖能力的增加显著高于牙龈成纤维细胞(P<0.01)。结论: 血管内皮细胞对牙周膜、牙龈成纤维细胞的迁移和创面覆盖有明显促进作用, 且血管内皮细胞对牙周膜成纤维细胞的垂直向迁移和创面覆盖能力的促进作用更为明显。     

静磁场对人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究不同磁路设计的磁性附着体所产生静磁场对人牙龈成纤维细胞酶学的相关作用.方法:使用自主设计的磁场加载系统,产生不同强度的静磁场,对体外培养的人牙龈成纤维细胞进行不同时间的磁场加载.通过与对照组的比较,探讨磁场对该类细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:改变加载强度(120 mT、10 mT、0mT)或加载时间(1、3、5个加载周期),静磁场对人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性均无显著性影响(P＞0.05).结论:静磁场对牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性没有影响,初步提示开放及闭合磁路系统磁性附着体所产生静磁场,对牙龈成纤维细胞的相关酶不存在生物学效应.     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

人牙龈成纤维细胞对羟基磷灰石人工骨附着情况的体外实验研究

本实验采用人牙龈成纤维细胞体外培养的实验方法及扫描电镜观察,探讨新型人工骨材料—羟基磷灰石在植入并修复牙周病所致骨缺损后能否成为牙龈附着的基础,使牙龈结缔组织生长并牢固附着其表面,进而诱导新骨形成,为临床应用修复治疗牙周骨缺损、重建牙龈新附着提供依据。结果表明人牙龈成纤维细胞与羟基磷灰石附着生长情况良好,羟基磷灰石是一种具有良好组织生物相容性能的人工骨材料、用于牙周骨缺损的治疗,将有广阔发展前景。