神经生长因子对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的修复作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的修复作用.方法 分离培养大鼠脑皮质神经元及其微管相关蛋白-2(MAP-2)免疫荧光鉴定;通过台盼蓝拒染色动态观察NGF对神经元的活性的影响;采用机械性离心损伤皮质神经元,观察损伤后神经元的形态改变,并测量损伤前后不同时间段损伤组与损伤加NGF组乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果 培养4、5、6、8天NGF组与对照组进行比较,细胞存活率均有显著差异,P<0.05;损伤组与对照组LDH值比较差异有显著性(P<0.01);损伤组加NGF组与损伤组LDH值比较有显著差异(P<0.05,P<0.01).结论 NGF对皮质神经元有促生长作用;NGF对机械性大鼠脑皮质神经元的损伤具有修复作用.     

具有神经生长因子缓释功能的聚羟基脂肪酸酯膜片的制备及其对PC12细胞神经分化的研究

目的 制备一种可缓慢释放神经生长因子(NGF)的的高分子复合材料,用于神经组织工程的研究.方法 采用溶剂挥发的方式,将NGF与聚羟基脂肪酸酯(PHA)在有机溶剂中充分混合,再将其倒入圆形玻璃器皿中,形成一个表面和内部都含有NGF的PHA膜,并将纯的PHA膜和浸泡干燥的PHA膜(粘附NGF的PHA膜)作为对照.将上述三种膜分别进行微观形貌(扫描电子显微镜)、水接触角和NGF体外释放的检测.最后,在连续培养6 d后,观察三种膜对PC12细胞的神经分化影响.结果 相对于两个对照组,负载NGF的PHA膜表面形貌更起伏粗糙,有明显的蛋白粘附,也具有最佳的亲水性.同时,负载NGF的PHA膜能连续6天释放出稳定的且有活性的NGF,浓度大于100 ng/mL.负载NGF的PHA膜上的PC12细胞分化明显,在培养第3天时出现神经样细胞的分化表型,长出了轴突,而第6天邻近的几个PC12细胞的轴突相互接触并形成类似神经网结构;其他对照组没有明显现象.结论 成功利用生物材料PHA制备出一种具有NGF缓释功能的生物高分子膜片,并可诱导PC12细胞向神经细胞表型分化.     

血清乳酸脱氢酶及其同工酶测定的临床价值

对171例患者及31例健康人血清LDH及其LDHi进行测定,结果发现:患者LDH总活性都普遍升高,LDHi酶谱的变化以AMI及病毒性心肌炎最为显著,其中LDHi分别为43.27%和34.86%,LDH_1/LDH_2都大于1,分别是1.58和1.30,肝炎患者LDH_5升高明显;原发性肝癌LDH总活性升高的同时LDH_5也升高,有的高达34%。     

绿脓杆菌外毒素A对兔角膜基质细胞的毒性作用

目的：探讨绿脓杆菌外毒素A兔对角膜基质细胞的毒性作用。方法：含兔角膜基质细胞（1×10⁵•mL^-1）三维胶原凝胶表面添加提纯的不同浓度绿脓杆菌外毒素A（0.1、1.0和10 mg•L^-1）后，放入无血清MEM培养液中37℃培养24 h，采用光学显微镜观察培养的兔角膜基质细胞形态学变化，采用酶联免疫吸附法检测损伤的兔角膜基质细胞释放的乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果：添加不同浓度绿脓杆菌外毒素A（0.1、1.0和10 mg•L^-1）各组兔角膜基质细胞释放的LDH，与不添加绿脓杆菌外毒素A组比较，差异均有显著性(P<0.01）。添加不同浓度绿脓杆菌外毒素A各组较不添加绿脓杆菌外毒素A组，角膜基质细胞形态发生变化，细胞由长纺锤形变为圆形，细胞伪足减少。结论：绿脓杆菌外毒素A，破坏角膜基质细胞,对兔角膜基质细胞毒性作用有剂量依赖性。     

牛磺酸对氧化应激损伤的神经保护作用

目的:探讨牛磺酸对过氧化氢(H2O2)引起的神经元损伤的保护作用?方法:采用不同浓度的H2O2处理神经元,制备体外氧化应激模型,造模前24 h分别给予5?15?25 mmol/L牛磺酸预处理?采用特异性荧光探针DCFH－DA检测神经元活性氧自由基水平,检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率反映神经元损伤程度,用免疫印迹法检测脑源性营养因子(brain－derived neurotrophic factor,BDNF)及突触相关蛋白的表达水平?结果:与Control组比较,不同浓度的H2O2(25?50?100 μmol/L)均能使LDH向胞外释放增多(P < 0.05),15?25 mmol/L的牛磺酸均能减少H2O2引起的LDH的释放(P < 0.05)?100 μmol/L H2O2使神经元胞内活性氧水平升高,仅25 mmol/L的牛磺酸能抑制H2O2诱导的胞内活性氧的增多(P < 0.05)?100 μmol/L H2O2处理神经元导致BDNF?突触相关蛋白Synapsin和Spinophilin表达水平下降,给予25 mmol/L的牛磺酸能部分逆转H2O2诱导的蛋白水平的下降(P < 0.05)?结论:牛磺酸能够减轻H2O2引起的神经元损伤,具有较好的神经保护作用?     

食管鳞癌和贲门腺癌乳酸脱氢酶进一步观察

取癌症患者手术切除的新鲜标本癌旁及癌组织、进行冰冻切片和琼脂糖电泳。分别在含有和不含有3mol L尿素的孵育液中孵育.作乳酸脱氢酶(LDH)的同工酶检查。结果表明:①食管浅层上皮细胞、癌珠、胃上皮,胃腺主细胞的酶反应较弱.且不受尿素影响。而盐酸细胞的酶反应特别强,也不受尿素影响,说明这些细胞主要含H型。②贲门腺癌和食管鳞癌的LDH_5 明显高于相应的癌旁组织,说明癌细胞中M型升高用3mol L 尿素处理后,LDH_5反应明显降低。③3mol L尿素能完全抑制胃粘膜LDH_5 但不能完全抑制贲门腺癌、食管鳞癌及食管粘膜的LDH_5而用3mol L尿素处理后,三种组织的LDH_5反应明显降低。     

脆弱类杆菌脂多糖对表皮细胞的损伤作用

目的采用体外实验研究脆弱类杆菌脂多糖（LPS）对表皮细胞的损伤作用,探讨脆弱类杆菌的致病机制。方法用不同剂量的脆弱类杆菌脂多糖（LPS）刺激体外培养的人表皮细胞,24h后测定上清液乳酸脱氢酶（LDH）浓度及细胞增殖活力,并进行相关性分析。结果与空白对照组比较,脆弱类杆菌LPS刺激后培养上清液中LDH含量未见显著性增加（P〉0.05）,对细胞增殖活力也无明显抑制作用。而阳性对照组大肠杆菌LPS刺激后上清液中LDH含量显著增加,细胞活力显著下降。结论脆弱类杆菌脂多糖对体外培养人体表皮细胞无明显损伤作用,脆弱类杆菌LPS在脆弱类杆菌引起的炎症反应中并非重要的致病物质。     

猪主动脉内皮细胞培养及内毒素对其形态影响的初步观察

内毒素对血管内皮细胞的直接损伤效应报道不一。本文应用酶消化和机械刮取法在体外成功地培养了猪主动脉内皮细胞。在此基础上,我们发现1～100ng/ml E.Coli 内毒素对培养细胞无明显损伤效应(根据形态学观察,LDH 的释放和有无细胞分离判断),无论血清存在与否(1～20%)和作用时间(2～24h)长短。     

冰片及其类似物对谷氨酸诱导神经元细胞损伤的保护作用

目的:探讨冰片及其类似物对谷氨酸诱导神经元细胞损伤的保护作用?方法:用谷氨酸刺激胎鼠原代神经元细胞,造成细胞损伤,导致乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放到细胞外,通过测定药物抑制LDH的漏出率评价药物对神经元细胞的保护作用?结果:冰片(1)?冰片基甲酸(3)?2-冰片基乙醇(4)?2-冰片基乙酸(5)?2-羧甲基异冰片(6)?2,6-二异丙基苯甲酸(8)?2-(2’,6’-二异丙基)苯乙醇(9)?2-(2’,6’-二异丙基苯基)乙酸(10)都显示对神经元细胞的保护作用,冰片胺(2)?薄荷酸(7)则表现为神经损伤作用?结论:冰片及多数类似物对谷氨酸诱导的神经元损伤具有保护作用,其中,2,6-二异丙基苯甲酸(8)在1 × 10-5~1 × 10-7 mol/L浓度范围内都显示较好的神经保护作用,值得深入研究?     

神经生长因子在NCI-H466细胞中的表达及其生物学意义

目的： 探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）在小细胞肺癌细胞株NCI-H466中的表达及肺癌脑转移的可能机制。方法： 采用免疫荧光标记技术观察人小细胞肺癌NCI-H466细胞中NGF的亚细胞定位表达,并采用MTT试验及Transwell试验观察NGF对NCI-H466细胞增殖及侵袭能力的影响。结果： NGF在NCI H466细胞中亚细胞定位表达存在细胞周期特异性,在分裂间期,NGF主要呈颗粒状分布于细胞核内;在分裂中期,NGF分布于纺锤丝上。加入外源性NGF的NCI-H466细胞增殖明显加速,侵袭能力增强。结论： NGF可以促进NCI-H466细胞增殖和迁移,中枢神经系统内高NGF水平可能是肺癌易于发生脑转移的原因之一。NGF在肺癌细胞内具有亚细胞定位表达的特点,有可能作为一种新的治疗靶点。     

神经支架复合体修复周围神经缺损

目的探讨壳聚糖与琼脂糖水凝胶载体及外源性神经生长因子联合制成组织工程神经支架复合体修复大鼠周围神经缺损的可行性.方法壳聚糖与琼脂糖水凝胶载体及外源性的神经生长因子结合,制备成新型的组织工程神经支架复合体,修复大鼠坐骨神经10 mm缺损,术后16周进行免疫组织化学等再生神经形态学观察.用单纯壳聚糖导管和自体神经分别作为阴性、阳性对照.结果复合支架组的神经再生数目和直径均优于单纯壳聚糖导管组(P＜0.01),与自体神经移植组相当.结论壳聚糖与琼脂糖水凝胶载体及外源性的神经生长因子结合,制备成的组织工程神经支架复合体对大鼠神经再生提供良好的再生微环境,可明显促进神经再生,效果接近自体神经移植水平.     

神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察

目的观察神经生长因子对新生儿缺氧缺血性脑病的疗效。方法对照组患儿39例及治疗组患儿47例给予支持治疗及对症治疗,同时治疗组患儿应用神经生长因子肌注10d。结果对照组总有效率74．4％,治疗组总有效率93．6％;治疗组明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病有明显疗效。     

重组人胶质细胞源性神经营养因子对大鼠周围神经再生的作用

目的：研究胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对周围神经再生的作用,方法：硅胶管套接大鼠切断了的坐骨神经,术中一次性将GDNF、生理盐水（SAL）分别加入硅胶管中,术后4周,应用溃疡神经纤维染色法、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP)逆行追踪技术观察GDNF对轴突再生的影响。结果：与SAL组相比,GDNF组溃变神经纤维面积明显减少,SAL组溃变纤维面积百分率为17．3％,GDNF组为1．9％（P＜0．01）;GDNFXEG组脊髓HRP标记胞体显著增加,SAL组标记胞体数的百分率为43．5％,GDNF组为68．3％（P＜0．01）。结论：外源性GDNF能明显促进周围神经再生。     

角质细胞生长因子对肠上皮细胞辐射损伤的防护作用

目的 探讨角质细胞生长因子（ＫＧＦ）的辐射防护作用与机制。为应用ＫＧＦ防护肠道辐射损伤提供实验依据。方法 应用正常及不同剂量γ射线损伤的肠上皮细胞（ＩＥＣ－６）,通过在培养体系中加入不同剂量的ＫＧＦ后检测细胞增殖活性的变化以及凋亡细胞百分率,作为ＫＧＦ辐射防护效应和细胞辐射敏感性变化的指标。结果 正常培养的ＩＥＣ－６细胞,ＫＧＦ呈剂量依赖型促细胞增作用;１０Ｃｙ照射后ＫＧＦ促细胞增殖作用显著减弱,     

RNA干扰技术对SKOV3细胞EGFR表达的抑制作用

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术对卵巢腺癌细胞株SKOV3表皮生长因子受体(EGFR)表达的抑制作用。方法体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA(dsRNA),用lipofectamin 2000转染SKOV3细胞,采用RT-PCR和Western blotting技术检测EGFR mRNA和蛋白水平的变化,通过水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测细胞增殖力,采用细胞黏附和移动实验检测细胞体外黏附和移动能力,通过细胞侵袭重建基底膜实验检测细胞体外侵袭能力。结果序列特异性dsRNA-EGFR对SKOV3细胞EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为73.65%和58.94%。dsRNA-EGFR组在转染后24、48、72 h细胞增殖抑制率分别为22.54%、35.76%、31.07%;dsRNA-EGFR组在30 min和90 min黏附实验中的黏附率分别下降12.11%和18.66%;转染dsRNA-EGFR后细胞体外移动和侵袭能力的抑制率分别为25.47%和22.08%。结论化学合成的dsRNA可抑制卵巢癌SKOV3细胞EGFR表达,抑制细胞增殖、移动、黏附和侵袭力。     

广西产圆斑蝰蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

目的 从蝰蛇蛇毒中分离纯化神经生长因子(NGF)。方法 粗毒采用CM52阳离子交换柱层析，DEAE Sephadex A-50阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤进行分离纯化。洗脱峰利用PCI2细胞测定活性，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦圆盘电泳(EFG)等方法，进行理化性质的鉴定。结果 从粗毒6．0g中得到电泳纯的神经生长因子3．64mg，分子量为36kD，由两个亚基通过二硫键交联组成二体结构。等电点pI为6．7，在0．5～5．0μg／mL时，对PCI2细胞有良好的促进分化作用。结论 本法可从广西产圆斑蝰蛇毒粗毒中得到电泳纯的神经生长因子。     

The Effect of Connective Tissue Growth Factor on Human Renal Tubular Epithelial Cell Transdifferentiation

Summary To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC),in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose CTGF-treated group (rh CTGF, 2.5 ng/ml) and high dose CTGF-treated (rhCTGF, 5. 0 ng/ml). Then the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) were assessed by indirect immuno-fluorescence, and the percentage of α-SMA positive cells were assessed by flow cytometry. RT-PCR were also performed to examine the mRNA level of α-SMA. Upon the stimulation of different concentrations of rhCTGF, the expression of α-SMA were markedly stronger than that in negative controls. The percentages of α-SMA positive cells were significantly higher in the stimulated groups than that of negative controls (38.9%, 65.5% vs 2.4%,P<0.01). α-SMA mRNA levels were also up-regulated by the stimulation of rhCTGF (P<0.01). These results suggest that CTGF can promote the transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells towards myofibroblast (Myo-F). ZHANG Chun, male, born in 1977, M. D., Ph. D. This work was supported by a grant from the Science & Technology Foundation of Hubei Province (No. 2003AA301C14).     

人血管内皮生长因子shRNA真核表达载体对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖影响

目的:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,观察对其增殖影响。方法:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及细胞的克隆形成能力的变化。结果:VEGF shRNA真核表达载体大部分阻断肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达,转染后细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;MTT法观察细胞生长速度变慢,单个细胞的克隆形成能力明显下降。结论:VEGF shRNA真核表达载体可明显抑制SMMC-7721细胞增殖能力,为将VEGF shRNA真核表达载体应用于肝癌的基因治疗提供依据。     

自体造血干细胞移植治疗实体肿瘤12例

目的探索和评价自体造血干细胞移植(APBSCT)治疗实体肿瘤的作用和效果。方法自2003年9月～2005年11月采用APBSCT治疗实体肿瘤患者12例,其中初治2例,经手术切除肿瘤8例;淋巴瘤2例。(1)动员方案为化疗+G-CSF,经2～3次采集获得MNC中位数为5.2×108/kg的干细胞,其CD3+4细胞为4.3×106/kg,干细胞采集后-80℃冰箱冷冻。(2)预处理方案:12例不同类型的肿瘤选择不同的高剂量化疗方案。(3)预处理后24h,回输自体造血干细胞。(4)出现低血细胞期及低免疫细胞期,给予G-CSF、EPO,静脉丙种免疫球蛋白及中药扶正固本等综合治疗。结果(1)近期疗效:12例患者CR4例(33.3%),PR8例(66.7%),在移植后的7～10d快速重建造血干细胞及免疫细胞的功能并发挥作用,无1例出现感染及出血现象。其中3例未经手术的肿瘤患者,X线胸片、CT扫描示肿瘤病灶有不同范围的缩小,肿大淋巴结消失。(2)远期疗效:每3个月为1周期,随访时间3～36个月。2例患者已死亡(其中1例转移肺癌延长生存期12个月,1例淋巴瘤IV期B延长生存期6个月)。其余患者均提高了生活质量。结论经APBSCT支持下的高剂量化疗治疗实体肿瘤是一种较安全的,能够提高缓解率的重要手段。