幽门螺杆菌CagA对AGS细胞RNA转录相关磷酸化蛋白的影响

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）细胞毒素相关蛋白A（CagA）作用后人胃腺癌上皮细胞（AGS）RNA转录相关蛋白磷酸化的变化情况,进一步揭示CagA的致病机制,为寻找生物标记蛋白奠定基础。方法采用金属离子亲和吸附富集技术富集H.pylori、H.pylori CagA缺失株（H.pylori△CagA）与AGS细胞相互作用4h、以及培养相同时间的AGS细胞的磷酸化蛋白,利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋门,ImageMaster 2D分析软件比较分析识别差异蛋白,4700型MALDI源蛋白分析器确认蛋白。结果CagA致使AGS细胞的7个RNA相关的磷酸化蛋白出现差异表达,其中1个磷酸化蛋白表达量上调、4个磷酸化蛋白表达量下调、2个新出现磷酸化的蛋白。hnRNP D0 127位的苏氨酸及137位的丝氨酸发生了磷酸化。结论CagA作用后,致使hnRNP D0蛋白磷酸化。AGS细胞与RNA转录相天蛋白磷酸化的变化,呈现出诱导细胞凋亡、增殖及有利于细胞免疫逃逸的趋势。     

幽门螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人数众多,但临床表现各异。大部分感染者终生无症状,但部分感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关胃淋巴瘤。Hp感染之所以有不同结局,在于菌株间存在致病力差异。Hp的致病因子包括菌毛、鞭毛、尿素酶、粘附素、细胞空泡毒素(vacuolization cytotoxin,VacA)、细胞毒素相关基因(cytotoxinassociated gene A,cagA)产物等,一些国家的流行病学研究表明,含细胞毒素相关基因,表达细胞毒素相关抗原A(cytotoxinassociated antigen A,CagA)的Hp菌株感染与十二指肠溃疡和胃癌等严重胃肠疾病发生有关,使cagA/CagA备受各国学者关注。最近,CagA进入宿主细胞后被磷酸化并导致宿主细胞形态改变的报道,为阐明CagA的致病作用和机制提供了契机,使得CagA的功能成为目前Hp研究的热点之一。     

定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立

目的建立定量检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因Ａ（ｃａｇＡ）的方法。方法以含ＨｐｃａｇＡ片段的质粒（ｐＭＣ３）作为外参照品，在微孔板中对聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ｃａｇＡ的产物进行辣根过氧化物酶标记探针的杂交及酶促显色以定量检测ｃａｇＡ阳性Ｈｐ。结果当ＰＣＲ反应体系中原始模板为１～１０５拷贝，循环次数小于或等于２５时，原始模板以相对固定的指数形式增加，在该范围内适宜定量分析。通过对２０份已知Ｈｐ菌株ｃａｇＡ的检测，符合率达１００％，观察结果的敏感度较电泳法提高了２００倍。定量检测不同胃黏膜组织中ｃａｇＡ阳性Ｈｐ，检出底线为６拷贝／毫克组织。结论本方法特异性强，敏感度高，对研究Ｈｐ与消化道疾病的关系及建立定量检测其他微生物的方法均有实用价值     

幽门螺杆菌毒力因子CagA与动脉粥样硬化

幽门螺杆菌的毒力因子CagA在动脉粥样硬化发病机制中起重要作用,CagA阳性的Hp感染能增加动脉粥样硬化的危险度,并通过抗原模拟、诱导自身免疫反应以及增强全身或动脉局部的炎症反应等途径促进动脉粥样硬化的发生发展。     

幽门螺杆菌cagA基因3''''端可变区和CagA蛋白EPIYA基序研究进展

细胞毒素相关基因A（cagA）编码CagA蛋白，是研究最多的幽门螺杆菌（H．pylori）基因之一。CagA蛋白经由Ⅳ型分泌系统进入Hpylori黏附的胃上皮细胞，其C-端发生酪氨酸磷酸化，磷酸化的CagA可引起细胞骨架重排、诱导细胞发生形态学变化、增强细胞动力，造成细胞异常运动和增殖．最终导致癌变。因此cagA阳性H．pylori菌株较cagA阴性菌株毒力更强。cagA基因3’端可变区重复序列数目的差异造成了cogA基因结构的多态性以及CagA蛋白大小、功能和细菌毒力（致病性）的差异。因此，cagA基因3’端可变区及其蛋白的EPIYA基序与H．pylori感染临床结果的相关性，成为目前H.pylori研究的热点之一。     

幽-螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染人数众多,但临床表现各异.大部分感染者终生无症状,但部分感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关胃淋巴瘤Hp感染之所以有不同结局,在于菌株间存在致病力差异.     

不同种族幽门螺杆菌菌株CagA蛋白羧基端结构和生物学功能的差异

目的比较不同种族H.pylori菌株CagA蛋白羧基端结构以及诱导AGS细胞延伸、分泌IL-8能力的差异。方法 PCR扩增CagA3′端可变区DNA序列并进行测序,获得CagA3′端可变区氨基酸序列。以不同H.pylori菌株与AGS细胞孵育,观察AGS延伸细胞的百分数,测定细胞培养上清IL-8含量。结果美籍亚裔和美籍非裔菌株的CagA羧基端氨基酸第3个EPIYA前后的氨基酸序列存在明显差异。不同种族cag PAI+H.pylori导致AGS细胞延伸、分泌IL-8能力无明显差异。cag PAI+H.pylori诱导细胞延伸AGS细胞、分泌IL-8的能力明显大于cag PAI-H.pylori。结论不同种族H.pylori菌株CagA蛋白羧基端结构存在差异。H.py-lori菌株诱导AGS细胞延伸、分泌IL-8的能力与cag PAI有关。     

中国三个地区幽门螺杆菌CagA羧基端多态性分析

目的分析我国不同地区幽门螺杆菌(H.pylori)的CagA羧基端可变区特征,比较CagA可变区序列差异。方法选取分离自西安、浙江、云南地区的41株H.pylori,PCR扩增CagA羧基端可变区。测序后使用Primer Premier 5软件将核苷酸序列翻译为氨基酸序列,使用Vector NTI Suit6软件将所有菌株的CagA羧基端可变区氨基酸序列进行比较分析。结果41株菌的CagA氨基酸序列可分为东亚型和西方型两类:38株分离株为东亚型模式,其中有31株为典型东亚型,7株为变异东亚型;1株分离株为典型的西方型模式,2株表现为片段缺失的变异西方型。结论中国不同地区H.pylori的CagA蛋白序列以东亚型模式为主,占92.7%(38/41);但在至少2个地区的菌株中发现有2株和1株菌CagA羧基端可变区为西方型模式。     

CagA与幽门螺杆菌致病的相关性研究

本文调查了114例胃镜受检者的 Hp 感染率,应用血清 ELISA 技术检测了 Hp 菌株中 CagA 阳性数,并对该蛋白与慢性胃病的关系进行了初步分析。结果发现54例中 Hp 阳性者,CagA 阳性25例;阳性率46.3%;胃炎、十二指肠溃疡和胃癌组织 CagA 阳性率分别为27.3%,71.4%和85.7%(P<0.01)。CagA 阳性菌株感染者胃粘膜的炎症程度、活动度及萎缩、肠化与淋巴滤泡形成数均高于阴性者。证实了 CagA 在 Hp 致病中的重要作用。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与脑梗死的关系

目的探讨幽门螺杆菌(HP)细胞毒素相关蛋白A(cagA)与动脉粥样硬化性脑梗死的关系。方法测定60例动脉粥样硬化性脑梗死患者(脑梗死组)的cagA-HP-IgG抗体、中性粒细胞、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血纤维蛋白原,应用颈部彩色多普勒超声仪进行颈部血管检测,并与50名健康对照者进行比较。结果脑梗死组cagA-HP抗体阳性率为62%,健康对照组为34%,两组相比差异有显著性(P0.05)。HP抗体阳性者颈动脉斑块和狭窄的发生率分别为92%和62%,健康对照组分别为52%和26%,差异有显著性(P0.05)。HP抗体阳性组较阴性组血hsCRP及纤维蛋白原明显升高(均P0.05)。结论cagA阳性菌株感染与动脉粥样硬化性脑梗死有关,且可能是脑梗死的独立危险因素。     

幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞白细胞介素-8基因转录的信号转导机制

背景:亚洲与欧美国家的幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cogPAI)存在地域差异,但此种差异与胃上皮细胞白细胞介素(IL)-8基因转录信号转导机制之间的关系尚不明确.目的:探讨我国H.pylori菌株诱导胃上皮细胞IL-8基因转录的信号转导机制.方法:以DNA杂交法分析长海医院5株临床分离H.pylori菌株的cagPAI状态.将含IL-8报告基因的人胃上皮细胞系L5F11分别与5株H.pylori共培养,或与各蛋白激酶(PK)抑制剂预作用1 h后再行共培养,用液体闪烁计数仪测定L5H11细胞的荧光素酶活性(IL-8基因转录),用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-8蛋白浓度.结果:在所分离的5株临床H.pylori菌株中,4株具有完整的cag PAI,1株cag PAI部分丢失.蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂除莠霉素A不仅能显著抑制H.pylori诱导的L5F11细胞的荧光素酶活性(P＜0.05或P＜0.01),而且能抑制其IL-8蛋白的分泌(P＜0.05或P＜0.01);PKG抑制剂KT5823和PKC抑制剂抑激酶素C对H.pylori诱导的IL-8基因转录和蛋白分泌均无影响.结论:与欧美国家的H.pylori菌株一样,本研究临床分离的H.pylori菌株亦通过PTK途径诱导胃上皮细胞IL-8基因转录.     

幽门螺杆菌OipA蛋白的研究进展

幽门螺杆菌（H.pylori）是人类重要的致病菌之一,近年其致病因子与胃肠疾病的关系已成为研究的热点,新的H.pylori致病因子逐渐被发现。外膜炎性蛋白A（OipA）是H.pylori外膜蛋白之一,研究发现OipA为H.pylori致病因子之一,与H.pylori相关疾病的发展密切相关,但不同地区研究结果不尽相同。本文旨在对H.pylori的致病因子OipA蛋白及其研究进展作一综述。     

不同病变胃组织端粒酶活性及其与让螺杆菌感染的关系

分析不同病变胃粘膜端粒酶活性的差异及其与幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）感染的关系,探讨端粒酶活性、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染与胃粘膜癌变的关系。方法：应用端粒重复扩增法测定正常胃粘膜、癌前病变和胃癌组织中的端粒酶活性,用酶免疫法检测Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染患者的血清Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ－ＣａｇＡ－ＩｇＧ水平,并分析端粒酶活性与Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ－ｃａｇＡ－ＩｇＧ水平的关系。结果：１７２例胃镜活检标本中,下沉胃粘膜     

幽门螺杆菌根除方案和影响因素

随着抗菌药物耐药性的不断上升,经典三联疗法对幽门螺杆菌（Hp）的根除率明显降低。近年出现的新治疗策略可替代三联疗法作为一线疗法,包括序贯疗法、含铋剂的四联疗法、伴同疗法、混合疗法等,以左氧氟沙星、利福布丁和呋喃唑酮为基础的疗法可作为补救治疗。此外,中药和益生菌亦可作为补充治疗。考虑到Hp的耐药性、CYP2C19基因表型、吸烟等诸多因素对根除效果的影响,临床医师应根据具体情况选择合理的治疗方案。本文就近年Hp根除治疗方案和影响因素作一综述。     

胃癌和慢性胃炎患者幽门螺杆菌蛋白质组学分析

背景：胃癌的发生是一个多因素多步骤的过程,幽门螺杆菌（H．pylori）感染在此过程中发挥重要作用。目的：建立胃癌和慢性胃炎H．pylori的双向凝胶电泳（2-DE）图谱,识别鉴定差异表达的蛋白质．探讨细菌本身因素在胃癌发病过程中的作用。方法：取H.pylori而阳性的胃癌和慢性胃炎患者胃黏膜组织后分离培养H.pylori,收集菌体并采用BCA法行蛋白定量,以2-DE分离Hpylori蛋白．采用PDQuest软件分析差异表达的蛋白质点．应用电喷雾四极杆飞行时间串联质谱（Q—TOF）进行鉴定,并在Mascot数据库中进行检索。结果：胃癌和慢性胃炎H．pylori总蛋白均获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱。共6个蛋白质点在胃癌和慢性胃炎中存在表达差异．其中超氧化物歧化酶、尿素酶仪亚单位、分子伴侣60kDa在胃癌Hpylori菌株中高表达,而巯基过氧化物酶、二磷酸核苷激酶、S．核糖基同型半胱氨酸裂解酶在慢性胃炎H．pylori菌株中高表达。结论：成功建立了分辨率高且重复性好的胃癌和慢性胃炎H．pylori蛋白的2-DE图谱,并鉴定出两种疾病相关菌株中差异表达的蛋白质点．这些蛋白质点可能在胃癌的发生中起重要作用。     

幽门螺杆菌27kDa外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定

背景：幽门螺杆菌（H.pylori)是全球人群中感染范围最广的致病菌，现已被公认为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因子，并与胃腺癌和胃淋巴瘤的形成密切相关。而H.pylori疫苗可能成为控制这一全球范围感染的有效措施。其研制和开发已成为目前研究热点。目的：探索研制H.pylori疫苗的新途径，对H.pylori27kDa外膜蛋白（OMP27）进行基因克隆和特性鉴定。方法：培养和收集H.pylori菌株NCTC11637，采用酚；氯仿抽提和纯化基因组DNA。分别设计引物P1和P2，并以该基因组DNA为模板，以聚合酶链反应（PCR）方法扩增OMP27基因片段。构建pQE30-OMP27重组表达载体时，pQE30质粒载体和纯化的PCR产物均用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切，再用T4DNA连接酶将双酶切后的目的基因片段OMP27重组于pQE30的相应酶切位点之间，连接产物转化大肠杆菌XL1-Blue。挑选转化克隆，提取质粒，并进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切和PCR方法鉴定，1%琼脂糖凝胶电泳观察酶切和PCR扩增结果，经测序分析确认后，筛选出插入目的基因的阳性克隆，命名为pQE30-OMP27，挑取单个含重组质粒pQE30-OMP27的工程菌（XL1-Blue)阳性克隆，进行培养和IPTG诱导表达后，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和Western blot进行蛋白表达和抗原性鉴定。结果：该目的基因的PCR产物全长723bp。编码241个氨基酸残基组成的多肽（约27kDa)。SDS-PAGE和Western blot检测表明，电泳图谱上显示出1条相对分子量约27kDa的新生蛋白带，占细菌总蛋白的5%，并能与H.pylori感染小鼠血清发生特异性反应，表明重组H.pyloriOMP27具有良好的抗原性。结论：H.pyloriOMP27有望成为新的H.pylori疫苗候选分子，并可作为抗原用于H.pylori感染患者血清膜蛋白抗体的检测。     

幽门螺杆菌对胃癌细胞线粒体DNA编码的细胞色素氧化酶基因表达的影响

既往研究表明胃黏膜细胞核基因组有线粒体DNA（mtDNA）片段整合,且这种整合与幽门螺杆菌（H. pylori）感染有关,并参与胃癌的发生.mtDNA片段与核基因整合后,是否会引起所编码基因表达的改变,这种改变是否与H.pylori感染有关尚不明确.目的：观察H.pylori作用于胃癌细胞后线粒体编码基因细胞色素氧化酶（COX）Ⅰ、COXⅡ和COXⅢmRNA表达的变化,探讨H.ptkiri致胃癌的分子机制.方法：将6μl/ml H.pylori培养滤液与胃癌细胞分别作用4 h、8 h和12 h,收集细胞,提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各时间点COXⅠ、COXⅡ和COXⅢmRNA的表达.结果：H.pylori作用4 h后,线粒体COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢmRNA的表达有所降低,8 h时下降更明显,12 h时段下降速度减缓;除COXⅡ4 h时与对照组无差异外,其余各时间点的表达量均显著低于对照组（P＜0.05）.结论：H.pylori可引起胃癌细胞线粒体编码基因COX Ⅰ、COXⅡ和COXⅢmRNA表达下调,影响线粒体的功能.     

Upregulated Cyclooxygenase-2 Inhibits Apoptosis of Human Gastric Epithelial Cells Infected with Helicobacter pylori

Helicobacter pylori induces apoptosis and alters the proliferation of gastric mucosal epithelial cells. Cyclooxygenase-2 (COX-2), the inducible form of prostaglandin (PG) synthesis, is known to cause alteration in epithelial cell growth. The goal of this study was to determine whether COX-2 gene expression by H. pylori infection could influence gastric epithelial cell apoptosis. Expression of COX-2 mRNA and proteins was up-regulated in Hs746T gastric epithelial cell lines infected with H. pylori, when assessed by quantitative RT-PCR and western blot. Inhibition of COX-2 expression using NS-398, a specific COX-2 inhibitor, showed a significant increase of gastric epithelial cell apoptosis and caspase-3 activation in Hs746T cells infected with H. pylori. Moreover, the effect of NS-398 on H. pylori-induced apoptosis was reversed by the addition of PGE₂. These results suggest that up-regulated COX-2 expression by H. pylori infection can inhibit apoptosis of gastric epithelial cells.     

The Distribution of Helicobacter pylori in Human Gastric Mucosa in vivo

Abstract: To estimate the distribution of Helicobacter pylori in human gastric mucosa in vivo, the phenol red dye spraying endoscopy lias been successfully developed and is performed after an oral and/or intravenous premedication of famotidine 20mg. This technique was conducted on 25 patients with chronic, atrophic gastritis, on 21 patients with a gastric ulcer and on 14 patients with duodenal ulcers. The red color changes which occurred on the gastric mucosa were classified into three types; the diffuse staining type, the regional staining type and the patchy staining type. In the chronic gastritis group, the diffuse staining type, the regional staining type and the patchy staining type occurred in 11 patients (44%), 7 patients (28%) and 2 patients (8%), respectively. The remainder of the patients' mucosa was unstained. In addition, the regional staining type occurred most frequently in the gastric ulcer group, while the diffuse staining type was dominant in the duodenal ulcer group. Notably, a recurrent and intractable ulcer was surrounded by regional staining fields in the stomach, and showed a diffuse staining at the antrum of the duodenum. These facts suggest that Helicobacter pylori prevented ulcer healing. This concurs with the results of our previous experimental study which found that the low concentration NH₃ solution, produced by Helicobacter pylori, prevented an acetic acid ulcer healing in rats and resulted from the suppression of the cell kinetics of the regenerative epithelial cells and the fibroblasts in the connective tissues at the ulcer margins.     

Different Effect of Helicobacter pylori on the Human Gastric Antral and Body Mucosal Intracellular Mucin

To elucidate the role of Helicobacter pylori infection in the pathogenesis of gastric ulcer, we investigated the intracellular mucin content by measuring the periodic acid-Schiff-Alcian blue (PAS-AB)-stained substances, by means of computer, in the biopsy sample of gastric mucosa from patients with and without H. pylori intection. In the antral mucosa the intracellular PAS-AB-stained mucin content was significantly smaller in patients with infection than in patients without infection, whereas in the oxyntic gland mucosa the intracellular mucin content showed no significant change between patients with and without infection. In an animal study we investigated the effect of ammonia, which might be produced by H. pylori in the presence of urea. The ammonia, administered orally, caused a greater decrease of intracellular PAS-AB-stained mucin content in the gastric antral mucosa than in the body mucosa, in a dose-dependent manner. The results suggested that H. pylori infection had a different effect on the gastric mucosal intracellular PAS-AB-stained mucin and lowered specifically the antral intracellular PAS-AB-stained mucin content, possibly due to generation of ammonia by H. pylori.