表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞cAMP及［Ca2＋］i的影响

目前，表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）是否以Ｃａ２＋及ｃＡＭＰ为第二信使尚存在分歧。本研究分别以Ｃａ２＋结合荧光染料（Ｆｕｒ...     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及5-氟尿嘧啶对培养的人视网膜色素上皮损伤愈合的体外研究

OBJECTIVE: To study the effects of epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) and 5-fluorouracil (5-Fu) on the cell migration and proliferation. METHODS: Phase-contrast microscopy, cell proliferation assay and wound -closure were used to study the process of cell proliferation and wound healing in a model of human retinal pigment epithelial (RPE) cell damage. RESULTS: It was found that EGF mainly stimulated proliferation and the migration of individual RPE cells from the wound edge, and induced cellular elongation, while bFGF mainly promoted proliferation and spread of the confluent monolayer into the wound defect, and induced enlargement and flattening of cells. But the effects of EGF, bFGF on wound closure were not very significant; 5-Fu inhibited the spread and proliferation of RPE cells, but had no effects on cell migration. CONCLUSIONS: EGF and bFGF have no significant effects on wound-healing, perhaps their effects on cell morphology are very important in cell transformation in proliferative vitreoretinopathy (PVR), and 5-Fu can only be a subsidiary drug to prevent PVR.     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞促进DNA合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人RPE细胞第6代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷(³H-thymidine, ³H-TdR)掺入试验及放射自显影检测EGF、bFGF对RPE细胞的促DNA合成作用。结果EGF、bFGF均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含2%血清的培养液中,EGE、bFGF作用最佳浓度为1ng/ml,明显低于无血清培养液中EGF、bFGF作用的最佳浓度(10ng/ml)。联合应用10ng/mlEGF、10ng/mlbFGF约提高RPE细胞合成DNA能力2.96倍。结论EGF、bFGF对培养的人RPE细胞具有促进DNA合成作用，且两者可产生协同效应。(中华眼底病杂志,1998,14:98-100)     

神经生长因子对人胚胎视网膜色素上皮细胞生长及其DNA合成的影响

研究表明一些细胞因子(如碱性成纤维细胞生长因子等)在体外能促进培养的视网膜色素上皮细胞 (retinal pigment epithelium, RPE) 增生和DNA合成[1].神经生长因子(nerve growth factor, NGF)不同于其他细胞因子,是主要作用于神经细胞和神经系统生长、发育以及发挥正常生理功能所必须的一类神经营养因子,虽然 RPE 细胞不是神经细胞,但它是从神经外胚层分化而来的,因此,我们试图在体外探讨NGF是否对 RPE 细胞生长以及DNA合成有促进作用.     

神经生长因子对人胚胎视网膜色素上皮细胞生长及其DNA合成的影响

研究表明一些细胞因子 (如碱性成纤维细胞生长因子等 )在体外能促进培养的视网膜色素上皮细胞 (retinal pigmentepithelium,RPE)增生和 DNA合成[1 ] 。神经生长因子 (nervegrowth factor,NGF)不同于其他细胞因子 ,是主要作用于神经细胞和神经系统生长、发育以及发挥正常生理功能所必须的一类神经营养因子 ,虽然 RPE细胞不是神经细胞 ,但它是从神经外胚层分化而来的 ,因此 ,我们试图在体外探讨 NGF是否对RPE细胞生长以及 DNA合成有促进作用。1　材料和方法4只人胚眼取自孕 16～ 32周水囊引产的胎儿。将胚眼收集在 4℃ D- Hanks液中…     

应用转基因技术体外培养表达人碱性成纤维细胞生长因子的视网膜色素上皮细胞

目的 探讨应用转基因技术体外培养稳定表达人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的可行性。方法 构建以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作为标记基因的人bFGF真核表达载体pcFG。应用脂质体介导法转染人RPE细胞,以G418筛选出表达bFGF的RPE细胞,并进行细胞克隆,传代培养4周。于荧光显微镜下观察GFP的表达情况,用原位杂交和免疫组织化学染色法检测bFGF在RPE细胞的表达情况。结果 酶切结果证实含有GFP的真核表达载体pcFG构建正确。在荧光显微镜下可见RPE细胞表达绿色荧光蛋白。经原位杂交和免疫组织化学染色证实,转染pcFG后的RPE细胞内有大量bFGF—mRNA的转录蛋白表达。结论 应用转基因技术可体外培养稳定表达bFGF的RPE细胞。     

白细胞介素-1β促人视网膜色素上皮细胞分泌血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的研究

目的 观察炎前因子白细胞介素-1β(IL-1β)对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-β浓度为0、1、10、20 ng/ml和时间为24、36、48 h作用下RPE细胞的VEGF和bFGF分泌量变化;采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定10 ng/ml IL-1β作用48 h后RPE细胞的VEGF和bFGFmRNA变化;噻唑蓝(MTT)比色法测定IL-1β刺激后RPE细胞的增生状态.结果 相同刺激时间即36 h作用下,终浓度为1、10 ng/ml的IL-1β促进RPE细胞VEGF的分泌(q=32.79,42.56;P<0.01);10 ng/ml的IL-1β促进bFGF的分泌(q=7.514,P<0.01);与浓度为10 ng/ml的IL-1β刺激相比,增加IL-1β刺激浓度至20 ng/ml使RPE细胞VEGF和bFGF分泌量下降(q=9.35,6.92;P<0.01).相同浓度即10 ng/ml的IL-1β作用下,IL-1β作用时间与RPE细胞VEGF和bFGF分泌量具有正性时间-效应关系;浓度为10 ng/ml的IL-1β作用48 h可促进RPE细胞的VEGF和bFGF mRNA水平;MTT结果 证明IL-1β未明显影响RPE细胞的增生状态(F=0.317,P>0.05).结论炎前因子IL-1β可影响人RPE细胞VEGF和bFGF的分泌量,在一定的作用浓度和作用时间范围内具有显著的促进效应.     

碱性成纤维细胞生长因子及其对晶体上皮细胞增殖的促进作用

本介绍了碱性成纤维细胞生长因子的分布和来源，阐述其基本特性及主要的生物学功能。探讨ｂＦＧＦ对眼晶体上皮细胞的增殖促进作用和后囊混浊的发病机理以及ｂＦＧＦ的作用机制。     

维甲酸对体外培养兔视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的：研究维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ,ＲＡ）对视网膜色素上ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞生长,增殖的影响。方法：通过细胞生长曲线的测定,观察１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＲＡ对ＲＰＥ细胞生长的影响;通过＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和液闪测定１０＾－５,１０＾－６,１０＾－７,１０＾－８,１０＾－９,１０＾－１９ｍｏｌ／Ｌ ＲＡ作用ＲＰＥ细胞５天,７天时每分钟脉冲值（ＣＰＭ     

褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨褪黑素(Mel)对过氧化氢(H202)氧化损伤的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞的保护作用及其作用机制.方法 实验研究.采用600μmoL/L H2O2建立体外培养的hRPE细胞氧化损伤模型.实验分为6组:溶剂对照组、600μmoL/L H2O2+溶剂组(H2O2损伤模型组)、600μmoL/L H2O2+10-7mol/L Mel组、600μmoL/L H2O2+10-6moL/L Mel组、600 μmol/L H2O2+10-5mol/L Mel组、600μmol/L H2O2+10-4moL/L Mel组.通过四甲基偶氮唑盐(MTT))法检测细胞活性;测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化损伤程度;分别用DNA Ladders电泳法和流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.溶剂对照组与600μmol/L H2O2组间均数比较采用随机区组设计的t检验;600μmol/L H2O2组以及600μmol/L H2O2+不同浓度Mel组间均数比较采用单因素5水平设计的方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 H2O2模型组较对照组细胞活性明显降低、SOD活件降低、MDA含量增加、凋亡率升高,差异均有统计学意义(t=2.25,39.50,68.42;P<0.05);Mel干预组较模型组细胞活性升高、SOD活性升高、MDA含最减少、凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),并与药物浓度的变化呈正相关趋势.结论 Mel对H2O2诱导的RPE的氧化损伤具有保护作用,其机制可能与影响细胞活性、增强抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关.     

视网膜色素上皮细胞凋亡中bax和bcl-2的表达

目的 探讨视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的分子机制。 方法 将柔红霉素加入培养的人RPE细胞培养液中(终浓度为180μg/L)作用12小时,撤药后继续培养24小时。通过光镜观察、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测和末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱氧尿苷三磷酸末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotin-dUTP nick end labelling,TUNEL)染色观测细胞凋亡状态。同时行bax和bcl-2免疫细胞化学染色和定量分析。 结果 柔红霉素作用后,部分细胞皱缩、核浆比例增大;TUNEL染色显示散在的阳性细胞;ELISA检测结果表明培养细胞中凋亡细胞比例随药物剂量增加而增大。与正常对照组相比,bax表达的积分光密度由69.4±6.3升至84.7±6.1(P<0.05);对照组和实验组细胞bcl-2染色的积分光密度分别为34.4±3.7和31.0±6.6(P>0.05)。 结论 在柔红霉素引发的人RPE细胞凋亡过程中,bax表达增强,bcl-2/bax 相对比率降低,提示bax和bcl-2在RPE细胞凋亡的调控中具有一定作用。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 153-156)     

生长因子对人视网膜神经胶质细胞增殖的作用

目的：研究生长因子对培养的人视网膜神经胶质细胞增殖的作用。方法：在培养的人视网膜神经胶质细胞中分别加入表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF,0.5～100.0ng/ml)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF,0.05～10.0ng/ml),培养3天后用MTT法测量细胞增殖情况。结果：EGF(0.5～100.0ng/ml)和NGF(0.05～10.0ng/ml)均能刺激人视网膜神经胶质细胞的增殖,其EC₅₀(half effective concentration,半数有效浓度)分别为17.0ng/ml和 0.7ng/ml。结论：EGF和NGF均能刺激人视网膜神经胶质细胞的增殖,它们可能在增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR）等增殖性病变中起一定作用。 (中华眼底病杂志,1998,14:33-34) (中华眼底病杂志,1998,14:33-34)     

过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞转录和表达促红细胞生成素的研究

目的研究不同浓度的过氧化氢诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞转录和表达促红细胞生成素（EPO）的现象并探讨其发生机制。方法原代培养人胚胎RPE细胞,经鉴定后,分别应用0、200、400、600、800μmol／L浓度的过氧化氢作用6h,造成RPE细胞不同程度的氧化应激,测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量;采用半定量RT-PCR法检测RPE细胞氧化应激中EPO在转录水平的表达变化;免疫组织化学法检测EPO在RPE细胞中的表达部位和表达变化。结果过氧化氢导致RPE细胞内SOD含量下降,MDA含量升高。半定量RT-PCR法检测结果显示过氧化氢诱导EPOmRNA表达量增加,并在一定范围内随着过氧化氢浓度的增高而增加,在600μmol／L过氧化氢组EPOmRNA表达量达最高值,之后随着浓度的上升而下降。免疫组织化学染色法检测结果显示过氧化氢可以诱导人RPE细胞EPO表达增强,并在一定范围内随着过氧化氢浓度的增高而增强,在600μmol／L过氧化氢组EPO表达量达到高峰。结论过氧化氢导致的氧化应激可以诱导人RPE细胞转录和表达EPO,EPO的表达量与RPE存活和耐受程度有关。     

转化生长因子β2对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成增殖的影响

目的：研究转化生长因子β2（TGF-β2）对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法：取眼库眼球游离其视网膜色素上皮细胞，用DMEM加10％血清及MEM氨基酸和庆大霉素，进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸（LPA）、转化生长因子β2（TGF-β2）及TGF-β2 LPA进行视网膜色素上皮细胞增殖试验，用细胞染色法进行细胞计数，提取视网膜色素上皮细胞DNA，用分光光度计进行DNA定量测定。结果：含有或缺乏1％小牛血清的两种LPA(10μM)均明显刺激视网膜色素上皮细胞增殖，但这种细胞的增殖被2nG/ml的转化生长因子-β2所阻滞。结论：转化生长因子-β2能阻滞体外培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖，TGF-β2在增殖性玻璃体视膜病变及RPE细胞中的确切作用，仍需进一步研究。