DC 荷载α-GalCer 联合肿瘤特异性 CTL对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的影响

目的：探讨树突状细胞（DC）荷载α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer）联合肿瘤特异性细胞毒T 淋巴细胞（CTL）对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的影响。方法诱导扩增小鼠骨髓来源的 DC 细胞和 T淋巴细胞,使其成为具有肿瘤特异性的 CTL;DC 细胞体外荷载α-GalCer。建立 Heps 肝癌移植瘤模型,采用随机数字表法将模型鼠分为4组（n ＝9）：对照组（静脉给予生理盐水）、CTL 组、DC 荷载α-GalCer组、DC 细胞荷载α-GalCer 联合 CTL 组。干预2周后取肿瘤组织,称取各瘤体重量,计算抑瘤率。免疫组织化学法和 Western blotting 检测各组移植瘤组织内 Bax 和 Bcl-2的表达水平。结果 CTL 组、DC 荷载α-GalCer 组和联合治疗组的平均瘤重分别为（1．07±0．15）g、（1．11±0．17）g、（0．79±0．14）g,均低于对照组（1．69±0．23）g,差异有统计学意义（t ＝14．176,P ＝0．023;t ＝12．351,P ＝0．034;t ＝18．672,P ＝0．000）。联合治疗组的平均瘤重低于 CTL 组及 DC 荷载α-GalCer 组,差异有统计学意义（t ＝15．236,P ＝0．012;t ＝11．176,P ＝0．037）。联合治疗组（53．25％）的抑瘤率高于 CTL 组（36．69％）和 DC 荷载α-GalCer组（34．32％）,差异有统计学意义（P ＝0．034;P ＝0．021）。免疫组织化学检测发现,CTL 组、DC荷载α-GalCer 组及联合治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞数量分别为35．83±0．75、33．67±0．82、41．17±1．17,与对照组（21．67±2．16）相比,差异有统计学意义（t ＝－13．789,P ＝0．002;t ＝－15．116,P ＝0．001;t ＝－17．452,P ＝0．000）;联合治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞数与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比,差异有统计学意义（t ＝－7．730,P ＝0．009;t ＝－5．872,P ＝0．011）。CTL 组、DC 荷载α-GalCer 组及联合治疗组移植瘤内 Bcl-2阳性细胞数量分别为30．83±0．75、31．67±1．03、25．00±0．89,与对照组相比（38．67±1．21）,差异有统计学意义（t ＝9．234,P ＝0．007;t ＝11．738,P ＝0．003;t ＝20．608,P ＝0．000）;联合治疗组移植瘤内 Bcl-2阳性细胞数与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比,差异有统计学意义（t ＝11．952,P ＝0．003;t ＝12．223,P ＝0．002）。Western boltting 检测结果显示 CTL 组、DC 荷载α-Gal-Cer 组和联合治疗组移植瘤内 Bax 的表达水平分别为0．46±0．01、0．42±0．03、0．55±0．01,与对照组（0．31±0．02）相比,差异有统计学意义（t ＝1．035,P ＝0．032;t ＝1．124,P ＝0．027;t ＝1．425,P ＝0．010）;联合治疗组移植瘤内 Bax 表达水平与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比,差异有统计学意义（t ＝1．305,P ＝0．013;t ＝1．421,P ＝0．010）。CTL 组、DC 荷载α-GalCer 组和联合治疗组移植瘤内 Bcl-2的表达水平分别为0．34±0．03、0．33±0．02、0．24±0．01,与对照组相比（0．46±0．01）,差异有统计学意义（t ＝－1．123,P ＝0．025;t ＝－1．061,P ＝0．031;t ＝1．278,P ＝0．014）;联合治疗组移植瘤内 Bcl-2阳性细胞与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比,差异有统计学意义（t ＝1．160,P ＝0．021;t ＝1．219,P ＝0．015）。结论 DC 荷载α-GalCer 与肿瘤特异性 CTL 联合应用对小鼠 Heps 肝癌移植瘤具有协同杀伤作用。     

致敏树突细胞治疗膀胱肿瘤血液细胞毒性T淋巴细胞的变化

目的观察致敏的树突细胞（DC）治疗膀胱肿瘤（BT）后血液细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的变化并探讨其机制。方法选取F344大鼠44只，称重后随机分为4组；均采用膀胱灌注N-甲基亚硝基脲（MNU）制成BT；第11周4组分别经皮下注射磷酸缓冲液（PBS）、未致敏DC、肿瘤抗原及致敏DC，每周1次，共4次；实验第15周，经显微镜和流式细胞仪（FCM）检测。结果致敏DC组膀胱重量比其他三组轻（P〈0．05）。致敏DC组BT病理分期低于PBS组和未致敏DC组（P〈0．05）；CD3^＋ T细胞在致敏DC组低于其余三组（P〈0．05）；CTL在致敏DC组高于其余三组（P〈0．001）。结论应用致敏DC经皮下注射治疗大鼠BT可降低肿瘤的病理分期，未致敏DC皮下注射对膀胱肿瘤治疗无效，肿瘤抗原皮下注射对膀胱肿瘤治疗效果欠佳。致敏DC可通过呈递抗原来激活CTL增生而发挥其免疫杀伤作用。     

CpG联合MUC1增强人外周血树突状细胞功能的实验研究

目的：观察CpG联合黏蛋白1（MUC1）应用对树突状细胞（DC）刺激T细胞增殖作用的影响。方法：应用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞,体外培养应用GM－CSF、IL－4、TNF－α等细胞因子诱导DC,观察细胞形态,并通过流式细胞术检测细胞标志物CD80、CD86。收获DC按如下分组：A：DC;B：DC＋CpG;C：DC＋MUC1;D：DC＋CpG＋MUC1;E：CpG＋MUC1,分别与T淋巴细胞混合培养,通过MTT法检测T细胞增殖情况。结果：DC表型检测结果为：CD80＋细胞占70．4％,CD86＋细胞占72．0％,呈现成熟DC表型。MUC1与DC联合疫苗与淋巴细胞混合培养显示：DC具有刺激T细胞增殖的作用,CpG＋DC组和MUC1＋DC组,分别较单纯DC组对T细胞的刺激增殖作用明显增强（P＜0．01）,DC＋CpG＋MUC1组又明显高于单用MUC1或CpG＋DC组,差别显著（P＜0．01）,单纯加CpG和MUC1（无DC组）则基本无明显刺激T细胞增殖作用。结论：CpG联合MUC1能明显提高DC促T细胞增殖的功能。     

HA 纳米载体转 hGM - CSF 基因的 HepG2 疫苗联合多柔比星抗肝癌作用

目的：评价HA纳米载体转hGM—CSF基因的HepG2疫苗联合多柔比星治疗肝癌的效果。方法：建立Hu—PBL—SCIDHepG2荷瘤小鼠模型,待皮下种植瘤长至100—150mm3时,随机分为5组,每组5只：对照组（PBS）;化疗组（多柔比星DOX）;疫苗组（60Co照射的转染GM—CSF基因的HepG2细胞）;先疫苗后化疗组;先化疗后疫苗组。末次治疗后第5天处死各组小鼠,用MTT法测定脾脏CTL活性及肿瘤组织浸润淋巴细胞（TIL）杀伤活性;取肿瘤组织行HE染色及CD8＋T细胞免疫组化检查。结果：化疗组的CTL活性与对照组相比无显著变化（P〉0．05）。疫苗组和先疫苗后化疗组及先化疗后疫苗组的CTL活性显著强于上述两组（P〈0．05）,该3组两两之间也存在显著差异（P〈0．05）,而先化疗后疫苗组的CTL活性增强最为明显,明显高于其他两组（P〈0．05）。该组的TIL活性同样强于其他各组。同其它组相比,先化疗后疫苗组的瘤体内可见大量肿瘤细胞坏死,CD8＋T细胞浸润显著增加。结论：HA纳米载体转染hGM—CSF基因的HepG2疫苗的主动免疫联合多柔比星化疗具有协同抗肝癌作用,为肿瘤免疫联合化疗治疗肿瘤提供了实验依据。     

树突细胞联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌治疗的实验研究

背景与目的：树突细胞（Dendritic cells，DC）是目前发现的功能最强大的肿瘤抗原专职免疫递呈细胞，DC疫苗是目前最具临床应用潜能的治疗性疫苗。肿瘤细胞凋亡小体被DC的MHC—1分子提呈并诱导的特异性CTL免疫反应抗癌作用显著。本研究探讨了DC负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌治疗作用。方法：制备C57BL／6小鼠骨髓源性DC并鉴定，负载肿瘤抗原后制备成疫苗。分别观察DC诱导的CTL和β-榄香烯对胰腺癌细胞的杀伤作用。体内观察DC疫苗联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌的抑制作用。结果1经电镜及流式细胞鉴定可获得典型的具有抗原加工及递呈作用的DC，利用TNF-α可使成熟的树突状细胞比例增加，MHC-Ⅱ、CD83、CD86等表面分子的表达较单纯DC组显著增强。负载凋亡抗原后DC诱导的特异性CTL体外对胰腺癌细胞有显著杀伤作用，效靶比30：1时，诱导的CTL对胰腺癌细胞抑制率达93％。β-榄香烯对癌细胞增殖抑制明显，DC疫苗与β-榄香烯联合治疗可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，使其生存期延长，联合治疗组生存期为49．4天，与单纯β-榄香烯组（24．8天）、DC疫苗（38．5天）、DC组（20．7天）及对照组（17．5天）相比有显著差异（P〈0．05）。结论：经凋亡肿瘤细胞致敏的DC回输荷瘤小鼠可激发宿主针对特异肿瘤的Th1及CTL免疫应答，以DC、介导的免疫反应联合中药的治疗方法可成为抗肿瘤的崭新且有效手段。     

薏苡仁提取物注射液对晚期原发性肝癌患者免疫功能影响的研究

目的：探讨薏苡仁提取物（康莱特,KLT）注射液对晚期原发性肝癌（PHC）患者免疫功能的影响。方法：用KLT治疗晚期PHC 52例为治疗组,并以常规对症处理治疗42例蛟期PHC为对照组,检测两组患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群（T－LS）及血清可溶性白细胞介素－2受体（sIL-2R)水平。结果：治疗组患者外周血CD3＋细胞,CD4＋细胞,CD4＋／CD8＋细胞比值治疗后较治疗前明显增高（P均＜0．05）,CD8＋细胞无显著性改变（P＞0．05）,血清sIL-2R明显降低（P＜0．05）,而对照组患者治疗后外周血CD3＋细胞,CD4＋细胞,CD4＋／CD8＋细胞比值及sIL-2R较治疗前无显著性改变（P均＞0．05）,结论：KLT对晚期PHC患者的免疫功能有一定改善作用。     

捕获肿瘤抗原的树突状细胞治疗小鼠膀胱肿瘤

目的：研究捕获肿瘤抗原的树突状细胞（dendritic cells,DC)治疗膀胱肿瘤的可行性。方法：分离小鼠脏树突状细胞,外体经粒－巨细胞集落刺激因子（GM－CSF）活化和放射线来活的肿瘤细胞刺激后（D组）,治疗膀胱肿瘤移植模型,并设立空白对照组（A）,单纯GM－CSF活化的树突状细胞组（B）及灭活肿瘤细胞组（C）。结果：D组特异性T淋巴细胞活性、IL－4及IFN－γ水平明显高于其它组（P＜0．01）;所有小鼠长期无瘤存活（＞100天）而其它组小鼠存活期小于30天（P＜0．001）。结论：捕获肿瘤抗原的树突状细胞治疗膀胱肿瘤具有一定的临床应用前景。     

荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤特异杀伤作用的研究

目的 观察荷CEA-rV的DC增强CD3AK细胞对CEA阳性肿瘤细胞的特异性杀伤功能。方法 用脐血制备脐血单个核细胞（UBMC），培养3h后，收集悬浮细胞制备CD3AK，重悬贴壁细胞制备DC。DC培养3d时加入CEA-rV，制备CEA-vV＋DC；在CD3AK培养8d时，加入CEA-rV＋DC混合培养，制备CEA-rV＋DC＋CD3AK。用MTT法测效应细胞UBMC，CD3AK，DC＋CD3AK，CEA-rV＋DC＋CD3AK，分别对CEA阳性靶细胞：LOVO，A549和CEA阴性靶细胞：肝癌细胞株BEL-7402，红白血病细胞株K652的杀伤活性。结果 ①用CEA兔抗人单克隆抗体对四种靶细胞株的鉴定结果表明，LOVO和A549确是CEA阳性细胞株，BEL．7402和K562确是CEA阴性细胞株。②培养10d的DC流式细胞仪检测结果示：高表达MHCI，Ⅱ类分子CD86（82．7％），CD80（51．1％），CD83（57．5％），CD40（69.4％），低表达CD123分子，光学和电子显微镜观察，DC细胞呈不规则形，有大量突起和伪足，成熟DC直径15-20um，胞浆线粒体，内质网丰富。证明为成熟DC。③CD3AK细胞和单纯UBMC细胞的流式细胞仪的免疫分子表型结果是，无论CD3，CD4，CD8和CD28，在CD3AK细胞组中的比率都是UBMC组的二倍以上。说明CD3AK组中成熟T淋巴细胞量明显高于UBMC细胞组。④三种效应细胞CEA-rV＋DC＋CD3AK，DC＋CD3AK和CD3AK对四种靶细胞的杀伤率均比单纯UBMC组明显提高（P〈0.01），而且CEA-rV＋DC＋CD，AK组〉DC＋CD3AK组〉CD3AK组〉UBMC组。说明细胞因子，DC和CEA-rV都有进一步提高UBMC广谱的杀伤肿瘤细胞活性的作用。⑤CEA-rV＋DC＋CD3AK和CD，AK相比较，对CEA阳性细胞LOVO和A549的杀伤活性提高的显著性（P〈0．01）明显优于对CEA阴性细胞K562和BEL-7402显著性（P〈0．05）。说明CEA-rV＋DC能显著提高CD3AK细胞对CEA阳性肿瘤的特异杀伤活性。CEA-rV＋DC＋CD3AK组和DC＋CD3AK组相比，对CEA阴性细胞株的杀伤活性无显著差异（P〉0．05），而对CEA阳性细胞株的杀伤活性确能明显提高（P〈0．01）。进一步证实了CEA-rV能明显提高CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用。结论 CEA-rV＋DC能明显提高CD3AK细胞对CEA阳性细胞株杀伤作用，单纯DC对提高CD3AK杀伤CEA阳性细胞的作用不显著，结果表明CEA-rV在提高CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用中起着关键作用。     

HepA-H和HepA-L肝癌荷瘤小鼠CD8+/CD28+T细胞和肿瘤新生淋巴管的研究

目的研究不同淋巴转移潜能肝癌（HepA-H和HepA-L）荷瘤小鼠体内CD8^＋／CD28^＋T淋巴细胞和肿瘤新生淋巴管，探讨与肿瘤淋巴转移的关系。方法用两种来源相同，而淋巴转移能力不同的小鼠肝癌细胞亚系，HepA-H（高淋巴转移）和HepA-L（低淋巴转移），小鼠皮下接种，制备荷瘤动物模型。采用抗小鼠CD8、CD28荧光标记单克隆抗体，流式细胞术定量检测小鼠外周血和肿瘤组织内CD8^＋／CD28^＋T淋巴细胞数量；应用5＇-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重组化染色法，观察肿瘤新生淋巴管。结果肿瘤皮下接种后14天，HepA-H组荷瘤小鼠外周血CD8^＋／CD28^＋T淋巴细胞数量明显低于正常对照组（P〈0．05）HepA-H组肿瘤组织内CD8^＋／CD28^＋T淋巴细胞数量显著低于HepA-L组（P〈0．05）。两种肿瘤细胞亚系均可诱导肿瘤新生淋巴管，但HepA-H肿瘤内和瘤周最高淋巴管密度均明显高于HepA-L组（P〈0．01）。结论肿瘤淋巴转移能力的差异与体内CD8^＋／CD28^＋T淋巴细胞数量及肿瘤新新生淋巴管有关。     

CD80 CD86和CD137L基因联合表达对小鼠肝癌种植模型肿瘤免疫原性的影响

目的探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达对肿瘤免疫原性的影响。方法按接种变异瘤株不同,将BALB／C小鼠随机分成A组（H22．Wt细胞）、B组（H22-neo细胞）、C组（H22-CD80／CD86^＋细胞）、D组（H22．CD137L^＋细胞）、E组（H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞）5组,建立H22．BALB／C小鼠荷肝癌模型,A、B组为对照组。观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、荷瘤鼠存活率及肿瘤增殖情况。通过复种试验观察转基因对H22变异株免疫原性和机体免疫保护作用的影响。结果E组首次接种成瘤率仅有50．0％,显著低于其余4组（P〈0．01）。首次接种后,C组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制,有2只荷瘤鼠肿瘤完全消退。E组肿瘤生长所受抑制较C组更为明显,肿瘤峰值体积显著小于C组,且有3只荷瘤鼠肿瘤完全消退。其余3组荷瘤鼠未见肿瘤完全消退。与A、B、D组相比,C、E组荷瘤鼠生存率显著改善（P〈0．01）,而C、E两组荷瘤鼠生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。复种试验表明,C、E组荷瘤鼠再次成瘤率低于对照组,E组与C组差异也有统计学意义（P〈0．01）;第3次接种后,E组成瘤率显著低于C组（P〈0．01）。E组中5只首次接种未成瘤的小鼠,于第21天重复接种H22-Wt细胞,小鼠100％排斥肿瘤,于第56天第3次接种H22／Wt细胞,小鼠仍然100％排斥肿瘤。结论CD80＋CD86和CD137L单独或者联合表达均可显著降低野生型H22细胞株致瘤性,CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著改善了野生型H22细胞的免疫原性。     

健康人和肿瘤患者CIK细胞的生物学特性比较

目的比较健康人和肿瘤患者外周血来源的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性;观察健康人CIK细胞对裸鼠体内移植瘤的预防和治疗作用。方法常规无菌采集健康人和肿瘤患者外周血单核细胞各10份,定向诱导成CIK细胞,然后直接活细胞计数法比较两者的扩增速度;流式细胞仪检测比较两者细胞表型;MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。取30只裸鼠分为3个组,预防组：裸鼠先尾静脉注射CIK细胞,连续5天,第6天背部皮下接种A549细胞。治疗组：裸鼠于第一天接种A549细胞,次日,分为3组,第一组局部（接种A549部位）注射CIK细胞;第二组尾静脉注射CIK细胞;第三组局部（接种A549部位）及尾静脉均注射CIK细胞,均连续治疗5天。对照组：裸鼠,第一天背部皮下接种A549细胞,第二天开始在尾静脉注射生理盐水,连续5天。四周后处死全部裸鼠,测量肿瘤大小,称重,计算肿瘤体积,抑瘤率,并做病理检查。结果健康人CIK细胞的扩增速度显著高于肿瘤患者CIK细胞（P〈0．05）;流式细胞仪检测显示健康人CIK细胞CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞百分比显著高于患者CIK细胞（P〈0．05）;健康人CIK细胞对K562,LOVO的杀伤活性强于患者CIK细胞（P〈0．05）。对照组各裸鼠背部皮下移植瘤出现较早,并且以相近速率快速生长,体积较大;CIK细胞预防组及治疗组中局部注射组和尾静脉注射组的移植瘤出现较晚,生长较慢,体积较小,联合治疗组治疗效果更佳（P〈0．05）。结论体外实验中,健康人CIK细胞体外扩增快,CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞比例高,对肿瘤细胞的杀伤活性强于肿瘤患者CIK细胞。动物实验中,健康人CIK细胞对裸鼠移植瘤有预防和治疗作用。     

Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤的抑制作用.方法:将Ad5-CCL20转染CT-26细胞,采用ELSA法和趋化实验分别检测CT-26细胞中CCL20的表达及其对DC的趋化作用.Western blot-ting检测热激结肠癌CT-26细胞中HSP70、GP96的表达.用热激后细胞蛋白(Heat组)对DC进行诱导,并设对照组(Control组)和阴性对照组(Unheat组),流式细胞术检测DC的表型.建立CT-26细胞移植瘤模型,设Ad5-CCL20/Heat、Heat、Ad5-CCIL20、Ad5-GFP和Control组,观察各组荷瘤小鼠肿瘤生长和生存时间;采用ELISAPOT法和LDH法分别检测脾组织T淋巴细胞分泌IFN-y的能力和对CT-26细胞的CTL杀伤活性,免疫组化法检测肿瘤组织DC浸润情况.结果:Ad5-CCL20转染CT-26细胞后可高表达CCL20,且对iDC、mDC都具有趋化活性,对iDC更为明显(P＜0.05).CT-26细胞热激后可高表达诱导型HSPT0和GP96.与Control、Unheat组相比,Heat组细胞蛋白诱导后DC的CD80、CD86、CCR6和MHC-Ⅱ的表达率明显升高(均P＜0.01).与Control、Ad5-GFP、Ad5-CCL20组和Heat组相比,联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤抑制最为明显(均P＜0.01),生存时间明显延长(均P ＜0.05).联合治疗后的荷瘤小鼠脾组织T淋巴细胞的CTL活性要明显高于另外四组(均P＜0.05),其瘤组织中CD11c+ DC的阳性率也明显增高(均P＜0.05).结论:重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗可召募并促进DC成熟和抗原提呈,明显抑制肿瘤生长,并延长荷瘤小鼠的生存期,提示其对结肠癌有潜在的治疗作用.     

中药联合化疗对中晚期非小细胞肺癌免疫功能的影响

[目的]观察中药联合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌患者T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。f方法]219例中晚期非小细胞肺癌患者,分为单纯化疗组和中药联合化疗组,对两组的T淋巴细胞亚群变化进行对比分析。[结果]单纯化疗组94例化疗后患者CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK细胞比例与化疗前相比均显著性升高（P〈0．01）;化疗后CD8＋细胞比例有所降低．但无统计学差异（P〉0．05）。中药联合化疗组125例化疗后患者CD4＋、CD4＋／CD8＋细胞比例与化疗前比较均显著性升高（P〈0．01）,CD8＋细胞比例显著性降低（P〈0．01）,化疗后CD3＋、NK细胞比例有所升高,但无统计学意义（P〉0．05）。与单纯化疗组相比,中药联合化疗组化疗后CD8＋比例降低和CD4＋／CD8＋比例升高更明显（P均〈0．05）。[结论]中晚期肺癌患者免疫功能处于抑制状态,单纯化疗与中药联合化疗均能改善免疫功能,且中药联合化疗优于单纯化疗组。     

5-FU联合胸腺肽对H_（22）细胞皮下移植瘤小鼠免疫功能的影响

目的：探讨5-FU联合胸腺肽的抗肿瘤及免疫调节功效。方法：32只ICR小鼠建立H22小鼠肝癌细胞的皮下移植瘤模型,分为对照组（生理盐水）,5-FU组（10mg/kg）,5-FU＋胸腺肽组（10mg/kg＋0.2mg/kg）,胸腺肽组（0.2mg/kg）,连续给药5天后测量肿瘤重量和体积,检测外周血WBC及淋巴细胞（LY）数量及外周血中CD3＋、CD4＋、CD8＋、NK细胞的百分含量、血清中白介素2（IL-2）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的浓度。结果：5-FU联合胸腺肽显著抑制了小鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.01）,胸腺肽上调了5-FU降低的WBC及LY细胞数量（P〈0.05）,增加外周血中CD3＋、CD4＋及NK细胞的水平（P〈0.05）;与对照组比,显著升高了血清中IL-2和TNF-α的浓度（P〈0.01）。结论：5-FU联合胸腺肽可增强机体的细胞免疫功能,上调血清中细胞因子的表达水平,具有显著的抗肿瘤功效。而不良反应较小。     

荷肿瘤抗原的DC细胞增强CD3AK细胞特异杀伤作用的研究

目的 探讨肺癌细胞株A549的肿瘤冻融抗原（Ag）负荷脐血来源树突状细胞（DC）（Ag＋DC）与CD3AK细胞混合培养制备的Ag＋DC＋CD3AK对肺癌细胞株A549特异杀伤活性的影响。方法 用脐带血单个核细胞（UBMC）分别制备DC细胞、CD3AK细胞，用肺癌细胞株A549的制备肿瘤抗原（Ag），用Ag负荷DC制备Ag＋DC，再把Ag＋DC和CD3AK共培养制备Ag＋DC＋cD3AK细胞；用MTT法检测不同效应细胞：UBMC、CD3AK细胞，Ag＋CD3AK和Ag＋DC＋CD3AK细胞对A549肺癌细胞株的杀伤活性。结果 各种效应细胞对A549细胞的杀伤活性分别是：Ag＋DC＋CD3AK（62．11％）〉Ag＋CD3AK（50．34％）〉CD3AK（45．91％）〉UBMC（34．35％），而且Ag＋CD3AK组的杀伤活性高于CD3AK组（P〈0．05）；Ag＋DC＋CD3AK组的杀伤活性更明显的高于CD3AK组（P〈0．01）。结论 Ag能增强CD3AK细胞对亲本靶细胞的特异杀伤活性，肿瘤抗原负荷的DC（Ag＋DC）能进一步增强CD3AK细胞对亲本靶细胞的特异杀伤活性，为CD3AK细胞的特异免疫治疗的临床应用提供了基础资料。     

低剂量环磷酰胺联合 CIK 细胞治疗小鼠肝癌研究

目的：探讨低剂量环磷酰胺（CTX）对肝癌荷瘤小鼠调节性 T 细胞（Treg）的影响及联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的抗瘤效果。方法建立小鼠皮下肝癌模型,采用随机数字表法随机分为4组（每组35只）：正常对照组、单独荷瘤组、单次 CTX 组（共1次,100 mg／kg,腹腔注射）、循环 CTX组（6 d 1次,共3次,100 mg／kg,腹腔注射）,流式细胞术检测小鼠脾脏 Treg／CD4＋细胞比例变化。取小鼠脾脏单个核细胞培养 CIK。观察体内抗肿瘤疗效实验中,将荷瘤小鼠随机分为6个治疗组：荷瘤对照组、单次 CTX 组、单独 CIK 组、循环 CTX 组、单次 CTX ＋CIK 组、循环 CTX ＋CIK 组,绘制各组肿瘤生长曲线,实验结束剥离瘤块称重,计算抑瘤率。结果单独荷瘤组小鼠脾脏 Treg／CD4＋细胞比例随荷瘤时间延长而逐渐升高,单次 CTX 组第10天该比例为（8．95±1．90）％,接近单独荷瘤组（9．25±1．74）％,差异无统计学意义（t ＝0．374,P ＝0．714）;而循环 CTX 组在第19天该比例为（8．99±2．11）％,仍低于单独荷瘤组（16．76±2．02）％,差异有统计学意义（t ＝8．544,P ＝0．000）。治疗21 d 后,荷瘤对照组、单次CTX 组、单独 CIK 组、循环 CTX 组、单次 CTX ＋CIK 组、循环 CTX ＋CIK 组的瘤体积和瘤重分别为（3800．4±607．5）、（3764．8±537．7）、（3352．2±485．4）、（2076．6±620．2）、（1867．1±533．6）、（970．7±135．3）mm3和（4．01±0．66）、（3．86±0．74）、（3．80±0．42）、（2．08±0．27）、（1．83±0．93）、（0．86±0．25）g;循环 CTX ＋CIK 组小鼠瘤体积及瘤重最小,循环 CTX 和单次 CTX ＋CIK 组对肿瘤抑制效应较弱,单独 CIK 和单次 CTX 组未能抑制肿瘤生长,6组间比较差异有统计学意义（F ＝213．750,P ＝0．000;F ＝27．142,P ＝0．000）。结论循环低剂量 CTX 联合 CIK 治疗小鼠肝癌疗效显著,可以为肿瘤治疗提供新思路。     

肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系

目的研究肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系。方法采用小鼠肝癌细胞系H22接种BALB／c小鼠,建立肝癌模型;采用流式细胞术方法检测CD4^＋ CD25^＋T／CD4^＋T细胞的比例;以RT-PCR和流式细胞术检测Foxp3基因的表达。以免疫磁珠分选法纯化CD4^＋CD25^＋T和CD4^＋CD25^-T细胞;在体外,用3H-TdR掺入法检测T细胞的增殖情况;在体内,观察荷瘤小鼠来源的CD4^＋CD25^＋T细胞对肿瘤生长的作用。结果（1）荷瘤小鼠在引流淋巴结中,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞（18．80％±0．06％）比例增高,与对照组（9．50％±0．03％）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;在非引流淋巴结（LN）和脾脏（SP）中,荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T比例分别为16．28％±0．02％和17．28％±0．06％,与对照组9．50％±0．03％和11．08％±0．04％相比,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;同时,调节性T细胞特异性标志Foxp3 mRNA的表达也升高。在同一只荷瘤小鼠中,引流淋巴结中CD4^＋CD25^＋T细胞数量（18．8％±0．06％）较对侧非引流淋巴结（16．28％±0．02％）略有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）从荷瘤小鼠中纯化的CD4^＋CD25^＋T细胞,在体外对抗CD3单抗的刺激无反应,但能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。（3）CD4^＋CD25^＋T／CD4＋T比例与肿瘤大小呈正相关,并且可以抑制CD4^＋CD25^-T细胞的抗肿瘤效应。结论肝癌细胞在小鼠体内的生长可以提高调节性T细胞的数量,其数量的高低与肿瘤的大小呈正相关,提示清除调节性T细胞将是肿瘤免疫治疗的策略之一。     

凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗治疗肺癌的实验研究

目的：用凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞（dendritic cells，DCs）激发肿瘤抗原特异性的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）活性，观察其体内外抗肺癌的特性。方法：常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs，采用或不采用凋亡肿瘤细胞负载DCs，并利用激发型CD40单克隆抗体（CD40mAb）诱导DCs成熟；成熟DCs与自体T细胞共育，分别获得Ag-CTL及non-Ag-CTL，流式细胞仪检测Ag-CTL细胞表型的变化；^3H-TdR掺入法测定DNA片段形成率；建立人肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型，过继回输Ag-CTL和non-Ag-CTL，评价其在体内的抗肿瘤活性。结果：CD40mAb激发可使DCs上调CD1a、CD80、CD86、CD83、HLR-DR的表达；凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb激发可进一步促进DCs的成熟；成熟DCs和自体的T细胞共育活化后CD8^＋T细胞明显上调；Ag—CTL对A549具有高效特异的杀伤力，明显强干Ag-CTL对肝癌细胞株HepG2的作用（P〈0．01），且Ag-CTL对A549的杀伤力明显强于non—Ag-CTL（P〈0．01），而non-Ag-CTL对A549及HepG2细胞的杀伤力无显著性差异；体内实验表明，Ag-CTL可有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，与生理盐水组（NS组）、non-Ag-CTL组相比在统计学意义上有显著差异（P〈0．05），non-Ag-CTL组与NS组相比在统计学意义上有差异（P〈0．05）。结论：凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗激发的Ag—CTL在体内外均呈现抑制肺癌细胞的特性。     

IL-12协同B7-1转基因细胞增强C57BL/6小鼠的抗肿瘤免疫

目的：应用逆转录病毒构建IL－12、B7－1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将两种表达载体分别转染EL－4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7－1或IL－12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种了EL－4／IL－12转染细胞后,在C57BL／6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL－4／Wt和EL－4／Neo组明显减少（P＜0．01）,在EL－4／IL－12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL－4／Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL－4／Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4＋、CD8＋和NK细胞有关。用EL－4／IL－12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL－4／Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL－4／Wt肿瘤的生长（P＜0．005）,EL－4／IL－12和EL－4／B7－1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果（P＜0．005）。结论：研究结果提示应用IL－12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL－12和B7－1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景。     

抗癌防转汤抑制肝癌淋巴道转移及其对MMP-9和CTL影响的研究

目的：探讨抗癌防转汤抑制小鼠肝癌淋巴道转移效果及其机制。方法：采用随机数字表法将小鼠分为正常对照组、荷瘤对照组、低剂量治疗组和高剂量治疗组，建立小鼠肝癌淋巴道转移模型，计算接种后面（21d小鼠抑瘤率）并运用MTT法检测CTL细胞活性及免疫组织化学方法和Western blot检测各组原发瘤及转移瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase9，MMP-9）的表达水平，运用统计学分析数据意义。结果：治疗组较对照组，小鼠抑瘤率明显提高，MMP-9在原发瘤、转移瘤表达均减少（P＜0．05），细胞毒性T淋巴细胞（cyto-toxicity T lymphocyte，CTL）活性增强（P〈0．05），而且跟药物浓度呈正相关，P〈0．05。结论：抗癌防转汤有抑制肝癌淋巴道转移的作用，且其与MMP-9的表达水平降低，CTL细胞活性增强有关。