降钙素基因相关肽对人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：从细胞周期的角度探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）地人血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响,揭示其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：流式细胞仪分析ＣＧＲＰ对ＶＳＭＣ细胞周期的影响,免疫组织化学检测细胞周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结果：ＣＧＲＰ使细胞停留于Ｇ０／Ｇ１期,并能降低细胞中周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结论：ＣＧＲＰ可能是通过抑制周期蛋白Ｄ１、Ｅ的积累,使人ＶＳＭＣ停留于Ｇ０／Ｇ期,限制细胞周期的     

BTEB2反义基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖及其机制

目的：研究基本转录元件结合蛋白2（BTEB2）反义RNA对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。 方法: 用BTEB2反义腺病毒载体Ad.ASBTEB2转染VSMC，通过RT-PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达；经免疫印迹法检测BTEB2蛋白质表达；通过MTT比色法和流式细胞仪分别检测VSMC增殖及细胞周期；用免疫细胞化学方法分析增殖细胞核抗原（PCNA）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）和血小板源性生长因子B链（PDGF-BB）在VSMC中的表达情况。 结果: VSMC被Ad.ASBTEB2转染后，可检测到BTEB2反义RNA的表达; Ad.ASBTEB2转染可显著抑制VSMC的BTEB2蛋白表达及血清诱导的VSMC增殖，使VSMC出现明显的G0/G1期阻滞；Ad.ASBTEB2转染可显著抑制AngⅡ诱导的PCNA、AT1R和PDGF-BB表达。 结论: BTEB2反义RNA可显著抑制VSMC增殖; 这种抑制作用可能是通过抑制VSMC增殖相关基因AT1R、PDGF-BB和PCNA等的表达而实现的。     

一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞低氧性增殖反应的作用

目的：观察低氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）受血管舒张因子一氧化碳的作用。方法：随机分为常氧组、低氧组（１％Ｏ２＋５％ＣＯ２＋９４％Ｎ２）、一氧化碳组（３％ＣＯ＋５％ＣＯ２＋９２％Ｎ２）,采用流式细胞仪、增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）、「６３Ｈ」－胸腺嘧啶「＾３Ｈ」－ＴｄＲ摄取量,检测ＰＡＳＭＣ增生的情况。结果：（１）流式细胞仪检测低氧组ＰＡＳＭＣＣ２／Ｍ期细胞比例明显增多,Ｇ０／Ｇ１期细胞比例明     

瓜蒌注射液对兔血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察瓜蒌注射液对血管平滑肌细胞(SMC)增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:用免疫组织化学LSAB法检测培养的兔主动脉SMC中PCNA的表达,液闪法测定SMC氚-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入量,同时测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)、前列环素(PGI₂)及环磷酸腺苷(cAMP)的含量。结果:瓜蒌注射液能增加SOD活性,降低LPO和升高PGI₂、cAMP水平,抑制SMC的[³H]-TdR掺入量和PCNA的表达(P均＜0.05,0.01)。结论:瓜蒌有抑制SMC增殖的作用。     

血管紧张素Ⅱ2型受体对大鼠血管平滑肌增殖的影响及其机制

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）对培养的大鼠血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖的影响。方法： 将AT2R cDNA转染到培养的大鼠VSMC中， 分别观察AngⅡ、AngⅡ＋losartan、AngⅡ+PD123319等不同处理因素处理对VSMC的 细胞数目以及PCNA、 NOS表达的影响。 结果：losartan 处理组细胞数目和PCNA表达量少于AngⅡ处理组，NOS表达量高于AngⅡ处理组， 而PD123319处理组细胞数目和PCNA表达量显著高于AngⅡ处理，NOS表达量较之为少。结论： 激活AT2R能拮抗AngⅡ的由AT1R介导的促细胞增殖作用，这种作用可能与激活AT2R后NOS表达增多使 NO合成增多有关。     

四逆汤对兔球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察四逆汤(SND)对兔腹主动脉球囊拉伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,探讨VSMCs增殖和凋亡在动脉损伤后再狭窄(RS)中的作用及SND预防PCI术后RS的可行性。方法: 建立兔腹主动脉球囊拉伤模型,用SND进行干预,电镜观察中膜和内膜增殖和凋亡的VSMCs超微结构特征。用α-actin标记VSMCs并检测其增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期素E(cyclin E)的表达;Tunel法检测凋亡细胞,计算增殖和凋亡指数。84 d亚组行腹主动脉造影观察损伤段血管的狭窄程度。结果: SND治疗组中膜内膜VSMCs增殖程度明显轻于对照组,凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),而且细胞凋亡持续的时间较长,到术后14 d才达高峰,以后才逐渐下降。术后84 d亚组血管造影显示治疗组损伤段腹主动脉狭窄程度明显小于对照组(P<0.05)。结论: 四逆汤能有效抑制VSMCs增殖,诱导其凋亡,减轻血管损伤后的狭窄程度。     

腺病毒介导的反义AT1R转染对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的:观察腺病毒介导的反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法:用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制缺陷型重组腺病毒(AdCMV/ahAT1),转染体外培养的VSMCs,用RT-PCR半定量法和免疫组化法检测AT1R的表达,用改良趋化小室法检测细胞迁移。结果:与对照组相比转染AdCMV/ahAT1后48h的VSMCs,AT1RmRNA表达少50%,AT1R的蛋白表达也显著低下(P＜0.01);迁移距离为(41.7±9.7)μm,显著短于空白对照组(77.5±12.7)μm和Ad/CMV.LacZ组(77.2±10.6)μm,均为P＜0.01。结论:腺病毒介导的反义hAT1R转染,通过抑制AT1R的表达,明显抑制了大鼠VSMCs的迁移。     

红景天甙对低氧培养的兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天甙(Salidroside,Sal)对低氧(3%)条件下兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖、DNA合成、细胞内钙离子浓度的影响。方法:应用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入试验、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微术测定细胞内Ca²⁺浓度等方法。结果:低氧24h可直接刺激PASMC,使MTT的A值增加62%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量增加138%(P＜0.01)。在低氧的PASMC培养液中加入Sal(32×10^-5mol/L)可抑制低氧的这种促增殖作用,与低氧组相比MTT的A值下降29%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量下降37%。在低氧的PASMC培养液中加入钙通道阻滞剂verapamil也可抑制低氧的促增殖作用,与低氧组相比较,MTT的A值下降23%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量下降51%(P＜0.01)。PASMC的低氧培养可使细胞内Ca²⁺浓度明显增加(P＜0.05),Sal可抑制低氧所致的细胞内Ca²⁺浓度的上升。结论:红景天甙可抑制低氧促进PASMC增殖、DNA合成的作用,其机制可能与抑制低氧时细胞内Ca²⁺浓度增加有关。     

神经肽Y刺激血管平滑肌增殖和losartan的干预作用

目的：搪塞神经肽Ｙ和肾素－血管紧张素系统之间的相互作用与高血压疾病发生之间的关系。方法：应用快速微量ＭＴＴ比色法和荧光免疫组化定量技术,观察神经肽Ｙ对体外２血管平滑肌细胞增殖活度和血管平滑肌细胞核细胞增殖的表达的影响以及血管临终素Ⅱ受体拮抗剂ｌｏｓａｒｔａｎ对其影响的干预作用,结果：神经肽Ｙ可刺激体外２血管平滑肌的增殖、使其增殖活度（ＭＴＴ－ＯＤ值）和细胞内核增殖怕（ＰＣＮＡ）的表达明显高于对照组     

打孔双玻片法联合培养内皮细胞-平滑肌细胞体外模型的构建及应用分析

目前在动脉粥样硬化研究领域虽已经构建出较为理想的内皮 -平滑肌体外联合培养模型并已得到初步应用[1] ,此模型具有极大的成功性 ,接近体内生理条件。然而此模型必须要有专门的设备制作特别的器具 ,即使购买 ,也价格不菲。在一般条件的实验室 ,难以开展此项研究。因此 ,本文试图利用上述模型的基本原理 ,并借鉴其他改良模型的长处[2 ] ,构建一个结构更简单 ,操作更方便 ,易于在一般实验室应用的简易联合培养模型———打孔双玻片法联合培养模型。材　料　和　方　法1　实验材料1 1　内皮细胞　取出长白×大白杂交小公猪 (华南农业大学茅山…     

氟伐他汀抑制高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞,不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血小板源生长因子(PDGF)、氟伐他汀及甲羟戊酸干预后,行细胞计数和[³H]-TdR掺入率测定。结果:①氟伐他汀呈浓度依赖性抑制10^-6mol/LAngⅡ和10μg/LPDGF刺激诱导的血管平滑肌细胞数和[³H]-TdR掺入率增加;②10^-3mol/L甲羟戊酸几乎完全逆转氟伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。结论:氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF诱导的高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖;甲羟戊酸代谢途径可能参与血管平滑肌细胞增殖过程。     

缺氧对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法: 采用析因实验设计, 测定在正常或缺氧环境下, 不同浓度的胎牛血清对培养的血管平滑肌细胞数量、[³H]-TdR掺入量、MTT比色以及细胞cGMP水平的影响; 透射电镜观察细胞超微结构。结果: 缺氧组平滑肌细胞的数量、[³H]-TdR掺入量以及MTT比色显著多于常氧组(P<0.01); 电镜下可见缺氧组较正常组细胞器发达, 可见大量分泌胞, 少量髓样变线粒体; 缺氧组平滑肌细胞内的cGMP浓度明显高于常氧组。结论: 缺氧可促进血管平滑肌细胞DNA合成, 促进细胞增殖, 可能与提高细胞内的cGMP水平有关。     

牛磺酸减轻β-甘油磷酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化氧化应激在反流物所致食管粘膜损伤中的作用

目的：观察牛磺酸对钙化的形成及逆转作用的影响，探讨牛磺酸在血管钙化发生中的作用。方法：利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞（VSMCs），测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性、[⁴⁵Ca]沉积及[³H]-胸腺嘧啶。结果：与对照组相比，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均明显升高（P<0.05），而牛磺酸与β-甘油磷酸同时孵育呈剂量依赖性地抑制钙化发生。在牛磺酸逆转实验中，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均较换液前明显降低（P<0.01）；且牛磺酸呈剂量依赖性地逆转已钙化细胞。与对照组相比，钙化细胞的细胞数量和[³H]-TdR掺入量增加（P<0.01），牛磺酸早期干预组显著抑制钙化细胞的增殖，但牛磺酸对已钙化的细胞,增殖抑制效应不明显。结论：牛磺酸可抑制细胞钙化形成且能逆转已形成钙化。     

阿魏酸钠抑制纤维粘连蛋白和纤维蛋白原诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移和粘附

目的：探讨阿魏酸钠（SF）对纤维粘连蛋白(FN)和纤维蛋白原(Fg)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和粘附的影响。 方法： VSMCs源于8周龄自发性高血压大鼠(SHR)的胸主动脉，组织块外生法体外培养VSMCs，在96孔聚苯乙烯平底培养板上进行细胞粘附实验；采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Fura-2/AM法测定细胞内游离钙离子(［Ca2+］i)浓度。 结果： (1) FN和Fg可诱导VSMCs的粘附，SF(10-7-10-3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞粘附，最大抑制率分别为67.12％和70.23％(P<0.01)。(2) FN和Fg可诱导VSMCs迁移，作用峰值浓度分别为40-60 mg/L和1-5 g/L。SF(10-7-10-3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移，10-3mol/L SF对FN和Fg诱导的细胞迁移的抑制率达69.79%和87.06％。(3)Fg和FN显著促进［Ca2+］i升高(P<0.05)，SF明显抑制Fg和FN诱发的［Ca2+］i升高，峰抑制率分别为74.85％和71.57％。 结论： Fg和FN可诱导VSMCs粘附、迁移和［Ca2+］i浓度升高，SF可直接抑制VSMCs的粘附、迁移和［Ca2+］i浓度升高，抑制［Ca2+］i 浓度升高可能是它抑制上述物质诱导的VSMCs迁移的机制之一。     

PAI-1反义RNA对人主动脉平滑肌细胞中血管内皮生长因子的影响

目的 探讨纤溶酶原激活物抑制剂－1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)反义RNA对离体培养的主动脉平滑肌细胞（smooth muscle cell,smc)PAI-1表达的作用及对血管内皮生长因子（vscular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法 PCR扩增PAI－1第2外显子,将PCR产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA3．1,构建PAI－1反应RNA重组质粒。将pcDNA3.1-反应PAI－1重组质粒转染SMC中。通过免疫组化、Western印迹、ELISA检测细胞中PAI－1表达的改变;通过免疫荧光技术观察细胞中PAI－1表达量的变化对VEGF的影响。 结果 转染后第3天、细胞中PAI－1含量最低,VEGF的表达也减少。第5天、PAI－1含量逐渐高,VEGF也相应增加。第7天、PAI－1含量接近于正常,VEGF也增至正常水平。结论 反义PAI－1RNA能有效阻断SMC中PAI－1的蛋白合成,同时抑制细胞中VEGF的表达。     

硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

雌激素诱导胎儿血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2分泌和活化

目的: 探讨雌激素对胎儿血管平滑肌细胞(HVSMC)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌及其活化的影响。方法: 分别以不同浓度的雌二醇与体外培养的HVSMC作用24h,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中明胶酶活性。结果: 随着雌二醇剂量增加,MMP-2的酶原形式(pro-MMP-2)和MMP-2活性形式逐渐增强。0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L雌二醇组pro-MMP-2分别比对照组高9.4%±8.2%(P>0.05)、73.0%±13.7%(P<0.05)、229.2%±42.2%(P<0.01)、428.4%±72.3%(P<0.01), MMP-2活性形式分别比对照组高39.8%±12.9%(P>0.05)、127.2%±20.4%(P<0.01)、428.4%±37.6%(P<0.01)、683.4%±50.9%(P<0.01)。结论: 雌二醇以剂量依赖性方式促进pro-MMP-2分泌和活化。     

阿司匹林抗大鼠血管平滑肌细胞增生及与细胞周期的关系

目的：研究阿司匹林抑制大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增生与细胞周期的关系。 方法： 记数大鼠A10 VSMC在不同浓度阿司匹林处理下细胞增殖数量的变化，测定细胞培养液中乳酸脱氢酶活性以确定有无细胞毒性。用Western免疫印迹技术观察细胞周期中各类分子的变化。 结果： 阿司匹林抑制大鼠A10 VSMC增生，此作用非细胞毒性所致。阿司匹林使p21、p27、非磷酸化 p107和cyclin A 表达增加。 结论： 大剂量阿司匹林能够在体外抑制大鼠VSMC增生，与阻断细胞周期的进程有关，可能有益于血管增生性疾病的防治。