TIMP-3基因瞬时表达对兔血管平滑肌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 观察特异性金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)基因瞬时表达对血管平滑肌(VSMC)增殖迁移及凋亡的影响.方法 通过阳离子脂质体介导TIMP-3重组质粒转染体外VSMC,将细胞分为对照组、空质粒组及重组质粒载体组.(1)转染后24、48和72 h进行细胞计数、检测MMP-2含量及TIMP-3 mRNA水平;(2)转染后48 h分别检测细胞凋亡率及细胞迁移数.结果 对照组各项观察指标与空质粒组相比均无显著性差异;重组质粒组与两者相比细胞生长缓慢,MMP-2含量明显降低,TIMP-3 mRNA表达旺盛,细胞迁移明显减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 TIMP-3能明显抑制体外VSMC的增殖和迁移并能促进细胞凋亡.     

硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

高胰岛素血症对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察胰岛素、内皮素-1(ET-1)和胰岛素+ET-1对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和形态结构的影响。方法: 体外培养VSMC中分别加入320 mIU/L胰岛素,10^-9 mol/L ET-1,320mIU/L胰岛素加10^-9 mol/L ET-1, 通过细胞计数和[³H]-TdR掺入量反映VSMC增殖情况, 进行细胞形态学观察。结果: ①胰岛素和ET-1都能促进VSMC的增殖(均为P<0.05); ②胰岛素和ET-1的联合应用使VSMC增殖约是对照组的两倍(P<0.01), 二者的联合作用也明显强于胰岛素(P<0.05)或ET-1(P<0.05)的单独作用; ③3组VSMC均有不同程度出现形态结构的改变, 由收缩表型转为合成表型。结论: 高胰岛素血症和/或ET-1水平增加均有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展。     

雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响

目的: 探讨雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响。方法: 分别测定不同浓度雌激素作用下兔血管平滑肌细胞[³H]-TdR掺入量、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、血管平滑肌细胞(VSMC)移行的变化。结果: 低浓度(1 nmol/L)的雌激素组的培养细胞[³H]-TdR掺入量及VSMC平均光密度值、VSMC移行细胞数与对照组相比无明显差异(P>0.05), 较高浓度(10 nmol/L、100 nmol/L)的雌激素可以显著降低培养的[³H]TdR掺入量及培养VSMC平均光密度值, 并能显著减少VSMC移行细胞数目(P<0.01)。结论: 雌激素可抑制血管平滑肌细胞的增殖与移行, 从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

脂质体介导的VEGF基因对培养血管细胞增殖的影响

目的：观察脂质体介导转移的VEGF基因在血管平滑肌细胞（VSMC）中的表达，比较VEG对血管内皮细胞（VEC）及VSMC增殖的影响。方法：将含血管内皮生长因子（VECF）CDNA的真核表达载体pSV121用脂质体介导的基因转移法导入血管平滑肌细胞（VSMC）中，取此VSMC条件培养液，再行血管内皮细胞（VEC）培养，用Northmblot杂交，Westem印迹法及[~3H]胸腺嘧啶核苷掺入法，观察了VEGF在VSMC及其条件培养液中的表达，比较了VEGF对VEC及VSMC增殖的影响。结果：转基因组VSMC中VEGFmRNA呈稳定高表达，转基因组VSMC条件培养液中，VEGF抗原表达显著高于对照组（P均＜0．01），加入此条件培养液的各组VEC的[~3H]胸腺嘧啶核苷掺入量均显著高于对照组（p均＜0．01），而在VSMC组无显著差异。结论：VEGF的转录和表达表明脂质体介导的血管细胞VEGF基因转移是成功的。VEGF具有促VEC增殖作用，但对VSMC无促增殖作用，有利于缺血性疾病及血管再狭窄的防治。     

丝裂原活化蛋白激酶参与胰岛素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖研究

目的:探讨高血压血管平滑肌细胞(VSMC)在胰岛素作用下胞内信号转导途径之一丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响,及其与VSMC增殖的关系。方法:选用6周龄自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠,无菌分离主动脉,体外纯化培养VSMC至6~8代,加胰岛素干预和蛋白激酶C(PKC)抑制剂,采用胶内髓磷脂碱性蛋白原位磷酸化法测定VSMC中MAPK活性,并用Western Blot检测VSMC中MAPK的含量, [³H]-TdR测定VSMC的DNA合成量。结果:胰岛素作用后,SHR组的DNA合成量显著增加,MAPK活性及蛋白含量也显著增加,PKC抑制剂可明显降低MAPK活性。结论:SHR体外培养的VSMC增殖与MAPK活性增加有关,胰岛素可影响其活性,并且可能存在胰岛素-PKC-MAPK轴。     

体外培养淋巴细胞基因转移的实验探讨

以ＰＨＡ、ＩＬ－２体外诱导培养２～３ｗｋ的淋巴细胞作为受体细胞，在脂质体介导下进行腺苷脱氨酶及β－半乳糖苷酶基因转移。结果表明：外周血淋巴细胞在体外经ＰＨＡ、ＩＬ－２诱导可大量增殖，其中ＣＤ３＋细胞占９０％以上。脂质体介导外源性ＤＮＡ阳性转染率可高达３０％～４０％以上。转移后细胞表达有活性的基因表达产物。提示应用脂质体对体外扩增的淋巴细胞实施基因转移，其方法简便，转移率高，转移后基因在受体细胞中能较好地表达     

养血清脑血清拮抗溶血磷脂酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察养血清脑药物血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的大鼠血管平滑细胞(VSMC)增殖作用的影响。方法:在培养的大鼠平滑肌细胞上,测定[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-thymidine,[³H]-TdR)掺入、丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性及脂质过氧化终产物丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)含量。结果:1×10^－9、1×10^－8和1×10^－7 mol·L^-1 LPA呈浓度依赖性引起VSMC[³H]-TdR掺入量、MAPK活性及MDA含量增加。5％、10％和15％养血清脑血清预孵育使1×10^－7 mol·L^-1 LPA诱导VSMC[³H]-TdR掺入量分别下降23.0％、42.0％和52.0％(P<0.01);使VSMC MAPK的活性分别下降13.9％(P<0.05)、29.6％(P<0.01)和48.9％(P<0.01);使细胞MDA含量分别下降19.4％、24.7％和43.2％(P<0.01)。结论:LPA呈浓度依赖性引起VSMC增殖及脂质过氧化,VSMC增殖与其细胞内信号转导MAPK途径有关。养血清脑血清可有效地拮抗LPA诱导的VSMC增殖、MAPK激活和脂质过氧化损伤。     

血管紧张素II及其受体在血管平滑肌细胞迁移中的作用

目的:探讨血管紧张素II(AngII)及其受体(ATRs)在局部血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用及其机制。方法:以体外培养VSMC为基础,采用细胞化学和改良Boyden'schamber的方法,观察AngⅡ干预VSMC后AngII受体的表达、VSMC迁移能力的变化、肌动蛋白纤维丝的动态组装变化,并探讨AT₁R拮抗剂、AT₂R拮抗剂对上述观测指标的影响。结果:AngII10^-7mol/L可以刺激VSMC发生迁移,该作用是通过影响VSMC内应力纤维动态组装而实现的;AngII干预VSMC后可使AT₁R表达上调,随着作用时间延长AT₁R表达水平下降。AT₁R拮抗剂可下调AT₁R表达。AngII通过AT₁R的介导发挥其影响VSMC迁移能力的生物学效应。AT₂R对此无明显影响。结论:AngII通过AT₁R介导来调节VSMC内肌动蛋白微丝的动态组装,进而改变VSMC的迁移能力,从而发挥其介导VSMC迁移的生物学效应。     

缺氧对ox-LDL诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响

<正>目的:通过缺氧诱导与ox-LDL的相互作用,分析体外缺氧条件下实验兔VSMC增殖、迁移相关基因的表达及生物学行为的改变;探讨缺氧参与VSMC增殖、迁移,加重AS硬化程度的可能机制。方法:原代培养兔主动脉VSMC,传至第3代进行实验。用不同浓度的ox-LDL诱导细胞,并采用低氧环境(<5%O2)进行实验。采用real time PCR和Western Blotting检测HIF1-α、VEGF及其受体、MMP9基因的表达变化;采用BrdU掺入法分析细胞增殖能力;细胞划痕实验检测VSMC的随机迁移能力。     

白藜三醇对黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶所致平滑机细胞增殖的干预作用

目的探讨红葡萄酒 (RW)是否对血管SMC增殖具有抑制作用。方法以培养幼兔主动脉平滑肌细胞为研究对象 ,分别给予不同浓度黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶和/或白藜三醇 ,采用免疫组织化学、3H -TdR掺入试验和MTT法技术检测不同处理对平滑肌细胞的增殖作用。结果RES呈剂量依赖性拮抗X/XO对VSMC的促增生效应 ;终浓度50umol/L的RES对X200umol/L/XO200u/L所致促VSMC的增殖效应即有抑制作用(P<0.05) ;终浓度200umol/L的RES对X200umol/L/XO200u/L所致促VSMC的增殖效应则具有极显著的抑制作用 (P<0.001)。结论红葡萄酒中的有效成份白藜三醇可拮抗黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶所致平滑肌细胞的作用 ,这可能有助于减轻或防治氧化损伤对血管平滑肌细胞增殖的影响。     

小檗碱对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖影响研究

目的:观察小檗碱(Berberine)对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖影响及对核因子-κB(NF-κB)的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素55mg.kg-1诱发糖尿病大鼠模型,取建模成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞,计数法观察细胞的生长曲线,CCK-8法测定小檗碱IC50,共聚焦显微镜下观察小檗碱对VSMC中NF-κB核转移的影响。结果:与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快,小檗碱能明显抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖,IC50为6.001±0.853μmol.L-1,而对正常大鼠VSMC增殖的IC50为18.229±0.434μmol.L-1(P<0.05)有剂量依赖性;小檗碱能抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。结论:小檗碱呈剂量依赖性能抑制糖尿病VSMC增殖与NF-κB的核转移。揭示小檗碱可能有抑制糖尿病大血管病变作用,而此作用可能与抑制NF-κB激活有关。     

BPD-MA光动力作用诱导兔血管平滑肌细胞凋亡的初步研究

目的：探讨新型光敏剂苯并卟啉衍生物单环酸A（BPD-MA）光动力作用诱导血管平滑肌细胞凋亡及机制。方法：用体外培养的兔血管平滑肌细胞，加浓度0．25mg／ml的光敏剂BPD-MA，经能量密度4．8J／cm^2波长650nm半导体激光照射。免疫组化染色鉴定平滑肌细胞，HE染色观察细胞形态，MTT法测定细胞增殖活性，TUNEL法观察细胞凋亡。结果：在4．8J／cm^2激光能量密度照射下，与空白对照组比较，光动力作用对平滑肌细胞增殖活性有显著地抑制作用（P〈0．01），单纯激光组照射埘平滑肌细胞的增殖则无明显抑制作用（P〉0．05）。BPD-MA光动力作用使光动力组的大多数细胞出现凋亡。结论：凋亡可能是苯并卟啉衍生物单环酸A光动力抑制兔血管平滑肌细胞增殖的关键因素。     

含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义

目的 :探讨辛伐他汀对体外培养兔血管平滑肌细胞增殖的影响及意义。方法 :16只雄性新西兰兔随机分为血清对照组和三个不同剂量的辛伐他汀亚组 (每日分别给予辛伐他汀 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg) ,7天后采血并混合每组 4只兔血 ,无菌分离制备三亚组的辛伐他汀含药血清。采用内皮素 1(ET 1)刺激正常喂饲原代培养兔主动脉血管平滑肌细胞的方法 ,建立血管平滑肌细胞增殖模型。采用MTT及3H TdR法检测各组辛伐他汀含药血清对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 :与不含药的正常对照组相比 ,不同亚组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖 (P <0 .0 1～0 .0 5 )。结论 :兔口服辛伐他汀后的血清具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用     

Learning from vascular remodelling

The positioning of a hollow silicone collar around the carotid artery of a rabbit induces many changes of early atherosclerosis including intimal proliferation of smooth muscle cells. This occurs below an intact endothelium indicating that endothelial damage is not necessary for smooth muscle cell proliferation. The endothelium may in fact produce substances that control processes occurring in the intima. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is an angiogenic agent that is produced by cultured vascular smooth muscle cells. The combination of hypoxia and factors such as platelet-derived growth factor, tumour necrosis factor alpha, basic fibroblast growth factor, and interleukin-1β lead to synergistic production of VEGF by cultured smooth muscle cells. VEGF receptors are present predominantly on the endothelium and may be an important target for modulating the response to damage, hypoxia and inflammation. Transfection of the gene for VEGF resulted in inhibition or regression of intimal hyperplasia induced by the silicone collar in the rabbit. Studies suggest that the two mediators responsible for this inhibition of smooth muscle cell proliferation are nitric oxide and prostacyclin, which are produced by cultured endothelial cells incubated with VEGF. Thus, VEGF produced by smooth muscle cells in response to hypoxia, damage or inflammation, acts on specific endothelial receptors to produce nitric oxide and prostacyclin, which inhibit smooth muscle cell proliferation. Failure of this process could give rise to intimal hyperplasia. Early clinical studies of VEGF transfection from the outside of human arteries using a biodegradable collar are in progress.     

BTEB2反义基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖及其机制

目的：研究基本转录元件结合蛋白2（BTEB2）反义RNA对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。 方法: 用BTEB2反义腺病毒载体Ad.ASBTEB2转染VSMC，通过RT-PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达；经免疫印迹法检测BTEB2蛋白质表达；通过MTT比色法和流式细胞仪分别检测VSMC增殖及细胞周期；用免疫细胞化学方法分析增殖细胞核抗原（PCNA）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）和血小板源性生长因子B链（PDGF-BB）在VSMC中的表达情况。 结果: VSMC被Ad.ASBTEB2转染后，可检测到BTEB2反义RNA的表达; Ad.ASBTEB2转染可显著抑制VSMC的BTEB2蛋白表达及血清诱导的VSMC增殖，使VSMC出现明显的G0/G1期阻滞；Ad.ASBTEB2转染可显著抑制AngⅡ诱导的PCNA、AT1R和PDGF-BB表达。 结论: BTEB2反义RNA可显著抑制VSMC增殖; 这种抑制作用可能是通过抑制VSMC增殖相关基因AT1R、PDGF-BB和PCNA等的表达而实现的。     

苯并卟啉衍生物单环酸A光动力作用对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨苯并卟啉衍生物单酸环A（BPD—MA）光动力作用对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：用不同浓度的光敏剂BPD-MA作用于体外培养的兔血管平滑肌细胞，经波长650nm半导体激光以能量密度1．2J／cm^2、2．4J／cm^2、4．8J／cm^2。照射，MTT法检测细胞增殖抑制率，用PCNA观察细胞增殖。结果：在1．2J／cm^2．2．4J／cm^2,4．8J／cm^2激光照射下，与空白对照组比较，BPD-MA光动力对平滑肌细胞有显著地抑制作用（P〈0．01），单纯激光组照射对平滑肌细胞的增殖无明显抑制作用（P〉0．05）。PCNA检测显示光动力作用抑制细胞增殖。结论：：BPD—MA光动力作用对血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用。     

肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸的促平滑肌细胞增殖作用

目的和方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上,观察了肾上腺髓质素（Ａｄｍ）对溶血磷脂酸（ＬＰＡ）诱导的ＤＮＡ合成和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性途径激活的影响。结果：ＬＰＡ使［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ活性增加,Ａｄｍ对基础水平的ＭＡＰＫ活性和［３Ｈ］－ＴｄＲ的掺入并无显著影响,但Ａｄｍ对ＬＰＡ刺激［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和ＭＡＰＫ活性具有抑制作用。结论：Ａｄｍ和ＬＰＡ相互作用参与血管平滑肌细胞增殖的调节。