丙型肝炎病毒感染成年树Qu的实验研究

探讨成年树Ｑｕ感染ＨＣＶ的可能性。方法用ＨＣＶＲＮＡ阳性人血清接种１０只健康成年Ｔｕｐａｉａ。观察临床表现；定期检测血清ＡＬＴ和ＨＣＶＲＮＡ正，负链；检测肝组织中ＨＣＶ３种抗原和负链ＨＣＶＲＮＡ；行肝组织病理检查。     

体外培养树鼠句肝细胞的初步观察

目的 探讨体外培养的树Qu肝细胞形态结构与生物合成功能。方法 采用体外两步灌流法分离肝细胞,以L15培养基予以培养,光电镜下动态观察细胞形态结构,同时检测不同时相点培养上清中蛋白及甲胎蛋白含量。结果 采用简易体外两步灌流法分离的肝细胞,经台盼蓝拒染试验证实肝细胞的存活率为90％,体外培养的肝细胞在第3－10天具有良好的增殖分化功能,维持此形态和功能至培养第18天。结论 体外培养的树Qu肝细胞具有良好的形态结构和生物合成能力,能够满足肝炎病毒体外研究培养的需要。     

丙型肝炎病毒感染免疫研究的进展

丙型肝炎病毒（HCV）可引起人类丙型病毒性肝炎,主要通过血液和血制品传播。全世界HCV感染者约2亿人,80%的成年感染者转变为慢性持续性肝炎,在日本和欧美等国家,慢性HCV感染是慢性肝脏疾病、肝硬化和原发性肝癌的最常见的原因,对人类健康危害甚大。目前尚无疫苗可以预防。     

人肝癌细胞系7721与原代人胎肝细胞用于体外培养HCV的对比研究

目的 研究丙型肝炎病毒（HCV）在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系7721中复制和表达的异同,探讨HCV体外培养条件。方法 原代人胎肝细胞系7721分别与HCV感染血清共孵育后,用逆转录-聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化检测细胞和培养上清中的HCV RNA和抗原表达。结果 从孵育的2～3天,即可在细胞内和/或培养上清中间断地检出HCV RNA（其中HCV在7721细胞株中的复制至少可达66d,HCV在 人胎肝细胞中的复制持续25d）;HCV抗原可在感染细胞内得到稳定表达,感染细胞内存在HCV负链RNA杂交信号,且多位于细胞浆。结论 两种肝细胞对HCV易感,尤其是7721细胞可以稳定地支持HCV体外复制,可用于HCV体外长期培养的靶细胞。     

肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。     

体外感染细胞表达HCV-NS5和复制HCV RNA的实验研究

为了研究 HCV- NS5 和 HCV RNA在体外感染细胞培养系统中的表达和复制情况 ,选用 HCV RNA水平为2× 10 4拷贝 / m l的阳性血清感染人肝癌细胞株 (Hep G2细胞株 )。应用胶体金标免疫电镜法和原位杂交法检测 HCV在被感染细胞中 NS5 蛋白表达和 RNA复制的情况。结果在细胞浆内有电子密度大的金标颗粒的吸附 ,在感染后的第 1至第 9代细胞中均有发现。感染后的细胞超微结构完整 ,未发现 HCV颗粒。在感染后的第 1至第 7代细胞内出现特异性杂交信号 ,HCV RNA阳性物呈蓝紫色细小颗粒分布在细胞浆和细胞核内。因此 ,HCV能够在 Hep G2细胞中表达 NS5抗原和复制 RNA,而细胞超微结构完整。     

丙型肝炎病毒JFH1在不同三维培养体系中复制水平的比较

目的：检测中空纤维丝、热可逆凝胶和低吸附培养板3种三维培养体系中丙型肝炎病毒（HCV）增殖水平，寻找效率较高的HCV体外培养系统。方法：利用中空纤维丝、热可逆凝胶及低吸附培养板培养永生化人肝细胞HuS-E/2，通过XTT法检测细胞增殖情况。以基因型为2a型的HCV病毒株JFH1进行感染，在感染后不同时间点收集细胞标本，利用实时PCR法检测细胞中HCV的滴度。结果：在中空纤维丝和热可逆凝胶中培养的HuS-E/2细胞增殖曲线为持续递增，至培养结束时细胞数为初始培养数的2～3倍，JFH1感染后中空纤维丝方法培养的细胞中HCV滴度为2.00×10³ copies/1 μg total RNA，热可逆凝胶培养的细胞中HCV滴度为2.95×103 copies/1 μg total RNA,低吸附培养板方法培养的细胞中HCV滴度为1.18×10³ copies/1μg total RNA。结论：与中空纤维丝及低吸附培养板比较，热可逆凝胶法为基础的JFH1体外培养系统细胞生长稳定，HCV复制效率较高。     

110例乙肝病毒血清标志物与前S1抗原检测结果比较

目的探讨HBV血清标志物与乙肝病毒前S1抗原检测结果的关系。方法用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测常规的乙肝病毒血清标志物和乙肝病毒前S1抗原。结果分析常规的HBV血清标志物不同组合模式发现，表面抗原阳性的模式中，HBV前S1抗原的检出率较高。结论乙肝病毒前S1抗原可作为一种新的HBV血清标志物对乙肝病毒进行检测。     

体外培养人肝癌细胞系7721中HCV复制和表达特性

建立支持ＨＣＶ体外长期复制的细胞培养体系,研究其体外复制和表达特性。方法：将ＨＣＶ感染血清接种人肝癌细胞系７７２１后,以逆转录－聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞内ＨＣＶ的感染和复制情况。结果细胞内和培养上清中在孵育后的３月余均可间断地检测出ＨＣＶ正链和／或负链ＲＮＡ,多种ＨＣＶ抗原在细胞内能稳定有达;ＨＣＶ ＲＮＡ和抗原多位于胞浆中,结论ＨＣＶ在７７２１细胞系中的复制和表达与体内感染状态接     

HCV体外感染正常成人肝细胞的研究

目的 为进一步研究丙型肝炎免疫发病机制，临床治疗和疫苗研制提供最接近自然感染状态的理想细胞模型。方法 体外二步灌流法分离正常成人肝细胞并维持培养1月以上，丙型肝炎患者血清感染上述肝细胞并用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR法）检测被感染肝细胞HCV抗原表达及HCVRNA。结果 正常成人肝细胞可在体外存活1月以上，加丙肝患者血清4-36d后免疫组化法可检测到肝细胞内HCVNS3、NS5抗原表达，感染后2-36d，RT-PCR法可在感染肝细胞培养上清和细胞悬液中间断检测出HCVRNA。结论 正常成人肝细胞可在体外存活1月余并被HCV感染者血清感染。     

乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎患者血清乙肝病毒前S1抗原检测的临床意义。方法乙肝患者血清标志物用ELISA法测定，并根据不同的模式分成四组；均用乙肝病毒前S1诊断试剂测定，方法为ELISA；用荧光定量PCR测定上述四组血清标本的HBV—DNA。结果704例乙肝患者血清标本中乙肝病毒前S1抗原阳性491例，阳性率69．7％；乙肝患者血清标本中HBV—DNA阳性511例，阳性率72复制的一个可靠指标。