阴沟肠杆菌流行菌株产超广谱β-内酰胺酶分析

目的研究江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的状况。方法采用改良的双纸片法(MDDT)进行ESBLs的初筛;以ESBLs引物(CTX-M、CTXM-1、CTX-M-2、CTX-M-9、SHV、TEM、VEB、PER型)进行PCR扩增,对扩增产物进行序列分析。结果MDDT初筛结果证明该菌株产超广谱β-内酰胺酶,CTX-M型ESBLs引物有扩增产物,序列分析表明该株阴沟肠杆菌携带CTX-M-3型ESBLs。结论江苏苏中地区阴沟肠杆菌流行株产CTX-M-3型ESBLs,是造成该流行株对三代头孢菌素耐药的重要原因。     

吉林市肠杆菌科细菌产AmpC酶及超广谱β-内酰胺酶的研究

目的：筛查吉林市耐药性肠杆菌科细菌产AmpC β-内酰胺酶（AmpC酶）和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,为临床用药提供参考依据。方法：收集北华大学附属医院及化工二院住院患者标本中分离出的207株肠杆菌科细菌,表型确证试验确定产ESBLs的菌株,酶粗提物三维试验粗筛出产AmpC酶菌株。结果：207株肠杆菌科细菌中产ESBLs者95株（占45．9％）,产AmpC酶者52株（占25．1％）。结论：AmpC酶和ESBLs是肠杆菌科细菌耐药的两类主要酶。     

阴沟肠杆菌产AmpC酶与ESBLs的研究

目的 检测临床标本分离的阴沟肠杆菌,了解产AmpC酶和ESBLS的情况,分析耐药性以指导临床用药.方法 收集2007年1-12月同济医院检验科分离到的阴沟肠杆菌121株,用改良的三维试验检测AmpC酶和ESBLs.结果 121株阴沟肠杆菌中,产ESBLs的菌株有56株,占45.3%;产AmpC酶的菌株有35株,占28.9%,产AmpC酶和ESBLs的有18株,占14.9%,非产AmpC酶和ESBLs的有9株.占7.4%;体外的抗菌药物敏感试验显示,头孢噻肟、头孢吡肟、环丙沙星、亚胺培南的耐药率分别为53.8%、24.4%、32.5%、0;氨苄西林和头孢唑林的耐药率高达96.7%和94.2%.结论 2007年检测到的阴沟肠杆菌主要产ESBLs,对碳青酶烯类药物敏感率最高,对氨基糖苷类和喹诺酮类及第四代头孢类药物敏感率也较高,对其他类药物敏感率较低.     

基层医院产β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的分析山区基层医院阴沟肠杆菌(ECL)产β-内酰胺酶的耐药现状,指导临床合理使用抗菌药物。方法用纸片扩散法(K-B法)对87株阴沟肠杆菌进行13种抗菌药物的敏感性试验,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的筛选按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的确证法进行,去阻遏持续高产AmpC酶的检测采用双抑制剂扩散协同纸片法检测。结果从87株阴沟肠杆菌中检出产AmpC酶13株,占14.9%,产ESBLs24株,占27.6%,同时表达AmpC酶和ESBLs10株,占11.5%;产酶株对13种抗菌药物均显示了不同程度的耐药性或出现交叉耐药性。结论ESBLs和AmpC酶的产生是阴沟肠杆菌的重要耐药机制。     

医院内产β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的检测

目的了解医院高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌的流行情况. 方法用改良三维实验检测86株阴沟肠杆菌中表型可疑产酶的菌株. 结果检出产酶菌26株,其中高产AmpC酶17株,ESBLs 4株,同时高产AmpC酶和ESBLs 5株;产酶菌对多种抗生素的耐药率明显高于不产酶菌. 结论及时准确检测阴沟肠杆菌的产酶株,对指导临床合理使用抗生素、减缓对细菌耐药的选择性压力、避免医院感染的发生和流行有重要意义.     

同时产超广谱β-内酰胺酶和AmpCβ-内酰胺酶菌的单独和联合药物敏感分析

目的研究同时产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpCβ-内酰胺酶(AmpCs)菌(同产酶菌)的抗生素单独和联合耐药性,以期指导同产酶菌的治疗. 方法采用多底物纸片法(协同法、拮抗法)、ESBLs确认试验、AmpCs检测法检测33株阴沟肠杆菌和46株不动杆菌属的ESBLs和AmpCs产酶情况,以琼脂扩散法检测同产酶菌的抗生素单独和联合耐药性. 结果在本组菌,检出同时产ESBLs AmpCs产酶株42株,其中ESBLs 诱导型AmpCs 12株,ESBLs 高产AmpCs 30株;同时产ESBLs 诱导型AmpCs菌对亚胺培南、头孢吡肟和头孢哌酮/他唑巴坦的单独敏感率均>90%,对阿米卡星的敏感率为66.67%,对其他4大类6种抗生素的单独敏感率均<34%;对4大类10种抗生素的10种组合联合药敏,氨曲南与阿莫西林/克拉维酸协同率高(75%),亚胺培南与头孢哌酮/他唑巴坦的拮抗率也较高(50%),其余大部分为无关;在同时产ESBLs 高产AmpCs时,有效抗菌药物仅为亚胺培南、头孢哌酮/他唑巴坦,对其他4大类8种抗生素的单独敏感率均<20%;对4大类10种抗生素的10种组合联合药敏,除氨曲南与阿莫西林/克拉维酸有少量协同外,全部为无关. 结论阴沟肠杆菌和不动杆菌属的同产酶率很高;同产酶菌仅对亚胺培南与头孢哌酮/他唑巴坦敏感,其对4大类10种抗生素的10种组合联合药敏,仅氨曲南与阿莫西林/克拉维酸部分协同,其余大部分为无关.     

阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 监测阴沟肠杆菌医院感染菌株ESBLs的产生及其对常用抗菌药物的耐药性。方法 采用5种底物的“双纸片协同试验”检测ESBLs;体外药敏试验采用K－B法;实验数据处理使用WHONET－5软件。结果 在本组样本的47株阴沟肠杆菌临床分离株中,ESBLs的检出率为38．3％;未发现亚胺培南耐药株,阿米卡星和环丙沙星的耐药率依次为17．0％、29．8％;产ESBLs和不产ESBLs菌株间的耐药率存在显著差异。结论 ESBLs是造成本地区阴沟肠杆菌严重耐药的主要原因之一;阴沟肠杆菌感染的治疗应首选亚胺培南;其次为阿米卡星和环丙沙星。     

下呼吸道感染肠杆菌科细菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测

目的探讨下呼吸道感染标本中分离的肠杆菌科细菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率.方法采用纸片扩散法对下呼吸道感染标本中分离的肠杆菌科细菌进行初筛,选择出可疑产酶菌株,然后以头孢西丁三维试验检测产AmpC酶菌株,以复合纸片法检测产ESBLs菌株,以头孢曲松三维试验检测同时产AmpC酶和ESBLs菌株.结果在下呼吸道感染肠杆菌科细菌初筛为耐药菌株的242株细菌中,检出单产AmpC酶、单产ESBLs及同时产AmpC酶和ESBLs细菌分别为21、110、6株,总检出率分别为8.7%、45.5%、2.5%,其中阴沟肠杆菌AmpC酶检出率最高,为42.1%,肺炎克雷伯菌ESBLs检出率最高,为64.5%.结论及时准确地检测产AmpC酶和(或)ESBLs细菌,为临床医师诊断和治疗患者提供依据,能早期治疗并控制下呼吸道感染性疾病.     

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的耐药调查

目的 了解阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶，或产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及同时表达这两类酶的现状及耐药性，指导医生临床用药。方法 采用改良的酶提取物三维试验法，检测阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶，用表型确证试验检测ESBLs，并用K—B法对抗菌药物进行体外药敏试验。结果 在68株阴沟肠杆菌中，8株持续高产AmpC酶，14株产ESBLs，3株同时表达这两种酶。结论 产酶菌株对抗菌药物的耐药性远远高于不产酶菌，且多重耐药，改良的酶提取物三维试验法，能较好地检测阴沟肠杆菌持续高产AmpC酶，适用于临床常规检验，为临床医生使用抗菌药物提供合理建议，对预防和控制医院感染的发生有重要意义。     

阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因的研究

目的调查阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因的流行状况及基因型。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对44株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测DHA和ACT型AmpC酶基因。结果44株阴沟肠杆菌呈多重耐药;36株质粒AmpC酶基因阳性(81.8%),DHA和ACT-1基因阳性率分别为11.4%、79.5%,而且3株阴沟肠杆菌同时携带DHA和ACT-1基因。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重、质粒AmpC酶基因携带率高;阴沟肠杆菌中检出ACT-1基因为国内首次报道。     

113株阴沟肠杆菌ESBLs和AmpC酶的携带率及耐药性分析

目的：了解两种超广谱β内酰胺酶(ESBLs和AmpC酶)在阴沟肠杆菌中的分布及其对常用抗菌药物的敏感性。方法:常规培养分离细菌，采用VITEK或API系统鉴定细菌。K-B纸片琼脂扩散法测定细菌对抗菌药物的敏感性；双纸片确认试验检测：ESBLs；三维试验确认法检测AmpC酶。结果:113株阴沟肠杆菌中产ESBLs和AmpC酶的阳性率分别为26．55％和42．48％；ESBLs和AmpC酶共同存在者为9．73％。阴沟肠杆菌对氨苄西林、头孢哌酮、阿米卡星、环丙沙星、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟和亚胺培南佰司他汀的耐药率分别为98．2％，66．4％，45．1％，23．0％，17．7％，9．7％和4．4％。产ESBLs菌株对头孢吡肟和亚胺培南/西司他汀的耐药率为6．7％和3．3％；产AmpC酶菌株对头孢吡肟和亚胺培南/西司他汀的耐药率为12．5％和2．1％；非产酶菌株对头孢吡肟和亚胺培南佰司他汀的敏感率为100．0％。结论：阴沟肠杆菌产EESBLs和AmpC酶的状况已十分突出，尤其是产AmpC酶的阴沟肠杆菌已逐渐成为引起医院感染的流行菌，应引起临床高度关注。临床应根据体外药敏试验合理选择抗菌药物，以减少阴沟肠杆菌耐药株的产生和流行。     

阴沟肠杆菌ampD基因突变与其AmpC酶持续高产关系的研究

目的 探讨阴沟肠杆菌ampD基因突变对持续高产型AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)的调控机制,为临床有效控制产持续高产型AmpC酶细菌引起的感染提供理论依据.方法 收集分离自临床的阴沟肠杆菌,用改良的头孢西丁三维试验筛选产持续高产型AmpC酶的菌株,运用T载体和pMW219质粒分别对ampD基因进行测序比对,分析并验证其基因突变是否与AmpC酶高产有关.结果 127株阴沟肠杆菌中有4株为持续高产型AmpC酶阳性,阳性率为3.15％;4株阳性菌株中,E290菌株ampD基因扩增未见条带;E101与E539氨基酸序列一致,将其氨基酸序列与野生株进行比对,95.00％一致,有8个位点发生突变,63位由Phe→Tyr、71位由Ala→Arg、72位由Leu→Val、75位由Asp→ His、95位Trp→ Arg、131位Glu→Gln、141位Ile→ Val、143位Arg→Leu;E487为180个氨基酸,与野生型ampD氨基酸187个氨基酸的序列相比,78.00％一致,有40个位点不一致;重组子的表型检测结果显示,4株菌重组后对头孢替坦、头孢他啶、头孢曲松和氨曲南的MIC出现8～64倍的降低.结论 4株阳性菌中3株产生持续高产型AmpC酶与ampD基因突变有关,使其对β-内酰胺类药物MIC明显升高;新发现的突变位点数目多且分散,其中72、75、71、131和143位氨基酸,研究的意义较大.     

44株阴沟肠杆菌耐药基因分析

目的了解解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌耐药基因存在状况。方法采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析44株阴沟肠杆菌中15种耐药相关基因。结果44株中,12种基因blaTEM、blaOXA-1群、blaMIR、blaDHA、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、intⅠ1、qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA17、qnr的阳性株数分别为24株(54.50%)、3株(6.82%)、35株(79.50%)、5株(11.40%)、11株(25.00%)、31株(70.50%)、15株(34.10%)、38株(86.40%)、36株(81.80%)、1株(2.27%)、20株(45.05%)、3株(6.82%),bla0XA-1群基因PCR产物经序列分析确认为blaOXA-1型广谱β-内酰胺酶基因,其他3种基因blaSHV、blaCTX-M-1群、blaOXA-10群均阴性。结论临床分离的阴沟肠杆菌至少存在12种耐药相关基因;在阴沟肠杆菌中检出blaOXA-1、dfrA1、dfrA17和qnr基因均为国内首次报道。     

112株阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶、AmpC酶及产ESBLs的检测与耐药性分析

目的 探讨济宁医学院附属医院阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶、AmpC酶、产ESBLs的情况及对17种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理选择抗菌药物.方法 收集医院2009年5月-2010年5月临床分离的非重复阴沟肠杆菌112株,采用改良的Hodge试验对碳青霉烯酶进行检测,采用头孢西丁三维试验对AmpC酶进行检测,采用表型确证试验对产ESBLs进行检测,K-B纸片扩散法进行药敏试验.结果 112株阴沟肠杆菌主要来自痰液,占60.7％,其次为分泌物及尿液,分别占16.1％、13.4％;从112株阴沟肠杆菌中检出碳青霉烯酶阳性2株,阳性率1.8％,AmpC酶阳性60株,阳性率53.6％,产ESBLs菌46株,阳性率41.1％,其中有28株仅携带ESBLs,42株仅携带AmpC酶,18株同时携带产ESBLs和AmpC酶.结论 应加强对产碳青霉烯酶阴沟肠杆菌的控制和检测;阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶携带率高;临床治疗应在药敏试验的基础上,针对不同的产酶株合理选择抗菌药物.     

阴沟肠杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解某医院阴沟肠杆菌产AmpC酶情况及其对10种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理选择抗菌药物。方法收集该院2007年8月-2008年7月临床分离的非重复阴沟肠杆菌98株,采用头孢西丁纸片扩散法进行AmpC酶初筛,酶提取物三维试验确证阴沟肠杆菌高产AmpC酶,聚合酶链反应检测AmpC酶基因。以K B纸片扩散法进行药敏试验。结果98株阴沟肠杆菌中有36株携带AmpC酶,检出率36.73％。在36株产AmpC酶阴沟肠杆菌中,检测到仅携带DHA基因株6株(16.67%);仅携带ACC基因株20株(55.56%);同时携带ACC和MIR基因株8株(22.22%);同时携带ACC、MIR和FOX基因株2株(5.56%)。产AmpC酶菌株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、联合抑酶剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药（44.44%~91.67%）;对头孢吡肟及亚胺培南较敏感,耐药率分别为27.78%、0.00%。结论阴沟肠杆菌AmpC酶携带率高,是导致其对第三代头孢菌素耐药的重要原因;治疗阴沟肠杆菌感染应以药敏检测结果为依据。     

K-B法和三维分析法测定阴沟肠杆菌 AmpC酶结果分析

目的 探讨阴沟肠杆菌Kirby—Bauer(K—B)法推测与三维分析法调定AmpC酶的相关性。方法 用K—B法测定细菌耐药谱用三维分析法和三维抑制法测定阴沟肠杆菌菌株粗提物中的AmpC酶。结果 124株阴沟肠杆菌从耐药谱分析可疑高产AmpC酶为32株，其中三维及三维抑制法证实24株(75％)为持续高产AmpC酶株，7株为ESBLs(extended—spectrum β—lactamases)( )，2株为SSBL( )，即为持续高产AmpC酶株，又为ESBLs阳性株。结论 从K—B法推测高产AmpC酶有75％相关性。     

肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表型和基因型分析

目的研究肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的表型和基因型。方法利用3-氨基苯酚硼酸及ESBLs确认试验检测AmpC酶与ESBLs表型,接合转移试验了解质粒在细菌间的传递;通过质粒的提取、纯化,PCR反应及序列分析,研究肺炎克雷伯菌质粒携带的ampC基因和ESBLs基因类型。结果从肺炎克雷伯菌中获得1条约15 kb大小的质粒,此质粒可通过接合转移方式将耐药性传递至大肠埃希菌,以从肺炎克雷伯菌及接合转移后的接合子细菌中,提取的质粒为模板,均可扩增出DHA型ampC基因及SHV型ESBLs基因,序列分析进一步证实ampC及ESBLs基因型分别为DHA-1型及SHV-12型。结论从肺炎克雷伯菌可转移的质粒中,检测到DHA-1型ampC基因及SHV-12型ESBLs基因。     

产ESBLs及AmpC大肠埃希菌耐药性分析

目的调查对头孢菌素耐药的大肠埃希菌的耐药机制及对15种抗生素的耐药性与耐药特点。方法对华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科2004年1~12月临床分离的468株大肠埃希菌采用琼脂二倍稀释法测定15种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),标准纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),改良三维试验检测头孢菌素酶(AmpC)。结果468株大肠埃希菌中检出ESBLs153株,检出率32.7%(153/468),AmpC酶7株,检出率1.5%(7/468)。产ESBLs大肠埃希菌对二代头孢耐药率大于90%,对三代头孢耐药率为30.4%(头孢他啶)和55.4%(头孢噻肟),对四代头孢(头孢吡肟)耐药率为58.9%,对酶抑制剂联合制剂阿莫西林/克拉维酸和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为92.9%和80.4%,对环丙沙星的耐药率为83%,对庆大霉素的耐药率为73.3%,对四环素的耐药率为88%。产AmpC酶大肠埃希菌表现出更高的耐药性,对二、三代头孢、四环素、环丙沙星和庆大霉素100%耐药,对四代头孢(头孢吡肟)的耐药率达71.4%,对酶抑制剂联合制剂阿莫西林/克拉维酸和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为100%和71.4%,对单环酰胺类的氨曲南耐药率为85.7%。非产ESBLs和AmpC大肠埃希菌的耐药率明显低于产酶者,碳青霉烯类的亚胺培南对所有测试菌株的耐药率为0,MIC50为0.5mg/L。结论(1)对头孢菌素耐药的大肠埃希菌的耐药机制主要是产生ESBLs。(2)产AmpC酶大肠埃希菌比ESBLs耐药更严重,仅亚胺培南对其有效。(3)在临床抗感染治疗中应依据药物敏感试验合理选择抗生素,尽量少选具有诱导细菌产酶的抗生素。     

肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因的研究

目的研究肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的存在形式及其基因类型和转移方式。方法利用CLSI纸片法确认实验和APB纸片增强试验分别检测ESBLs和AmpC酶,基因芯片技术和序列分析测定两种酶基因的类型,接合转移实验了解肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药基因转移方式。结果在对头孢西丁不敏感的72株肺炎克雷伯菌和20株产酸克雷伯菌中,以同时产生ESBLs和AmpC酶为主要形式,分别占54.2%和75.0%;单产ESBLs分别为22.2%和25.0%,肺炎克雷伯菌中单产AmpC酶占12.5%;肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中的AmpC酶基因绝大多数为DHA型(测得DHA-1型基因),ESBLs则以SHV型为主(测得SHV-12型),它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药的主要原因,耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。