耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及耐药谱分析

目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) SCCmec基因分型情况,并对其耐药谱进行分析.方法 收集从临床标本分离出的MRSA 91株,应用多重PCR法对MRSA进行SCCmec基因分型,采用MicroScanWalk-Away-40全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌的鉴定及药敏试验,部分药敏试验采用K-B法.结果 91株MRSA中SCCmecⅡ型72株,占79.1％,SCCmecⅢ型16株,占17.6％,未分型3株,占3.3％,未见SCCmec Ⅰ型及SCCmecⅣ型;ICU中MRSA所占比例最多,为SCCmecⅡ型51.4％、SCCmecⅢ型37.5％,2种SCCmec基因型的MRSA对万古霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、利奈唑胺、喹奴普汀/达福普汀的耐药率为0,对氯霉素的耐药率分别为11.1％和12.5％,对利福平的耐药率分别为8.3％和37.5％,其余均呈高水平耐药,2种SCCmec基因型的MRSA均表现为多药耐药.结论 临床分离的MRSA以SCCmecⅡ型为主,且对抗菌药物呈多药耐药.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型的研究

目的应用多重聚合酶链反应(PCR)对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCCmec基因型及亚型进行分型。方法收集医院2007年1月~2008年12月临床分离的65株MRSA用多重PCR检测MRSA的SCCmec的基因型及亚型。结果SCCmecⅠ型菌株5株(4.6%),SCCmecⅢ型菌株47株(72.3%),SCCmecⅣ型菌株2株(3.1%),未分型11株(16.9%),未检测到Ⅱ型。结论研究结果显示,医院分离的MRSA以SCCmecⅢ为主;多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型结果可靠,适合临床实验室。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型与耐药性研究

目的研究临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,检测MRSA葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)基因型,并进行杀白细胞素(PVL)毒力基因检测。方法采用标准平皿两倍稀释法测定250株MRSA对多种抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),采用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型,单一PCR方法对MRSA菌株进行PVL毒力基因检测。结果 250株MRSA经多重PCR方法检测SCCmec基因型,SCCmecⅡ-dcs型菌株30株,占12.0%,Ⅱ型的亚型1株,占0.4%,Ⅲ型62株,占24.8%,含有342 bp(dcs)额外扩增条带的Ⅲ型菌株141株,占56.4%,Ⅳ型7株,占2.8%,Ⅳa型1株,占0.4%,Ⅴ型1株,占0.4%,7株细菌未能分型,占2.8%,未发现Ⅰ型;单一PCR方法获得PVL呈阳性的菌株共2株,占临床分离MRSA的0.8%;各基因型对多种抗菌药物呈现不同程度的耐药。结论临床分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主;其次为SCCmecⅡ型;有少量SCCmecⅣ型,少数菌PVL毒力基因阳性。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及PVL基因研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因型的分布特征并检测杀白细胞毒素(PVL)基因。方法收集2007年10月-2008年5月临床标本中,分离的非重复金黄色葡萄球菌110株,用头孢西丁纸片扩散法对MRSA进行初筛;用多重聚合酶链反应(PCR)对MRSA进行SCCmec基因分型及PVL基因检测;用琼脂稀释法对MRSA菌株进行抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)检测。结果 64株MRSA中,63株医院获得性(HA)-MRSA,1株社区获得性(CA)-MRSA,其中SCCmecⅢ型57株(89.0%),Ⅱ型1株(1.6%),SCCmecⅣ型1株(1.6%),未分型5株(7.8%);未发现SCCmecⅠ、Ⅴ型菌株;SCCm ecⅡ型、SCCm ecⅢ型的菌株均为多药耐药株,SCCmecⅣ型的菌株除对β-内酰胺类抗菌药物耐药外,对其他类抗菌药物较敏感。结论 HA-MRSA主要以SCCmecⅢ型为主,CA-MRSA菌株为SCCmecⅣ型,携带PVL毒力基因,HA-MRSA对抗菌药物呈多药耐药性,CA-MRSA菌株耐药谱比HA-MRSA菌株耐药谱窄,加强对MRSA的监测,对指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型研究与耐药基因检测

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的葡萄球菌盒染色体(SCCmec)基因型分布特点和耐药基因的携带状况。方法采用多重聚合酶链反应(PCR)对医院分离的125株MRSA进行SCCmec基因型分型,普通PCR对其中的50株MRSA进行6种耐药基因扩增。结果检测的125株MRSA中124株SCCmec基因型为Ⅲ型,1株不能分型,6种耐药基因的阳性率分别为aac(6′)/aph(2″)98%、aph(3′)Ⅲ基因46%t、etM基因72%、erm基因86%,未扩增出TEM和ant(4′、4″)基因。结论引起感染的MRSA的基因型基本为SCCmecⅢ型,SC-CmecⅢ型的MRSA对氨基糖苷类、红霉素类、四环素类耐药基因有较高的携带率,多重PCR法可以有效的用于大批量临床分离的MRSA的SCCmec分型研究。     

西安地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型分析

目的:了解西安地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCCmec基因型别。方法:应用聚合酶链反应(PCR)技术检测mecA基因并对其进行分型。结果:147株MRSA的mecA基因全部阳性,SCCmecⅡ型1株,SCCmecⅣa型1株,SCCmecⅢ型144株,还有1株用本实验方法未能分型。结论:SCCmecⅢ型为西安地区主要流行类型。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型及同源性研究

目的对下呼吸道标本中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药机制、同源性及分子生物学分型进行研究,从分子水平了解其耐药特点,为临床用药提供参考依据。方法于2012年7月-2013年4月住院患者送检的下呼吸道标本中分离出金黄色葡萄球菌66株,常规方法进行分离鉴定,根据2013年CLIS规定检测其耐药性;PCR技术检测mecA基因,对其进行SCCmec分子生物学分型及耐消毒剂基因(qacA/B)检测;利用RAPD技术对其进行同源性分析。结果凝胶电泳结果表明,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分子分型全部为ccrAB3型,mecA、qacA/B基因的携带率100.0%,并且同源性分析有5个克隆型。结论临床分离的下呼吸道标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全部为ccrAB3型,并对普通消毒剂有相当程度的抗性;分离到的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中同源性分型不同菌株耐药率与其基因型之间存在有一定的关系,且这些菌株均为多药耐药株。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型方法当前水平

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)自1961年首次被报道后,逐渐成为医疗相关感染的常见而重要的致病菌[1]。随着首例社区相关MRSA(CA-MRSA)出现,大量资料显示,MRSA也开始影响广大的社区人群。     

21株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型及耐药性分析

目的 将医院分离到的21株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行SCCmec基因分型,并进行耐药性研究,为临床诊断及治疗提供理论依据.方法 应用聚合酶链反应(PCR)对21株MRSA进行基因分型;采用K-B纸片扩散法进行抗菌药物敏感试验.结果 21株MRSA中SCCmec Ⅰ型1株占4.8％,Ⅱ型2株占9.5％,Ⅲ型6株占28.6％,Ⅳ型12株占57.1％;21株MRSA对万古霉素耐药率为0,对青霉素、苯唑西林的耐药率均为100.0％,对头孢唑林、红霉素、四环素、克林霉素的耐药率分别为47.6％、42.9％、38.1％、33.3％,对庆大霉素、氯霉素、环丙沙星的耐药率分别为28.6％、23.8％、19.0％.结论 医院MRSA的基因类型以SCCmecⅣ型为主;未发现对万古霉素耐药的菌株,分离到的MRSA中,不同型别的耐药率与基因型之间存在有一定的关系,且这些菌株均为多药耐药株.     

随机引物聚合酶链反应对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型的研究

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）随机引物聚合酶链反应（ＡＰ－ＰＣＲ）基因分型的方法用于；临床流行病学调查。方法优化ＡＰ－ＰＣＲ方法并与抗生素敏感谱分型法比较，评价ＡＰ－ＦＣＲ基因分型法的可靠性与分辨力；并对４９株ＭＲＳＡ进行ＡＰ－ＲＣＲ基因分型。结果４９株医院感染的ＭＲＳＡ可分为１０个ＡＰ－ＰＣＲ谱型，主要谱型为 Ａ３型，分型率 １００％；其中 ４１株 ＭＲＳＡ为流行病学相关株。结论 ＡＰ－ＰＣＲ基因分型是一种经济、快捷、可靠的分型方法；是在分子水平上对微生物感染进行病原学、发病机理及流行病学研究较理想的工具。     

葡萄球菌染色体mec盒多位点复合PCR分型测定

目的研究用多位点复合PCR分型法高效、快速、准确地测定金黄色葡萄球菌SCCmec型别。方法采用正交设计和平行对比分析,对影响测定结果的退火温度、延伸时间,MgCL2、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物的用量进行了测试。结果获得多位点PCR测定的最佳退火温度为55℃、延伸时间为1 min,以及MgCl2、dNTP、TaqDNA聚合酶和各位点引物的最佳用量。结论多位点PCR测定是一种高效、快速、实用的SCCmec分型方法,可用于大规模的MRSA分子流行病学研究。     

社区分离金黄色葡萄球菌在健康人群中的分布及其分子生物学特点

目的 调查医科大学学生鼻腔中金黄色葡萄球菌(金葡菌)的定植状况,解析鼻腔定植社区型甲氧两林耐药性金葡菌(MRSA)克隆的分子生物学特点.方法 以无菌棉签从调查对象鼻腔中收集定植菌,鉴定出甲氧西林敏感性金葡菌(MSSA)和MRSA;多重PCR法分型MRSA携带的SCCmec基因岛;PCR测定pvl、seh、tsst1等毒素基因在菌株中的分布;脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测MRSA菌株的脉冲场型.结果 2009年977名学生488份样本中鉴定出葡萄球菌,其中凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)和金葡菌分别为364份和124份,MRSA在金葡菌中所占比例为3.4%.2010年调查显示,657名学生中有310份样本鉴定为葡萄球菌属,其中CoNS为195份,金葡菌115份,MRSA在金葡菌中所占比例为7.7%.金葡菌在所有葡萄球菌属中所占比例为29.9%,而MRSA在金葡菌中所占比例为5.1%.MRSA菌株中共鉴定出5种SCCmec基因岛型,其中Ⅳa型最多(10株),为优势SCCmec基因岛类型.PFGE共有11种图谱型,7种(A～G)脉冲场型.10株MRSA均为pvl阳性.结论 1株起源于社区,基因型为Ⅳa SCCmec-pulsotype A且携带pvl毒素基因的特定MRSA克隆在健康大学生中传播.

Abstract：

Objective To investigate the nasal colonization of Staphylococcus (S.) aureus strains among medical university students in Shenyang and to study the molecular epidemiological characteristics of methicillin resistant S. aureus (MRSA) strains. Methods Sterilized nasal swabs were used to collect nasal bacteria from both nares of the students. Nasal specimens were further identified as S. aureus strains, sensitive or resistant to methicillin through a series of tests. Molecular related methods including staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) typing, pulsed- field gel electrophoresis (PFGE) , coagulase isotyping and minimum inhibitory concentration (MIC) determination etc. were used to characterize the isolates. Prevalence of the panton-valentine leukocidin (pvl) genes (lukS and F-PV) among the isolates was also assessed. Results Staphylococci were found in 488 specimens from 977 participants through the surveillance program, conducted in 2009. Of the 488 specimens being tested, 364 were identified as coagulase-negative staphylococci (CoNS) and 124 as S. aureus. MRSA strain among the S. aureus isolates was accounted for 3.4%. In the surveillance program conducted in 2010, staphylococci grew in 310 specimens fiom 657 participants. Of the 310 specimens tested, 195 were identified as CoNS and 115 as S. aureus. The percentage of MRSA strains among the S. aureus isolates was 7.7%. In total, 239 students carried S.aureus, and the percentage of MRSA carriers among the total specimens tested in this study was 5.1%.Most of the MRSA strains could be classified into one of the five types of SCCmec elements. Type Ⅳ a SCCmec strains were most frequent seen overall (10 isolates). A total of 11 pulsotypes were identified among the MRSA strains and were classified into 7 major groups (A to G) by the mutual correlations of their banding patterns. Ten MRSA strains were identified as pvl positive strains. Conclusion An MRSA clone (Ⅳ a SCCmec pulsotype A) carrying pvl toxin gene was found to be prevalent in the nares of the healthy university students.     

携带新SCCmec型别菌株的耐药特点及PCR图谱多位点序列分析

目的了解前期研究中发现的3株携带有新型SCCmec聚合酶链反应（PCR）谱型的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的位点序列特性。方法在前期的分型研究中,从58株MRSA中检测到3株（5.17%）携带了一种新的SCCmec多位点PCR谱型,其含有5条扩增带,依次为A、F、H、B和M。对上述扩增产物测序,用BLAST与国际基因库内已知位点序列进行对比分析。结果测得序列与已有位点相应序列的同源性均在97%以上。结论此型为一新的SCCmec多位点PCR谱型,是传统Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型的重组型,与已有型别比较,不但有不同的位点图谱,且有多个点突变。     

中国15个地区分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究

目的 研究中国2006年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的来源和遗传背景.方法 收集2006年1-12月15个地区17家医院连续分离的非重复MRSA 302株,通过多重PCR对MRSA进行染色体mec(SCCmec)分型,葡萄球菌A蛋白(Spa)分型和多位点序列分型(MLST).结果 SCCmec分型Ⅲ型为76.8%,不能分型为7.9%.从广州地区分离株中发现2株Ⅳ型,Ⅱ型为14.6%;而大连地区分离株中Ⅱ型为75.0%,与其他地区菌株分型的差异存在统计学意义(P<0.005).MLST共有4种分型,其中序列分型(ST)239(46.7%)、ST5(44.4%)、ST59(6.7%)、ST88(2.2%).Spa分型共有14种,其中t30(52.6%)、t37(27.2%)、t2(12.9%)、t632(2.3%)、t437(1.3%)和t570、t601(各0.7%)及t377、t459、t796、t899、t1152、t2649(各0.3%),未分型占0.3%.未检出pvl以基因.结论 调查的15个地区MRSA主要克隆株为ST239-MRSA-SCCmecⅢ-t30和ST5-MRSA-SCCmecⅡ-t2,具有独特的地理分布.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec遗传元件的分子结构与分型

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院和社区感染的重要致病菌.SCCmec遗传元件不仅与MRSA的耐药产生密切相关,而且是MRSA感染株分型的重要指标.此文对MRSA中SCCmec遗传元件的结构特点、命名原则及分型方法等方面的研究进展作了综述.     

多重PCR技术在检测食源性金黄色葡萄球菌 肠毒素基因中的应用

摘要:目的　金黄色葡萄球菌A、B、C、D和E型肠毒素是引起食源性疾病的主要类型,采用多重PCR技术分析食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素基因携带状况。方法　以19株食源性金黄色葡萄球菌分离株为研究对象,利用多重PCR技术对核酸酶基因以及肠毒素A、B、C、D和E型基因进行检测。结果　19株菌中均检出金黄色葡萄球菌特异性核酸酶基因,与传统菌落分离培养鉴定结果一致;9株菌含肠毒素SEA基因,1株同时含SEA和SEB基因,没有检测到肠毒素C、D和E基因。结论　在19株食源性金黄色葡萄球菌分离株中,10株携带肠毒素基因,以携带肠毒素A基因为主。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及其SCCmec基因型的研究

目的了解华南地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及其葡萄球菌盒染色体(SCCmec)的基因型特点。方法采用纸片扩散法检测MRSA对抗菌药物的耐药性;多重聚合酶链反应对SCCmec进行基因分型。结果MRSA的检出率为34.13%(43/126),多数菌株具有多重耐药性,但对万古霉素、氯霉素和复方磺胺甲口恶唑较为敏感。SCCmec基因型以Ⅲ型最为常见,占55.81%;其次为Ⅲa型,占25.58%;I型占6.98%;未定型占11.63%。结论华南地区MRSA具有多重耐药的特征,SCC mec基因型以Ⅲ型为主。