泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件指标的聚类分析

目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件携带状况,并分析两者的相关性.方法 收集医院2008年1-12月住院患者送检痰液标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应的方法分析54种β-内酰胺类、喹诺酮炎、氨基糖苷类获得性耐药相关基因及12种可移动遗传元件遗传标记,并对检测结果作指标聚类分析.结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出获得性β-内酰胺类耐药基因TEM-1、ADC-3和OXA-30,三者阳性率均为100.0％;检出的5种获得性氨基糖苷类耐药基因中,aac(6′)-Ⅰ b、ant(3″)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅰ基因阳性率为100.0％,aac(3)-Ⅰ基因阳性率为75.0％,armA基因为5.0％;外排泵基因qacE△1、adeB和可移动遗传元件遗传标记基因int Ⅰ 1、tnp513、tnpU、ISaba1、IS26的阳性率均为100.0％;其余51种基因未检出.结论 从该组泛耐药鲍氏不动杆菌指标聚类分析中可见,β-内酰胺酶基因 TEM-1、ADC-30、OXA-23,氨基糖苷炎修饰酶基因aac(6’)-Ⅰ b、ant(3")-Ⅰ,抗菌制剂外排泵基因qacE△1和abeB与可移动遗传元件intⅠ 1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1基因遗传标记高度相关.     

多药耐药鲍氏不动杆菌化合物外排泵基因及可移动遗传元件研究

目的了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)化合物外排泵基因、可移动遗传元件的存在状况。方法从2009年4-8月医院住院患者中分离20株MDR-ABA,用K-B法测定鲍氏不动杆菌对10种抗菌药物的敏感性,采用PCR及序列分析的方法分析化合物外排泵基因(mdfA、qacE△1、smr-2)、可移动遗传元件(tnpU、tnp513、ISaba1、ISaba4、ISaba9、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)。结果 20株MDR-ABA化合物外排泵基因mdfA、qacE△1均为阳性,未检出smr-2;可移动遗传元件基因tnpU、tnp513、ISaba1、intⅠ1均为阳性,未检出ISaba4、ISaba9、intⅠ2、intⅠ3。结论携带mdfA、qacE△1基因是菌株对多药耐药的原因,携带转座子和整合子等可移动遗传元件,可能是耐药基因互为传播的主要因素,其中ISaba4、ISaba9基因检测为国内首次。     

耐药鲍氏不动杆菌水平获得性耐药基因与可移动遗传元件测得结果的指标聚类分析

目的 调查耐药鲍氏不动杆菌水平获得性耐药相关基因与可移动遗传元件的关系.方法 收集2009年1-12月医院住院患者痰标本中分离的耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)方法分析54种水平转移获得的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药基因和12种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记检测以及插入序列与β-内酰胺酶基因(ISaba1与ADC、ISaba1与OXA-23)连锁检测,再对检测结果作指标聚类分析(UPGMA法).结果 20株耐药鲍氏不动杆菌共检出4种获得性β-内酰胺类耐药基因(TEM、PER、ADC、OXA-23),5种获得性氨基糖苷类耐药基因(aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ b、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、armA),2种抗菌制剂外排泵基因(adeB、qacE△1),7种可移动遗传元件的遗传标记(intⅠ 1、tnpU、tnp513、IS26、IS903、ISaba1、ISaba9);指标聚类分析提示,获得性耐药基因armA、ADC、ant(3″)-Ⅰ、qacE△1、adeB、TEM、aac(3)-Ⅰ与可移动遗传元件tnpU、IS26、intⅠ 1、tnp513、ISaba1高度相关,阳性率均＞90.0％;插入序列与β-内酰胺酶基因(I Saba1与ADC、I Saba1与OXA-23)连锁检测均呈阳性.结论 该组耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件有一定的关联度,菌株携带的获得性耐药基因可能由可移动遗传元件介导.     

多药耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因与可移动遗传元件检测的指标聚类分析

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件携带状况,并分析两者的相关性.方法 收集2008年11月-2009年12月住院患者送检标本中分离的鲍氏不动杆菌共30株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,分析48种β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药相关基因和13种可移动遗传元件遗传标记,并对检测结果作指标聚类分析.结果 30株鲍氏不动杆菌共检出3种获得性β-内酰胺类耐药基因,5种获得性氨基糖苷类耐药基因,1种抗菌制剂外排泵基因,6种可移动遗传元件的遗传标记;其余46种基因未检出.结论 多药耐药鲍氏不动杆菌指标聚类分析显示,ADC型β-内酰胺酶基因和抗菌制剂外排泵基因adeB与tnpU、tnp513、IS26、ISaba9、intⅠ 1等可移动遗传元件遗传标记高度相关.     

多药耐药鲍氏不动杆菌可移动遗传元件研究

目的了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)可移动遗传元件的存在状况。方法收集住院患者中分离的62株MDR-ABA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测接合性质粒遗传标记(traA、trbC),插入序列(ISaba1、IS1133、ISEcp1),转座子遗传标记(merA、tnsA),整合子遗传标记(intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)等可移动遗传元件,并将先前报道的转座子遗传标记新型转座酶基因tnpU、tnp513合并总结分析。结果62株MDR-ABA中,4种可移动遗传元件基因ISaba1、tnpU、tnp513和intⅠ1阳性株数分别为55株(88.7%)、34株(54.8%)、35株(56.5%)和34株(54.8%),其余8种基因均阴性;55株(88.7%)至少检出1种基因,33株(53.2%)同时4种基因阳性。结论MDR-ABA存在严重的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等多药耐药状况可能与ISaba1、tnpU、tnp513和intⅠ1等可移动遗传元件标记携带率高有关,在MDR-ABA中检出ISaba1、tnpU、tnp513等3种基因插入序列和转座酶基因为国内首次。     

多药耐药肺炎克雷伯菌尿液分离株检出gyrA基因新亚型

目的了解1株多药耐药肺炎克雷伯菌的遗传学背景。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1株多药耐药肺炎克雷伯菌可能存在的65种耐药相关基因:包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因及可移动的遗传元件(整合子、转座子、接合性质粒)遗传标记、抗菌制剂外排泵基因。结果该株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物基因检出blaTEM,耐氨基糖苷类药物基因检出aph(3′)-Ⅰ,耐喹诺酮类药物基因检出gyrA,Ⅰ类整合子遗传标记检出intⅠ1,转座子遗传标记检出tnp513,接合性质粒遗传标记检出trbC;抗菌制剂外排泵基因检出qacE△1-sul1,gyrA基因是新亚型(GenBank登录号:JN232083),83位密码子突变方式为TCG→TTC,导致氨基酸从丝氨酸(S)→苯丙氨酸(F);87位密码子突变方式为GAC→GCC,导致氨基酸从天冬氨酸(D)→丙氨酸(A)。结论携带多药耐药基因和抗菌制剂外排泵基因是这株肺炎克雷伯菌呈多药耐药的主要原因,携带多种可移动遗传元件使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。     

两所医院铜绿假单胞菌连续分离株耐药性与整合子、转座子遗传标记研究

目的 了解江浙地区两所医院铜绿假单胞菌(PAE)连续分离株的耐药性与遗传标记.方法 采用K-B法检测PAE连续分离株的耐药性,PCR方法检测4种整合子、转座子遗传标记(qacE△1-sul1、mer、tnpA、tnpU).结果 两所医院PAE对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南与阿米卡星药物敏感性尚好,对β-内酰胺类、环丙沙星、复方新诺明耐药率极高,PAE检出qacE△1-sul1基因(48.6%、45.0%)和merA(11.4%、5.0%),tnpA、tnpU未检出.结论 PAE连续分离株携带qacE△1-sull、merA基因是细菌呈多药耐药的主要原因,具有流行病学意义.     

泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因的指标聚类分析

目的调查一组泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因与可移动遗传元件的关系,以了解它们之间是否存在关联。方法收集2010年7-12月某医院住院患者痰标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,用gyrA和parC基因的分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析50种水平转移获得的β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因和13种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记检测等。结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出5种获得性β-内酰胺类耐药基因、5种获得性氨基糖苷类耐药基因、2种抗菌制剂外排泵基因、5种可移动遗传元件的遗传标记,连锁检测ISaba1-ADC、ISaba1-OXA-23均呈阳性,而ISaba1-OXA-66均呈阴性;获得性耐药基因TEM-1、ADC、OXA-23、OXA-66、ant(3")-Ⅰ、aph(3')-Ⅰ,adeB、qacE△1与可移动遗传元件intⅠ1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1高度相关。结论泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件一定的关联度,菌株携带的获得性耐药基因可能由可移动遗传元件介导。     

耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件检测及指标聚类分析

目的 调查一组耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件的关系.方法 收集2010年1月-2010年12月医院ICU患者痰液标本中分离的耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记,插入序列与β-内酰胺酶基因(ISaba1与ADC、ISaba1与OXA-23),再对检测结果作指标聚类分析(UPGMA法).结果 20株耐药鲍氏不动杆菌各种基因检测,其中β-内酰胺酶基因TEM和ADC,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,16S rRNA甲基化酶armA基因,抗菌制剂外排泵adeB、qacE△1基因,可移动遗传元件int Ⅰ 1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1及连锁检测ISaba1-ADC基因20株均为阳性;β-内酰胺酶基因OXA-23群,氨基糖苷类修饰酶基因aac(6')-Ⅰ b、aph(3')-Ⅰ及连锁检测ISaba1-OXA-23基因各有10株阳性,阳性率均为50.0％;亚胺培南、美罗培南耐药与敏感菌株各10株,耐药率和敏感率均为50.0％,对其他抗菌药物均耐药;指标聚类分析提示,获得性耐药基因TEM、qacE△1、armA、adeB、aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、ADC与可移动遗传元件IS26、ISaba1、tnpU、tnp513、intⅠ 1高度相关,获得性耐药基因aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ、OXA-23与之也相关联,插入序列与β-内酰胺酶基因(ISaba1与ADC、ISaba1与OXA-23)连锁检测均呈阳性.结论 该组耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件一定的关联度,菌株携带的获得性耐药基因可能由可移动遗传元件介导,指标聚类分析显示的ISaba1与ADC-60,ISaba1与OXA-23相关联得到了测序验证.     

鲍氏不动杆菌泛耐药株的耐药机制研究

目的了解临床分离的鲍氏不动杆菌泛耐药株(PDRABA)β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素、四环素、利福平和磺胺类等7类抗菌药物耐药基因及多种药物外排泵基因和质粒、转座子、整合子遗传标记存在状况。方法采用K-B纸片扩散法测定22种抗菌药物的敏感性,并用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类耐药基因(包括氨基糖苷类修饰酶基因、16S rRNA甲基化酶基因)、gyrA突变喹诺酮耐药基因、利福平耐药相关基因、四环素耐药相关基因、氯霉素耐药相关基因、磺胺耐药相关基因、多种药物外排泵基因、质粒遗传标记、转座子遗传标记和整合子遗传标记等73种耐药基因及遗传标记。结果该PDRABA除对头孢哌酮/舒巴坦敏感以外,其余21种抗菌药物均为耐药,共检出TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、tetB、mdf A、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU、tnp513、ISaba1、gyrA突变等15种耐药基因及遗传标记,其余58种基因均阴性。结论携带多种耐药基因和多种药物外排泵基因mdf A是该菌株泛耐药的成因,同时该PDRABA株携带多种可移动遗传元件,极易造成耐药基因的水平转移,对PDRABA感染者应实行严格的隔离措施,同时携带TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、tetB、mdf A、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU、tnp513、ISaba1基因伴喹诺酮作用靶位gyrA基因突变为国内首次报道。     

多药耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)耐药基因载体-可遗传元件分布状况。方法运用PCR法对20株MDR-KPN进行了接合性质粒遗传标记(traAt、rbC)、插入序列遗传标记(IS1133I、SEcp1)、转座子遗传标记(merAt、npUt、np513)、整合子遗传标记(intⅠ1i、ntⅠ2i、ntⅠ3)等4类可移动遗传元件检测。结果 trbC、ISEcp1、merAt、npUt、np513i、ntⅠ1检出阳性率分别为:55.0%、65.0%、25.0%、20.0%、50.0%、65.0%,其余4种基因均未检测到可移动性元件;20株菌株每株至少检出1种可移动遗传元件遗传标记,其中在MDR-KPN中检出ISEcp1、merA、tnpUt、rbC基因属国内首次。结论多药耐药肺炎克雷伯菌易检出各类可移动遗传元件,与医院多耐药肺炎克雷伯菌耐药机制相关的可移动遗传元件主要有trbCI、SEcp1、merAt、npUt、np513i、ntⅠ1。     

大肠埃希菌和铜绿假单胞菌耐药基因检测及其与医院感染的关系分析 FREE

目的探讨医院大肠埃希菌和铜绿假单胞菌连续分离株的遗传标记与医院感染的关系。方法以聚合酶链反应（PCR）法检测大肠埃希菌质粒AmpC酶基因ACT 1、DHA,Ⅰ类整合酶基因IntⅠ1,耐消毒剂基因qacE△1 sul1;铜绿假单胞菌4种整合子、转座子遗传标记(qacE△1 sul1、merA、tnpA、tnpU)。结果大肠埃希菌质粒AmpC酶基因ACT 1、DHA阳性率分别为57.50%、40.00%,Ⅰ类整合酶基因IntⅠ1阳性率为47.50%,耐消毒剂基因qacE△1 sul1阳性率为57.50%。铜绿假单胞菌中qacE△1 sul1基因阳性率为48.57%,merA阳性率为11.43%,未检出tnpA、tnpU。结论大肠埃希菌连续分离株携带质粒AmpC酶基因、Ⅰ类整合酶基因IntⅠ1及耐消毒剂基因qacE△1 sul1;铜绿假单胞菌连续分离株携带qacE△1 sul1、merA基因。不同菌株间的耐药基因可以相互传播,具有流行病学意义。     

克雷伯菌属的耐药性及可移动遗传元件标记研究

目的 分析克雷伯菌属的耐药性和耐药基因载体-可移动原件的携带情况.方法 收集宁波大学医学院附属医院及宁波市医疗中心李惠利医院2009年8月-2011年3月住院患者送检标本分离出20株克雷伯菌属,经鉴定确认2株为植生克雷伯菌,18株为肺炎克雷伯菌;采用K-B纸片扩散法对其进行13种抗菌药物敏感性判断;PCR法检测13种可移动遗传元件,PCR阳性产物采用PCR直接全自动荧光法测序.结果 20株克雷伯菌属均表现对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物多药耐药性,植生克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南敏感;20株克雷伯菌属的可移动遗传元件检出率分别为:traA 10.0％、trbC 70.0％、int Ⅰ 1 100.0％、tnpU 80.0％、tnp513 100.0％、IS26 100.0％、IS903 95.0％、ISKpn6 45.0％、ISEcpl 90.0％.结论 20株克雷伯菌属多药耐药的表型可能与携带多种可移动遗传元件相关.     

多药耐药大肠埃希菌11种外排泵基因的研究

目的 调查多药耐药大肠埃希菌中11种外排泵基因存在情况.方法 用PCR方法检测多药耐药大肠埃希菌中11种外排泵基因(emrB、emrD、emrE、mdfA、sugE、mdtI、tehA、oqxA、qacE△1、qacE、smr-2),并进行BIOCYC基因数据库检索.结果 20株多药耐药大肠埃希菌中共检出emrB、emrD、emrE、mdfA、sugE、mdtI、qacE△1、tehA、oqxA 9种基因,检出率分别为100.0％、100.0％、95.0％、100.0％、100.0％、100,0％、75.0％、100.0％、20.0％,未检测到qacE、smr-2基因;每株细菌中均检测到了6～9种基因.结论 多药耐药大肠埃希菌中外排泵基因携带率较高,或许是多药耐药大肠埃希菌的高度耐药的一个重要原因.     

一株多药耐药铜绿假单胞菌整合子基因结构分析

目的 检测临床分离的72株多药耐药铜绿假单胞菌(PAE)整合子分布情况,并对其中一株vim2基因阳性菌株整合子结构及定位进行分析.方法 通过药敏试验检测铜绿假单胞菌的MIC,以PCR扩增多药耐药PAE的vim2耐药基因和Ⅰ类整合子,电泳胶回收DNA片段并测序,将测序结果以Pubmed在线软件BLAST进行序列比对分析.结果 72株非重复多药耐药铜绿假单胞菌的intI基因阳性率高达99.0％,在一株多药耐药铜绿假单胞菌(命名为PAE vim2)中检测到双整合酶,两整合酶及其相连的不同基因盒均位于细菌染色体上.其中一个结构为int Ⅰ -sul1,位于Tn21样转座子中,另一个为Tn402样的Ⅰ类整合子,后者携带vim2等基因盒.结论 多药耐药PAE整合子的携带率高,且在一株多药耐药铜绿假单胞菌中发现双整合酶耐药结构,可能是引起耐药基因水平转移的遗传物质基础.     

肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株;采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.     

大肠埃希菌尿液分离株7种抗菌制剂外排泵基因研究

目的调查7种抗菌制剂外排泵基因(smr-2、emrB、emrD、emrE、mdf A、tehA、qacE△1)在大肠埃希菌尿液分离株中的存在情况。方法收集宁波市第一医院2008年10月～2009年3月患者尿液标本中分离的大肠埃希菌共28株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析7种外排泵基因。结果6种外排泵基因emrB、emrD、emrE、mdf A、tehA、qacE△1的阳性株数分别为26株(92.9%)、17株(60.7%)、21株(75.0%)、28株(100.0%)、27株(96.4%)、19株(67.9%),只有smr-2未能检出;且这6种外排泵基因以11种阳性模式存在,其中6种基因同时检出的模式:emrB+emrD+emrE+mdf A+tehA+qacE△1检出率最高,共9株(32.1%);另外,1号株mdf A和tehA的基因序列与美国NCBI中已登录的相关序列比对后,发现均为同义突变的新基因型。结论同时检测这7种抗菌制剂外排泵基因中6种基因在大肠埃希菌尿液分离株中被检测到,且阳性率很高,这或许是导致分离株呈多药耐药的一个重要原因。