整合子及其相关基因盒在临床产ESBLs肺炎克雷伯菌的分布

目的检测Ⅰ~Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用K-B纸片扩散法对108株产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)分析108株产ESBLs肺炎克雷伯菌株的Ⅰ~Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果108株菌中有58株(53.70%)含有Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类整合子及Ⅲ类整合子阳性菌;在Ⅰ类整合子阳性菌中,有52株携带Ⅰ类整合子相关基因盒,占89.66%;分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

多药耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶及整合子检测与分析

目的了解新疆维吾尔自治区多药耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶和整合子分布,为有效控制医院感染提供重要依据。方法收集2010年5月-2011年12月医院各种标本5 208份,使用VITEK-2Compact系统进行菌株的鉴定和药敏试验,对14株肺炎克雷伯菌进行改良Hodge试验,亚胺培南-EDTA协同试验,使用PCR技术检测blaNDM、blaIMP、blaIMI、blaVIM、blaGES、blaKPC、Ⅰ^Ⅲ类整合酶及整合子可变区,并测序明确基因型。结果 14株肺炎克雷伯菌对阿米卡星和妥布霉素的耐药率均为71.42%,对亚胺培南和美罗培南及其他抗菌药物的耐药率均为100.00%;14株多药耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验有13株表现为阳性,阳性率92.86%;亚胺培南-EDTA纸条法协同试验检测均表现为阴性;PCR检测多药耐药肺炎克雷伯菌均携带KPC-2基因和Ⅰ类整合子;7株整合子可变区扩增出dfrA12-aadA2基因。结论新疆维吾尔自治区发现的多药耐药肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因和Ⅰ类整合子,耐药机制与KPC-2和Ⅰ类整合子有关。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行特点及耐药机制

目的目前,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)在全球很多地区医院中的分离率越来越高,引起WHO及国内外同行高度关注,在抗菌药物的选择性压力下,碳青霉烯酶耐药基因可位于不同的移动元件,在相同及不同种属细菌之间播散,给临床感染防控带来极大挑战,笔者拟通过对CRKP分子流行病学特点、碳青霉烯酶基因及整合子介导的耐药机制研究进展进行综述,为CRKP感染的预防和控制提供依据。     

肺炎克雷伯菌整合子携带情况及与毒力基因和耐药性的关系

目的分析安徽医科大学第一附属医院临床分离肺炎克雷伯菌的耐药性,毒力基因、整合子携带情况,并重点比较分析整合子阳性和阴性菌株之间耐药性和毒力基因的差异性,探讨整合子在菌株耐药性以及整合毒力基因中的作用。方法收集临床分离保存的肺炎克雷伯菌72株,运用纸片扩散法和Vitek-2 compact仪器进行药物敏感性试验,聚合酶链式反应(PCR)技术扩增整合子基因(IntI1、IntI2、IntI3)、毒力基因(rmpA、aerobactin、alls、kfu、wcaG、magA、fimH、mrkD)。同时分析整合子阳性肺炎克雷伯菌和整合子阴性肺炎克雷伯菌之间毒力基因和耐药性的差异性。结果药敏试验结果表明72株肺炎克雷伯菌除对米诺还素、多黏菌素B、替加环素具有较高的敏感性外,对头孢菌素类、碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物耐药率均30%,PCR技术检出整合子IntI1型共40株,未检出IntI2、IntI3型。毒力基因aerobactin、rmpA、wcaG、alls、kfu、fimH、mrkD、magA检出率分别为25.00%、44.44%、23.61%、19.44%、40.28%、98.61%、98.61%、12.50%。整合子阳性菌株和阴性菌株相比,对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物具有较高的耐药性,且差异有统计学意义(P0.05)。但是整合子阳性菌株和整合子阴性菌株毒力基因携带情况相比,除aerobactin及kfu基因具有统计学差异外,其他六种毒力基因在两者之间无统计学意义。结论医院肺炎克雷伯菌以携带整合子IntI1型为主,整合子阳性菌株对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药性更高,但对毒力基因的携带情况无差异。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测

目的 对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药性分析及碳青霉烯酶基因检测,为临床正确选择抗菌药物提供依据.方法 采用K-B法检测15株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对18种抗菌药物的耐药性,以WHONET5.5软件分析细菌耐药表型,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,以聚合酶链反应检测blaKPC、blaIMP、blaVIM、balNDM基因并进行测序.结果 2008年1月-2009年12月共分离到非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌15株,改良Hodge试验检出14株含碳青霉烯酶,检出率为93.3％;PCR结果显示14株携带blaKPC,未检出blaIMP、blaVIM、blaNDM基因,与改良Hodge试验一致.结论 blaKPC是肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物主要原因,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶具有很好的敏感性.     

肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株;采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的研究

目的:研究耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及耐药基因类型,为合理使用抗菌药物及监测院内感染等提供有效的科学指导。方法:对医院收治的肺炎患者分离出的29株CRKP,采用改良碳青霉烯类失活(mCIM)试验法检测肺炎克雷伯菌中的碳青霉烯酶,通过聚合酶链反应(PCR)及测序方法对碳青霉烯酶基因KPC、IMP、NDM型、超广谱β内酰胺酶基因(ESBLs)、TEM、SHV、CTX-M型以及AmpC酶基因DHA进行检测。结果:29株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验中7株改良Hodge实验阳性,18株mCIM试验阳性。20株(占68.97%)菌检测到碳青霉烯酶基因,其中KPC为17.24%(5/29),IMP为13.79%(4/29),NDM为37.93%(11/29)。25株(占86.20%)菌检测到ESBLs菌株的基因,其中TEM型为62.07%(18/29),SHV型为79.31%(23/29),CTX-M型为62.07%(18/29)。3株菌检测到AmpC酶基因,其中DHA为10.34%(3/29)。29株CRKP中有14株既表达了碳青霉烯酶基因又表达了ESBLs的基因,共同表达率为48.28%。对耐药基因抽取其中部分阳性结果进行测序后均为目标基因,其中KPC为KPC-2、NDM为NDM-1。结论:29株CRKP对多种抗生素耐药率均较高,且对碳青霉类抗菌药物的耐药基因型主要为KPC-2和NDM-1,故加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐消毒剂基因检测及同源性分析

目的 探讨武汉地区临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)中耐消毒剂基因的携带状况及耐消毒剂基因携带菌株的同源性, 为有效预防和控制CRKP传播提供理论依据。 方法 收集2018—2019年武汉市3所三级医院临床住院患者分离的非重复性CRKP菌株, 采用最低抑菌浓度测定方法对药敏结果进行复核, 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测耐消毒剂基因qacEΔ1、cepA, 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对同时携带qacEΔ1和cepA基因的CRKP菌株进行同源性分析。 结果 共收集62株CRKP, 77.42%来源于重症监护病房(ICU), 40.32%来自痰标本。所有CRKP均为多重耐药菌, 对厄他培南、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林、头孢他啶、头孢曲松5种抗生素的耐药率均为100%, 对临床其他常见抗菌药物也呈现高度耐药。耐消毒剂基因检出率为95.16%(59/62), 其中qacEΔ1、cepA基因检出率分别为64.52%(40/62)、91.94%(57/62), 38株(61.29%)同时检出qacEΔ1和cepA。PFGE结果显示, 38株CRKP可分为A~K共11个型别, 以E型为主, 占42.11%(16株)。 结论 武汉地区CRKP菌株耐药形势严峻, 广泛携带耐消毒剂基因, 存在不同医院、不同科室间的克隆传播, 应加强流行病学监控, 合理使用消毒剂。     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药基因检测及分析

目的分析耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)耐药情况与耐药相关基因的关系,了解其耐药机制。方法采用PCR技术检测29株碳青霉烯类耐药KPN与产碳青霉烯酶、超广谱b-内酰胺酶(extended-spectrum b-lactamases,b-ESBLs)、amp C酶及喹诺酮类耐药相关基因bla KPC-2、bla IMP-4、bla CTX-M、bla CTX-M-15、bla VIM-1、bla TEM、bla SHV、amp C、gyr A、par C,并对KPC-2、amp C、gyr A基因进行序列分析。结果用PCR技术证实了29株为产KPC、IMP型碳青霉烯酶的KPN,并且携带TEM、SHV型b-ESBLs,其中18株同时编码amp C基因;29株待测菌均检出喹诺酮类耐药相关gyr A、par C基因。KPC基因片段同源性分析显示,待测菌株之间核苷酸同源性为98%~100%,氨基酸同源性为97%~100%;与肺炎克雷伯氏菌Kpn-1504株之间的核苷酸同源性最高,为99%~100%。gyr A、par C基因突变率分别为58.6%、62.1%。结论产KPC-2、IMP-4型碳青霉烯酶同时携带多种b-ESBLs、amp C基因及突变的喹诺酮类耐药相关gyr A、par C基因的KPN耐药情况更加严重,同时存在克隆性流行可能。     

88株肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子的分布和耐药性分析

目的:研究Ⅰ类整合子在肺炎克雷伯菌分布、结构及其在介导耐药中的作用。方法:利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因,对其阳性菌株可变区扩增产物进行测序分析;采用微量稀释法测定14种抗生素对试验菌株的敏感性。结果:在其中38株肺炎克雷伯菌DNA上检测到I类整合,阳性率43.2%。所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA2和dfr17,整合子阳性组耐药率明显高于阴性组(P<0.05)。结论:目前临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性强,并广泛存在I类整合子。菌株携带基因盒和耐药表型之间有较好的对应关系,基因盒介导了细菌耐药性。耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类耐药的主要原因。     

水产品中耐药大肠埃希菌整合子与耐药基因盒研究

目的:利用水产品中分离到的耐药大肠埃希菌,研究整合子与耐药性的关系。方法:PCR扩增1类和2类整合酶及整合子,将其进行序列分析。结果:85株耐药大肠埃希菌中88%含有1类整合酶基因;其中68%能扩增此基因;1类整合子可变区PCR扩增产物谱型有17种;1类整合子最常见的基因盒有4种。还发现1株大肠埃希菌同时携带1和2两类不同的整合酶和整合子。结论:大肠埃希菌耐药性与整合子有相关性。     

医院感染患者与健康者呼吸道分离肺炎克雷伯菌携带整合子的分析比较

目的 分析比较来源于南京地区部分社区健康成年人鼻咽部与住院患者分离的肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性、携带整合子的特征及基因盒种类.方法 于医院体检中心采集健康体检者的鼻咽拭子,按《全国临床检验操作规程》进行培养、分离及鉴定KPN;运用法国生物梅里埃公司VITEK细菌分析系统,鉴定住院患者痰标本中的KPN;应用纸片扩散法对抗菌药物进行耐药性监测和分析;应用PCR法扩增整合子;对PCR产物纯化、测序、并对结果进行分析.结果 来源于临床痰标本的24株KPN,10株为Ⅰ类整合子阳性株,整合子阳性率为41.7％,明显高于24株健康者定植菌分离KPN整合子的阳性率4.2％,差异有统计学意义(P＜0.01);医院感染患者检出的KPN对13种抗菌药物总的耐药率为16.7％～83.3％,明显高于健康者分离KPN的4.2％～45.8％;且携带有氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素抗菌药物耐药基因盒.结论 医院感染患者分离的KPN整合子阳性率及耐药率,显著高于健康者呼吸道分离的KPN,健康者携带菌株可分离出Ⅰ类整合子,提示应从基因水平上检测不同人群细菌耐药性.     

耐碳青霉烯药物肺炎克雷伯菌研究进展

随着临床碳青霉烯类抗菌药物的大量应用,耐碳青霉烯药物肠杆菌科广泛流行,其中耐碳青霉烯药物肺炎克雷伯菌临床检出率逐渐增加,给临床诊疗和感染控制带来很大挑战.现就耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的感染现状、耐药机制、检测及治疗进展作一综述.     

ICU耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染患者的预后分析

目的 了解ICU耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染患者的预后并加以分析,为临床治疗提供可靠依据.方法 收集2009年1-12月浙江大学医学院附属第二医院中心ICU经细菌培养鉴定为肺炎克雷伯菌菌株82株,采用法国生物梅里埃公司的VITEK系统进行细菌鉴定,用琼脂稀释法进行药物敏感性试验;将肺炎克雷伯菌医院感染患者47例经药敏试验分耐碳青霉烯类患者组和非耐药组,对两组患者的病死率、入住ICU天数、使用呼吸机天数进行分析.结果 从痰中分离肺炎克雷伯菌菌株居首位,占54.88％,其余依次为引流液19.51％、血液15.85％、胆汁3.66％、伤口分泌物2.44％、深静脉导管尖端2.44％、穿刺液1.22％;肺炎克雷伯菌对美罗培南、亚胺培南的耐药率分别为54.88％、52.44％;与非耐药组比较,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染患者的预后差、病死率高,达到76.19％,差异有统计学意义(P＜0.05);患者入住ICU天数延长(74.14±64.23)d,差异有统计学意义(P＜0.05);呼吸机使用天数延长(61.8±73.68)d,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ICU中耐青霉烯类肺炎克雷伯菌感染患者的预后差,病死率高,入住ICU天数及呼吸机使用天数明显延长;严格控制抗菌药物药物的使用,及时有效地细菌鉴定及药物敏感试验,尽早发现肺炎克雷伯菌的感染情况,为临床提供可靠的治疗依据.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药性及危险因素分析

目的研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapene-resistant klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药情况及临床感染的危险因素,为CRKP的防控提供依据。方法收集天津市第三中心医院2016年1月-2018年12月CRKP感染患者160例为CRKP组,按1∶2比例配对选取同期同病区320例对碳青霉烯类敏感的肺炎克雷伯菌(Carbapenem-susceptible kpneumoniae,CSKP)患者为CSKP组,进行耐药情况的比较,对CRKP感染的相关因素进行单因素分析,并进行多因素的Logistic回归分析。结果两组患者对呋喃妥因耐药率差异无统计学意义,CRKP组对其余抗菌药物耐药率均高于CSKP组(P<0.05)。单因素分析显示,感染前住院天数>14 d、ALB<35 g/L、导尿管置入、深静脉置管、气管插管、抗菌药物使用时间>14 d、抗菌药物种类>3种、碳青霉烯类、糖肽类的使用均与CRKP感染有关(P<0.05)。多因素的Logistic回归分析显示:ALB<35 g/L、置入导尿管、应用抗菌药物种类>3种为CRKP的独立危险因素(P<0.05)。结论针对其危险因素,改善患者营养状态,合理应用抗菌药物,减少有创操作,增强感染监测,严格实施消毒隔离,从而对CRKP进行有效的防控。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的基因型和同源性分析

肺炎克雷伯菌是医院感染常见的病原微生物之一,而耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）是引起医院感染的一个重要致病菌,CRKP感染是引起患者死亡的危险因素之一 [1]。有关研究表明患者使用的机械通气设备、留置导尿、动静脉插管、气管插管、床头桌、监护仪表面以及输液泵分离出的CRKP与患者感染的CRKP具有同源性 ...     

多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因新亚型的发现

目的调查多药耐药肺炎克雷伯菌中喹诺酮类耐药相关基因的存在与变异状况。方法收集绍兴市人民医院2007年10月-2009年6月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析1种染色体介导的喹诺酮类耐药相关基因(gyrA基因)和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因〔qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb、qepA基因〕。结果 gyrA基因83位密码子17株菌(85.0%)有突变,87位密码子7株菌(35.0%)有突变,各分为4种突变方式;SX007株存在同义突变的gyrA基因新亚型,SX001、002、003、006、017株同时存在有义突变和同义突变的gyrA基因新亚型;另检出aac(6′)-Ⅰb-Cr基因2株(10.0%),qnrB基因1株(5.0%),qnrS基因4株(20.0%);qnrA和qepA基因未检出。结论该组多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因突变率高,这是喹诺酮类耐药的主要原因,其他耐药基因阳性率比较低。