化学去细胞同种异体神经的研究进展

周围神经缺损的修复以自体神经移植效果最佳。多年来，医学界不断寻找能替代自体神经的生物材料。Fawcett与Keynes认为理想的神经移植体应具备以下特征：（1）无免疫抗原性；（2）能较快地获得血运；（3）再生轴突能长入并通过该移植体到达远端部位；（4）通过移植体的轴突能成熟到具有正常的直径、髓鞘化和传导动作电位；（5）移植体内再生轴突能准确到达靶器官。与其它移植材料相比，化学去细胞神经除具备上述特征外，还具有与正常神经相似的特性，显示了良好的临床应用前景。     

犬化学去细胞神经同种异体移植的早期观察

目的：以化学去细胞同种异体神经，移植修复犬粗大神经的长段缺损，观察早期功能恢复及神经再生。方法：去细胞神经移植组和自体神经移植组各3犬，分别桥接坐骨神经5.0cm缺损。术后3个月观察其运动功能及神经再生。结果：实验组和对照组在术后功能恢复；移植段内新生神经纤维、新生血管及许旺细胞；吻合口远端有髓神经纤维等方面非常相似。结论：化学去细胞神经作为同种异体神经移植物，在修复粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其早期功能恢复及神经再生与自体神经移植无明显差别。     

去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损的免疫反应研究

目的观察去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损后的全身及局部免疫排斥反应,评价该修复材料的安全性。方法健康成年雄性长白猪1只,体重48 kg,取胫神经制备去细胞异种神经;健康成年雄性猕猴1只,体重4.5 kg,分离培养脂肪干细胞;健康成年雌性猕猴10只,体重3～5 kg,制备25 mm长桡神经缺损动物模型,随机分为复合细胞组和无细胞组(n=5),前者采用去细胞异种神经复合第3代脂肪干细胞移植修复,后者采用去细胞异种神经移植修复。于术前及术后14、60、90 d抽取外周静脉血行淋巴细胞分析;术后5个月取材观察移植物组织免疫反应和神经再生情况,并与自体神经移植组作比较。结果复合细胞组与无细胞组术前及术后各时间点外周静脉血淋巴细胞数量、T淋巴细胞百分率及其数量、CD8+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后14 d,复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于其余时间点,差异有统计学意义(P<0.05);同一时间点两组间比较,除术后14 d复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于无细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各时间点各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后5个月,去细胞异种神经与周围组织有轻度粘连,神经外膜较自体神经厚,未见组织坏死、纤维瘢痕形成,移植物内见再生神经纤维,复合细胞组、无细胞组均有稀疏的CD3+、CD4+、CD8+、CD68+、CD163+T淋巴细胞散在分布,细胞浸润情况与自体神经移植组类似。结论去细胞异种神经移植修复猕猴周围神经缺损后未产生全身及局部免疫排斥反应;复合同种异体脂肪干细胞移植后也未发现免疫排斥反应,且术后早期可能抑制CD4+T淋巴细胞增殖。     

猕猴骨髓间充质干细胞与去细胞神经优化人工神经的体外构建

目的探讨猕猴骨髓间充质干细胞作为种子细胞与去细胞同种异体神经作为支架，体外构建人工神经的研究。方法采用密度梯度离心的方法分离并培养猕猴骨髓间充质干细胞，利用相差显微镜观察细胞生长情况并描绘其生长曲线；取猕猴3段4cm的周围神经，其中2段用4％triton—X-100及4％脱氧胆酸钠液分别萃取1次和2次，在新鲜神经和萃取神经中段取材，组织学检测及电镜学观察萃取前后的形态学变化；采用显微注射的方法把猕猴骨髓间充质干细胞种植到萃取两次的异体神经内，HE染色观察细胞在支架内的生长情况。结果猕猴骨髓间充质干细胞自我增殖能力强；萃取1次的异体神经细胞及髓鞘结构仍部分存留，而萃取2次的其细胞及髓鞘结构消失；HE染色可见细胞在萃取2次的异体神经内可爬行生长。结论猕猴骨髓间充质干细胞与化学萃取的去细胞同种异体神经适合体外构建人工神经。     

经诱导的骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经修复大鼠10mm长坐骨神经缺损的效果。方法 28只体重在160～200g的雌性F344大鼠随机分成4组，每组7只。A组：种植经诱导5d后的同源骨髓基质干细胞并具有内部支架结构的中空管；B组：种植同源许旺细胞并具有内部支架结构的中空管；C组：无细胞只具有内部支架结构的中空管；D组：自体神经移植组。术后3个月，进行系列神经电生理监测、坐骨神经功能指数测定、神经组织学观察、S—100及神经微丝蛋白兔疫组化染色和轴突计数等检查。结果 术后12周内，实验组(A组)的各项检测指标均优于C组(P＜0．05或0．01)，与B和D组间差异无显著性(P＞0．05)。结论 初步结果显示经诱导的骨髓基质干细胞可作为外周神经组织工程中的种子细胞，并应用于人工神经修复外周神经缺损。     

同种异体神经移植的研究进展

周围神经的损伤缺损十分常见，而修复对医学界来说一直是一个比较棘手的问题。在临床上，自体神经移植是最基本和最可靠的方法。但自体神经移植因其来源有限而无法满足较大神经缺损和广泛神经缺损修复的需要，而且增加手术创伤，造成供区的功能障碍。硅胶管等合成材料和自体骨骼肌、静脉等生物原性材料虽可引导神经再生，但是其结构与神经基底膜不同，轴突再生欠佳，修复神经缺损距离有限，临床应用价值有限。     

化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究

目的：探索犬去细胞神经的最佳储存方法。方法：采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经12个月。进行细菌学检查，一般组织学观察，免疫组化染色，透射电镜观察。结果：储存过程中不会发生细菌污染，储存去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性保持良好；其基本结构，神经基底膜及许旺细胞基底板层被保留；仍然保持为没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论：真空封装辐照灭菌法可有效储存去细胞神经1年。     

脱细胞同种异体神经移植的进展

自1870年Philipeaux和Vulpain首次利用游离神经移植术修复舌下神经缺损以来，自体神经移植被认为是周围神经损伤的修复最佳选择，但白体神经材料存在来源有限，取材将给病人带来新的创伤，取材后可有供区麻木、瘢痕、神经瘤等并发症。异体神经移植及组织工程人工神经导管技术被认为是修复神经缺损新的发展方向，而单纯的异体神经移植也存在着受体免疫排异的问题。     

冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究

目的研究冻干去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法50只成年雌性DA大鼠随机分为5组，每组10只，分别用5种移植物桥接大鼠1．5cm坐骨神经缺损。A组：冻干去细胞异体神经种植类许旺细胞移植组；B组：冻干去细胞异体神经移植组；C组：去细胞异体神经移植组；D组：新鲜异体神经移植组；E组：自体神经移植组。术后4、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果术后24周A、E组间差异无统计学意义（P〉0．05），A、E组的各项指标均优于B、C、D组（P〈0．05或P〈0．01）。结论冻干化学去细胞神经是良好的神经移植替代材料。     

脱细胞同种异体神经移植的进展

自1870年Philipeaux和Vulpain首次利用游离神经移植术修复舌下神经缺损以来,自体神经移植被认为是周围神经缺损修复的金标准,但自体神经材料存在来源有限,取材将给病人带来新的创伤．取材后可有供区麻木、瘢痕、神经瘤等并发症。异体神经移植及组织工程人工神经导管技术被认为是修复神经缺损新的发展方向,而单纯的异体神经移植也存在着受体免疫排异的问题。[第一段]     

构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究

目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs 去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs 去细胞同种异体神经支架;C组:自体BMSCs PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学、神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、C三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源SCs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。     

Comparison of acellular nerve allograft modification with Schwann cells or VEGF

Background

Individual contributions of exogenous Schwann cells (SCs) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were evaluated in acellular nerve allografts (ANAs). ANA processing removes SCs and vasculature, likely contributing to reduced regeneration compared to autografts. Exogenous SCs may improve the regenerative microenvironment, and VEGF has been shown to stimulate angiogenesis. Replacing these components in ANAs may improve regeneration.

Methods

A rat sciatic nerve transection model was used to study 20-mm grafts. Four graft types were studied: (1) isograft, (2) ANA, (3) ANA-SCs, and (4) ANA-VEGF. After 10 weeks in vivo, the midgraft and distal nerve to the grafts were analyzed for axonal regeneration using histomorphometry to assess total myelinated axon counts, density, width, and percent neural tissue.

Results

The most axons in the distal nerve were regenerated in the isograft followed by the ANA- SC group, with 9171 ± 1822 and 7103 ± 1576 regenerated axons respectively. Both the ANA and ANA-VEGF groups had significantly fewer regenerated axons compared to the isograft (p < 0.05) with 5225 ± 2994 and 5709 ± 2657 regenerated axons, respectively. The ANA and ANA-VEGF groups also had significantly reduced fiber density and percent nerve compared to the isograft; the isograft and ANA-SC groups were not significantly different (p < 0.05).

Conclusions

These results show that SCs improve axonal regeneration in a 20 mm ANA to a greater extent than VEGF. VEGF treatment showed a trend toward increased axonal regeneration but was not significantly different compared to the untreated ANA. The role of VEGF may be clearer in longer grafts where ischemia is a greater factor.     

雪旺氏细胞植入硬脊膜管修复周围神经缺损的实验研究

本文报道两组10mm大鼠坐骨神经缺损,分别用含雪旺氏细胞和不含雪旺氏细胞的硬脊膜管桥接修复,术后2、4个月行光镜、电镜、神经电生理和计算机图像分析检测,证实植入雪旺氏细胞者,再生神经生长及成熟较早,肢体功能恢复较快,雪旺氏细胞和硬脊膜管结合,对周围神经再生有更大的促进作用。     

雪旺细胞移植与周围神经再生

广泛阅读近年来有关人工神经方面的文献，重点了解桥接神经的移植体和雪旺细胞移植方面的研究进展。自体材料，异体材料和合成材料均可作为桥接神经缺损的神经导管，以化学萃取的同种异体神经较为理想，雪旺细胞体外纯化和培养后仍具有生物活性，用微注入法把雪旺细胞植入移植物内可促进神经轴突的再生。理想的人工神经应由有特定的三维结构的生物材料和有生物活性的雪旺细胞构成，雪旺细胞在支架内有序的分布，类似于Bungner带。     

人源性同种异体去细胞外周神经材料标准制备方法的研究

目的 对目前文献报道使用的5种不同方法制备的人源性同种异体去细胞外周神经材料进行综合分析比较其优劣,以确定可供临床使用的标准的制备流程.方法 将人源性神经按5种不同方法进行化学萃取,制备的外周神经支架材料分别行苏木精-伊红(HE)染色、免疫组化(S-100、Col I)和透射电镜、氮含量测定等检测,观察5种方法去除许旺细胞、髓鞘和轴突等抗原成分以及基底膜保存完好的情况.结果 分别萃取2次持续24 h组神经的HE染色显示去除细胞和轴突彻底,纵切片上未见任何细胞,红染的神经内膜呈波浪状纵形排列,轴突、髓鞘结构消失而形成管柱状空隙;S-100染色呈阴性;Col I染色结果可以看出其结构呈松散不规则的棕黄色结构,而其它处理组则结构相对整齐的纵向带状结构.透射电镜显示该组与各处理之间髓鞘去除差异无统计学意义.氮含量测定显示该组蛋白含量比值最低.结论 使用Triton X-100处理24 h再分别脱氧胆酸钠24 h持续萃取2次,可作为供临床使用的制备人源性去细胞同种异体神经支架材料的标准流程.     

猕猴去细胞同种异体神经体内移植的组织学观察

目的观察去细胞同种异体神经体内移植后组织形态学改变,寻找合适的人工神经支架材料。方法共使用成年猕猴9只,随机取其中的6只,培养自体Scs,应用已经制备好的去细胞神经为支架材料,体外构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经40mm缺损。分实验组、空白组、正常对照组3组。术后5个月取材,观察大体形态、HE染色、免疫组织化学染色及组织形态学改变。结果3组移植物表面均有不同程度的血管化,HE染色均有细胞核和髓鞘的蓝染成份出现,NF免疫组织化学染色后,均有淡黄色神经微丝出现。实验组、正常对照组效果相似,它们均优于空白组、实验组,正常对照组再生神经纤维的数量差异均无统计学意义（P〉0．05）。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论去细胞同种异体神经具有良好的生物相容性和促进神经再生能力,是最具应用前景的神经修复材料之一。     

无细胞的异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的 通过化学萃取同种异体神经,去除髓鞘和雪旺细胞,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损,研究神经再生效果。方法 正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管,桥接鼠坐骨神经20mm缺损。实验分3组:无细胞基膜管移植组(A组),自体神经移植组(B组)和异体神经移植组(C组)。术后进行肌电图、光镜、电镜及图象分析仪检查。结果 A组再生神经有大量轴突通过移植体,术后2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组(P<0.05),术后3个月2组差异无显著意义。髓鞘厚度在术后3个月时亦低于B组,差异有显著意义(P<0.05)。轴突直径及数目两组无差异。C组因无神经再生,结果无法测量。结论 这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移,是一种良好的神经移植替代材料。     

猕猴组织工程化周围神经移植物的实验研究

目的 评价利用化学萃取法获得的神经支架制备猕猴组织工程化周围神经移植物修复40mm尺神经缺损的效果。方法 共使用成年猕猴9只，随机取其中的6只，培养自体雪旺细胞，应用已经制备好的去细胞神经为支架材料构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经的40mm缺损。实验分实验组，空白组，正常对照组3组。术后5个月通过形态学，肌电检测和免疫组织化学方法观察。结果 3组均未发现猕猴双手有糜烂或溃疡形成，猕猴小鱼际肌群的饱满度和弹性于术前无明显差别。实验组与正常对照组间小鱼际肌群的运动动作电位潜伏期．最大振幅及再生神经纤维的数目差异均无统计学意义（P〉0．05）。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 用自体源雪旺细胞微注入去细胞同种异体神经支架构建的组织工程化神经移植物修复猕猴40mm的尺神经缺损，可取得与自体神经移植相似的效果。     

化学萃取同种异体神经种植许旺细胞的体外实验

目的：通过自体许旺细胞与化学萃取同种去细胞异体神经桥接物体外结合培养的研究，寻找一种在结构功能上与自体神经相似而抗原性少或无的物质来修复较长距离的神经缺损。方法：使用近交系F344乳鼠和双差速贴壁及Arab-C抑制成纤维细胞生长的细胞培养方法来获得大量纯度的许旺细胞。成年SD大鼠作为异体神经来源，利用化学萃取去除其中细胞成分降低其抗原性，制备去细胞神经桥接物，再把前者通过微注射方法注入到后者内部继续培养观察细胞生长情况。用抗S-100标记许旺细胞计算纯度，用HE染色、电镜观察神经萃取及细胞种植其内后生长情况。结果：许旺细胞培养纯度达92%以上。Triton-X-100及脱氧胆酸钠具有完全萃取掉神经纤维中的许旺细胞及髓鞘，萃取后所得到的桥接物适合于许旺细胞体外生长，并且细胞在其内有迁移排成行的特性。结论：通过化学萃取方法所得到的异体去细胞神经桥接物种植自体许旺细胞后可能为一种理想的神经缺损修复材料。     

去细胞同种异体神经修复材料临床应用初步报告

目的 观察去细胞同种异体神经修复材料(hANG)修复周围神经缺损的安全性和临床疗效.方法 对指固有神经缺损10～20 mm 4例5侧,用hANG(广州中大医疗器械有限公司提供)移植桥接神经缺损,其中急诊一期手术移植3例4侧,二期手术移植1例1侧,均为单侧指固有神经移植.在10倍手术显微镜下进行神经清创修复,确保移植物两端的神经断端均无损伤,以9-0显微缝合线端端间断缝合.未使用免疫抑制药物.术后随访1～3个月,通过手术部位物理检查及血生化和免疫检测以评价hANG移植的安全性.采用英国医学研究会评定标准评价指神经功能,以观察hANG修复指神经缺损的临床疗效.结果 4例伤口均一期愈合,未发生免疫排斥反应、过敏性反应、感染、肝肾毒副作用等不良反应.术后1～3个月血生化检测均正常.所有hANG移植侧指神经功能恢复良好,其中2例移植侧术后3个月两点分辨觉为8 mm(S3~+,优).结论 hANG移植修复指神经缺损在短期内未发现移植物被排斥或对人体产生毒性反应,神经功能恢复良好.