糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响

目的 观察糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖能力和Ⅰ型胶原合成的影响,探讨糖基化终产物对牙周组织修复功能的作用及在伴有糖尿病牙周炎中的致病机制.方法 采用组织块法培养牙龈成纤维细胞,培养基中加入体外合成的不同浓度的糖基化终产物,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测在不同时间段下牙龈成纤维细胞增殖水平的变化,酶联免疫吸附测定法和实时定量反转录聚合酶链法(RT-PCR)分别测定牙龈成纤维细胞合成Ⅰ型胶原的量和表达Ⅰ型胶原mRNA的水平.结果 200 mg/L糖基化终产物作用于牙龈成纤维细胞48、74 h的A值分别为0.016±0.023、0.035±0.008,比其他组A值低(P＜0.05),并且细胞形态发生了改变,细胞由均一的梭形变成圆形、椭圆形、细长不规则条状等,胞质浓缩,细胞间隙增大;糖基化终产物作用72 h后,牙龈成纤维细胞上清液中和胞内Ⅰ型胶原的含量减少(P＜0.05),Ⅰ型胶原mRNA表达下调(P＜0.05).结论 糖基化终产物能抑制牙龈成纤维细胞的增殖、降低其合成Ⅰ型胶原蛋白和表达Ⅰ型胶原mRNA,从而可能削弱了牙周组织的愈合能力.     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨.方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞.在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒克满整个胞浆内.在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱.牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞.牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性.结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞.牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞.     

牙周组织病

超声结合手用器械进行龈下刮治效果的扫描电镜观察;糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响;冠状动脉粥样硬化斑块中牙周炎致病菌的检测;冠心病患者牙周状况及牙周细菌的检测;光动力疗法辅助龈下刮治和根面平整对不同性别牙周病病人的疗效观察     

两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探究两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养ⅠfimA、ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌,并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养;在共培养2、8、24和48 h 时,采用 CCK-8法检测细胞生长状况。结果：ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐动脉平滑肌细胞后8 h,促增殖作用明显,但是24和48 h 平滑肌细胞增殖受到抑制（P ＜0．05）;ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞没有明显促细胞增殖或细胞毒性作用。结论：ⅠfimA 型和ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞的作用存在差异,ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌有明显的促平滑肌细胞增殖和细胞毒性作用。     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

硝苯地平对牙龈成纤维细胞增殖和DNA合成的影响

目的：研究钙离子通道拮抗剂硝苯地平对人牙龈成纤维细胞的影响,方法：以硝苯地平1200．0、360．0、108．0和32．4μg/L作体外培养牙龈成纤维细胞细胞计数观察,并以^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TDR)细胞内掺入法评价DNA合成量。结果：细胞计数在实验的第6、7d组间差异有极显著性。主要表现为硝苯地平1200．0μg/Lt 360.0μg/L组,细胞计数明显高于低浓度组,各组间DNA合成量差异有极显著性。进一步分析差异存在于高浓组织与其他各之间。结论：高浓度硝苯地平有刺激牙龈成纤维细胞增殖的作用。     

实验性牙龈炎Ⅰ型胶原的变化

目的观察实验性牙龈炎早期炎症牙龈组织Ⅰ型胶原的变化。方法以正畸钢丝拴结豚鼠切牙牙颈部，取临床牙周炎患者牙周袋内菌斑种入豚鼠受试牙龈沟，连续5天，受试牙龈局部红肿、龈沟加深，形成实验性牙龈炎动物模型。取其切牙连同周围牙同组织，常规石蜡切片，免疫组化PAP法检查牙龈Ⅰ型胶原，同时HE染色。结果炎性牙龈Ⅰ型胶原较正常着色明显减弱，着色缺乏连续性。结论早期炎症已有胶原受损，其损伤可能主要由炎症反应所致。     

苯妥英钠所致牙龈增生的发病因素与免疫组化探讨(附20例报告)

对苯妥英钠所致牙龈增生的致病因素和机理做一分析．对２０例病人临床检查和处理资料，部分病例做常规组织病理学观察和免疫组化研究．尤其是当患者处于性腺内分泌不稳定的青春期而又口腔卫生欠佳并伴有牙龈炎症时，三者协同作用最易导致本病发生．免疫组化检测发现，本病牙龈增生组织主要由新生幼稚的Ⅲ型胶原所构成，成熟的Ⅰ型胶原较少．牙龈组织持续合成大量新生胶原是导致临床牙龈增生的一个重要原因     

Disposition of nifedipine in plasma and gingival crevicular fluid in relation to drug-induced gingival overgrowth

The present study investigates the relationship between the pharmacokinetic variables of nifedipine with the incidence and severity of gingival overgrowth in 9 adult male patients medicated with the drug for at least 6 months. Five of the patients had experienced significant gingival changes and were thus designated "responders". The remaining four patients exhibited no gingival overgrowth, and thus acted as a control. A baseline periodontal examination (plaque scores, bleeding index and gingival overgrowth assessment) was carried out on each patient, and confined to the upper and lower anterior teeth. Serial blood and gingival crevicular fluid samples were collected over an eight-hour investigation period. Samples were analyzed for nifedipine by gas chromatography. No significant difference (p>0.05) was seen between responders and non-responders with regard to drug therapy, periodontal parameters or plasma pharmacokinetics of nifedipine. Nifedipine was detected in the gingival crevicular fluid of seven subjects (all responders, and two non-responders). The peak concentration of nifedipine in crevicular fluid was 15–90 fold greater than levels observed in plasma.     

The effect of IL-1alpha and nifedipine on cell proliferation and DNA synthesis in cultured human gingival fibroblasts

The effect of nifedipine and interleukin-alpha (IL-1alpha) on the cell proliferation and DNA synthesis was studied in human gingival fibroblasts derived from 5 patients who developed gingival overgrowth (nifedipine responders) and 5 patients who did not develop gingival overgrowth (nifedipine non-responders) in response to nifedipine. Epidermal growth factor was used as a positive control. The fibroblasts derived from nifedipine responders tended to have a numerically greater rate of cell proliferation and DNA synthesis (3H-thymidine incorporation) than those from nifedipine nonresponders in the presence of nifedipine and IL-lalpha. Fibroblasts derived from nifedipine responders showed significantly higher cell proliferation rate in the presence of nifedipine and IL-1alpha, than nifedipine or IL-lalpha alone on both the second and the fourth day of incubation (P < 0.05). A combination of IL-1alpha and epidermal growth factor also showed significantly greater cell proliferation than IL-lalpha alone on the second day (P < 0.05). The DNA synthesis rate with a combination of nifedipine and IL-1alpha was higher than that for nifedipine alone on the second day (P < 0.01), and IL-1alpha alone on the fourth day (P < 0.05) in gingival fibroblasts originating from nifedipine responders. These results suggest that the interaction between nifedipine and gingival inflammation might play an important role in the pathogenesis of nifedipine-induced gingival overgrowth.     

釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的研究釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响并探究其可能的机制。方法原代培养人牙周膜干细胞,经过流式鉴定后选取第3代细胞进行实验。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)的釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响;通过Trichrome染色和Von Kosa’s染色检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞胶原合成和矿化结节形成的影响;不同浓度釉基质衍生物和DDK1作用人牙周膜干细胞之后,通过Western blot和qRT-PCR检测β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ及NLK表达情况。结果釉基质衍生物对人牙周膜干细胞的增殖具有明显的促进作用,并呈现剂量和时间依赖性;釉基质衍生物处理人牙周膜干细胞之后,矿化结节形成和胶原合成显著增多,骨钙素、Ⅰ型胶原、RunX2的表达明显增多;另外,釉基质衍生物处理能显著增加β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ和NLK的表达,且该作用可被DDK1抑制。结论釉基质衍生物对体外培养的人牙周膜干细胞有促进增殖和成骨分化的作用,其作用可能是通过Wnt/β-连环蛋白实现的。     

重组人骨形成蛋白-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞增殖分化影响的实验研究

目的明确重组人骨形成蛋白(rhBMP)-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和分化的影响。方法在rhBMP-2纳米微球作用于BMSCs后,采用嗜银蛋白(AgNORs)染色法检测细胞的增殖状况;采用反转录PCR方法,观察细胞中骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原mRNA水平表达的改变以反映对细胞分化的影响,并与单纯rhBMP-2作用细胞后的结果进行比较。结果该纳米微球缓释系统能显著促进BMSCs的增殖以及细胞中骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原mRNA水平的表达,且均高于单纯rhBMP-2的作用。结论rhBMP-2纳米微球缓释系统促进BMSCs增殖以及向成骨细胞方向分化的作用强于单纯rhBMP-2的作用。     

Proliferation and differentiation of cultured MC3T3-E1 osteoblasts on surface-layer modified hydroxyapatite ceramic with acid and heat treatments

Effects of functionally gradient calcium phosphate consisting of hydroxyapatite (HAP) and alpha-tricalcium phosphate (alpha-TCP) on proliferation and differentiation of osteoblasts were evaluated using MC3T3-E1 cells. There were no significant differences in the proliferation of MC3T3-E1 cells among HAP-alpha-TCP functionally gradient calcium phosphate, pure HAP, and cell culture plastic wells. mRNA expressions of type I collagen, alkaline phosphate, and osteocalcine were evaluated as indexes of initial; mid-stage, and late-stage osteoblastic differentiation. Basically, HAP-alpha-TCP functionally gradient calcium phosphate and pure HAP enhanced the expressions of the three markers when compared with that of cell culture plastic wells. For type I collagen and alkaline phosphate expressions, HAP-alpha-TCP functionally gradient calcium phosphate showed the same expression level as pure HAP. For osteocalcine expression, HAP-alpha-TCP functionally gradient calcium phosphate showed a higher level than pure HAP. We concluded, therefore, HAP-alpha-TCP functionally gradient calcium phosphate has good potential to be a bone filler material with high osteoconductivity.     

辐射对体外培养MC3T3-E1成骨前体细胞增殖和分化的影响

目的 观察60Co γ射线对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖和分化能力的影响。方法 MC3T3-E1细胞接种24 h后进行60Co γ射线照射,单次照射剂量分别为0、4、8 Gy。辐射后第 1、3、5、7天,采用噻唑蓝比色法检测细胞的增殖能力;辐射后第12天,用黏胶纤维红染色法检测细胞的胶原分泌情况;第16天,用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞成骨相关基因mRNA的表达;第28天,采用茜素红染色及定量分析检测细胞基质的矿化能力。结果 与对照组（0 Gy）相比,4、8 Gy剂量的射线可以明显降低MC3T3-E1细胞的增殖,并下调其Osterix和骨钙素基因的表达;8 Gy剂量的射线可以明显抑制细胞的胶原分泌和基质矿化能力。结论 60Co γ射线可以降低MC3T3-E1细胞的增殖、胶原分泌及基质矿化能力,并下调其成骨相关基因表达,且随辐射剂量增加,其作用增强。     

硝苯地平和机械力对人牙周膜成纤维细胞基质金属蛋白酶的表达影响

目的研究机械静态拉伸作用下,硝苯地平对人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）基质金属蛋白酶（MMP）-10和MMP-13的表达影响。方法按弹力形变不同将细胞随机分为4组,分别为0%、8%、12%、16%形变组,每组再按照硝苯地平浓度不同分为4个亚组,分别为0、10、30、50 μm亚组。硝苯地平孵育1 h后,给予细胞12 h静态拉伸,免疫组化染色检测细胞胞浆中MMP-10和MMP-13的表达。结果弹性形变为0%时,各亚组中MMP-10和MMP-13的表达无明显变化,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当硝苯地平浓度为0 μm时,8%、12%、16%形变组胞浆内MMP-10和MMP-13均呈高表达,且随形变的增大,表达呈上升趋势（P<0.001）;当加入硝苯地平后,随硝苯地平浓度的增加,MMP-10和MMP-13表达均呈下降趋势（P<0.001）。结论硝苯地平对机械力诱导的MMP-10和MMP-13表达有抑制作用,提示钙离子通道参与机械力对HPDLF中MMP-10和MMP-13的诱导表达。     

服用硝苯地平后牙龈增生以及未增生患者牙龈成纤维细胞生物特性比较

目的：观察服用硝苯地平后牙龈增生和未增生患者牙龈成纤维细胞（nifedipine responders gingival fibro-blasts NIFr-HGF,nifedipine non-responders gingival fibroblasts NIFn-HGF）超微结构、细胞周期变化以及增殖能力的差异性,以探讨该药导致牙龈增生的可能作用机理。方法：采用透射电镜观察NIFr-HGF、NIFn-HGF的超微结构,利用流式细胞仪、MTT法检测和比较2种细胞经硝苯地平诱导后其细胞周期以及增殖能力的差异性。结果：与NIFn-HGF相比较,NIFr-HGF内粗面内质网扩张;受硝苯地平诱导后其增殖明显加强。结论：NIFr-HGF合成蛋白质的能力可能较NIFn-HGF强,且前者对于硝苯地平的反应也明显强于后者,这提示两类细胞的细胞生物学特性以及对钙离子拮抗剂的反应能力存在差异,药物性牙龈增生的发生可能存在细胞异质性。     

Sensory trick splint as a multimodal therapy for oromandibular dystonia

Purpose

Many patients with oromandibular dystonia, which is characterized by involuntary masticatory, lower facial, and/or tongue muscle contractions, experience relief of symptoms through sensory tricks such as eating chewing gum or candy. The aim of this study was to identify the factors influencing the effects of splints in patients with oromandibular dystonia.