周围神经放射线照射后原位再植再生功能与组织学的恢复

目的:观察大鼠体外坐骨神经节段经放射线照射后原位再植再生功能与组织学影响。方法:实验于2004-05/09在哈尔滨医科大学附属肿瘤医院动物实验中心完成,选择清洁级5月龄雌性大白鼠26只,其中2只编号为1、2号。余24只随机分为3组,对照组,单纯手术组和4500cGy照射组,每组8只。制备模型,单纯手术组切取右腿坐骨神经中段10mm后原位再植;4500cGy照射组坐骨神经节段离体以4500cGy高能射线一次照射后原位再植。1号鼠神经节段同单纯手术组处理,2号鼠同自体神经移植4500cGy照射组处理,完毕后即行标本固定,光镜、电镜观察。对照组鼠不给以干预处理,各组大鼠术后饲养12周进行一般情况观察及大鼠坐骨神经功能测定、胫前肌定量分析与组织学评价。结果:纳入实验大鼠26只,无动物死亡,均进入结果观测与分析。①术后12周单纯手术组和4500cGy照射组的坐骨神经功能指数显著低于对照组正常对照值[(-33.41±2.99),(-11.23±2.38),q=22.62,P<0.05];[(-34.63±2.91),(-11.23±2.38),q=23.87,P<0.05]。神经纤维数量多于对照组正常值[(192.50±21.00),(203.00±16.94),(174.13±10.18)×102根/mm2]。②组织学变化的光镜观察结果:1号鼠神经结构完整,神经纤维排列规则,髓鞘无肿胀;2号鼠4500cGy高能X射线照射后,神经纤维轻度空泡样变,轴索见境界尚清,髓鞘轻度肿胀,无髓鞘脱失。术后12周末对照组为正常神经组织;单纯手术组神经束毛细血管增生不明显,髓鞘无明显肿胀。4500cGy照射组神经纤维粗细基本一致,排列尚规则,少量炎性细胞浸润和纤维组织增生。③坐骨神经的组织学变化的电镜观察结果:1号鼠髓鞘多呈椭圆形,明暗相间板层结构清晰可见,轴索结构完整,神经膜细胞内见丰富的线粒体、粗面内质网等结构。2号鼠可见髓鞘板层结构轻度空泡样变,细胞核基本完好。术后12周末对照组神经呈椭圆形,髓鞘壁薄厚一致,板层结构致密,轴浆内富含神经微丝和微管,许旺细胞核少见;单纯手术组和4500cGy照射组均可见神经轴突发育良好,呈近似椭圆形,髓鞘壁薄,许旺细胞核多见,轴索内见线粒体。结论:经4500cGy高能射线一次照射大白鼠坐骨神经体外节段原位再植,神经干再生结构与功能恢复完全,可最大限度保存神经干再生能力。实验条件下,体外放射灭活处理法作为神经保存的方法是可行的。     

许旺细胞与脱细胞神经移植物共培养在周围神经损伤修复中的作用

目的：观察体外分离、培养、纯化的许旺细胞对脱细胞神经移植物修复神经损伤舯促进作用，为临床应用组织工程化神经修复周围神经缺损提供实验依据。 方法：实验于2004-04／2005-04在中国医科大学组织工程实验室完成。纳入普通级雄性Wistar大鼠24只，体质量180-220g。随机分为实验组、空白对照组、自体移植对照组共3组，每组8只。分笼饲养。另纳入5-8d龄spmgue-Dawley乳鼠40只，取其双侧坐骨神经与臂丛神经。实验组大鼠右后腿用种植许旺细胞的ARSN桥接人为造成的神经缺损。空白对照组大鼠右后腿用单纯ARSN桥接人为造成的神经缺损。酶反复消化法与差速贴壁法分离和培养许旺细胞；许旺细胞与10mm长的脱细胞神经移植物共培养后，应用外科手术移植到大鼠坐骨神经缺损处，自体移植对照组大鼠右后腿用单纯切断的神经上下颠倒原位桥接人为造成的神经缺损。13周取材通过透射电镜和扫描电镜观察神经纤维的再生情况。 结果：Wistar大鼠24只全部进入结果分析，没有脱失。①实验组较空白对照组的再生有髓神经纤维均匀，轴索略粗，髓鞘厚度有差别，部分神经纤维髓鞘还未形成板层结构，许旺细胞包绕神经纤维，轴索内微丝微管结构较清晰，无髓神经纤维直径较小，不均匀分布在有髓神经纤维之间，由一层纤维结缔包裹形成纤维束，实验组较自体移植对照组的髓鞘略薄，自体移植组再生神经纤维均较粗，许旺细胞包裹轴突形成排列规则、电子密度较高的髓鞘，髓鞘厚薄基本相同。②实验组可见大量许旺细胞呈双极梭形，并且首尾相连排列成链状或网状特征性分布。许旺细胞还可在神经纤维上的胶原丝上附着。③实验组有髓神经纤维数、髓鞘厚度、G率（有髓纤维总面积／神经干总面积）接近自体移植对照组，差异无显著性意义[（5344&;#177;592），（5514&;#177;373）；（3．13&;#177;0．16），（3．19&;#177;0．25）μm；（48．43&;#177;3．62）％，（57．11&;#177;2．28）％；P〉0．05]；与空白对照组比较差异有显著性意义[（5344&;#177;592），（3191&;#177;236）；（3．13&;#177;0．16），（1．28&;#177;0．33）μm；（48．43&;#177;3．62）％，（31．05&;#177;4．19）％；P〈0.05]。 结论：与许旺细胞共培养的脱细胞神经移植物可加快宿主轴索再生，促进神经损伤修复，是临床修复神经缺损的可行办法。     

运动疗法对大鼠坐骨神经卡压模型神经功能影响的评估

目的：通过电生理和组织学方面观察中等强度的有氧运动对大鼠坐骨神经卡压后神经功能恢复的影响。 方法：实验于2001-05／2003-02在浙江中医学院动物中心实验室完成。①选择雄性SD大鼠64只，手术制造大鼠坐骨神经卡压模型，造模后将大鼠随机分为3组：模型组32只，造模后自由活动；术后2周运动组16只，术后第2周末开始游泳，1次／d，第1天10min，逐日增加3min，第3周末30min／d，第4周30min／d；术后4周运动组16只，在术后4周末开始游泳，共游泳2周，方法同术后2周游泳组。②3组术后每周测1次坐骨神经功能指数，以0为正常值，-100为神经完全断离指标。③模型组在术后2，4，6，8周末，术后2周运动组在术后4，8周末，术后4周运动组在术后6，8周末分别测定运动神经传导速度。④取卡压神经进行组织学观察。 结果：纳入动物64只，均进入结果分析。①术后第4～8周，术后2周运动组坐骨神经功能指数高于模型组、术后4周运动组坐骨神经功能指数低于模型组，差异均显著（以第8周为例，模型组、术后2周运动组、术后4周运动组分别为-19．96&;#177;1．75，-16．06&;#177;2．21，-23．73&;#177;3．10，P〈0．05）。②术后第8周时，术后2周运动组运动神经传导速度比模型组增快、术后4周运动组运动神经传导速度比模型组减慢，差异显著[模型组、术后2周运动组、术后4周运动组分别为（36．74&;#177;2．36），（38．66&;#177;2．56），（32．46&;#177;2．94）m／s，P〈0．05]。③光镜下卡压神经的组织形态学观察结果：模型组第4周髓鞘变形较多，凸向轴索呈花边形，轴索偏移，髓鞘上可见空泡，个别髓鞘套叠或增厚；术后2周运动组第4周髓鞘变形，大小不一，变薄．分层；术后4周运动组第6周：髓鞘变形增厚，套叠呈双杯状，髓鞘一端增厚，呈戒指状，轴索偏移。④透射电镜下卡压神经的组织形态学观察结果：模型组第4周髓鞘变形较多，凸向轴索呈花边形，致轴索偏移，髓鞘上可见条形致密线，个别髓鞘套叠或增厚；轴浆均匀，但个别轴索内见小空泡或致密颗粒；许旺细胞内质网扩张，高尔基体发达；术后2周运动组第8周髓鞘套叠较多，变薄，板层松散，内凸向轴索；术后4周运动组第6周：髓鞘变形、增厚、套叠，板层松散，轴索与髓鞘基底膜分离、偏移，许旺细胞核染色质边聚，核缘内陷，内质网扩张，线粒体空化。 结论：神经卡压早期中等量主动运动可延缓神经卡压的病理变化．改善卡压神经的功能，而中后期运动则不利于神经功能的改善。     

定量评估经皮神经电刺激促进周围神经的再生和功能恢复

目的：探讨经皮电刺激对周围神经损伤后组织修复和功能恢复的作用，以神经传导速度为量化恢复指标，以髓鞘增生数目定量分析再生神经纤维数目。方法：实验于1998-09／1999-06在复旦大学附属华山医院实验动物部和显微外科实验室、复旦大学上海医学院手外科研究所肌电图研究室、复旦大学上海医学院电镜中心和病理实验室完成。雄性SD大鼠20只随机分成2组，每组10只。用显微外科手术造成大鼠坐骨神经损伤模型后电刺激组行神经吻合术并进行经皮电刺激，对照组只固定于和电刺激组相同的固定装置上，不进行干预。采用电生理学方法和组织学方法分别观察经皮电刺激对损伤周围神经的神经电位参数和髓鞘结构及数目的影响。结果：实验过程中对照组1只大鼠和电刺激组2只大鼠在麻醉过程中死亡，进入结果分析对照组9只大鼠，电刺激组8只大鼠。①电刺激组大鼠受损坐骨神经的潜伏期较对照组缩短[(0．58&;#177;0．33)ms，(2．27&;#177;0．88)ms，(f=5．12，P&;lt;0．001)]。电刺激组的神经传导速度较对照组增快[(21．44&;#177;8．31)m／s，(16．74&;#177;22．82)m／s，P&;gt;0．05l，波幅低于对照组[(1．95&;#177;1．56)mV，(6．64&;#177;8．42)mV，P&;gt;0．05]。②电刺激组可见大量新生髓鞘，其数目较对照组明显增多[9900．86&;#177;1433．65，6505．83&;#177;77950，(t=5．16，P&;lt;0．001)]。结论：电刺激定量检测的大鼠坐骨神经潜伏期缩短，神经髓鞘计数增高。说明电刺激可能通过促进许旺细胞增殖和髓鞘形成来改善受损周围神经再生和修复的作用。     

补气通络胶囊和神经外膜切开减压对大鼠坐骨神经挤压伤后神经功能修复的影响——4周、8周神经电位及神经髓鞘结构变化比较

目的：比较由黄芪、入参、当归、丹参、川芎组成的补气通络胶囊和神经外膜切开术对坐骨神经急性挤压伤的治疗效果。方法：实验于2004—04／10在广州中医药大学第三附属医院完成。将造模成功的96只SD大鼠随机分为3组：补气通络胶囊组、神经外膜切开手术组和对照组，每组32只。造模后第2天起，补气通络胶囊组大鼠按体质量10mL／kg灌胃补气通络胶囊混悬液，1次／d；手术组造模处行神经外膜切开术；对照组给予10mL／k生理盐水，1次／d。在治疗1周、4周、8周的不同时间取材检测坐骨神经电生理变化中神经传导速度、阈强度和最大振幅。测定坐骨神经氧自由基相对浓度、丙二醛含量和总超氧化物歧化酶活性及电镜超微结构观察，判断神经功能的修复情况。结果：纳入大鼠108只，因造模死亡12只，进入结果分析的为96只。①第4周时应用电生理检测仪测定阈强度比较：补气通络胶囊组明显低于对照组[（0.97&;#177;0．32，1．66&;#177;0．48）μA，（P〈0．01）]。②第8周时应用电生理检测仪测定最大振幅比较：补气通络胶囊组明显高于神经外膜切开手术组[（23．32&;#177;7.3,15．55&;#177;4．38）μV]，（P〈0．05）]。③第1周时测定丙二醛含量比较：补气通络胶囊组明显低于对照组[（214．65&;#177;3．89,249．82&;#177;4.21）mmol/g,（P〈0．05）。④第4周时测定过氧化物歧化酶活性比较：补气通络胶囊组明显高于对照组[（146．91&;#177;1．23，123．89&;#177;142）Nu／mg,（P〈0.05）]。⑤电镜超微结构变化比较：治疗1周后，电镜显示各组坐骨神经髓鞘板层结构松散，而补气通络方组出现增生肥大的许旺细胞。4周后，补气通络方组髓鞘明显再生。第8周。补气通络方组脱髓鞘变化较对照组减轻。对照组和手术组脱髓鞘改变无明显差别。结论：补气通络胶囊对周围神经急性挤压伤后的神经恢复有促进作用。且随时间长而作用增强；单纯神经外膜切开对周围神经急性挤压伤早期（4周）可能有帮助，但远期（8周）时疗效低于补气通络胶囊治疗组。     

电针对大鼠损伤坐骨神经再生的影响

目的：探讨电针对受损伤的周围神经功能恢复的影响。方法：Wistar大鼠60只切断左侧坐骨神经并缝合，随机分成电针组与模型组。电针组每天穴位电针20min。分别于术后2，4及8周动态观察髓纤维形态学变化、坐骨神经动作电位幅值的变化。模型组不作任何处理。结果：电针组坐骨神经动作电位幅值恢复率2，4及8周时分别为(11.98&;#177;4.12)％，(45．03&;#177;7.21)％，(82．41&;#177;15．97)％时优于模型组(9．46&;#177;4．17)％，(15．02&;#177;16.98)％，(33．97&;#177;7．46)％(P(0．05)；有髓神经纤维数、有髓神经纤维直径及截面积在术后各观察点电针组明显多于模型组(P&;lt;0．01)。结论：穴位电针对损伤神经的再生和功能恢复有促进作用。     

自体变性骨骼肌-神经束复合体修复大鼠坐骨神经缺损的实验

目的：观察自体变性骨骼肌-神经束“并联”复合体桥接大鼠坐骨神经缺损的修复效果及可行性。 方法：实验于2005—06／12在咸宁医学院神经组化研究室完成，将Wistar大鼠36只随机分为3组：复合桥组，神经桥组和肌桥组，每组12只。①模型制作：采用2％戊巴比妥钠溶液（0．1mL／50g）经腹膜腔注射麻醉后，显露并切去鼠的右侧坐骨神经一段使形成10mm缺损。另在复合桥组和肌桥组，切取股二头肌外缘纵行肌束，置于60℃水浴变性5min。②分组处理：复合桥组：将缺损远端神经行“束间分离”，等分为两束，切取10mm长的一束与自体变性骨骼肌束“并联”桥接于坐骨神经缺损处并用筋膜包裹；神经桥组：以自体神经原位桥接于神经缺损处；肌桥组：以自体变性骨骼肌束桥接于神经缺损处。③指标测试：术后24周，用肉眼观察桥接体及吻合口外形，取称大鼠双侧胫前肌湿质量，以术侧（右侧）与正常侧（左侧）湿质量百分比作为胫前肌湿质量恢复率；取移植体，以Bielschowsky镀银染色后，石蜡包埋，作纵、横切片，苏木精-伊红复染，光镜下观察和用彩色图像分析仪测量再生神经纤维的数目（密度）、平均直径及髓鞘厚度。 结果：实验大鼠36只均进入结果分析，术后24周时，①大体观察：复合桥组和神经桥组的桥接段均有完整的神经外膜和清晰的神经折光横纹，与周围组织粘连轻，吻合处质软，表面光滑，而肌桥组则无完整的神经外膜和神经折光横纹，与周围组织粘连较重，吻合口处质硬，表面粗糙；胫前肌（湿质量）恢复率：复合桥组和神经桥组均较肌桥组高，其差异有显著性[复合桥组（72．19&;#177;7．23）％，神经桥组：（75．01&;#177;6．21）％，肌桥组：（63．98&;#177;6．41）％，P〈0．05]。②再生神经纤维的数目（密度）：复合桥组和神经桥组均较肌桥组多（密）[复合桥组：（77．78&;#177;6．76）&;#215;10^4根／μm^2，神经桥组：（78．43&;#177;4．56）&;#215;10^4根／μm^2，肌桥组：（68．88&;#177;2．39）&;#215;10^4根／μm^2，P〈0．05]。③再生神经纤维直径和髓鞘厚度：复合桥组和神经桥组也较肌桥组粗厚[复合桥组：（6．56&;#177;1．58）μm和（1．21&;#177;0．25）μm，神经桥组：（7．22&;#177;1．57）μm和（1．34&;#177;0．22）μm，肌桥组：（6．22&;#177;1．57）μm和（1．10&;#177;0．17）μm，P〈0．05]。④复合桥组与神经桥组间各项检查指标比较差异均无显著性（P〉0．05）． 结论：缺损周围神经远段“束间分离”所得的自体神经与自体变性骨骼肌束“并联”复合桥体修复大鼠神经短距离缺损，其效果接近单纯的自体神经桥体而优于单纯的自体变性骨骼肌桥体，具有一定的临床应用价值。     

种植骨髓间充质干细胞的甲壳质人工神经修复周围神经缺损

目的：骨髓间充质干细胞(bone marrow stem，MSCs)在体外可以诱导分化为周围神经的许旺细胞，通过MSCs和生物降解支架材料复合后构建成的神经套管，探讨其桥接修复周围神经缺损的效果和MSCs的体内分化去向。方法：实验于2003—04／2004—02在北京大学人民医院创伤骨科实验室完成。培养纯化的成年大鼠MSCs，传代扩增。建立大鼠坐骨神经缺损的动物模型，缺损长度0．5cm，实验分3组，每组8只SD大鼠，各组均取右侧为实验侧，左侧为正常对照。A组：复合MSCs的甲壳质神经套管桥接组；B组：单纯神经套管桥接组；C组：造成神经缺损后原位神经移植组。术后4周和8周分别计算坐骨神经功能指数，行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果：各组动物均有不同程度感觉和运动神经功能的恢复。术后8周各组的再生的神经纤维已越过套管缝合口，A，B，C组坐骨神经功能指数分别为45．2&;#177;1．32，54．2&;#177;1．47，66．5&;#177;1．40；运动神经传导速度分别为(36．10&;#177;3．71)，(32．89&;#177;4．01)，(25．45&;#177;3．78)m／s。上述各指标及远端神经轴突面积各组间比较均有：A组优于B组，B组优于C组，差异均有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：复合了MSCs的甲壳质神经套管修复周围神经缺损的效果优于单纯的甲壳质套管组，单纯套管组优于神经移植组。     

大白鼠坐骨神经节段离体放射线照射后原位再植的实验研究

背景：肢体恶性肿瘤如侵及神经干，手术切除将给患者带来肢体功能障碍。欲修复神经干，需找到符合神经再生条件的理想材料替代。目的：研究用4000cGy高能电子线一次照射的大白鼠坐骨神经离体节段(10．0mm)原位再植后神经再生的可能性。设计：随机对照研究。地点和对象：本实验在哈尔滨医科大学第一和第三临床医学院完成．实验对象为30只Wistar雌性大白鼠(由哈医大动物实验中心提供)。干预：将Wistar雌性大白鼠30只按随机数字表分成A组(单纯手术组)、B组(放射手术组)和C组(正常对照组)，A，B组术后分别于7，14，21，28，35，42，49，56，63和70d观察测量各项指标，与C组(常规饲养1周)进行对照。主要观察指标：骨神经功能恢复(SFI)、电生理指标和组织学观察。结果：4000cGy放射线对神经组织有严重损伤。A，B两组光镜下和大体所见无明显差异，均于术后8～9周，呈现神经再生轴索形态良好，功能有一定程度恢复；两组计量资料比较差异无显著性意义(P&;gt;0．10)，除SFI外，各项指标均于术后一段时间达到C组均值水平。结论：经4000cGy高能电子线一次照射10mm大白鼠坐骨神经离体节段，原位再植不妨碍神经再生的速度和质量。     

丙戊酸钠对大鼠坐骨神经修复与再生的影响

目的：通过对坐骨神经损伤模型的药物实验研究，观察丙戊酸钠对大鼠周围神经损伤的修复作用。方法：实验于2004-07／11在武汉大学医学院动物实验中心进行。采用清洁级SD大鼠36只，行右坐骨神经横形切断后即刻原位吻合术，制成周围神经损伤模型后，随机分为丙戊酸钠组、对照组、维生素组。分别在给药后4，8，12周以坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index，SFI)、坐骨神经传导速度(nerve conduction velocity，NCV)和坐骨神经轴突计数(sciatic nerve axon counting，NAC)为观测指标，判断神经功能的修复情况。结果：①术后4，8，12周坐骨神经功能指数检测结果：丙戊酸钠组分别为-74．75&;#177;1．55，-67．41&;#177;2．21，-55．29&;#177;0．82，明显好于对照组-84．60&;#177;2．00，-79．43&;#177;0.72，-73．41&;#177;0．94和维生素组-77．15&;#177;0．90．-73．55&;#177;0．92，-63．48&;#177;0．57(P均&;lt;0．05)。②再生神经运动诱发电位潜伏期检测结果：丙戊酸钠组分别为(2．19&;#177;0．13)，(1．97&;#177;0．28)，(1．61&;#177;0．73)ms，明显好于对照组(3．10&;#177;2．11），(2．62&;#177;1．79)，(2．58&;#177;0．16)ms和维生素组(2．64&;#177;1．94)，(2．59&;#177;0．67)，(2．54&;#177;0．09)ms(P均&;lt;0．05)。③术后12周单位视野有髓神经纤维计数结果：丙戊酸钠用药组(152．33&;#177;7．88)个／视野优于对照组(116．08&;#177;12．63)个／视野和维生素组(136．42&;#177;11．41)个／视野(P均&;lt;0．05)。结论：丙戊酸钠对周围神经损伤后神经功能的恢复有促进作用。