大鼠星形胶质细胞和少突胶质细胞的纯化培养与鉴定

目的 纯化培养并鉴定大鼠脑组织星形胶质细胞和少突胶质细胞。方法 根据星形胶质细胞和少突胶质细胞的生长时间差异、细胞生长方式及细胞对培养层粘附等特性的不同,改进ＭｃＣａｒｔｈｙ方法纯化培养星形胶质细胞和少突胶质细胞,用免疫组化法对其鉴定。结果 （１）混合培养的星形胶质细胞和少突胶质细胞生长分化状况均优于纯化后的生长,以少突胶质细胞表现更为明显;（２）星形胶质细胞呈向心性生长,细胞相邻的接触面有较多的     

活化小胶质细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效初探

目的 研究活性小胶质细胞移植对脊髓损伤后大鼠运动功能恢复的作用.方法 选用成年雌性Wistar大鼠40只,随机分为4组,前两组为运动功能观察组,采用自制改良Allen脊髓打击装置打击脊髓,建立中度脊髓损伤的动物模型,分成移植组和对照组,每组10只.后两组为组织学观察组,用相同方法制作动物模型,也分为移植组与对照组,每组10只.在动物模型制作早期进行新生大鼠小胶质细胞的培养、分离以及纯化,并对小胶质细胞进行鉴定和细胞纯度的测定.移植组术后7 d再次暴露损伤部位,微量注射器以损伤部位为中心注射移植活化小胶质细胞悬液.而对照组不移植.运动功能观察组分别在移植后第1天、第1,2,3,4周对大鼠进行运动功能评分;组织学观察组在相同时相点进行Naoumenko及Feigin小胶质细胞石蜡切片染色,每个时间点移植组和对照组每组随机抽取两只大鼠取材切片,镜下观察并计数小胶质细胞.对所得数据进行统计学分析.结果 术后1,2,3,4周,对照组与移植组随时间延长BBB评分均逐渐升高,移植组术后2,3,4周后肢运动功能评分较对照组明显升高(P＜0.05);Naoumenko-Feigin染色计数,移植组比同期对照组阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 小胶质细胞移植可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复.     

人脑少突胶质细胞的培养与鉴定

少突胶质细胞是中枢神经的成髓鞘神经胶质细胞，它包绕神经纤维的轴突形成髓鞘，对轴突正常的电传导功能有重要作用。将少突胶质细胞移植人髓鞘形成障碍或脱髓鞘的中枢神经系统内，可揭示髓鞘形成和再生机制。由于体外培养的少突胶质细胞与其在体内的特性相关,因此通过体外培养研究可了解少突胶质细胞的存活、增殖、分化和发育过程中的细胞生物学变化。然而中枢神经系统具有细胞多样性，它包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞，所以必须对少突胶质细胞进行体外纯化。     

谷氨酸对星状胶质细胞分泌神经生长因子的影响

星状胶质细胞合成分泌神经生长因子 ( NGF)受到多种因素 (发育过程、神经系统损伤、病毒刺激等 )的影响。其中脑损伤后谷氨酸的作用还不明确〔1〕。通过体外培养星状胶质细胞 ,用不同浓度的谷氨酸直接作用于细胞 ,观察细胞合成分泌 NGF的改变 ,明确了谷氨酸对星状胶质细胞表达 NGF的确切作用。1　材料与方法1 .1　星状胶质细胞的培养纯化鉴定　取 SD乳鼠(生后 3～ 5天 )大脑组织 ,按参考文献〔2〕方法进行培养。1 .2　细胞的分组与处理　纯化后的星状胶质细胞以 2× 1 0 5/ml密度接种于 2 4孔培养板上培养 48h,吸去培养液 ,每组设 4孔 …     

IFN-γ预处理骨髓间充质干细胞及其抑制小胶质细胞 活化作用的影响

 目的 探讨干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)预处理大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)及其抑制脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)诱发的小胶质细胞(microglia,MG)活化作用的影响。方法 采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMMSCs,利用含100 ng/ml 的IFN-γ完全培养液对BMMSCs进行预处理;利用LPS(10μg/ml)诱导大鼠小胶质细胞活化。小胶质细胞分离纯化后,以1×10⁵/孔种植于6孔板中,按以下分组将小胶质细胞和BMMSCs以直接接触的方式进行共培养24h:B组(单纯BMMSCs组)、L+B组(LPS+ BMMSCs组)、I+B组(IFN-γ预处理BMMSCs组)、L+I+B组(LPS+IFN-γ预处理BMMSCs组)、M组(单纯MG组)、L+M组(LPS+MG组)、B+L+M组(BMMSCs+LPS+MG组)、I+B+L+M组(IFN-γ预处理BMMSCs+LPS+MG组)。采用ELISA技术检测培养液上清TNF-α、IL-1β水平,免疫荧光法检测小胶质细胞表面标记物CD68表达。结果 L+M组小胶质细胞CD68表达增高,分泌TNF-α、IL-1β含量明显增多;B+L+M组以及I+B+L+M组的小胶质细胞CD68表达水平、TNF-α、IL-1β分泌量低于L+M组,且B+L+M组与I+B+L+M组相比有统计学差异(P＜0.05)。结论 BMMSCs和IFN-γ预处理的BMMSCs均可以直接接触的方式抑制LPS诱发的小胶质细胞的活化且经IFN-γ预处理后的BMMSCs对小胶质细胞活性抑制作用更强。     

少突胶质细胞祖细胞高效分离培养及EGFP基因转染

目的：建立高效分离少突胶质细胞祖细胞（oligodendrocyte precursor cells，OPCs）的方法，并转染增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因。方法：采用2次接种培养和差速振荡分离，结合使用神经营养因子（bFGF、PDGF-AA），体外分离纯化和扩增培养OPCs，用抗A285、GFAP、CNPase免疫荧光抗体鉴定细胞类型。采用脂质体介导EGFP基因转染OPCs，筛选获得稳定表达EGFP的OPCs细胞。结果：分离培养的OPCs细胞呈A2B5阳性，纯度达到99％，具有增殖和双向分化的潜能（GFAP阳性的2型星形胶质细胞和CNPase阳性的少突胶质细胞），传代培养1个月仍具有增殖能力。EGFP基因转染后OPCS细胞能发出绿色荧光，并继续保持增殖分化特性。结论：二次接种培养和差速振荡分离法可获得高纯度OPCs细胞；EGFP基因转染可作为示踪OPCs迁移的有效方法。     

PYK2在海人酸癫痫大鼠海马神经元及小胶质细胞中的表达变化

目的 观察海人酸癫痫大鼠海马内神经元和小胶质细胞中PYK2的表达并探讨其意义。方法 建立海人酸大鼠癫痫模型，大鼠癫痫发作后8、24、72h后处死大鼠，采用免疫组化方法观察大鼠海马内小胶质细胞的活化状况，以及海马神经元和活化后小胶质细胞中PYK2的表达变化。结果 与正常大鼠相比，癫痫大鼠中PYK2的表达在癫痫发作8h后急剧下降，并随时间推移继续下降。癫痫发作24h后，海马中出现大量呈阿米巴形状、强烈表达活化型PYK2的活化型小胶质细胞；癫痫后72h，海马中出现大量有活化型PYK2强表达的“杆”状活化型小胶质细胞。结论 癫痫可致海马神经元及小胶质细胞PYK2表达变化；小胶质细胞中活化型PYK2的表达可能与小胶质细胞活化有关。     

纤维型和原浆型星形胶质细胞的分离培养及睫状神经营养因子对其增殖的影响

目的和方法：建立纤维型及原浆型星形胶质细胞体外分离培养的方法,并观察在体外睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对这两种细胞的增殖作用。结果和结论：经免疫组织化学鉴定,本方法分离培养的星形胶质细胞,纤维型纯度达９５％,原浆型纯度达９９％。ＣＮＴＦ可以促进纤维型星形胶质细胞的增殖,而对原浆型星形胶质细胞的促增殖作用不明显。     

大鼠肝脏原代Kupffer细胞的分离培养

目的 建立稳定而有效的大鼠肝脏Kupffer细胞分离、纯化的实验方法.方法 用无Ca2+灌注液和浓度为0.05%的胶原酶灌注液进行肝脏的灌注及消化,用Percoll密度梯度离心法进行Kupffer细胞的分离、纯化,并鉴定大鼠肝脏原代Kupffer细胞.结果 分离培养后得到纯化的原代Kupffer细胞,生长状态良好,DAB染色实验证实经大鼠肝脏灌流得到稳定生长的原代Kupffer细胞.结论 通过大鼠肝脏灌注建立了有效的大鼠肝脏Kupffer细胞分离、纯化的实验方法.     

前列腺炎性疼痛与脊髓胶质细胞活化关系的初步研究

目的探讨前列腺炎性疼痛与脊髓胶质细胞活化的关系。方法用完全弗氏佐剂（CFA）刺激SD大鼠前列腺,用免疫组织化学技术对不同时间段大鼠相应脊髓节段（L6和S1）星形胶质细胞和小胶质细胞活化情况进行检测。结果CFA刺激大鼠前列腺后3、10、28天,L6、S1脊髓背角浅层和深层星形胶质细胞和小胶质细胞的活化与对照组相比均显著增加。结论胶质细胞活化在前列腺炎性疼痛的神经病理过程可能具有重要作用。