一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物的细胞免疫…

检测一种恶性疟原虫保护性原重组复合基因表达产物诱导小鼠细胞免疫的反应，方法：免疫小鼠的巴细胞，体外分别经ＣｏｎＡ，ＨＲＡ和可溶性裂殖子抗原的刺激。＾３Ｈ－ＴｄＲ参入法检测淋巴细胞的增殖水平。结论：ＨＲＡ上的Ｔ细胞位点发挥了效应。具肝一这一的突破ＭＨＣ限制的能力。     

脂质体包裹可溶性蛋白质抗原诱导特异性CTL的研究

目的：搪塞用可溶性蛋白质抗原诱导特异性ＣＴＬ的途径。方法：用冻融－超声法制备包裹可溶性鸡卵蛋白（ＯＶＡ）和ＣＡ－Ｈｂ３蛋白质抗原的阳离子脂质体，并借助脂南体将抗的导入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞胞浆内，以此细胞经尾静脉免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，取体内初致敏脾细胞，在体外以渗透方式导入ＯＶＡ或ＣＡ－Ｈｂ３抗原的脾细胞再刺激，诱导特异性ＣＴＬ，并进行Ｉ类途径阻断实验和ＭＨＣＩ类分子中和实验，结果：脂质体成功     

活化B淋巴细胞与NS1瘤细胞融合瘤苗的抗肿瘤免疫治疗

观察活化Ｂ淋巴细胞与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合瘤苗对荷ＮＳ１瘤ＢＡＢＬ／Ｃ小鼠免疫治疗作用。方法用灭活ＮＳ１瘤细胞及其裂解物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠活化的Ｂ淋巴细胞；以５０％ＰＥＧ为融合剂，将免疫脾Ｂ淋巴细胞与野生型ＮＳ１骨髓瘤细胞融合，经ＨＡＴ选择性培养，筛选融合细胞，     

日本血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗对小鼠免疫应答的影响

采用日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫８周时,断头取血,取脾脏,取腹腔巨噬细胞。以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力,以ＮＯ湫得检测巨噬细胞吞噬活性,以ＥＬＩＳＡ试剂盒检测血清及脾淋巴细胞培养上清的白细胞介素２（ＩＬ－２＿和干扰素γ（ＩＦＮ－γ）的含量。结果表明,ｒＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗以１０＾－６ＣＦＵ剂量经皮下免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显高于     

单克隆抗体MAb7及其相应抗原在单核－巨噬细胞系统及中性粒细胞中的表达

目的：建立一株抗人单核－巨噬细胞及中性粒细胞的杂交瘤ＭＡｂ７．方法：用人肝癌组织细胞悬液免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，ＡＢＣ染色法筛选单克隆抗体，ＡＰＡＡＰ法鉴定髓细胞特征。结果：抗体亚类为小鼠ＩｇＧｌ，相应抗原经亲和层析纯化，Ｍｒ６００００．免疫组化染色，在石蜡切片的组织中和在血片及骨髓涂片中单核巨噬细胞和成熟的中性粒细胞阳性，单核细胞性白血病及中性粒细胞性白血病阳性，而上皮、内皮、网状组织细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞及其它粒细胞、淋巴细胞、红细胞均为阴性．结论：ＭＡｂ７在研究单核－巨噬细胞的分化、免疫功能及病理分型等方面有一定的意义和价值．     

抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初…

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。分泌的抗体为ＩｇＧ     

弓形虫McAb的制备和鉴定

弓形虫是一种人兽共患病的病原寄生虫,是一级实验动物必须检测的项目之一。目前最常用的检查方法是检测血清抗体。抗原检查应该是最直接、直观的手段,但是直接涂片、饱和盐水漂浮和动物接种等方法或检出率低或步骤繁琐。制备制异性的ＭｃＡｂ,用于弓形虫抗原检测是这个研究的出发点。我们通过小鼠腹腔繁殖弓形虫速殖子,利用Ｇ２砂蕊漏斗过滤,提纯速殖子,反复冻融及超声波粉碎,制备可溶性抗原。常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,免疫剂量为１００μｇ／只,取免疫后小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,间接ＥＬＩＳＡ法筛选,有限稀…     

和肝助脾饮对免疫性肝损伤小鼠脾脏T和B淋巴细胞功能的影响

Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾脏Ｔ和Ｂ淋巴细胞的增殖能力，在受到免疫性肝损伤后下降（Ｔ细胞１６５７４±７７６→２８８０±１３４ｃｐｍ，Ｐ＜０．０１；Ｂ细胞１６０６４±３２５→１４９０４±２４１ｃｐｍ，Ｐ＜０．０５），和肝助脾饮不仅能使免疫性肝损伤小鼠脾脏Ｔ和Ｂ淋巴细胞增殖能力下降得到改善（Ｔ细胞６１８８±１２９ｃｐｍＰ＜０．０１；Ｂ细胞有增高趋势１５６００±２６８ｃｐｍ），而且正常小鼠应用后亦明显提高（Ｔ细胞３１４５４±４７２ｃｐｍ，Ｐ＜０．０１；Ｂ细胞２９５９８±６４２ｃｐｍ，Ｐ＜０．０１）。提示和肝助脾饮能改善免疫功能，减轻小鼠的免疫损伤。     

分泌抗人喉癌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及临床意义

用喉癌抗原免疫疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选获得４株分泌抗人喉癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，均收集到腹水型ＭｃＡｂ，并验证其滴度高，纯化效果好，特异性强。     

日本血吸虫未成熟卵对小鼠肝肉芽肿形成的免疫学影响

目的探讨日本血吸虫未成熟卵诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚免疫的效果及其对小鼠肝肉芽肿形成的影响。方法采用未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及其不同组分抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠产生的抗病免疫能力。结果经ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫后，均可明显地降低攻击感染后免疫鼠的肝肉芽肿数目和大小。与对照组比较，上述两者免疫后的小鼠，其肝肉芽肿平均直径分别下降了２９．２６％和４９．６４％，尤以ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原的免疫效果为佳，且感染鼠脾重明显下降（Ｐ＜０．０１）。但是成熟虫卵可溶性抗原以及ＳＩＥＡ－１分部抗原免疫对降低肝卵肉芽肿数量和大小以及脾肿大程度均无明显作用，甚至刺激肉芽肿反应增强。结论ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫可诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的作用，并明显抑制虫卵肉芽肿的形成。     

结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875、Rv3804c细胞表位融合蛋白的表达及其免疫原性评价

  目的  评价结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的细胞表位融合蛋白的免疫原性,为研制新型多阶段结核疫苗提供可靠的靶抗原。  方法  将Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的细胞表位串联构成融合抗原基因(命名为msv),克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1中,诱导表达后采用亲和层析纯化表达产物,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用纯化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度;分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,采用淋巴细胞增殖法检测其免疫原性。  结果  成功构建了能表达融合抗原基因msv的原核表达质粒;SDS-PAGE和Western blot结果表明,表达产物亲和层析纯化后,获得相对分子质量为41.3×103的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度,结果表明特异性抗体效价约为1:81 920;淋巴细胞增殖实验结果表明,抗原致敏的淋巴细胞经融合蛋白msv刺激后明显增殖。  结论  成功表达并纯化出融合蛋白msv,该融合蛋白可诱导小鼠特异性抗体表达和刺激细胞免疫应答,可作为结核疫苗的抗原组分。     

新型冠状病毒疫苗免疫BALB/c小鼠后的T细胞表位鉴定

目的 鉴定携带新型冠状病毒S、N和M基因的疫苗在BALB/c小鼠上的T细胞表位。方法 用携带新型冠状病毒S、N和M基因的DNA疫苗和痘病毒载体疫苗免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,末次免疫1个月内取小鼠脾细胞,用ELISPOT法检测其对新型冠状病毒特异性多肽的T细胞免疫反应,筛选出具有阳性反应的多肽片段,并对其表位进行预测分析。结果 S、N、M基因分别鉴定出12、2、17条阳性多肽。S基因中多肽S49、S50、S100、S101、S102、S103阳性反应率为100%,且免疫刺激指数最高;覆盖M蛋白全长的41条多肽中有7条能刺激50%以上的小鼠产生阳性反应。预测分析结果显示,S、N、M基因分别有10、1、16个MHC-1 H-2限制性表位,主要位于S基因的RBD区、N基因RBD区以及M基因的跨膜区。这些表位在SARS-CoV-2及其变异株、SARS-CoV中高度保守。结论 新型冠状病毒DNA疫苗和痘病毒载体疫苗诱导了针对多个基因、多个表位的特异性T细胞应答,未来通用型疫苗设计应包含能诱导细胞免疫的多个抗原,特别是包含保守表位的结构抗原。     

CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠和HBV转基因C57BL/6J小鼠

目的:探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对HBsAg诱导BALB/c和HBV转基因小鼠产生免疫应答的影响. 方法: 用人工合成CpG ODN与血源HBsAg联合免疫BALB/c和HBV转基因C57BL/6J小鼠,采用ELISA方法观察小鼠血清HBsAg及抗-HBs水平,用ELISPOT方法判断CpG ODN对HBsAg免疫小鼠脾T淋巴细胞分泌细胞因子的影响. 结果: CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠较HBsAg单独注射组同期抗-HBs滴度明显提高,尤其在首次免疫后6、8、12 wk,2组比较差异显著(P<0.05),联合免疫较CpG ODN单独免疫自首次免疫后4 ～16 wk差异显著(P<0.05).与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或9倍;CpG ODN,HBsAg联合免疫可诱导转基因小鼠产生抗-HBs,随时间延长,抗体滴度逐渐升高,并能使更多小鼠产生抗体,而单用HBsAg组、CpG ODN组均不能诱导抗-HBs的产生,免疫后各组血清HBsAg浓度较免疫前明显下降(P <0.05),但组间无明显差别(P>0.05),与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或11倍. 结论: CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/c小鼠产生体液及细胞免疫应答,CpG ODN ,HBsAg联合免疫可打破HBV转基因小鼠对HBsAg免疫耐受,可望成为慢性乙型肝炎的有效预防和治疗性疫苗.     

Immune responses to the expressed products of the CSP antige n gene of Plasmodium falciparum southern China isolate FCC1/HN in Hela cell

Objective To construct a eukaryotic expression system with pcDNA3-PfCSP/Hela for the Circ umsporozoite protein (CSP) gene of Plasmodium falciparum (P.falciparum), t o observe the immune responses in BALB/c mice induced by the expressed proteins .Methods The recombinant plasmid pcDNA3-PfCSP was transformed into the Hela cell line. The expressed protein was isolated and analyzed by using SDS-PAGE and used for immunization of BALB/c mice by subcutaneous, intravenous, and intraperitone al adminstration.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), Dot-ELISA, Wester n blot, T lymphocyte proliferation test, natural killer cell(NKC) activity assay , and CD4(+) and CD8(+) T cell detection were used for observation of humoral an d cellular immune responses.Results Immune sera strongly reacted with the expressed protein, antibody titer was up to 1∶6400 as detected by ELISA.Western blot analysis revealed a specific b and at 38.3 Kda.When the spleen cells of normal and immunized BALB/c mice we re specifically stimulated with expressed protein, the optical densities were 0 .12±0.03 and 0.34±0.04, respectively.The latter were significantly highe r than the former (P&lt;0.01).We used the MTT colorimetric assay to measure NKC activity of mice spleen.The results showed that the NKC activity of immuni zed BALB/c mice was remarkably higher than that of the controls (P&lt;0.05). CD4(+) and CD8(+) T cells were detected by using monoclonal antibody immunofluor escence methods.The results showed that the percentage of CD4(+) and CD8(+) T cells of immunized group were significantly higher than that of control group ( P&lt;0.05).Conclusions The humoral and cell-mediated immune responses and elevated NKC activity to pr oducts made with a eukaryotic expression system could be specifically detected i n BALB/c mice.These findings indicate that the expressed protein could enhance the immune function in mice.     

Immune responses to the expressed products of the CSP antigen gene of Plasmondium falciparum south in China isolate FCC1/HN in Hela cell

Immune responses to the expressed products of the CSP antigen gene of Plasmondium falciparum south in China isolate FCC1/HN in Hela cell@Yu XB @Liu YW @Luo SH     

Effects of the configuration of a multi-epitope chimeric malaria DNA vaccine on its antigenicity to mice

Ｔｈｅａｓｅｘｕａｌｂｌｏｏｄｓｔａｇｅｏｆｍａｌａｒｉａｐａｒａｓｉｔｅｓｉｓｔｈｅｏｎｌｙｓｔａｇｅｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅａｎｄｈａｓ,ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ,ｂｅｅｎｔｈｅｓｕｂｊｅｃｔｏｆｍｏｓｔｏｆｔｈｅｓｔｕｄｉｅｓｏｎｍａｌａｒｉａｖａｃｃｉｎｅＢａｓｅｄｏｎｉｎｖｉｖｏｐａｓｓｉｖｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｉｍｍｕｎｉｔｙｉｎｈｕｍａｎｓ,ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅｅｖｉｄｅｎｃｅｓｈａｖｅｐｒｏｖｅｎｔｈａｔＩｇＧｃｏｎｓｔｉｔｕｔ…     

Calpain免疫BALB／c鼠后IFN-γ和IF-4水平的动态变化

目的探讨弓形虫疫苗候选分子-钙离子激活的中性蛋白激酶（Calpain）的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法用重组纯化的Calpain抗原免疫BALB/c小鼠,RT—PCR分析Calpain抗原免疫BALB/c小鼠一氧化氮激酶（iNos．eNos．nNos）mRNA的表达;ELISA分析免疫小鼠体外培养脾细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-4的动态变化。结果重组Calpain抗原免疫小鼠后,RT—PCR测定重组Calpain抗原免疫1周小鼠iNos mRNA的表达显著性的增强,培养24h免疫鼠脾细胞上清中IFN-γ浓度显著性的高于对照组,而IL-4的产生在免役组与对照组差异无统计学意义。结论Calpain抗原能够诱导IFN-γ的产生,提示Calpain诱导Th1的免疫应答反应来抗弓形虫的感染。     

基因转染Sp2/0细胞作为检测乙肝病毒基因疫苗细胞免疫效应的靶细胞的研究

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)S基因转染的Sp2/0细胞作为检测HBV基因疫苗细胞免疫效应的靶细胞的可行性.方法以脂质体介导基因转染,含G418的培养基筛选,获得HBV基因S转染的Sp2/0细胞;构建编码HBV抗原蛋白S的重组真核表达质粒pCR3.1-S作为HBV基因疫苗;采用51Cr 4 h释放法体外检测HBV基因疫苗免疫接种小鼠的淋巴细胞杀伤功能.结果与空载体对照组相比较,HBV基因疫苗诱发Balb/c小鼠产生较好的HBV特异的细胞免疫应答(P＜0.05).结论以Sp2/0基因转染细胞作为靶细胞检测免疫BALB/c小鼠的淋巴细胞杀伤功能是可行的.     

弓形虫 SAG1基因的表达及其诱导的细胞免疫应答

目的分析弓形虫 SAG1基因真核表达质粒的体外表达及其诱导小鼠的细胞免疫应答.方法重组表达质粒 pVAX1-SAG1瞬时转染 vero细胞, Western blot法检测在细胞中的表达.将重组真核表达质粒 pVAX1-SAG1及空质粒 pVAX1于 0、 4周分别经肌注免疫 BALB/c小鼠;第 8周杀鼠,取脾,分离淋巴细胞,分别经 ConA和抗原刺激,用 MTT法测定免疫鼠脾脏 T淋巴细胞转化率 ;使用直接免疫荧光法 ,用流式细胞仪对 CD4+、 CD8+ T细胞亚群进行测定;两组小鼠经弓形虫速殖子攻击感染,计算存活期.结果 Western blot法分析转染细胞,发现存在弓形虫感染血清识别的 26 000u的特异带,与理论值相符 ;抗原刺激小鼠脾 T淋巴细胞发生增殖反应 , 免疫组与空质粒对照组间差异有显著性 (P< 0.05),但 ConA刺激小鼠后,两组间差异无显著性 (P >0.05); T细胞亚群 CD4+、 CD8+动态分析 ,CD4+、 CD8+ T细胞数量均升高,免疫组与空质粒对照组差异均有显著性 (P1< 0.05, P2< 0.05).弓形虫攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较空质粒对照组延长.结论 真核表达质粒 pVAX1-SAG1在 vero细胞中获得表达 ,且能诱导 BALB/c小鼠产生细胞免疫应答.     

复制型重组痘苗病毒TTK-EG特异性T细胞表位研究

目的筛选和确定TTK-EG包含的H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。方法 6~8周龄雌性BALB/c小鼠0周时分别经肌肉注射、皮内注射和滴鼻途径免疫5×10~6PFU TTK-EG,间隔4个月进行加强免疫。末次免疫后2周取小鼠脾细胞,采用IFN-γELISPOT方法筛选HIV-1 Env和Gag肽库,反应阳性的肽库进行第二轮单肽筛选。用流式细胞术(胞内因子染色,intracellular cytokine staining,ICS)对筛选出的单肽进行验证(小鼠免疫途径为肌肉注射),确定H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。结果经过ELISPOT筛选和ICS验证,确定2条Env多肽(gp140-9,氨基酸位点60~77;gp140-74,氨基酸位点548~565)和3条Gag多肽(Gag-49,氨基酸位点196~210;Gag-64,氨基酸位点256~270;Gag-65,氨基酸位点260~274)包含H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位,其中gp140-74(IVQQQSNLLRAIEAQQHL)是首次发现的H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。Env、Gag优势表位肽与Env、Gag全肽池刺激小鼠T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α三种细胞因子的能力基本相同。结论 Env多肽gp140-9、gp140-74和Gag多肽Gag-49、Gag-64、Gag-65包含H-2~d限制的T细胞表位,可用于重组痘苗病毒TTK-EG的T细胞免疫研究。