microRNA-10b对人食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭能力的影响。方法:构建pEGFP-miR-10b真核表达载体,在食管癌细胞系EC9706中稳定表达miR-10b,利用real-time PCR检测其表达水平,应用划痕试验,Transwell小室实验分析迁移和侵袭能力的改变。结果:转染miR-10b载体后,real-time PCR检测其表达水平显著高于对照组(P<0.05),miR-10b的表达能够显著促进EC9706细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:miR-10b能够促进食管癌细胞系EC9706的迁移和侵袭,可作为评价食管癌转移能力的指标。     

SOX1对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

[目的]探究性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box,SOX1)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。[方法]选择稳定表达SOX1基因的HeLa细胞株为实验组,同时选择稳定表达空白质粒的He La细胞株和HeLa细胞为对照组。采用二甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SOX1对HeLa细胞增殖的影响;通过细胞基质黏附实验、体外细胞迁移实验、体外细胞侵袭实验分别研究SOX1对HeLa细胞粘附、迁移、侵袭能力的影响;采用明胶酶谱法检测细胞内相关蛋白的水平。[结果]在研究第1天,两组的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组在研究第3天(0.526±0.067)、第5天(1.169±0.148)、第7天(1.160±0.134)的增殖能力均显著性低于对照组(P<0.05)。实验组黏附率(0.754±0.041)显著性低于对照组(0.931±0.135)(P<0.05);实验组在24h(5.84±1.20)、48h(10.28±3.01)、72h(14.51±2.31)迁移距离均显著性小于对照组(P<0.05);实验组侵袭细胞的数量(120.09±10.04个)明显较对照组(215.67±6.98个)少(P<0.05)。实验组基质金属蛋白酶2(0.981±0.199)、基质金属蛋白酶9(0.536±0.033)、波形纤维蛋白(0.429±0.029)表达水平显著性低于对照组,SOX1、E钙黏附蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。[结论]SOX1表达水平升高,会使宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭抑制,MMP2、MMP9、Vimentin蛋白表达水平降低,Ecadherin表达水平升高。     

Annexin a2表达对人乳腺癌细胞增殖迁移和侵袭能力的影响

目的：研究Annexin a2的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：采用小干扰RNA技术下调人乳腺癌细胞中Annexin a2的表达,并筛选单克隆细胞株,得到实验组克隆,阴性对照组命名为control。采用Western blot（WB）技术检测Annexin a2蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法研究其对MDA-MB-231细胞的存活、增殖能力的影响;采用划痕实验、侵袭实验观察其对细胞迁移和侵袭能力的影响; 免疫沉淀法检测与Annexin a2相互作用的蛋白分子。结果：WB检测发现siRNA干扰后MDA-MB-231细胞中Annexin a2的蛋白表达水平明显下降, MTT增殖实验显示Annexin a2下降组细胞克隆在72、96h的增殖能力明显低于亲本和control组细胞 （P均<0.05）, 同时细胞迁移和侵袭能力也显著下降, 差异具有统计学意义 （P<0.05）;免疫沉淀法证实Annexin a2与热休克蛋白27（HSP27）之间存在相互作用。结论：人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有较强的迁移和侵袭能力,Annexin a2蛋白水平下降可以明显抑制其增殖、迁移和侵袭能力,研究提示Annexin a2与HSP27的相互作用有可能在乳腺癌的发生、 浸润和转移中起调节作用。     

MIIP对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:利用质粒转染技术制备过表达迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)的肾癌786-0/MIIP细胞系,观察MIIP对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法:构建携带MIIP基因的质粒,通过脂质体质粒转染技术上调肾癌786-0细胞系MIIP基因表达.Western-blot、Real-time PCR检测转染效果;利用MTT实验检测MIIP对786-0细胞增殖能力的影响;Transwell实验、划痕实验检测MIIP对786-0细胞侵袭、迁移能力的影响.结果:Westem-blot、Real-time PCR检测发现实验组786-0/MIIP细胞MIIP蛋白及mRNA表达量有效上调.MTT实验显实验组786-0/MIIP细胞增殖能力明显减弱(P＜0.01).Transwell实验显实验组786-0/MIIP细胞侵袭能力减弱,穿透小室细胞数明显减少(P＜0.01).细胞划痕实验显实验组786-0/MIIP细胞迁移能力显著下降(P＜0.01).结论:通过质粒转染技术能够制备过表达MIIP的肾癌细胞系.转染成功的肾癌786-0/MIIP细胞系MIIP表达量增加,有效抑制了肾癌细胞的增殖、侵袭与迁移.     

下调ERp57抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析内质网驻留蛋白57(ERp57)在食管鳞癌组织中的表达情况以及下调ERp57对食管癌细胞TE-1生物学功能的影响。方法:GEPIA数据库分析食管癌中ERp57的表达;通过荧光定量PCR和Western blot检测临床食管癌标本及细胞株中ERp57的表达;利用shRNA沉默TE-1细胞内ERp57后,通过CCK8检测细胞增殖、TUNEL检测细胞凋亡、划痕检测细胞迁移、Transwell检测细胞侵袭。结果:食管癌组织中ERp57的mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁组织(P<0.05),食管癌细胞中ERp57的mRNA及蛋白的表达高于食管上皮细胞(P<0.05)。沉默ERp57使TE-1细胞的增殖能力减弱、凋亡比例增加,并减弱了TE-1细胞的迁移及侵袭能力。结论:沉默ERp57表达能够抑制食管癌细胞TE-1的增殖、迁移、侵袭,可为食管癌研究提供理论依据。     

FOXC2蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与预后的相关性

目的：叉头框 C2（FOXC2）在多种肿瘤中表达,并与肿瘤的转移和增殖关系密切,但其在食管鳞癌中的表达以及作用未见报道,本研究旨在探讨 FOXC2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及与预后的相关性。方法：应用实时定量 PCR 法以及 Western blot 法检测 FOXC2在129例食管鳞癌组织中的表达情况,并且分析其表达水平与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、分化程度、T 分期、淋巴结转移等临床病理之间的关系,研究FOXC2对患者预后的影响。结果：PCR 证实在 mRNA 水平 FOXC2在食管鳞癌组织中表达水平均高于其对应的癌旁组织（P ＝0．005）。免疫组化结果表明 FOXC2在食管鳞癌中的阳性率为60．47％,与患者的肿瘤大小（P ＜0．001）、T 分期（P ＝0．008）、淋巴管转移（P ＝0．005）关系密切,而与患者的年龄、肿瘤位置等没有统计学意义;FOXC2阳性表达的患者5年生存率显著低于 FOXC2阴性表达的患者（P ＝0．009）;同时,多因素分析显示 FOXC2是食管癌患者预后的独立因素。结论：FOXC2高表达于食管鳞癌组织中,并且发现其与食管癌的转移密切相关,其对食管鳞癌患者的预后预测有重要意义,可能成为食管鳞癌诊断、治疗的新标志物。     

干扰FBXO2表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT的影响

目的：探讨F框蛋白2（F-box only protein 2,FBXO2）基因在人胃癌细胞系中表达及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT 的影响。方法：选择胃癌细胞系 MGC-803、AGS、SGC-7901、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1,qPCR 法检测细胞中FBXO2 mRNA表达水平。设计靶向抑制FBXO2表达的特异siRNA,并瞬时转染MGC-803细胞,转染siRNA无义序列的为阴性对照。qPCR法检测转染48 h后MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达水平;用MTT法、细胞划痕愈合法、Transwell小室法检测降低 FBXO2表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 法检测细胞中 EMT 相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达。结果：4种胃癌细胞中FBXO2 mRNA表达水平显著高于胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照组相比,siRNA[1]FBXO2组MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达下调（P<0.01）,该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制（P<0.05或P<0.01）,E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.01）,N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低（均 P<0.01）。结论：低表达的 FBXO2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该抑制作用可能与EMT过程有关。     

转录因子Snail对食管癌Eca-109细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Snail在诱导食管癌细胞侵袭和迁移中的作用及机制。方法 采用慢病毒转染构建食管癌细胞株Eca-109-Snail和Eca-109-vc,Real-time PCR及Western blot实验分别检测其mRNA及蛋白表达水平,Transwell及细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。 结果 慢病毒转染细胞株构建成功。经Real-time PCR及Western blot实验鉴定慢病毒转染后的Eca-109-Snail细胞Snail表达量升高,细胞表现出成纤维细胞样外形,细胞之间彼此分离;Eca-109-Snail细胞E-cadherin表达下降,Vimentin和MMP-2表达上升,其侵袭和迁移能力较空载体对照组增强,差异均具有统计学意义（P<0.01）。 结论 Snail通过诱导食管癌Eca-109细胞发生上皮间质转化,进而提高其侵袭和迁移能力。     

lncRNA HEIG对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响及其分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HEIG在宫颈癌组织和细胞中的表达及其生物学功能。方法:采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织和癌旁组织、正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela和C33A中lncRNA HEIG的表达;敲低Hela细胞中HEIG表达,MTT法和流式细胞术分别检测Hela细胞的增殖、凋亡情况;Transwell小室法检测Hela细胞的迁移侵袭能力;Western blot检测AKT信号通路的变化。结果:lncRNA HEIG在宫颈癌组织和细胞中高表达;敲低HEIG可显著抑制宫颈癌细胞Hela的细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,同时抑制AKT信号通路的活化。结论:lncRNA HEIG有可能作用于AKT信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭。     

FOXC2和E-cad在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨结肠癌组织中叉头框蛋白C2（FOXC2）、E-钙粘附蛋白（E-cad）的表达及临床意义。方法 收集2014年1月至2016年3月70例结肠癌组织和30例癌旁组织,采用免疫组织化学SP法检测上述组织中FOXC2、E-cad的表达情况,分析两者的相关性及与临床病理特征的关系。结果 FOXC2在结肠癌组织中的阳性表达率为74.3％（52／70）,高于癌旁组织的20.0％（6／30）,差异有统计学意义（P＜0.001）;E-cad在结肠癌组织中的阳性表达率为21.4％（15／70）,低于癌旁组织的80.0％（24／30）,差异有统计学意义（P＜0.001）。FOXC2和E-cad在结肠癌组织中的表达与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关（P＜0.05）,与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关（P＞0.05）。在结肠癌组织中两者表达呈负相关（r=-0.728,P＜0.05）。结论 FOXC2在结肠癌组织中高表达,而E-cad呈低表达,且两者表达呈负相关,提示FOXC2、E-cad可能共同参与了结肠癌的发生、发展过程。     

慢病毒介导的RNA干扰FOXC2表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞功能影响

目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰叉头框C2(FOXC2)表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹法检测人正常永生化上皮Hecate细胞和皮肤鳞状细胞癌A431细胞中FOXC2 mRNA和蛋白的表达水平.将体外培养的A431细胞分为对照组(正常...     

Ezrin对食管鳞癌细胞侵袭、迁移和黏附能力的影响

[目的]探讨Ezrin对食管鳞癌细胞转移能力的影响。[方法]用脂质体转染方法将空载体和构建好的pCB6-Ezrin载体稳定转染入EC9706细胞中,经G418筛选后,通过Western blotting法检测Ezrin表达情况选择试验用细胞。通过MTT法检测EC9706细胞增殖和黏附能力的变化,通过流式细胞仪检测凋亡的变化,通过Transwell、划痕试验检测侵袭、迁移能力的改变。[结果]与对照组相比,过表达Ezrin的EC9706细胞侵袭(P<0.01)、迁移(P<0.05)和黏附能力(P<0.01和P<0.05)较空载体增强,但增殖能力和凋亡未发生显著变化(P>0.05)。[结论]Ezrin可以增强食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附能力,可能在食管癌远处转移中具有重要作用。     

Rab31对神经胶质瘤细胞增殖迁移侵袭的影响及机制研究

目的:研究Rab31对人神经胶质瘤细胞增殖迁移侵袭的影响及相关分子机制.方法:Western blot检测正常人胶质细胞NHA和3株人神经胶质瘤细胞SHG-44、TJ905和LN229中Rab31表达;将3种Rab31沉默siRNA及其对照分别转染至神经胶质瘤SHG-44细胞中,分别记为si-Rab31-1组、si-R...     

miR-4465调控EZH2的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨miR-4465通过调控EZH2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测胃癌组织和细胞系中miR-4465的表达水平;在MKN45细胞中过表达miR-4465或沉默EZH2,采用CCK-8和Transwell检测MKN45细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;Western blotting检测EZH2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-4465与EZH2的相互作用。结果:与癌旁组织相比,miR-4465在胃癌组织中的表达降低,在胃癌细胞系(MCC-803、SGC7901、MKN45)中的表达水平显著低于人永生化胃细胞RGM-1,且在MKN45细胞系中的表达低于其他细胞。过表达miR-4465明显抑制MKN45细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT);双荧光素酶报告基因结果证实,miR-4465直接靶向作用于EZH2的3’-UTR;进一步实验证明,同时沉默miR-4465和EZH2能够恢复沉默EZH2对MKN45细胞增殖...     

Sema6D对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成能力的影响及机制

目的 探讨沉默信号素蛋白6D(Sema6D)对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及促进血管形成能力的影响.方法 检测人骨肉瘤组织及细胞系中Sema6D的表达情况,脂质体法转染靶向siRNA后通过CCK-8、细胞划痕、Transwell、人脐静脉内皮细胞与肿瘤条件培养基共培养实验探究骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和体外促血管形成能...     

hsa-miR-223通过靶向ARTN调控食管癌KYSE-150细胞的迁移和侵袭能力

探讨hsa-miR-223对人食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响,研究hsa-miR-223影响食管癌细胞功能改变的作用机制。方法：通过Real-time PCR和Western blot检测hsa-miR-223和ARTN在人食管癌细胞系中的表达;建立了稳定过表达成熟miR-223的人食管癌KYSE-150细胞系,通过细胞划痕实验和Boyden chamber检测细胞迁移和侵袭能力的改变;在此基础上,通过报告基因分析和Western blot探讨hsa-miR-223引起食管癌细胞生物学功能改变的作用机制。结果：Real-time PCR结果表明hsa-miR-223在高转移潜能的人食管癌细胞KYSE-150中呈低表达,而ARTN在KYSE-150中呈高表达;在人食管癌细胞KYSE-150中过表达hsa-miR-223后降低细胞的迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因分析表明成熟的miR-223能够作用于ARTN的3'UTR区降低荧光素酶的活性,Western blot进一步证实了hsa-miR-223能够抑制内源性ARTN的表达。结论：hsa-miR-223在高转移能力的食管癌细胞KYSE-150中呈低表达,具有类似抑癌基因的作用调控ARTN的表达,降低了食管癌细胞KYSE-150的迁移和侵袭能力,ARTN是miR-223的靶基因,有可能成为肿瘤生物治疗的一个靶点。     

MIIP 对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移侵袭能力的抑制作用及其机制

目的：探讨迁移侵袭抑制蛋白（migration invasion inhibitory protein,MIIP）对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及作用机制。方法：设计并合成 MIIP 过表达质粒,并利用脂质体转染方法上调 T24细胞系中 MIIP 的表达。Western blot 及实时定量聚合酶链反应（Real －time PCR）检测过表达 MIIP 的效果,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）及平板克隆法观察 MIIP 过表达对 T24细胞增殖能力的影响,划痕及 Transwell 实验检验 MIIP过表达对 T24细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot 及 Real －time PCR 检测过表达 MIIP 后其上皮间充质转化（epithelial －mesenchymal transition,EMT）过程相关标志物钙黏蛋白 E（E －cadherin）、钙连蛋白 N（N －cadherin）、转录因子 Snail 蛋白和 mRNA 变化情况。结果：过表达质粒能有效上调 T24细胞系中 MIIP 蛋白及mRNA 的表达,上调 MIIP 表达后 T24细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力下降,迁移侵袭能力减弱;上调MIIP 表达后 E －cadherin 表达增加,N －cadherin 及转录因子 Snail 表达减少。结论：过表达 MIIP 可能通过降解转录因子 Snail,从而抑制 EMT 进程降低膀胱癌 T24细胞的增殖及迁移侵袭能力。     

miR-194靶向EZH2抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-194、EZH2对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测甲状腺癌组织、癌旁正常组织及甲状腺癌细胞和正常甲状腺上皮细胞中miR-194和EZH2的mRNA表达;将miR-194（转染miR-194 mimics）、miR-NC（未转染细胞）、inhibitor-NC（转染空inhibitor）、miR-194 inhibitor（转染miR-194 inhibitor）、si-EZH2（转染si-EZH2）、miR-194+Vector（miR-194 mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-194+EZH2（miR-194 mimics和pcDNA 3.1-EZH2共转染）均以脂质体法转染到SW579、IHH-4细胞;Western blot检测细胞中EZH2的蛋白表达;MTT法检测细胞的增殖;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果:与正常组相比,甲状腺癌组EZH2的表达显著升高,miR-194的表达显著降低;与人正常甲状腺上皮细胞相比,甲状腺癌细胞中EZH2表达显著升高,miR-194的表达显著降低,且过表达miR-194和沉默EZH2均可抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。EZH2为miR-194的靶标,且EZH2可逆转过表达miR-194对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-194可抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与靶向EZH2有关,将可为miR-194靶向治疗甲状腺癌提供依据。     

shRNA沉默HMGA2对食管癌ECA109细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨shRNA沉默HMGA2对食管癌ECA109细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探究所涉及的相关机制.方法 构建针对人HMGA2基因的shRNA表达载体,瞬时转染至人食管癌细胞系ECA109中,24 h后应用蛋白免疫印迹法(WB)检测转染效率;应用MTT法比较转染后sh-HMGA2组与sh-NC组细胞增殖情况;应用流式细胞术检测HMGA2沉默对细胞凋亡的影响;应用Transwell测定评估HMGA2沉默对细胞迁移和侵袭能力的影响;应用WB检测HMGA2沉默对ECA109细胞内HMGA2、TGF-βRⅡ、Vimentin、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2/3、E-cadherin、N-cadherin、Bax、Bcl-xl、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响.结果 与sh-NC组相比,sh-HM-GA2组中HMGA2的蛋白表达水平降低(P﹤0.05).MTT结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞增殖率明显降低(P﹤0.01).流式细胞术结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞凋亡率增加(P﹤0.05).Tran-swell测定结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组中ECA109细胞迁移和侵袭数量均减少(P﹤0.05).WB结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞内Bax和E-cadherin表达水平增加,而Bcl-xl、Vimentin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、TGF-β、Smad2、Smad3、p-Smad2/3蛋白表达水平均降低(P﹤0.05).结论 shRNA沉默HMGA2基因通过下调Bcl-xl表达、上调Bax表达水平来抑制食管癌细胞系ECA109细胞增殖并促进细胞凋亡,并通过抑制MMP及上皮间质转化来抑制细胞迁移和侵袭,这一过程涉及TGF-β/Smad信号通路.     

pan-RAF抑制剂LY3009120对分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制

目的:探讨pan-RAF抑制剂LY3009120对甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法:以不同浓度的LY3009120作用于MDA-T32细胞,应用CCK-8法检测细胞的增殖能力。以半数致死浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）作用于细胞,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blotting法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin和Snail的表达。结果:通过CCK-8法检测显示LY3009120能明显抑制MDA-T32细胞的增殖。划痕实验和Transwell实验结果显示LY3009120能抑制细胞的迁移和侵袭。Western blotting结果显示LY3009120促进MDA-T32细胞中E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Snail的表达。结论:LY3009120能够抑制甲状腺癌细胞系MDA-T32的增殖,可能通过上皮间质转换机制抑制细胞的侵袭和迁移。