结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术检测肺泡灌洗液诊断肺结核的价值

收集陕西省结核病防治院2021年10月至2022年7月疑似肺结核住院患者的肺泡灌洗液,同时进行涂片抗酸杆菌染色、分枝杆菌BACTEC MGIT 960液体培养(简称“培养”)及菌种鉴定、GeneXpert MTB/RIF、结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberculosis,SAT-TB),并对结果进行分析。以培养法(菌种鉴定结果为结核分枝杆菌复合群)为参考标准,SAT-TB诊断肺结核的敏感度为80.61%(399/495),特异度为87.74%(1259/1435),阳性预测值为69.39%(399/575),阴性预测值为92.92%(1259/1355),约登指数为0.68。SAT-TB技术具有敏感度和特异度较高的特点,对临床快速诊断活动性结核病具有一定的价值。     

DNA实时荧光恒温扩增法联合检测对结核性胸膜炎的早期诊断价值

目的:分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)联合腺苷脱氨酶(adenosine deaminase, ADA)、外周血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测对结核性胸膜炎患者早期诊断的价值。方法:采用回顾性研究方法,选取2020年1月至2021年12月西安市胸科医院收治的不明原因胸腔积液患者427例作为研究对象。所有研究对象均进行胸腔积液恒温扩增法、胸腔积液ADA、胸腔积液结核分枝杆菌培养和外周血T-SPOT.TB检测。以临床综合诊断作为参考标准,评价恒温扩增法联合ADA、外周血T-SPOT.TB对结核性胸膜炎的早期诊断价值。结果:427例研究对象中,279例(65.3%)确诊为结核性胸膜炎(结核性胸膜炎组),148例确诊为非结核性胸膜炎(非结核性胸膜炎组)。ADA的最佳诊断界值为19.5 U/L。单一检测方法中,恒温扩增法的特异度为100.00%,敏感度为31.54%,与结核分枝杆菌培养类似(分别为100.00%和30.11%)。胸腔积液ADA和外周血T-SPOT.TB检测的敏感度分别为74.91%和84.95%,特异度分别为87.16%和74.91%。ADA+...     

胸腔积液游离核酸检测在结核性胸膜炎早期诊断中的价值

目的: 评价胸腔积液结核分枝杆菌游离核酸检测技术(cell-free Mycobacterium tuberculosis DNA test,CF.TB)在结核性胸膜炎中的诊断价值。方法: 选取2016年7月至2018年12月收住于首都医科大学附属北京胸科医院初诊不明原因胸腔积液患者216例。所有患者均在B超引导下进行胸腔穿刺术或置管术留取胸腔积液,并同时进行胸腔积液CF.TB、SAT-PCR、GeneXpert MTB/RIF及腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)检测和血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测。以临床复合标准(composite reference standard,CRS)为参考标准,评价胸腔积液CF.TB、SAT-PCR、GeneXpert MTB/RIF、ADA及血T-SPOT.TB检测诊断结核性胸膜炎的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。评价胸腔积液CF.TB方法单独或与ADA联合检测对结核性胸膜炎早期诊断的价值。结果: 216例患者中,165例患者临床确诊为结核性胸膜炎,51例患者确诊为其他病因胸腔积液。以CRS为参考标准,CF.TB、SAT-PCR、GeneXpert MTB/RIF、ADA及T-SPOT.TB方法对结核性胸膜炎诊断的敏感度分别为70.30%(116/165)、7.88%(13/165)、12.12%(20/165)、67.27%(111/165)和87.27%(144/165),特异度分别为100.00%(51/51)、100.00%(51/51)、100.00%(51/51)、92.16%(47/51)和62.75%(32/51),阳性预测值分别为100.00%(116/116)、100.00%(13/13)、100.00%(20/20)、96.52%(111/115)和88.34%(144/163),阴性预测值分别为51.00%(51/100)、25.12%(51/203)、26.02%(51/196)、46.53%(47/101)和60.38%(32/53)。CF.TB检测胸腔积液MTB的敏感度(70.30%)明显高于SAT-PCR(7.88%)、 GeneXpert MTB/RIF(12.12%)和ADA(67.27%)(χ²=1.350、1.153、1.025,P值均=0.000),差异均有统计学意义;而且CF.TB与ADA联合检测(88.48%, 146/165)可明显提高CF.TB(70.30%, 116/165)诊断结核性胸膜炎患者的敏感度,差异有统计学意义(χ²=16.670,P=0.000)。结论: 胸腔积液CF.TB检测技术对结核性胸膜炎诊断的敏感度优于SAT-PCR及GeneXpert MTB/RIF技术,特异度优于ADA及T-SPOT.TB方法,而且CF.TB与ADA联合检测可明显提高其在结核性胸膜炎中的诊断价值,建议CF.TB技术可作为结核性胸膜炎的辅助诊断。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术辅助诊断肺外结核的临床价值

目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)辅助诊断肺外结核的价值。 方法 收集2016年1月至2017年12月期间重庆市公共卫生医疗救治中心结核科、普通外科与骨科收治的482例患者肺外样本(主要为病变部位的脓液或手术取出物),根据患者病历记录的临床诊断分为肺外结核(试验组,433例)和排除结核病的其他疾病(对照组,49例)。所有标本同步采用培养法(联合罗氏培养法和BACTEC MGIT 960液体培养法两种方法,只要其中一种培养阳性就视为“培养法”结果为阳性)和SAT检测结核分枝杆菌,并对培养法阳性、SAT检测结果阴性的标本进行菌种鉴定。分别与培养法、患者临床诊断比较,并分析SAT检测的敏感度、特异度和临床辅助诊断肺外结核的价值。 采用SPSS 13.0软件进行分析,计数资料采用χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 试验组127例培养法阳性的标本中TB-SAT检测阳性107例,阴性20例;306例培养法阴性的患者中TB-SAT检测阳性73例,阴性233例。对照组1例标本培养法阳性、TB-SAT检测阴性,其余48例标本培养法与TB-SAT检测均为阴性。以培养法为标准,SAT检测MTB的敏感度、特异度分别是83.6%(107/128)、79.4%(281/354)。与患者临床诊断相比,则培养法的敏感度、特异度分别为29.3%(127/433)、98.0%(48/49);SAT检测MTB的敏感度、特异度分别为41.6%(180/433)、100.0%(49/49)。培养法检测阳性率为29.3%(127/433),SAT法检测阳性率为41.6%(180/433),两者检测阳性率比较,差异有统计学意义(χ ²=14.17,P<0.05)。 结论 SAT检测技术辅助诊断肺外结核具有方便快速、检出率高、敏感度和特异度高等优势,具有较高的临床价值。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在肺结核诊断中的价值分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT-TB)在肺结核诊断中的价值。方法纳入1121例非相同患者痰标本,其中26例为非结核分枝杆菌。570例肺结核为观察组,525例其他肺部疾病患者为对照组。对治疗前的痰标本分别进行抗酸杆菌涂片、培养及鉴定和SAT法检测。阳性检出率的比较使用卡方检验。结果临床诊断肺结核570例,痰培养结核菌阳性率46.5%(265/570),SAT法检测阳性率46.7%(266/570),痰涂片阳性率34.4%(196/570),SAT与涂片法阳性率的差异有统计学意义(χ2=17.83,P0.01)。在涂阴肺结核中,SAT阳性率达19.5%。以培养阳性作为金标准,SAT法诊断结核病的灵敏度为89.4%,特异度96.3%,阳性似然比为24.2,阴性似然比为0.11,一致率是94.6%,阳性预测值是88.4%,阴性预测值为96.6%。在非结核分枝杆菌肺病中SAT检测阳性率为零。结论 SAT-TB法在肺结核的早期诊断中是一种快速、准确、敏感的方法,值得推广。     

DNA实时荧光恒温扩增法在结核病临床检测中的应用价值

目的分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称"恒温扩增法")在结核病临床检测中的应用价值。方法收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。结果以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法(95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ²值分别为...     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的临床应用

目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing,SAT）在结核病患者的痰液、体液及病灶组织等标本中检测结核分枝杆菌的价值.方法 收集在广州市胸科医院就诊的疑似结核病患者的痰液734份、体液标本94份（包括68份胸腔积液、21份脑脊液、5份关节积液,以下统称“体液”）及病灶组织标本76份,共计904份标本.同时采用SAT法、改良罗氏培养法进行检测,培养阳性者进行基因芯片菌种鉴定.SAT法与改良罗氏培养法结果不相符的标本,用结核分枝杆菌聚合酶链（polymerase chain reaction technology for Mycobacterium tuberculosis,PCR-TB）荧光诊断试剂盒进行检测.采用x2检验比较SAT法与改良罗氏培养法对结核病患者的阳性检出率.结果 以改良罗氏培养结果为金标准,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为90.20％（230/255）、92.48％（443/479）、91.69％（673/734）;94.74％（18/19）、81.33％（61/75）、84.04％（79/94）;100.00％（14/14）、77.42％（48/62）、81.58％（62/76）.以扩大金标准（培养＋PCR法）比对,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为96.30％（260/270）、99.35％（461/464）、98.23％（721/734）;96.97％（32/33）、100.00％（61/61）、98.94％（93/94）;100.00％（27/27）、97.96％（48/49）、98.68％（75/76）.改良罗氏培养法和SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的阳性检出率分别为34.74％（255/734）和36.24％（266/734）、20.21％（19/94）和34.04％（32/94）、18.42％（14/76）和36.84％（28/76）;痰标本两者的阳性率比较,差异没有统计学意义（x2=0.36,P＞0.05）.体液与病灶组织标本中,SAT法较改良罗氏培养法的阳性率高出13.83％和18.42％,差异有统计学意义（x2值分别为4.55、6.44,P值均＜0.05）.结论 SAT法检测痰液、体液及病灶组织标本中的结核分枝杆菌,具有快速、敏感度和特异度较高的优点,可提高结核分枝杆菌的检出率.     

恒温扩增荧光检测法检测结核分枝杆菌复合群的应用价值

目的:评价恒温扩增荧光检测法检测痰样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC)的临床应用价值。方法:选择上海市6家结核病定点医院作为研究现场,收集2020年1月至2020年11月各家医院肺科门诊初诊的1848例疑似肺结核患者痰样本,分别进行恒温扩增荧光检测法与传统的痰涂片、BACTEC MGIT 960液体培养(液体培养)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测。以液体培养为参照标准,分析比较恒温扩增荧光检测法、痰涂片及GeneXpert的检测效能。结果:在1848例患者痰样本中,恒温扩增荧光检测法、痰涂片、液体培养和GeneXpert检测MTBC的检出率分别为16.7%(309/1848)、14.4%(266/1848)、25.4%(470/1848)和28.7%(530/1848)。以液体培养为参照标准,恒温扩增荧光检测法、痰涂片和GeneXpert检测的敏感度分别为58.94%(277/470)、52.77%(248/470)、80.43%(378/470);特异度分别为97.68%(1...     

不同技术联合检测痰液和胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 研究不同技术联合检测痰液和胸腔积液对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 收集2014年1月至2017年3月首都医科大学附属北京胸科医院收治的临床诊断为结核性胸膜炎的1955例患者,其中1232例(63.02%)有肺部实质病变,723例(36.98%)无肺部实质病变,通过抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片法”)、改良固体培养法和BACTEC MGIT 960液体培养(简称“培养法”)和Xpert MTB/RIF技术(简称“Xpert法”)单独及联合检测患者痰液和胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性检出率,并分析肺部实质病变对结核分枝杆菌检测阳性率的影响。结果 1955例结核性胸膜炎患者同时采用涂片法进行痰液和胸腔积液检测者中有535例(27.37%)患者、353例(18.06%)采用培养法、294例(15.04%)采用Xpert 法,188例(9.62%)患者同时进行了涂片法+培养法+Xpert法检查。涂片法、培养法和Xpert法单独检测胸腔积液结核分枝杆菌的阳性率[3.18%(17/535)、15.30%(54/353)、19.05%(56/294)]明显低于3种方法联合检测痰液+胸腔积液的阳性率[21.87%(117/535)、43.63%(154/353)、47.62%(140/294)](χ ²值分别为85.31、68.16、54.00,P值均<0.01)。在有肺部实质病变的患者中,涂片法、培养法、Xpert法单独检测胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性率[3.82% (13/340)、16.30% (37/227)和23.91% (44/184)]明显低于3种方法单独检测痰液的阳性率[30.29% (103/340)、51.10% (116/227)、60.33% (111/184)](χ ²值分别为84.19、61.53、50.04,P值均<0.01)和联合检测痰液+胸腔积液的阳性率[分别为32.06% (109/340)、55.95% (127/227)、67.93% (125/184)](χ ²值分别为92.06、77.32、71.79,P值均<0.01)。以培养为金标准,涂片法、培养法和Xpert法检测痰液+胸腔积液的敏感度[48.36%(59/122)、79.38%(77/97)、80.49%(66/82)]明显高于单独检测胸腔积液的敏感度[8.20%(10/122)、26.80%(26/97)、26.83%(22/82)](χ ²值分别为48.52、53.84、47.47,P值均<0.01);检测痰液+胸腔积液的特异度较单独检测胸腔积液有所下降,其中涂片法检测的差异无统计学意义(χ ²=3.65,P=0.056);而Xpert法和涂片法+Xpert法检测的差异均有统计学意义(χ ²=4.71,P=0.030;χ ²=5.67,P=0.017)。 结论 联合检测痰液和胸腔积液中结核分枝杆菌的阳性检出率高于单独检测,对于疑似结核性胸膜炎的患者,应尽量进行痰液标本的检测,以提高对结核性胸膜炎诊断的参考价值。     

聚合酶链反应在诊断结核性胸腔积液中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对６２例胸水进行结核菌ＤＮＡ检则，并同时与胸水涂片及培养结果进行比较。结果显示：３４例结核性胸水涂片抗酸染色、结核菌培养和ｐＣＲ检测阳性率分别为５．９％、８．８％和５２．９％，后者显著高于前二者（Ｐ均＜０．０１）。２８例非结核性胸水涂片和培养结果均呈阴性，但ＰＣＲ有４例（１４．３％）出现阳性。结果表明ＰＣＲ直接检测胸水中结核菌显示出快速、敏感和高效等优点。同时还对影响ＰＣＲ检测结核菌的某些因素作了分析。     

血清及胸腔积液抗PPD-IgG检测对结核性胸腔积液的诊断价值

目的　评价血清、胸腔积液抗PPD-IgG检测对结核性胸腔积液的诊断价值。方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测58例结核性胸腔积液的血清、胸腔积液抗PPDIgG,同时与胸膜活检及胸腔积液抗酸杆菌阳性率作比较,并随机选择42例非结核性胸腔积液作为对照组。结果 结核性胸腔积液血清、胸腔积液抗PPD-IgG阳性率(82.8%,96.6%)与胸膜活检阳性率(56.9%),胸腔积液抗酸杆菌阳性率(0%)比较,有显著性差异(P<0.005)。与对照组血清、胸腔积液抗PPDIgG阳性率(11.9%,21.4%)比较,有显著性差异(P<0.005)。本法血清抗PPD-IgG敏感性为82.8%,特异性为88.1%,准确性为85.0%。胸腔积液抗PPD-IgG敏感性为96.6%,特异性为78.6%,准确性为89.0%。结论 同时检测血清、胸腔积液抗PPDIgG可作为诊断结核性胸腔积液的一种可行的辅助方法。     

实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对肺结核诊断价值的研究

目的 检测实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对结核病诊断的作用。 方法 收集172例疑似肺结核患者的痰液标本2份/例,1份进行涂涂片金-胺染色,另一份进行罗氏培养基培养与菌种鉴定及SAT法检测结核分枝杆菌,如SAT法和培养结果不符合则使用痰荧光定量PCR法（FQ-PCR)进行复核。 结果 172例入组患者中有156例根据临床及实验室结果确诊为肺结核病。如果以Mtb培养鉴定结果和荧光PCR结果作为判定金标准,SAT检测的敏感度和特异度分别为97.8%（89/91）和97.5%（79/81）。如以临床诊断为标准,SAT诊断结核的敏感度为58.3%（91/156）,特异度为100.0％（16/16）。对于痰菌阳性肺结核患者,SAT 阳性率为84.9%（79/93）;对于痰菌阴性患者,SAT的阳性率为19.0%（12/63）。 结论 SAT法可以作为临床对结核病的辅助诊断方法。     

探针导向重组酶介导等温扩增法检测MTB rpoB基因突变的应用价值

目的建立可快速检测MTB rpoB基因516位点突变的探针导向重组酶介导等温扩增法(probedirected recombinase amplification,PDRA)。方法设计4条探针[1条野生型探针(P-W)及3条突变型探针(P-GGC、P-GTC、P-TAC)]和1条共同的下游引物,分别构建TB-516-W、TB-516-GGC、TB-516-GTC和TB-516-TAC4种检测体系,在39℃条件下恒温扩增40 min。通过阳性阈值时间判定MTB rpoB基因516位点是否发生突变及其突变类型;通过同一探针检测对应的重组质粒确定该检测体系的敏感度;通过不同探针检测某一种重组质粒,根据阳性阈值时间确定该检测体系的特异度。应用建立的PDRA方法检测6株利福平耐药MTB菌株和35份MTB培养阳性的痰标本,并与一代测序结果进行比较。结果 4种检测体系检测对应重组质粒的敏感度为1000拷贝/μl。4种检测体系的特异度良好,探针与靶序列完全匹配时,阳性阈值时间早;探针与靶序列不完全匹配时,阳性阈值时间晚,具有稳定的阳性阈值时间差值,体系TB-516 W,TB-516-GGC,TB-516-GTC和TB-516-TAC的阳性阈值时间差值分别为7.0、5.8、10.0、7.0 min。PDRA检测6株MTB利福平耐药菌株和35份MTB培养阳性痰标本的结果与测序结果一致。结论本研究初步建立了可应用于MTB利福平耐药rpoB基因516位点突变检测的PDRA方法,该方法检测敏感度高,特异度好,具有一定的实验室应用价值。     

白细胞介素27在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值

目的研究胸腔积液中白细胞介素27(IL-27)浓度对于结核性胸腔积液(TPE)和恶性胸腔积液(MPE)的鉴别诊断价值.方法纳入2015~2018年收住北京朝阳医院诊断为TPE或MPE的患者,通过酶联免疫吸附法测定胸腔积液及血浆中IL-27浓度.通过受试者工作特征曲线获取胸腔积液中IL-27的浓度、胸腔积液与血浆IL-27浓度的差值和比值的诊断价值.结果143例患者中TPE组78例,MPE组65例.TPE患者中胸腔积液IL-27浓度显著高于MPE患者,胸腔积液IL-27诊断TPE的诊断界值为499.71 ng/L,敏感度为93.6%,特异度为95.4%,曲线下面积为0.952(95%CI:0.913~0.991),Z统计分析显示,胸腔积液与血浆IL-27浓度差值和比值的诊断价值不高于胸腔积液IL-27浓度.结论胸腔积液IL-27浓度是鉴别TPE和MPE的理想生物标志物.