肺癌患者外周血白细胞mtDNA HVR Ⅰ区序列变异研究

目的分析肺癌患者及健康成人外周血白细胞mtDNA非编码HVRⅠ区序列的突变情况并探讨其意义.方法应用一步法制备17例肺癌患者和14位健康成人外周血白细胞mtDNA,PCR产物直接测序,对比分析非编码HVRⅠ区序列变异情况.结果肺癌组和健康成人组中,非编码HVRⅠ区共发现136个变异,碱基平均变异率分别为1.238 4%和1.336 7%,差异无统计学意义,P=0.304 89.肺癌组中碱基平均变异率腺癌(0.994 2%)＜鳞癌(1.202 1%)＜小细胞癌(1.754 4%).结论肺癌患者外周血白细胞mtDNA主要碱基变异发生在非编码HVRⅠ区,与健康成人相应区域变异率趋于一致,可能HVRⅠ区的高突变率并不是肿瘤的特异性变化,但小细胞肺癌组碱基平均变异率有增高趋势,可能是其预后差的相关因素.     

高通量基因测序技术检测外周血循环肿瘤DNA基因突变在非小细胞肺癌中的应用

目的:探究高通量基因测序技术检测非小细胞肺癌外周血循环肿瘤DNA基因突变的应用价值。方法:临床纳入2017年1月至2018年9月在我院就诊的40例晚期非小细胞肺癌患者作为研究对象,所有患者入院后均经肺组织活检或气管镜检查确诊为晚期非小细胞肺癌。对患者进行病理组织石蜡切片DNA（tDNA）检测,并采集患者肘静脉血使用高通量基因测序技术检测患者外周血循环肿瘤ctDNA基因情况。对比分析tDNA与ctDNA检测对患者DNA基因突变的准确性,探讨非小细胞肺癌患者进行高通量基因测序技术检测外周血循环肿瘤DNA基因突变的应用价值。结果:40例非小细胞肺癌的外周血循环肿瘤DNA基因突变检测与组织石蜡切片比较,两种方法检测率差异无统计学意义（P>0.05）。在高通量基因测序技术检查外周血循环肿瘤DNA中,21外显子测序结果:61号替代突变2573G→T,62/63/68号替代突变L858R（2573T→G）。19外显子测序结果:50号样品突变为del E746→A750+2235G→A,60号样品突变为del E746→A750,70号样品突变为del L747→T751,80号样品突变为del L747→S752＋2257C→T。结论:非小细胞肺癌外周血循环肿瘤DNA基因突变进行高通量基因测序技术对具体的基因突变或缺失具有较高准确性,可实时监测肿瘤DNA基因突变情况,且具有无创性、可重复应用等优点。     

ESR基因单核苷酸多态性与EGFR敏感突变的非小细胞肺癌脑转移风险的相关性CSCD

目的探讨雌激素受体信号通路中基因的单核苷酸多态性与EGFR敏感突变的非小细胞肺癌脑转移发生风险的相关性。方法提取105例EGFR敏感突变的非小细胞肺癌患者全血样本的基因组DNA。选择雌激素受体信号通路中ESR1和ESR2基因的7个单核苷酸多态性(SNP)位点并检测这7个SNPs位点的基因型。通过Kaplan-Meier分析评估基因型与累积脑转移发生率的相关性。采用多因素Cox回归分析来评估基因型与脑转移发生风险之间的相关性。结果发现ESR1:rs2982685的GA/AA基因型和ESR2:rs3020443的AC/CC基因型会增加脑转移风险(HR=5.845,95%CI:1.979-17.263,P=0.001;HR=5.288,95%CI:1.859-15.036,P=0.002)。结论雌激素受体信号通路上的基因变异可预测EGFR敏感突变的非小细胞肺癌患者脑转移发生风险。     

晚期非小细胞肺癌外周血循环肿瘤DNA EGFR突变与TKI疗效的相关性

目的:探讨晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）外周血循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）突变与EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）治疗疗效的相关性。方法:利用突变扩增阻滞系统（amplification refractory mutation system，ARMS）法检测50例NSCLC患者外周血ctDNA EGFR突变，其中27例进行组织与ctDNA配对检测。给予TKI治疗一月后进行疗效评价。对ctDNA EGFR突变与患者的临床因素、疗效相关性进行分析，并比较ctDNA与肿瘤组织EGFR突变的一致性。结果:患者性别、年龄、PS评分、病理类型、吸烟史与ctDNA EGFR突变无明显相关性（P>0.05）。ctDNA EGFR突变组客观缓解率（76.5%）、疾病控制率（100%）均高于野生型组（30.3%，60.6%）（P<0.05）。生存分析结果显示:ctDNA EGFR突变组无进展生存期（12个月）较野生型组长（4个月）（P<0.05）。27例配对检测结果显示:ctDNA与肿瘤组织EGFR突变一致率为66.7%（18/27，Kappa=0.400，P<0.05）。无进展生存期:ctDNA（23个月）/肿瘤组织（12个月）EGFR突变组均长于野生型组（2个月/1个月）（P<0.05）。结论:晚期NSCLC外周血ctDNA EGFR突变患者TKI治疗有效率高，ctDNA与肿瘤组织EGFR突变一致性好，作为肿瘤组织的替代检测标本是可行的。     

肺癌患者外周血白细胞mtDNA HVRⅠ区序列变异研究

目的：分析肺癌患者及健康成人外周血白细胞mtDNA非编码HVRⅠ区序列的突变情况并探讨其意义。方法：应用一步法制备17例肺癌患者和14位健康成人外周血白细胞mtDNA，PCR产物直接测序，对比分析非编码HVRⅠ区序列变异情况。结果：肺癌组和健康成人组中，非编码HVRⅠ区共发现136个变异，碱基平均变异率分别为1．2384％和1．3367％，差异无统计学意义，P=0．30489。肺癌组中碱基平均变异率腺癌（0．9942％）〈鳞癌（1．2021％）〈小细胞癌（1．7544％）。结论：肺癌患者外周血白细胞mtDNA主要碱基变异发生在非编码HVRⅠ区，与健康成人相应区域变异率趋于一致，可能HVRⅠ区的高突变率并不是肿瘤的特异性变化，但小细胞肺癌组碱基平均变异率有增高趋势，可能是其预后差的相关因素。     

非小细胞肺癌患者血浆EGFR突变表达检测及其临床意义

目的：检测非小细胞肺癌患者血浆表皮生长因子受体（ EGFR）基因突变表达情况，探讨其临床意义。方法采用荧光定量PCR法检测90例非小细胞肺癌患者组织及血浆EGFR的基因突变表达情况，分析两者的一致性，并分析血浆EGFR与患者预后的关系。结果非小细胞肺癌患者的血浆与肿瘤组织中EGFR突变表达是一致的，血浆EGFR突变表达与非小细胞肺癌的病理类型、肿瘤大小及淋巴结转移有关，但血浆EGFR突变表达与非小细胞肺癌患者的疾病进展时间、生存时间无关。结论非小细胞肺癌患者血浆EGFR的检测有可能替代肿瘤组织中EGFR的检测，为无法取得肿瘤组织或取得肿瘤组织困难的患者提供一种更快捷、简便的替代检测方法，但血浆EGFR尚不能确立为独立的预后指标。     

非小细胞肺癌组织中P-ACC及COX-2的相关性研究

  目的   探讨非小细胞肺癌组织中乙酰辅酶A羧化酶磷酸化后的产物（P-ACC）与环氧合酶-2（COX-2）的表达及其与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期及病理类型的关系,并研究两者的相关性。   方法   以62例非小细胞肺癌患者的肺癌组织作为研究组,20例因其他它原因行肺叶切除患者的正常肺组织作为对照组。应用免疫组织化学SP法检测肺癌组织及正常肺组织中P-ACC、COX-2的表达情况。   结果   P-ACC、COX-2在非小细胞肺癌和正常肺组织中的阳性表达差异有统计学意义（P < 0.05）。在非小细胞肺癌中,P-ACC的阳性表达与肿瘤大小显著相关（P < 0.05）,而与淋巴结转移、临床分期及病理类型无关;COX-2的阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期及病理类型无关。P-ACC与COX-2的阳性表达之间呈显著负相关（r=-2.37,P=0.032）。   结论   P-ACC在非小细胞肺癌组织中的阳性表达降低;COX-2在非小细胞肺癌组织中阳性高表达,二者呈显著负相关,提示P-ACC阳性表达降低可能激活COX-2阳性表达,可促进非小细胞肺癌的发生、发展及侵袭转移。      

循环肿瘤DNA在非小细胞肺癌中应用的研究进展

非小细胞肺癌（NSCLC）的靶向治疗及免疫治疗依赖于分子分型,但敏感基因及耐药基因的检测受困于组织活检取材困难及有创性等。循环肿瘤DNA（ctDNA）,作为一种无创性的“液体活检”手段,随着检测技术的进步,已显示良好的应用前景。本文将就ctDNA技术在非小细胞肺癌的诊断、靶向药物疗效预测及耐药监测等方面的研究及应用进展作一综述。     

基于组学数据分析的非小细胞肺癌亚型特征识别

目的:探索非小细胞肺癌4种亚型在基因组、转录组层次的特征，实现对肿瘤类型的精确分型，获取能够体现非小细胞肺癌亚型的基因组学特征。方法:利用NMF聚类和生存时间分析，对TCGA数据库中的504个非小细胞肺癌样本的拷贝数变异数据和基因表达数据进行分析，对不同疾病亚型的差异表达基因进行富集分析。结果:所有肺癌患者可根据基因变异信息分为4个类别，它们具有不同的基因组特征，其生存时间曲线具有显著差异，同时发现吸烟是肺癌亚型的一个决定因素。结论:通过检测遗传特征和基因表达特征，有助于对非小细胞肺癌患者进行疾病亚型精准判定。     

NSCLC患者CYP2D6基因多态性与吉非替尼不良反应相关性研究

目的:探索口服吉非替尼片后代谢过程中不良反应发生与CYP2D6基因多态性的关系。方法:收集2016.01-2018.12于新疆医科大学附属肿瘤医院病理确诊的NSCLC患者180例,使用ARMS法行基因检测具有EGFR19del或21L858R敏感突变,并口服吉非替尼,随访过程中根据是否发生不良反应分为肝损组和非肝损组,皮疹组与非皮疹组并收集患者的外周血。应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR)-限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）检测以上患者CYP2D6基因rs1065852位点的基因型。通过χ2检验探究吉非替尼靶向治疗肝损害及皮疹发生的危险因素。结果:非小细胞肺癌患者CYP2D6基因rs1065852位点的基因型、肿瘤分期、基因突变类型与使用吉非替尼发生肝损害相关,CYP2D6基因rs1065852位点的基因型,肿瘤分期与吉非替尼靶向治疗皮疹发生相关,对临床用药有指导意义。结论:口服吉非替尼片的晚期非小细胞肺癌患者,CYP2D6的rs1065852位点基因多态性可预测肝功能及皮疹发生可能性。     

PCR-SSCP法检测非小细胞肺癌中E-cadherin基因突变的研究

目的 探讨E-cadherin基因突变在人非小细胞肺癌中的作用。方法 采用PCR－SSCP方法检测了53例非小细胞肺癌原发灶组织和5例肺部其他良恶性病变组织的E－cadherin基因突变的情况。结果 共有3例发生E-cadherin基因的突变。E-cadherin基因的突变与非小细胞肺癌的淋巴结转移情况有关（P＜0.005)，但与肿瘤的病理类型以及肿瘤的原发灶情况无关（P＞0.05)，而且在非小细胞肺癌与肺部其他病变之间，E-cadherin基因的突变无显著性差异。结论 E－cadherin基因能够较好地预测非小细胞肺癌的淋巴结转移情况。     

非小细胞肺癌患者组织与血清ctDNA突变频谱的一致性及其相关因素分析

目的:探究非小细胞肺癌（NSCLC）患者组织与血清循环肿瘤DNA（ctDNA）突变频谱的一致性及其相关因素分析。方法:选取2019年01月至2019年06月在河北大学附属医院诊断及治疗的NSCLC患者50例，检测所有患者肿瘤组织及ctDNA基因突变情况，同时搜集患者肿瘤相关临床资料，根据基因一致性情况将患者分为一致组与不一致组，使用Logistic回归分析影响一致性的相关因素。结果:肿瘤组织中至少存在一种突变的为96%（48/50），血清中至少存在一种突变的为64%（32/50），组织学与血清ctDNA检测结果一致率为46%（23/50）;一致组年龄显著小于不一致组，组织学分级中低分化人数比例、Ⅳ期人数比例、肿瘤＞3 cm人数比例、骨转移人数比例显著高于不一致组（P＜0.05），多因素Logistic回归分析显示，组织低分化（OR=2.802，P=0.028）、Ⅳ期（OR=8.922，P=0.004）、有骨转移（OR=8.425，P=0.012）是基因突变检测一致性的独立危险因素。结论:NSCLC患者组织与血清ctDNA突变频率一致性受多种因素影响，分化越低，分期越高、伴骨转移的一致性越高。     

非小细胞肺癌的潜在生物标记物:长链非编码RNA

非小细胞肺癌是常见的肺癌类型之一,筛选可用于诊断、治疗和预后判断的生物标志物是近年来非小细胞肺癌研究的热点之一。我们已知,基因和表观遗传学改变是非小细胞肺癌发展的重要因素,近期研究发现,基因组的非蛋白质编码区域可以作为各种RNA的转录模板,统称为非编RNA。包括长链非编码RNA在内的非编码RNA,在多种细胞功能中发挥了重要作用。研究表明,长链非编码RNA的表达异常与肿瘤的发生关系密切,包括非小细胞肺癌。在本篇综述中,我们将总结长链非编码RNA作为非小细胞肺癌潜在生物标志物的最新研究进展。     

VEGFA基因多态性与晚期非小细胞肺癌含铂方案近期疗效的相关性

摘 要：［目的］ 探讨VEGFA rs699947与rs833069位点的单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌含铂方案近期疗效的关系。［方法］ 收集经病理确诊、驱动基因阴性且接受含铂方案化疗的晚期非小细胞肺癌患者95例及其临床资料,采集静脉血标本,提取血液基因组DNA,高通量测序鉴定rs699947和rs833069位点的基因型,分析各基因型与近期疗效之间的相关性。［结果］ 95例晚期非小细胞肺癌患者中25例（26.3%）评估为部分缓解,70例（73.7%）为稳定或进展。近期疗效与性别、年龄、吸烟状态、ECOG评分、病理类型、组织分化程度、临床分期、淋巴结转移、远处转移、化疗方案以及rs833069位点的单核苷酸多态性无关（P＞0.05）,与rs699947位点的单核苷酸多态性相关（P=0.044）。携带CC基因型患者的部分缓解率为37%（17/46）,显著性高于携带AA或AC基因型患者的16.3%（8/49）（OR=0.333,95%CI：0.127~0.874;P=0.022）。［结论］ VEGFA rs699947位点的单核苷酸多态性与驱动基因阴性的晚期非小细胞肺癌患者的近期疗效有关,rs699947 CC基因型可能是对含铂方案敏感的分子标志物。     

术后辅助化疗对Ib期非小细胞肺癌患者无瘤生存的影响

目的:探讨术后辅助化疗对Ib期非小细胞肺癌患者无瘤生存的影响。方法:回顾性队列研究78例行肺癌根治术的Ib期非小细胞肺癌患者。采用Kaplan-Meier法研究术后辅助化疗对患者无瘤生存的影响;以肿瘤分化程度、肿瘤直径、血管侵袭、脏层胸膜侵袭危险因素将患者进行分层分析;采用Logistic回归分析Ib期患者出现复发或转移的影响因素。结果:Ib期非小细胞肺癌患者中行术后辅助化疗组无瘤生存期与观察组比较,差异有统计学意义（P=0.02）;危险因素的分层分析显示:对于肿瘤分化程度低和肿瘤直径>4 cm的Ib期非小细胞肺癌患者,术后辅助化疗组与观察组的无瘤生存期之间均有统计学差异（P<0.05）;Logistic回归分析显示影响肿瘤复发或转移的因素:肿瘤分化程度低（OR=23.983,P=0.005）、血管侵袭（OR=15.411,P=0.027）OR>1,为危险因素;术后辅助化疗（OR=0.040,P=0.007）OR<1,为保护因素。结论:对肿瘤分化程度低或肿瘤直径>4 cm的Ib期非小细胞肺癌患者建议使用术后辅助化疗,术后辅助化疗是Ib期非小细胞肺癌患者生存的保护因素,可降低肿瘤复发或转移的概率。     

KRT81 rs3660变异对肺癌发病风险的影响北大核心CSCD

目的探讨KRT81基因3'UTR rs3660多态与肺癌遗传易感性之间的关系。方法使用Taq ManMGB荧光探针标记法对KRT81基因rs3660遗传变异进行基因分型。用Logistic回归计算rs3660各基因型影响非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)发病风险的OR值及95%CI。结果 KRT81基因rs3660G>C变异影响SCLC发病风险(P=0.048),但与NSCLC发病风险无关(P=0.614)。与rs3660GG基因型携带者相比,至少携带一个C等位基因者患SCLC风险显著降低(OR=0.70,95%CI:0.49~0.99)。吸烟分层分析显示,在不吸烟组中,至少携带一个C等位基因的非吸烟者具有较低的SCLC发病风险(OR=0.60,95%CI:0.36~0.99,P=0.049)。进一步以累计吸烟量来分析,未发现至少携带一个C等位基因的轻度吸烟者(或重度吸烟者)具有较低的SCLC发病风险(OR=0.61,95%CI:0.26~1.43,P=0.254)。结论 KRT81基因rs3660G>C变异影响SCLC发病风险,但与NSCLC发病风险无关。     

左右侧肺癌患者外周血循环肿瘤DNA突变特征分析

目的:探究左右侧肺癌患者外周血循环肿瘤DNA(ctDNA)突变特征及导致治疗响应与预后差异产生的潜在分子机制.方法:本研究对14例肺癌患者的外周血标本ctDNA行高通量测序,并利用生物信息学方法分析左右侧肺癌组间ctDNA突变特征、蛋白质结构与功能及信号调控网络等的变化.结果:发现左侧肺癌组中检出突变种类及多重突变数量...     

原发性非小细胞肺癌中线粒体DNA含量变化的研究

背景与目的已有的研究表明:线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变和拷贝数的改变和肿瘤有着密切联系;大多数实体性肿瘤中mtDNA拷贝数有明显降低。本研究旨在探讨线粒体基因组含量的改变和原发性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的关系。方法通过实时荧光定量PCR,对肺癌及相对应的癌旁肺组织mtDNA的含量进行精确定量(拷贝数/细胞)。结果肺癌组织mtDNA的平均拷贝数/细胞为395±125,而相对应的正常肺组织为733±196,前者明显低于后者(P<0.001)。肺癌mtDNA含量的改变与患者性别、年龄、是否吸烟及肿瘤的病理类型无关(P>0.05)。结论 mtDNA含量的改变与NSCLC的发生发展密切相关,同时也可能影响其治疗和预后。     

全身化疗和支气管动脉灌注联合CIK过继免疫治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的临床研究

背景与目的 中晚期肺癌治疗效果欠佳,CIK过继免疫疗法作为治疗非小细胞肺癌的一种辅助疗法日益受到重视,本研究通过比较支气管动脉灌注化疗、全身化疗和支气管动脉灌注联合CIK细胞过继免疫治疗Ⅲ期非小细胞肺癌,探讨支气管动脉灌注联合CIK细胞过继免疫治疗中晚期非小细胞肺癌的可行性.方法 选取120例Ⅲ期非小细胞肺癌病例,随机分为支气管动脉灌注化疗组、全身化疗组和支气管动脉灌注化疗联合CIK细胞过继免疫治疗组,行2周期治疗后,评价临床疗效和毒副作用.结果 支气管动脉灌注化疗联合CIK细胞治疗组的临床有效率(CR+PR%)高于全身化疗组(66.67%,n=39),差异有统计学意义(χ2=4.721,P=0.03);骨髓抑制毒性和非骨髓抑制毒性发生率低于全身化疗组(P<0.05),差异有统计学意义.单纯支气管动脉灌注化疗组肿瘤进展率(PD%)高于支气管动脉灌注化疗联合CIK组(χ2=4.287,P=0.038),差异有统计学意义.全身化疗组和支气管动脉灌注化疗联合CIK组之间比较肿瘤进展率(PD%)无统计学差异(χ2=0.082,P=0.775).结论 支气管动脉灌注化疗联合CIK过继免疫治疗非小细胞肺癌,在控制肺内原发灶方面疗效优于全身化疗;在控制和预防远处转移方面与全身化疗无差异,是一种较为理想、安全有效的综合性治疗手段,值得推广应用.     

PD-L1单抗对EGFR敏感性突变肺癌细胞PD-L1表达及对增殖的影响

摘 要：［目的］ 探讨PD-L1单抗对EGFR敏感性突变肺癌细胞PD-L1的表达及对增殖的影响。［方法］ 选取2017年5月至2018年8月在我院呼吸内科治疗的非小细胞肺癌患者60例为研究对象,同时选取同期来我院检查的健康人群30例为对照。采集外周静脉血,测定血清标本中游离PD-L1（sPD-L1）蛋白含量。建立肺癌细胞与T细胞共培养体系。［结果］ 肺鳞癌组与肺腺癌组sPD-L1的表达水平明显高于对照组（P<0.001）,而肺鳞癌组与肺腺癌组sPD-L1表达水平无统计学差异（t=2.584,P=0.086）;野生组与突变组sPD-L1表达水平亦无统计学差异（t=2.215,P=0.097）。sPD-L1表达量与患者性别、年龄、分期无相关性（P＞0.05）,而与患者的吸烟史、肿瘤转移相关（P＜0.05）。 EGFR敏感型sPD-L1表达率明显高于EGFR野生型（t=12.365,P<0.001）。加入PD-L1单抗后,EGFR的sPD-L1的表达水平有明显下降趋势,而EGFR野生型与治疗前无统计学差异（t=2.154,P=0.958）。PD-L1单抗使用后,PC9、HCC827等EGFR敏感型细胞株共同体系中T细胞明显增加。［结论］ sPD-1表达与EGFR敏感性无明显相关性,而与患者是否吸烟、肿瘤转移相关。与此同时,EGFR敏感突变肺癌细胞行PD-L1单抗干预后,sPD-L1的表达量明显降低,T细胞增殖明显。