端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌中的表达

目的检测端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌组织中的表达。方法收集我院33例明确诊断为食管癌患者的中心组织及其相应癌旁组织,然后提取总RNA并逆转录成cDNA,适时荧光定量PCR方法检测TRF1、TRF2和POT1基因在这些组织中的表达水平。结果 TRF1mRNA在食管癌中心和癌旁表达所得CT值分别为（1.42±2.31）和（1.02±1.04）,差异有统计学意义（P〈0.05,n=33）;TRF2为（8.53±2.57）和（8.38±1.50）,两者差异无统计学意义（P〉0.05,n=33）;POT1为（4.72±1.47）和（3.80±1.06）,两者差异有统计学意义（P=0.001,n=33）。结论虽然TRF2基因在食管癌中表达没有统计学差异,但TRF1和POT1基因在食管癌组织中表达显著降低,提示TRF1和POT1有可能与食管癌的发生、发展有着密切的关系。     

胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系

目的研究人胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系。方法采用实时定量荧光PCR分析不同胃黏膜细胞POT1 mRNA的表达,采用TRAP-ELISA半定量分析不同细胞端粒酶活性。结果与癌旁正常黏膜相比,晚期胃癌癌组织POT1 mRNA增高,中重度不典型增生胃黏膜与其正常胃黏膜比较其POT1 mRNA表达也明显增高,肠上皮化生胃黏膜及其正常胃黏膜POT1 mRNA表达无明显差异。晚期胃癌及中重度不典型增生胃黏膜上皮中端粒酶活性明显高于肠上皮化生组织和正常胃黏膜上皮,但是胃癌和中重度不典型增生及肠上皮化生组织和正常胃黏膜间端粒酶活性无明显变化。结论尽管胃癌细胞和中重度不典型增生端粒酶活性高于正常和肠上皮化生胃黏膜细胞,但是POT1 mRNA的表达与之无关。     

胃癌和癌旁组织ECM1基因水平的检测及临床意义

目的：检测细胞外基质蛋白1基因在胃癌和癌旁组织中的表达,并分析及其临床意义。方法：基于TagMan-MGB荧光探针技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测胃癌癌旁组织(n=38),胃癌(淋巴结未转移)(n=18)和胃癌(淋巴结转移)(n=20)中ECM 1基因的表达。结果：癌旁组织、淋巴结未转移和淋巴结已转移的胃癌组织ECM1基因的表达均值分别为(6.67±2.29)×108拷贝/g RNA, (7.41±2.65)×108拷贝/gRNA, (5.01±2.22)×109拷贝/g RNA。淋巴结未转移的胃癌组织ECM1基因表达均值高于癌旁组织,但两者差别未达到统计学意义 (P>0.05); 淋巴结已发生转移的胃癌组织ECM1基因表达明显高于癌旁和淋巴结未转移的胃癌组织,差别具统计学意义 (P<0.01)。结论：ECM1基因在转移性胃癌中表达升高,可能与胃癌转移相关。     

端粒重复序列结合因子1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨人端粒重复序列结合因子1（TRF1）在非小细胞肺癌（NSCLC）肺组织中的表达及其与临床、病理的关系。方法采用Envision免疫组织化学染色法检测40例NSCLC患者手术切除后石蜡包埋标本和37例癌旁正常肺组织中TRF1的表达水平,并分析其与NSCLC患者临床、病理指标及生存期的关系。结果NSCLC组织中TRF1蛋白阳性表达率显著高于癌旁正常组织（P〈0.01）;TRF1蛋白在NSCLC组织中的阳性表达水平与患者性别、年龄、是否长期吸烟、肿瘤大小、淋巴结是否转移、病理TNM分期、分化程度、组织学类型和总生存期等方面的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论TRF1在NSCLC组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织,但其表达水平则与NSCLC的组织学类型、性别、年龄、是否长期吸烟、肿瘤大小、淋巴结是否转移、病理TNM分期、分化程度及预后无关。     

胃癌和癌旁组织ECM 1基因水平检测及其临床意义

目的检测细胞外基质蛋白1基因在胃癌和癌旁组织中的表达,并分析及其临床意义。方法基于TagMan-MGB荧光探针技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测胃癌癌旁组织(n=38),胃癌(淋巴结未转移)(n=18)和胃癌(淋巴结转移)(n=20)中ECM1基因的表达。结果癌旁组织、淋巴结未转移和淋巴结已转移的胃癌组织ECM1基因的表达均值分别为(6.67±2.29)×108拷贝/gRNA,(7.41±2.65)×108拷贝/gRNA,(5.01±2.22)×109拷贝/gRNA。淋巴结未转移的胃癌组织ECM1基因表达均值高于癌旁组织,但两者差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结已发生转移的胃癌组织ECM1基因表达明显高于癌旁和淋巴结未转移的胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论ECM1基因在转移性胃癌中表达升高,可能与胃癌转移相关。     

不同年龄供体正常胃粘膜端粒状态分析

目的:探讨不同年龄供体正常胃粘膜端粒长度的变化规律.方法:采用Southern杂交及图像分析技术,检测26例76岁以下不同年龄供体正常胃粘膜端粒限制性片段长度(Telomeric restriction fragment,TRF).结果:正常胃粘膜TRF长度呈年龄递减趋势,60岁以上组TRF长度明显短于0～39岁、40～49岁及50～59岁组(4.1±1.2 vs 6.4±1.8、6.0±1.0、5.5±1.1,P<0.05),正常胃粘膜TRF长度与供体年龄呈明显负相关(r=-0.56,P=0.0028),端粒重复序列平均每年丢失约(41±12)bp碱基对.结论:TRF长度可以作为衡量胃粘膜细胞衰老的一种生物学标志.     

食管癌端粒酶活性的检测

1目的　探讨食管癌端粒酶活性检测的临床意义。 2方法　建立并应用以 PCR技术为基础的端粒重复序列扩增 ,对 36例食管癌及其癌旁组织进行检测。 3结果　 36例食管癌组织中 2 9例端粒酶活性呈阳性 ,阳性检出率为 80 .5 0 % ;癌旁组织中 2例呈阳性 ,阳性检出率为 6 .0 0 % ,两者相比差异具有极显著性 (χ2 =41.30 ,P<0 .0 0 1)。36例食管癌均为鳞状细胞癌 ,其中 17例伴随淋巴结转移的标本中端粒酶活性均呈阳性 ,而在 19例未伴随淋巴结转移的病人中仅有 12例检测出端粒酶的活性 ,其活性检出率为 6 3.15 % ,两者相比差异具有显著意义 (P=0 .0 0 6 )。 4结论　端粒酶活性检测可作为食管癌诊断的指标之一 ,同时对判断食管癌的预后具有重要参考价值     

BRMS1 mRNA在直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)mRNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR法检测80例直肠癌组织及其40例癌旁正常黏膜组织中BRMS1 mRNA的表达。结果 BRMS1 mRNA在直肠癌中低表达(0.467±0.045),在癌旁组织中呈高表达(0.991±0.054),两者相比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达水平与直肠癌患者年龄、性别无关(P>0.05),与直肠癌患者的组织分化、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05)。结论BRMS1 mRNA在直肠癌中低表达,且其低表达可能与直肠癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移有关。     

食管癌及癌旁组织端粒酶活性的原位检测

目的 :研究端粒酶活性在食管癌、癌旁组织、正常粘膜中的定位表达情况。方法 :应用原位杂交技术 ,检测端粒酶的mRNA。结果 :食管癌组织中端粒酶阳性表达率为 (2 8/ 30 ) ,明显高于癌旁组织 (4/ 30 )和正常粘膜(0 / 30 )。结论 :原位杂交检测是一种特异、灵敏、简单、准确的端粒酶检测方法 ,端粒酶活性的原位表达是食管癌的一项有用的诊断指标。     

淋巴细胞中pot1 mrna表达?端粒酶活性与2型糖尿病发生发展的关系

目的:研究淋巴细胞中端粒保护蛋白(POT1)的表达、端粒酶活性与2型糖尿病发生发展的关系。方法:以2型糖尿病患者162例为实验组,以健康体检者162例为对照组,RT-PCR检测POT1mRNA的表达;TRAP-ELISA分析端粒酶活性。结果:实验组POT1 mRNA的表达和端粒酶活性均明显高于对照组。其中血糖控制尚可组和差组分别与对照组比较,POT1 mRNA表达和端粒酶活性均明显增高;按糖尿病性视网膜病变分期中各组POT1mRNA表达和端粒酶活性与对照组比较存在显著性差异;且病程5～10年组、10年以上组与5年以下组相比,POT1mRNA表达和端粒酶活性也存在显著性差异。结论:2型糖尿病淋巴细胞中POT1mRNA的表达和端粒酶活性均明显增高,且与病情发展呈正相关。POT1和端粒酶的表达变化作为预后的评价依据有重要的临床意义。     

端粒重复序列结合因子在肾脏肿瘤中的表达水平

目的:研究TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤及相应癌旁组织中的表达水平.方法:定量分析肾组织中TRF1蛋白的表达水平,应用经倍比稀释的TRF133-277纯化蛋白作为定量标准,建立了以抗TRF133-277单抗作定量Wes-tern-blot的方法,并以该方法检测TRF1蛋白在组织中的表达水平.结果:32例肾肿瘤样本均不同程度的表达TRF1蛋白质,均值为2.428±1.352 μg/μl,癌旁自身对照组织TRF1的表达水平为3.611±1.922 μg/μl(t=5.776,P<0.001).肿瘤组织内TRF133-277表达水平较相应癌旁组织显著降低,并与肿瘤的恶性程度相关,差异具有显著性意义(P<0.01).结论:TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤中的表达明显减低,并与肿瘤恶性程度呈负相关.     

端粒缩短在鼻咽癌发病作用中的研究

目的探讨端粒缩短在鼻咽癌发病中的作用。方法采用Southern 杂交测定了42例鼻咽癌组织及对照组中的平均端粒长度(Mean telomere lengths, MTL)。结果在鼻咽癌组织中,MTL为(4.5±2.3) kb,明显比癌旁组织(14.6±2.8) kb和慢性鼻咽炎组(15.8±3.1) kb缩短。结论端粒长度改变与包括鼻咽癌在内的人体恶性肿瘤的发病可能有密切关系。     

辛伐他汀对颅内动脉瘤大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶及端粒重复序列结合因子2基因表达的影响

目的 探讨辛伐他汀对颅内动脉瘤(IA)大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶(TERT)和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因表达的影响.方法 将36只SD大鼠分为对照组、模型组和辛伐他汀组,每组12只.对模型组及辛伐他丁组的大鼠切除双侧卵巢并结扎左侧颈总动脉及双侧肾动脉后支以构建IA模型,对照组仅暴露相应组织及血管后缝合.建模后模型组和辛伐他汀组分别给予生理盐水及辛伐他汀灌胃.于建模后4个月,测定各组大鼠外周血白细胞端粒相对长度、TERT和TRF2 mRNA的相对表达量.结果 建模后4个月,模型组和辛伐他汀组各有8只大鼠形成IA,对照组无大鼠形成IA;对照组、辛伐他汀组和模型组大鼠的端粒相对长度依次缩短(P<0.05),而对照组、模型组和辛伐他汀组TRF2 mRNA相对表达量依次升高(P<0.05);模型组和辛伐他汀组的TERT mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05),但两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IA大鼠可能由于端粒酶活性降低而发生端粒长度缩短,辛伐他汀可通过促进TRF2的表达而发挥保护端粒作用.     

人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究

目的:研究人端粒结合因子1(telomere repeat binding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达.方法:应用分子克隆技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列,并克隆入pEGFP-C2真核表达载体,表达绿色荧光(GFP)融合蛋白;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性Hela细胞和端粒酶阴性WI38-2RA细胞,Western Blot验证目的蛋白分子量,荧光显微镜观察TRF1在间期细胞和染色体的定位;利用药物阻断HeLa细胞于不同周期,流式细胞仪检测细胞周期,半定量Western Blot检测TRF1在不同细胞周期中的表达.结果:TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为1.3 kb和0.9 kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为80 kD和60 kD.TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达,在染色体则表达于染色体未端,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML)共定位,在端粒阳性细胞中则没有共定位.TRF1在HeLa细胞中以M期表达量最高,G1/S表达最低,M期表达量是G1/S期的3.9倍(t=12.92,P<0.01).结论:TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式,在HeLa细胞中TRF1呈周期性表达.     

大肠癌组织端粒酶活性检测

为研究大肠癌组织中端粒酶活性的表达情况 ,探讨其在大肠癌预防、诊断、治疗方面的临床价值。采用端粒重复扩增法 (TRAP)检测 4 0例大肠癌组织及其中 10例癌旁正常黏膜组织的端粒酶活性。发现 :4 0例大肠癌组织中 ,34例端粒酶活性阳性表达 ,阳性率为 85% ,10例癌旁正常黏膜组织端粒酶活性表达均为阴性。 2组阳性率比较差异有显著性 (P <0 .0 5)。端粒酶活性与大肠癌部位、细胞分化程度、Dukes分期及是否伴有淋巴结转移无关 (P >0 .0 5)。提示 :端粒酶普遍存在于大肠癌组织中 ,可作为大肠癌的基因标志物。检测大肠病变组织端粒酶活性有可能对大肠癌的早期发现、早期诊断和早期治疗有一定作用     

食管细胞系和癌组织中分化抑制因子Id-1 mRNA的表达

目的:探讨分化抑制因子Id-1基因在食管癌组织和食管癌细胞系中的表达状况.方法:采用RT-PCR方法检测食管癌细胞系(EC109、EC1、EC18)、食管永生化上皮细胞系(NECA6-E6E7和NECA6-E6E7-hTERT)及20例食管癌及其配对癌旁正常组织中Id-1 mRNA基因的表达状况.结果:EC109、EC1、EC18、NECA6-E6E7和NECA6-E6E7-hTERT均出现Id-1 mRNA的表达.正常食管上皮中未见其表达,癌旁组织中Id-1 mRNA阳性表达率为35%(7/20),癌组织中为65%(13/20),有升高趋势,但差异无统计学意义(x2=3.6,P＞0.05).结论:Id-1基因可能参与了食管癌的癌变过程.     

肺癌组织端粒酶活性测定

①目的　探讨端粒酶作为肺癌诊断标记物的可行性及临床意义。②方法　用TRAP法检测 2 9例肺癌组织、2 7例癌旁组织和 35例正常组织标本中端粒酶活性表达。③结果　 2 9例肺癌组织中 2 1例 (72 .4 % )端粒酶活性表达阳性 ,2 7例癌旁组织中 6例 (2 2 .2 % )端粒酶活性表达阳性 ,35例正常组织均不表达端粒酶活性。癌组织、癌旁组织与正常组织标本端粒酶活性比较有显著差异 (χ2 =34.0 13、3.937,P <0 .0 1、0 .0 5 )。④结论　端粒酶表达与肿瘤发生有关 ,其癌旁组织中端粒酶活性有可能成为判定肿瘤复发和预后的指标。     

TIMP-1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在食管鳞状细胞癌及其癌旁正常组织中的表达及与临床病理因素间的关系。方法:100例新鲜离体手术切除食管癌标本,每例分别各取癌组织及对应癌旁组织1份,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测TIMP-1mRNA在癌及癌旁正常组织中的表达;采用Western Blot法检测TIMP-1蛋白在癌及癌旁正常组织中的表达。结果:TIMP-1mRNA在癌及癌旁正常组织中的表达分别为0.736 4±0.082 9和0.516 0±0.056 0,差异有统计学意义(t=2.203,P=0.029);TIMP-1mRNA在T1+T2期及T3+T4期食管癌组织中的表达分别为0.536 6±0.097 9和0.695 0±0.075 4,差异有统计学意义(t=2.006,P=0.043);TIMP-1mRNA在高、中、低分化食管癌组织中的表达分别为0.396 6±0.074 3,0.907 2±0.128 1和0.548 5±0.089 8,差异有统计学意义(F=3.520,P=0.033);TIMP-1mRNA在有无淋巴结转移、不同大体病理类型、不同性别及不同年龄食管癌间比较,差异均无统计学意义。随机选取的5例标本的Western Blot的检测结果与RT-PCR结果一致,肿瘤组织内的表达高于癌旁正常组织中的表达。结论:TIMP-1在食管鳞状细胞癌浸润生长方面可能发挥了促进作用,与食管癌分化程度可能有关,但与食管鳞状细胞癌淋巴结转移可能无关。     

XRCC1基因在食管癌组织、癌旁组织中的蛋白表达与临床因素的相关性研究

目的:探讨DNA修复基因XRCC1在人食管癌组织、癌旁组织中的蛋白表达及其临床意义。方法:应用免疫印迹技术对66例食管癌患者的癌、癌旁组织中XRCC1的蛋白表达水平进行检测和比较。结果:66例食管癌患者XRCC1在癌组织的蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05);淋巴结转移阳性患者组XRCC1在癌组织与癌旁组织的表达差异程度高于淋巴结转移阴性患者组(P<0.05);不同临床分期、病理类型、鳞癌中不同分化程度、族别病例组之间XRCC1在食管癌和癌旁表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:XRCC1的蛋白表达在癌组织和癌旁组织表达差异程度与食管癌发生及淋巴结转移有关联。     

人端粒重复序列结合因子在急性白血病细胞中的表达及与端粒酶活性的关系

目的:研究人端粒重复序列结合因子(TRF1)在30例急性白血病细胞中的表达,了解TRF1表达与急性白血病分型的关系,以及与端粒酶活性的关系.方法:用荧光定量RT-PCR定量检测30例急性白血病细胞中TRF1 mRNA表达情况,同时检测hTERT mRNA的表达,并分析两者之间的相关性.结果:TRF1在急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)细胞中的表达0.0126(0.0127～0.0546)明显低于正常人骨髓单个核细胞中的表达0.0457(0.00839～0.262)(P<0.001),但在急性淋巴细胞性白血病(ALL)细胞中的表达0.0745(1.92×10-6～0.193)与正常人骨髓单个核细胞比较差异无显著性,且在ANLL细胞中的表达明显低于ALL细胞中的表达(P=0.001).TRF1和hTERT在急性白血病细胞和正常人骨髓单个核细胞中的表达无显著相关性(r=-0.173,P=0.207).结论:TRF1 mRNA在ANLL细胞中表达明显降低,而在ALL细胞中表达无显著改变,提示ANLL细胞中TRF1可能通过调控端粒长度对端粒酶起间接负调控作用.