miR-520a在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨miR-520a在人食管鳞癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测59例食管鳞癌组织和45 例癌旁组织中miR-520a的表达,分析其与临床病理特征之间的关系。结果:miR-520a在食管鳞癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者淋巴转移明显相关（P＜0.05）。结论:miR-520a在食管鳞癌中低表达,提示其可能发挥抑癌基因的功能。     

MicroRNA-181在食管癌组织中的表达

目的：探讨 microRNA-181（miR-181）在食管癌组织及细胞系中的表达及其与食管癌临床病理参数的关系。方法 RT-PCR 检测56对食管鳞癌、癌旁正常组织及食管癌细胞系 KYSE450、EC109中 miR-181的表达,并分析其表达水平与临床病理参数及生存的关系。结果与癌旁正常组织比较,食管鳞癌组织中miR-181表达明显升高（P <0.05）,食管鳞癌细胞系 KYSE450、EC109中 miR-181表达水平与正常永生化食管上皮细胞 Het-1a 中表达水平比较差异有统计学意义（P <0.05）。食管鳞癌组织中 miR-181的表达量与患者的肿瘤大小、分化程度及转移情况有关。结论 miR-181在食管癌组织及食管癌细胞系中高表达,并与肿瘤大小、分化程度及转移情况相关,提示 miR-181能够作为食管癌治疗的新靶点。     

Wnt/β-catenin信号通路激活诱导食管癌Eca-109细胞miRNA表达谱的研究

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞癌Eca-109细胞系miRNA表达的影响,为靶向该通路相关miRNA治疗提供实验依据。方法:食管癌Eca-109细胞分别以培养基终浓度10ng/ml、20ng/mlWNT3a处理48小时,细胞免疫荧光、Western-blot、RT-PCR检测β-catenin表达水平;芯片检测WNT3a处理组和对照组miRNA表达谱;qRT-PCR验证miRNAs表达水平。结果:WNT3a可上调食管癌细胞β-cate-nin mRNA和蛋白水平,增加其细胞核内分布;芯片检测经qRT-PCR验证,WNT3a处理后食管癌Eca-109细胞相对于未处理组miR表达改变,其中miR-21(3.87倍,P=0.002)、miR-638(2.90倍,P=0.016)显著升高;miR-107(0.18倍,P=0.003)、miR-99b(0.33倍,P=0.019)明显降低,差异均具有统计学意义。结论:Wnt/β-catenin信号通路激活影响食管癌Eca-109细胞miRNAs表达,提示Wnt/β-catenin信号通路的功能也可能通过调控相关miRNA表达参与实现。     

miR-658和miR-492的差异表达与宫颈鳞状细胞癌盆腔淋巴结转移的关系

目的 寻找宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移相关的microRNAs。方法 采用Affymetrix miRNA 4.0 芯片筛查宫颈鳞癌淋巴结转移组（n=8）和未转移组患者（n=16）癌组织中差异表达的microRNAs;并选择表达差异较大的2种microRNAs,采用实时定量RT-PCR法进行验证。结果 miRNA芯片筛查出两组间有5个microRNA存在差异表达,分别为miR-5585-3p、miR-6735-5p、miR-8073、miR-658和miR-492。且淋巴结转移组均为表达上调,其中以miR-658和miR-492的上调倍数最大,分别为4.24和5.43。实时定量RT-PCR检测miR-658和miR-492组间差异与miRNA芯片筛查结果基本一致。结 论 miR-658和miR-492表达上调可能与宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移有关。     

上调miR-181a和miR-181b表达对HeLa细胞生物学特性的影响

目的：探讨miR-181a和miR-181b表达改变对HeLa细胞生物学特性的影响。方法：收集18例宫颈癌手术标本及18例正常宫颈组织标本,提取总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181a和miR-181b的表达情况。选取人宫颈癌细胞系HeLa细胞为研究对象,转染miR-181a和miR-181b成熟体。应用实时定量PCR技术检测转染后HeLa细胞中miR-181a和miR-181b的表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化情况;CCK-8实验及细胞生长曲线检测细胞增殖能力。结果：miR-181a和miR-181b在宫颈癌组织中低表达。转染microRNA成熟体使细胞中miR-181a和miR-181b表达增高;HeLa细胞凋亡增加,细胞增殖能力下降,周期阻滞。结论：上调miR-181a和miR-181b的表达能够促进HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,导致细胞G0／G1期阻滞。miR-181a和miR-181b可能为宫颈癌临床靶向治疗的靶点选择和药物开发提供理论基础。     

黄曲霉毒素B1诱导的恶性转化肝细胞miRNA表达谱的变化

目的：检测黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）诱导的恶性转化肝L02细胞（L02T）的miRNA表达谱,寻找差异表达的miRNA。方法：以含有AFB1的培养液多次间歇性染毒L02细胞获得转化细胞L02T,通过miRNA芯片技术检测和分析对照L02和转化L02T细胞的miRNA表达谱;用实时荧光定量PCR方法对芯片结果加以验证;采用TargetScan软件预测miRNA可能调控的靶基因。结果：获得2组细胞856个miRNA的表达谱,在25个表达差异显著的miRNA中,15个表达上调,10个表达下调;用定量RT-PCR对芯片结果中表达差异的miR-320a、miR-638和miR-98进行验证,并对其中上调显著的miR-638进行生物信息学分析,预测到4个与肝癌相关的潜在靶基因。结论：在AFB1诱导的恶性转化肝L02细胞中筛查出25个表达差异显著的miRNA,差异表达的miRNA可能在细胞恶性转化过程中起重要作用。     

CRNDE和miR-181a在结直肠癌中的表达及临床意义

摘 要：［目的］ 研究结直肠癌癌组织中长链非编码RNA（long-noncoding RNA,LncRNA）CRNDE及微小RNA（microRNA,miR）-181a表达及其临床意义。［方法］ 应用荧光实时定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测89例结直肠癌癌组织和癌旁组织中CRNDE及miR-181a的表达,分析组间CRNDE及miR-181a表达差异及两者表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析比较不同水平CRNDE、miR-181a患者3年总体生存率（OS）的差异。［结果］ 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中CRNDE表达水平明显升高,miR-181a表达水平明显降低（P均<0.05）。结直肠癌癌组织中CRNDE、miR-181a表达与肿瘤分期、肿瘤分化有关（P均<0.05）,与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置及淋巴结转移无关（P均>0.05）。癌组织中CRNDE与miR-181a表达呈显著负相关（r=-0.558,P=0.008）。Kaplan-Meier分析表明癌组织中CRNDE高表达患者3年OS明显低于CRNDE低表达者（P<0.05）,而高表达miR-181a与低表达miR-181a患者3年OS无明显差异（P>0.05）。［结论］ 结直肠癌组织中CRNDE表达升高,而miR-181a表达降低,两者均参与结直肠癌的发生发展过程,有可能成为新的肿瘤标志物。     

miR-181家族的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系

目的：探讨miR-181家族，miR-181a、miR-181b和miR-181c，在不同恶性程度的人脑胶质瘤中的表达。方法：收集病理确诊的15例不同恶性程度胶质瘤以及5例正常脑组织手术标本，提取总微小RNA，应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181a、miR-181b和miR-181c基因在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达，并进一步比较miR-181家族表达情况与不同级别胶质瘤的相关性。结果：miR-181a和miR-181b，在人脑不同级别胶质瘤中表达均明显下降。miR—18Ia表达水平呈随胶质瘤级别增高而下降趋势。miR-181b在胶质瘤级别HI级以上表达水平趋于稳定，Ⅲ级和Ⅳ级组织中的表达无明显差异。miR-181c表达量在正常脑组织与胶质瘤Ⅱ级和Ⅲ级组织间差异不显著．在胶质瘤Ⅳ级组织miR—181c表达水平降低。结论：miR-181a、miR-181b和miR-181c在胶质瘤组织中呈不同程度低表达，miR-181a表达与胶质瘤级别呈负相关，     

miR-146a对食管鳞癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的探讨miR-146a对食管鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期等生物学行为的影响及其机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-146a在食管鳞癌细胞株Eca109、KYSE140和KYSE150中的表达。将miR-146a模拟物转染Eca109细胞, 上调miR-146a的表达, 采用细胞增殖实验检测细胞的增殖能力, Transwell实验检测细胞的侵袭能力, 划痕实验检测细胞的迁移能力, 流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期。运用相关生物信息学技术预测miR-146a的靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-146a与靶基因白介素1受体相关激酶1(IRAK1)3′端非翻译区(3′UTR)的结合情况, RT-qPCR技术和Western blot法分别检测靶基因mRNA和蛋白的表达。结果食管鳞癌Eca109、KYSE140和KYSE150细胞中miR-146a的相对表达量分别为0.36±0.05、0.16±0.06和0.09±0.02, 均低于食管正常上皮细胞HEEC(1.00±0.05, 均P<0.01)。miR-146a模拟物转染E...     

循环miR-29a和miR-150与非小细胞肺癌胸部放射治疗剂量的相关性

目的:探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）胸部放射治疗剂量与循环血miR-29a和miR-150的相关性。方法:收集56例2014年1月至2015年12月在我院接受放射治疗的诊断为NSCLC的患者,其中5例NSCLC患者在0、20、40、60 Gy辐照后用miRNA芯片检测循环血miRNA表达差异;51例NSCLC患者在0、20、40 Gy辐照后用实时定量PCR验证循环血中候选miRNA表达;医用直线加速器（2 Gy/天,连续处理3天）辐照A549和MRC5细胞,实时定量PCR检测细胞内和细胞上清外泌体miR-29a和miR-150的表达。结果:miRNA芯片筛选出随着患者放疗剂量的增加而差异表达的10个miRNA（miR-29a、miR-150、miR-142、miR-342、miR-125b、miR-101、miR-425、miR-338、miR-126、miR-15b）。验证发现验证组患者0、20、40 Gy辐照后循环血miR-29a和miR-150表达具有统计学差异（P<0.05）。验证组循环miR-29a和miR-150分别与V5、V20、MLD、Mean Eso呈负相关。A549及MRC5细胞辐照3天后细胞内miR-29a和miR-150表达显著增加（P<0.05）,细胞上清外泌体中表达显著下降（P<0.05）。结论:循环血miR-29a和miR-150与NSCLC胸部放射治疗剂量相关。     

新疆哈萨克族食管癌与正常组织间差异表达miRNA的筛查及验证

目的：筛查并验证新疆哈萨克族食管癌组织与正常组织间差异表达的miRNAs,并初步探讨这些miRNAs在食管癌发生演进中的作用。方法：采用miRNA表达谱基因芯片分析系统筛查哈萨克族食管癌组织及远端正常食管组织中差异表达的miRNAs,实时荧光定量PCR检测验证差异显著miRNA的表达情况,分析miRNAs表达与食管癌临床病理指标的关系。结果：与远端正常组织相比较,miR-21、miR-132、miR-130b在哈萨克族食管癌组织中表达上调（P < 0.05）,miR-141、miR-143、miR-133b、miR-195表达下调（P < 0.05）;miR-140表达变化无统计学意义;miR-21、miR-132、miR-143与食管癌临床分期有关,miR-21、miR-132、miR-143、miR-133b与淋巴结转移有关,miR-21、miR-141、miR-143、miR-133b与食管癌组织分化程度有关（P < 0.05）。结论：本研究采用基因芯片筛查出新疆哈萨克族食管癌组织与远端正常组织中差异表达的miRNAs,实时荧光定量PCR结果与基因芯片检测结果基本一致,miRNA表达的变化与新疆哈萨克族食管癌的发生发展有关。     

脾酪氨酸激酶与食管鳞状细胞癌的关系

目的：探讨脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测30例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及30例相对正常食管黏膜组织中Syk mRNA的表达;应用免疫组化技术检测39例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及38例相对正常食管黏膜组织中Syk蛋白的表达并分析其与临床病理学指标间的关系。结果：食管鳞癌组织中Syk mRNA表达高于癌旁组织和正常食管黏膜组织,但差异无统计学意义（P〉0.05）。Syk蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率（34/39,87.2%）明显高于食管鳞癌癌旁组织（18/27,66.7%）和正常食管黏膜组织（26/38,68.4%）（P〈0.05）。Syk蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期均无明显相关关系（P均〉0.05）。结论：Syk mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中表达增高,但Syk蛋白表达与临床病理学指标无相关关系。     

胃癌石蜡包埋组织的miRNA实时荧光定量PCR表达

目的：研究miRNA在胃癌石蜡包埋组织和新鲜组织的表达。方法：应用实时荧光定量PCR检测6例石蜡包埋胃癌组织及其正常胃黏膜组织、新鲜胃癌组织及其正常黏膜组织的miRNA表达（let-7a,miR-21,miR-155）,以U-6为内参对照。结果：胃癌石蜡包埋组织与胃癌新鲜组织中miRNA表达呈平行性高表达。结论：可以利用石蜡组织进行miRNA相关指标表达研究。     

NEK5在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:本研究检测了NEK5在人宫颈鳞癌组织中的表达水平,分析其表达量变化对于临床病理发展的影响,旨在研究NEK5蛋白作为潜在的生物标志物用于预测宫颈鳞癌患者癌转移和预后的价值。方法:本研究收集了150对宫颈鳞癌及癌旁正常组织,制成组织芯片,运用免疫组化技术检测NEK5蛋白在组织中的表达水平。为进一步确认NEK5 mRNA在宫颈鳞癌病理发生发展中的表达变化,我们收集了140例新鲜冻存宫颈鳞癌及宫颈癌前病变组织,包括35例正常宫颈鳞状上皮组织,35例宫颈上皮内瘤变CIN Ⅰ 级组织,35例CIN Ⅱ-Ⅲ级组织及35例宫颈鳞癌组织,运用荧光定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）技术检测NEK5 mRNA的表达水平,分析其表达量的临床病理学意义。结果:相比癌旁正常组织,NEK5蛋白在宫颈鳞癌组织中表达量显著上调（P<0.001）;NEK5蛋白表达上调与宫颈鳞癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移与否均具有显著相关性（P<0.05）;COX多因素回归分析发现,NEK5蛋白表达水平、分化程度、浸润深度和淋巴结转移都是宫颈鳞癌预后的独立因素。qRT-PCR结果显示,NEK5 mRNA在正常宫颈鳞状上皮组织、上皮内瘤变CIN Ⅰ 级组织、CIN Ⅱ-Ⅲ级组织及宫颈鳞癌组织中的表达量依次增高,相比正常组织均具有统计学差异（P<0.05）。结论:我们的研究结果证实,在宫颈癌病理发生发展中,NEK5表达水平异常上调,提示其可作为宫颈鳞癌诊断的生物标志物。     

CNTN-1基因在食管鳞癌中的表达

目的研究CNTN-1基因在人食管鳞癌中的mRNA表达及其与肿瘤发生的关系。方法采用SYBR Green实时定量PCR技术和免疫组织化学技术检测20例正常食管上皮组织和60例食管鳞癌及癌旁组织中的CNTN-1基因mRNA水平。结果与正常食管上皮组织和癌旁组织相比,CNTN-1基因在食管鳞癌组织中mRNA水平较正常食管上皮组织显著上调6.7倍,较癌旁组织上调2.3倍。免疫组织化学的结果也表明CNTN-1基因在食管鳞癌组织中的mRNA表达要高于正常食管上皮组织和癌旁组织。结论CNTN-1基因在人食管鳞癌中较正常食管上皮组织和癌旁组织mRNA表达显著上调。CNTN-1基因的表达与食管鳞癌的发生可能有一定关系。     

血清MicroRNA-320c表达对食管鳞癌的诊断价值及临床意义

目的: 探讨microRNA-320c (miR-320c)与食管鳞癌发生发展的关系,评价其作为食管鳞癌标志物的诊断价值。方法: 采用实时定量RT-PCR技术检测食管鳞癌患者和对照组血清中miR-320c的表达水平。结合研究对象危险因素调查资料与临床病历资料,应用协方差分析,探讨血清miR-320c在食管癌患者与对照组之间的差异表达及其与食管鳞癌患者临床特征的关系。应用二元logistic回归模型及ROC曲线进行多变量（多项测量指标）观察值的ROC曲线分析,评估其诊断效能。 结果: 食管鳞癌患者血清中miR-320c的表达量高于对照组(P=0.008);不同肿瘤TNM分期患者之间血清miR-320c差异表达无统计学意义(P=0.793);不同肿瘤分化程度患者之间血清miR-320c差异表达无统计学意义(P=0.864);ROC曲线下面积AUC为0.856（95%CI：0.799～0.912）。当临界值取0.642时,灵敏度和特异度分别为71.9%和87.2%。结论: miRNA-320c在食管鳞癌患者血清中高表达,可能成为食管鳞癌辅助诊断的潜在生物标志物。     

miR-203基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态的研究

[摘要] 目的：检测食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中miR-203基因的表达及其甲基化状态,探讨miR-203基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法：分别应用实时定量RT-PCR（Real-Time RT-PCR, qRT-PCR）以及甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR, MSP）的方法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-dC）处理前后的食管癌细胞系（TE1、TE13、YES-2、EC109、T.TN）以及食管鳞癌组织及相应癌旁正常组织中miR-203基因的表达和甲基化状态。结果：未经5-aza-dC处理的五种食管癌细胞系中miR-203基因的表达均相对较低,经5-aza-dC处理后,五种食管癌细胞系中miR-203基因的表达均增高。五种食管癌细胞系在5-aza-dC处理前表现为miR-203基因高甲基化状态,应用5-aza-dC处理后,YES-2细胞系中miR-203基因甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余四种细胞系中miR-203基因均表现为非甲基化状态。miR-203基因在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（P＜0.05）。食管鳞癌组织中miR-203基因的启动子区甲基化率为62.7%（52/83）,显著高于癌旁正常组织（7.22%, 6/83） （P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（P＜0.05）。发生miR-203基因甲基化的食管鳞癌组织中miR-203基因的表达显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织（P＜0.05）。结论：miR-203基因在食管鳞癌中的异常低表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。     

胃癌全基因组蛋白H3K27三甲基化水平的研究

 目的 研究胃癌肿瘤细胞全基因组蛋白H3K27的三甲基化水平。 方法 收集我科2007年10月～2008年1月间8例胃癌患者肿瘤组织和正常胃黏膜组织，采用染色质免疫沉淀联合芯片技术（ChIP-chip）在全基因组范围内对两种组织细胞的组蛋白H3K27进行高通量的检测。随后采用染色质免疫沉淀 实时定量聚合酶链反应（ChIP-qPCR）验证芯片结果，定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测H3K27显著差异基因的mRNA表达水平。用统计软件进行基因筛选。 结果 两种组织细胞组蛋白H3K27三甲基化水平对比，筛选出234个基因存在H3K27显著差异，肿瘤细胞中有71个基因显示有H3K27三甲基化程度增高,161个基因H3K27甲基化程度降低；ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片检测结果一致。 结论 和正常胃黏膜组织细胞相比，胃癌肿瘤细胞多个基因组蛋白H3K27三甲基化存在显著改变。ChIP-chip检测技术有利于进一步揭示胃癌肿瘤发生的分子机制，发现新的基因治疗靶点。