多黏菌素类抗生素的研发沿革与现状

多黏菌素类抗生素近年来被广泛用于治疗多重耐药性革兰阴性菌感染.然而,由于其在过去的几十年中曾经被弃用,导致人们对其认知存在断层.本文对多黏菌素类抗生素的发现、命名和结构等进行了系统的梳理,通过对目前不同国家、地区临床应用的多黏菌素B和黏菌素(多黏菌素E)制剂的效价定义、制剂特点、临床推荐剂量、国际标准品量值等的现状和差...     

比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价

研究比浊法测定硫酸多黏菌素E效价的影响因素和规律，建立了硫酸多黏菌素E的比浊法快速测定方法，检测时间由杯碟法的20h缩短到4h。当硫酸多黏菌素E的效价为30～100u／ml时，检测菌液接种浓度为5％，培养时间为4h，吸光度对数值与抗生素效价具有良好的线性关系。本法重现性好，相对误差小于5％。     

多黏菌素E临床应用的文献计量分析

目的从文献计量学角度分析多黏菌素E临床用药的现状。方法检索Pub Med、Web of Science、中国知网、万方数据库。用Endnote软件对纳入文献的时间、国家、文献类型、所用药物、期刊等进行分析。结果共纳入文献400篇,其中英文375篇,中文25篇。第1篇发表于1961年,随后发表数量程上升趋势。文献类型以体外研究为主(227篇,占56.75%)。联合应用中以多黏菌素E联合碳青霉烯类、利福平、替加环素的研究报道居多。结论由于多药耐药的革兰氏阴性菌频繁出现,及多黏菌素E严重肾毒性和神经毒性的发生,联合用药逐渐得到国内外的重视,其中以多黏菌素E联合碳青霉烯类抗菌药物的体外研究为主,但动物体内协同抗菌活性研究和临床研究证据不足。     

多黏菌素E肾毒性机制研究进展

近年来，院内多重耐药革兰阴性菌感染形势日趋严峻，老药多黏菌素E(colistin)重新成为临床选择。对于耐药菌感染增加colistin剂量能够获得更好疗效，但具有增加肾脏的毒性风险。本文就colistin的肾毒性作用机制研究进行综述，包括其对肾的直接毒性作用、激活经线粒体、死亡受体和内质网的细胞凋亡通路，以及抑制自噬对肾损伤的保护作用等；同时，本文还归纳了对于colistin诱导的肾损伤具有潜在的保护作用的药物，旨在为临床合理应用colistin降低其肾毒性提供相关数据支持。     

多黏菌素吸入治疗肺炎的临床研究进展

研究表明多黏菌素雾化吸入治疗肺炎的靶向性好,疗效显著,肾毒性小,多个国内外指南将其作为多重耐药革兰阴性菌(MDR-GNB)所致肺炎的重要治疗方法之一.从目前文献来看,这一治疗方式的研究数据主要来源于多黏菌素E甲磺酸钠(CMS)的临床实践,而硫酸多黏菌素B(PMBS)由于应用地区相对局限导致其相关研究较少.最新研究指出P...     

正交试验法优化硫酸多黏菌素E脂质体的处方

目的 采用正交设计法筛选硫酸多黏菌素E脂质体的最优处方，建立透析法作为测定脂质体包封率的方法。方法 逆相蒸发制备脂质体，紫外分光光度法测定硫酸多黏菌素E含量，正交设计法优化硫酸多黏菌素E脂质体处方。结果 采用正交设计法筛选出的脂质体粒径均匀、外观较好，包封率可达50％。结论 采用正交设计法可以方便的筛选出硫酸多黏菌素E脂质体的最优处方。采用透析法测定硫酸多黏菌素E脂质体的包封率准确性高、重现性好、简便易行。     

复合诱变选育多黏菌素E高产菌株

以多黏芽胞杆菌（Bacillus polymyxa）090918为出发菌株,经60-Co-r射线照射（剂量为22Gy）、甲磺酸乙酯（EMS）诱变处理、多粘菌素E耐受等处理,得到一株多粘菌素E突变株120116,其摇瓶发酵效价较出发菌株提高26％。     

硫酸多黏菌素E水溶液的表面张力和泡沫性能的研究

探讨泡沫分离技术有效应用于生物分离过程,指出被分离的生物表面活性物质在体系中的性能研究的重要性。本文以硫酸多黏菌素E水溶液为体系,研究硫酸多黏菌素E浓度、杂蛋白、无机离子、pH值和温度对硫酸多黏菌素E溶液表面张力和泡沫性能的影响,为硫酸多黏菌素E实现泡沫分离提供依据。     

多黏菌素E注射制剂及其临床应用

目的:对多黏菌素E注射制剂的相关信息以及临床应用进行综述。方法:参考近年来国内外文献,对三种多黏菌素E注射制剂的基本信息、耐药性和不良反应等进行详尽的整理和讨论,对产品的临床应用进行分类和评价。结果:三种多黏菌素E注射制剂在化学结构、给药途径、给药剂量等方面都存在差异,临床医生在使用的时候尤为需要关注。除静脉注射给药外,多黏菌素E注射制剂尚有雾化吸入、鞘内或脑室内给药以及膀胱灌注等多种给药途径的应用。结论:随着多药耐药菌的出现,多黏菌素E重新获得了青春。但是,该品种仍需进一步的深入研究,同时也需要开发适应临床需求的新品种。     

国产硫酸黏菌素中B2组分的分离和结构解析

目的:研究本公司硫酸黏菌素有效组分与欧洲药典标准品的区别。方法:采用高效液相色谱法对样品进行对比分析,目标组分经制备液相分离纯化后通过核磁共振和质谱进行结构解析。结果:分离得到的与欧洲药典标准品不一致的组分为多黏菌素B2。结论:发酵菌种不一致可能会导致有效组分有一定的差别,应该引起生产厂家的关注。     

孕烯醇酮中微量杂质的分离和结构确证

目的:分离和确证孕烯醇酮中所含杂质的结构.方法:采用柱色谱和制备高效液相色谱法进行分离纯化,MS和NMR等光谱方法确证结构,并合成杂质A后进一步确证其结构.结果:从孕烯醇酮中分离出4个杂质,其中杂质A得到结构确证,其它3个有待确证.合成产物的HPLC、NMR等分析结果与该杂质一致.结论:所得杂质A的结构为:3β,20(R)-二羟基-孕甾-5-烯.     

纳滤膜在硫酸多粘菌素E浓缩与纯化中的应用

纳滤膜能在低温状态下,将硫酸多粘菌素Ｅ树脂解析液的浓缩和纯化合二为一,彻底替代了原有的真空薄膜蒸发器和树脂除杂质,既降低了能耗,又避免了产品受热分解和树脂除杂质时损失,提高了产品的收率和成品质量。     

Isolation and structure elucidation of major alkaline degradant of ezetimibe

This work presents the isolation and characterization of the alkaline degradant of Ezetimibe. Ezetimibe, a selective inhibitor of intestinal cholesterol absorption, was subjected to alkaline degradation. Ezetimibe was reacted with 0.1M methanolic sodium hydroxide solution for 10min at 80°C to yield alkaline degradant to an extent of 90% of initial amount of the drug taken. This degradant was detected by high performance liquid chromatography (HPLC) at relative retention time (RRT) of 1.48 with respect to Ezetimibe. HPLC method involved an isocratic elution on a Waters Symmetry C(8) 150mm×4.6mm, 5μm column using ammonium acetate buffer (pH 4.5, 50mM) - acetonitrile (50:50, v/v) as the mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min and UV detection at 242nm. The degradant was isolated by preparative HPLC. Purity of the isolated solid was found to be more than 99%. Structure of alkaline degradant was confirmed by LC-MS, (1)H and (13)C NMR and IR spectroscopy. On the basis of spectral data, the structure of the degradant was confirmed as 5-(4-fluorophenyl)-2-[(4-fluorophenyl amino)-(4-hydroxyphenyl)methyl]-pent-4-enoic acid. The route for the formation of this degradant is also proposed. Determining the structures of degradation products arouse during stress testing can be useful for preclinical discovery efforts.     

海洋青霉属真菌菌株XGH2321抑菌活性代谢产物的分离与鉴定

目的从青霉属真菌XGH2321的发酵液中分离抑菌活性次级代谢产物。方法发酵液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱层析、C18柱制备色谱分离获得单体,并对化合物进行结构鉴定及活性测试。结果从菌株XGH2321的乙酸乙酯提取物中分离得到3个己酮烯类化合物及1个酯类化合物,根据化合物的光谱特征(ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR)和理化性质分别鉴定为sorbicillin(1),2’,3’-dihydrosorbicillin(2),2,3-Dihydro-7-hydroxy-6,8-dimethyl-2-[(E)-prop-l-enyl]chromen-4-one(3)和dibutylphthalate(4),其中化合物3和4对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的生长具有明显的抑菌活性,化合物1、2、3对白色念珠菌(Candida albicans)的生长具有明显的抑菌活性,化合物1和2对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)对的生长具有明显的抑菌活性。结论化合物2和3的抗MRSA作用,化合物1和3的抗白色念珠菌作用及化合物1、2和3的抗烟曲霉作用属首次报道。     

E.coli L-天冬酰胺酶结构与功能及其纯化工艺

综述近年来有关大肠杆菌来源的L-天冬酰胺酶的结构与功能、纯化工艺以及酶的修饰的研究进展。L-天冬酰胺酶具有抗肿瘤活性,目前临床上已将其用于儿童急性淋巴细胞白血病的治疗,是治疗此类白血病的重要药物。     

尼拉霉素新组分98-23的研究——分离、结构鉴别及抗菌活性

从黑暗链霉菌(S．tenebrarius)菌种诱变中得到一变株．其发酵产物系单一组分．经大孔离子交换剂、葡聚糖Sephadex离子交换剂提取精制，制得纯品，经IR、MS、^1H-NMR、^13C-NMR、^1H-^1H COSY、HOHA-HA、HMQC等光谱解析，确定为氨基糖苷类中的新抗生索．化学名为0-3-amino-6-O-(anlinocarbonyl)-3-deoxy-Q-D-glucopyranosyl-(1→6)-0-[2-amino-2．3-dideoxy-n-D-glucopyranosyl-(1→4)]-2-deoxy-D-strep-tamine．并测定了部分菌株的MIC数据以及LD50的范围。     

大肠杆菌表达的乙型肝炎表达抗原124aa分子的纯化和免疫学鉴定

目的 探索大肠杆菌表达的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）124aa分子作为疫苗成分应用的可能性。方法 以超声破碎法获取包涵体,用HisTrap^TM试剂盒亲和层析纯化目的蛋白。加入聚乙二醇（PEG4000）以提高变性蛋白的复性效率。以抗HBsAga抗原决定簇单克隆抗体（McAb)和抗HBsAg多克隆抗体（PcAb)作为包被抗体,采用夹心ELISA法分析其抗原性;以纯化产物免疫BALB/c小鼠,RIA法测定小鼠血清中抗HBs抗体。结果 通过HisTrap^TM试剂盒亲和层析纯化的HBsAg124aa分子经反相高效液相色谱（RP-HPLC）分析。纯度达95%以上,经复性后的蛋白具有抗原性和免疫原性。结论 HBsAg124aa分子在大肠杆菌中的成功表达,为探索新的乙型肝炎疫苗成分提供了重要线索。     

L-天门冬酰胺酶II的表达与纯化

依据发表的大肠杆菌天门冬酰胺酶II基因序列,合成引物,利用PCR技术获得天门冬酰胺酶II的结构基因,插入高效表达载体pBV220,并转化大肠杆菌菌株DH5α,获得高效表达天门冬酰胺酶II的基因工程菌株。通过对包涵体的提取与纯化,结合离子交换层析获得天门冬酰胺酶II的蛋白质纯品。检测结果表明得到的天门冬酰胺酶II具有较高的比活性,与商品化的同类产品比活相近。     

Design, synthesis and cytotoxicity of a new series of isoxazolidine based nucleoside analogues

5‐Arylisoxazolidin‐3‐yl‐3‐diethoxyphosphonates have been synthesized from N‐methyl‐C‐diethoxyphosphorylnitrone and vinyl aryls in good yields and their transformation into the respective phosphonic acids has been accomplished via dealkylation procedure using trimethylsilyl bromide. Phosphonates having 1‐ and 2‐naphthyl substituents at C5 in the isoxazolidine ring as well as the respective phosphonic acids have been found cytotoxic to HeLa and K562 cells with IC₅₀ in the 0.1–0.3 mM range. Preliminary studies on mechanism of action imply that intercalation to DNA is not responsible for their cytotoxic properties.     

Bactericidal effect of colistin on planktonic Pseudomonas aeruginosa is independent of hydroxyl radical formation

The bactericidal effect of several major types of antibiotics has recently been demonstrated to be dependent on the formation of toxic amounts of hydroxyl radicals (OH) resulting from oxidative stress in metabolically active cells. Since killing by the antimicrobial peptide colistin does not require bacterial metabolic activity, we tested whether the bactericidal effect of colistin depends on the formation of OH. In Pseudomonas aeruginosa cultures, OH-mediated killing by ciprofloxacin was demonstrated by decreased bacterial survival and induction of 3′-(p-hydroxyphenyl) fluorescein (HPF) fluorescence. OH-mediated killing by ciprofloxacin was further confirmed by rescue of cells and reduction of HPF fluorescence due to prevention of OH accumulation by scavenging with thiourea, by chelating with dipyridyl, by decreasing metabolism as well as by anoxic growth. In contrast, no formation of OH was seen in P. aeruginosa during killing by colistin, and prevention of OH accumulation could not rescue P. aeruginosa from killing by colistin. These results therefore demonstrate that the bactericidal activity of colistin on P. aeruginosa is not dependent on oxidative stress. In conclusion, antimicrobial peptides that do not rely on OH formation should be considered for treatment of Gram-negative bacteria growing at low oxygen tension such as in endobronchial mucus and paranasal sinuses in cystic fibrosis patients, in abscesses and in infectious biofilm.