胃癌组织中SFRP2和NDRG4的表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中SFRP2和NDRG4的表达及其临床意义。方法选取64例接受手术切除治疗的胃癌患者作为研究对象,取适量胃癌病灶组织作为观察组,距离肿瘤边缘5 cm以上的癌旁正常组织则为对照组。分别采用Western-blot和荧光定量PCR检测胃癌病灶组织和正常组织中SFRP2和NDRG4蛋白及mRNA含量。结果SFRP2和NDRG4在胃癌病灶组织和正常组织中均有表达,病灶组织中SFRP2和NDRG4灰度值分别为(0. 149±0. 044)和(0. 19±0. 038),明显低于正常组织中的(0. 557±0. 123)和(0. 740±0. 093);此外,胃癌病灶组织中SFRP2和NDRG4mRNA的相对表达量分别为(0. 331±0. 048)和(0. 276±0. 085),正常组织中的相对表达量则是(1. 056±0. 145)和(1. 043±0. 150)。胃癌病灶组织中的SFRP2和NDRG4蛋白含量及mRNA水平均显著低于正常组织,差异具有统计学意义(P <0. 05)。SFRP2和NDRG4联合检测敏感性和特异性分别为44. 2%和87. 6%,优于单独检测。结论胃癌中SFRP2和NDRG4表达同时下调并参与了其病理发展,联合测定上述肿瘤相关因子对提高胃癌诊断的特异性具有重要临床意义。     

分化相关基因NDRG1在恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是危害人类健康的重要疾病之一,其发生发展是一个多因素作用、多基因参与、经过多个阶段才最终形成的极其复杂的生物学现象。随着人癌基因和抑癌基因的发现,人们已认识到恶性肿瘤是一种基因分子疾病。近年来,恶性肿瘤发病率逐年升高,发病年龄年轻化,在全球范围内,其防治仍是当今生命科学研究领域的一个难点。因此,如果能找出有预警作用的标志物,在癌变早期准确预报;找到促进肿瘤细胞分化,逆转其恶性表型,减少其侵袭转移的基因,肿瘤的防治就会有战略性突破。NDRG1基因是近年来新发现的一种分化相关基因,本文以NDRGI基因在恶性肿瘤发生发展过程中的作用为基础,对该基因的结构、功能和作用机制进等行如下综述：     

分化相关基因NDRG1在恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是危害人类健康的重要疾病之一,其发生发展是一个多因素作用、多基因参与、经过多个阶段才最终形成的极其复杂的生物学现象.随着人癌基因和抑癌基因的发现,人们已认识到恶性肿瘤是一种基因分子疾病.近年来,恶性肿瘤发病率逐年升高,发病年龄年轻化,在全球范围内,其防治仍是当今生命科学研究领域的一个难点.因此,如果能找出有预警作用的标志物,在癌变早期准确预报;找到促进肿瘤细胞分化,逆转其恶性表型,减少其侵袭转移的基因,肿瘤的防治就会有战略性突破.     

分化相关基因NDRG1的研究进展

目的:总结分化相关基因NDRG1的研究进展,探讨NDRG1在肿瘤等疾病治疗中的应用价值.方法:应用PubMed和CNKI期刊全文数据库检索系统,以"NDRG1、肿瘤转移、细胞分化"为关键词,共检索到1997-2010年相关文献159篇,纳入标准:1)NDRG1的表达及调控;2)NDRG1在肿瘤中的表达及临床意义.根据标准纳入分析30篇参考文献.结果:NDRG1属NDRG家族成员,受p53、PTEN和缺氧等多种因素调控,主要参与细胞的生长发育和分化、成熟,近年发现,NDRG1与人类肿瘤的发生发展、侵袭及转移密切相关,是影响恶性肿瘤预后的新指标.结论:有关NDRG1的研究可能为肿瘤预后判断及分化治疗提供新的依据.     

NDRG1基因的功能及与肿瘤的关系

NDRG1是一种与细胞增殖和分化相关的基因,属于NDRG家族,在人体多种组织中均有表达,在肾脏、前列腺和胎盘中水平最高.大量研究发现,NDRG1与细胞分化和外周神经髓鞘的形成相关,受缺氧应激、抑癌基因、金属离子代谢等调控.NDRG1基因在肿瘤组织中异常表达,参与肿瘤的发生、发展和转移,但NDRG1在肿瘤中的确切功能尚未完全明确,有待深入研究.     

胃癌组织中NDRG3的表达及其与预后的关系

目的:探讨N-myc下游调控基因家族（N-myc downstream-regulated gene,NDRG）3在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌患者预后的关系。方法:应用免疫组化染色研究NDRG3在胃癌组织中的表达,并分析其与胃癌患者预后的关系。结果:NDRG3主要表达在细胞质中,在细胞核中也有少量表达。在60例胃癌组织中,42例高表达,阳性率为70%,明显高于癌旁组织。临床病理资料分析显示NDRG3表达与胃癌的淋巴结转移相关（P<0.05）,且NDRG3高表达患者较低表达患者预后差（P<0.05）。结论:NDRG3在胃癌组织中较癌旁组织高表达,且其表达水平与胃癌淋巴结转移及患者预后相关,提示NDRG3与胃癌转移机制密切相关,为胃癌诊治提供了新的思路。     

喉鳞状细胞癌组织中 NDRG1、NDRG2 基因启动子区CpG岛甲基化状态及其蛋白的表达

目的：探讨喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）组织中 N-myc 下游调节基因1（ N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1）及NDRG2 基因启动子甲基化状态和蛋白表达情况及其临床意义。方法：应用甲基化特异性PCR（methylation specific polymerase chain reaction, MSP）技术及免疫组织化学(immunohistochemestry, IHC）法检测45例LSCC组织、18例癌旁组织中 NDRG1、NDRG2 基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白表达情况,分析其与临床特征的关系。结果：LSCC组织中 NDRG1及NDRG2 基因启动子区的甲基化发生率显著高于癌旁正常组织\[66.7%（30/45） vs 33.3%（6/18）,53.3%（24/45） vs 22.2%（4/18）,均 P <0.05\],其高甲基化与淋巴结转移及临床分期有关( P <0.05),与病理分级、临床分型、吸烟史、年龄和性别无关( P >0.05)。在LSCC组织中,NDRG1及NDRG2蛋白的阳性表达率显著低于癌旁组织\[37.8% (17/45） vs 88.9% (16/18）,33.3%(15/45） vs 83.3%(15/18）,均 P <0.01\],其低蛋白表达与淋巴结转移及临床分期有关 ( P <0.05) ,与病理分级、临床分型、吸烟史、年龄和性别无关( P >0.05)。LSCC组织中 NDRG1及NDRG2 启动子区甲基化与其蛋白表达呈负相关(r1＝-0.713, P <0.01; r 2＝-0.472, P <0.01)。结论：在LSCC组织中 NDRG1及NDRG2 基因均呈高甲基化及低蛋白表达状态,这可能与喉癌的发生和发展有关, NDRG1及NDRG2 基因启动子区CpG岛的异常甲基化可能是抑制它们蛋白表达的机制之一。     

Snail基因在不同分化程度胃癌细胞中的表达及其意义

目的探讨Snail基因在不同分化程度人胃癌细胞中的表达及意义。方法分别以0ng/ml、5ng/ml、10ng/mlTGF-β1处理未分化、低分化、中分化的人胃癌细胞株,RT-PCR法测定Snail基因的表达。结果在0ng/ml浓度TGF-β1刺激下,不同分化程度人胃癌细胞SnailmRNA表达有显著性差异,随着肿瘤分化程度的降低,SnailmRNA表达水平增高;在5ng/ml浓度TGF-β1刺激下,不同分化程度人胃癌细胞SnailmRNA表达有显著性差异,随着肿瘤分化程度的降低,SnailmRNA表达水平增高;在10ng/ml浓度TGF-β1刺激下,不同分化程度人胃癌细胞SnailmRNA表达有显著性差异,随着肿瘤分化程度的降低,SnailmRNA表达水平增高。结论 Snail在分化程度越低的胃癌细胞中表达水平越高,Snail可以作为判断肿瘤恶性程度的辅助标志。     

NDRG2在非小细胞肺癌中的表达意义

目的：探讨NDRG2蛋白在tM,细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其在病理分类、分级、TNM分期中的差异性,为进一步研究NDRG2在NSCLC中的作用及其机制提供依据。方法：采用免疫组化EnVinsion法检测NDRG2蛋白在155例tP,I,细胞肺癌中的表达,统计学分析其病理分类、分级及临床TNM分期的差异性。结果：NDRG2阳性表达主要定位于胞质中和胞膜上,在癌和相应正常肺组织中总阳性率分别为63．23％、100％,两者相比差异性非常显著（P=0．0000）,其中肺鳞癌和腺癌阳性率分别为54．65％、73．91％,与正常组织比差异性均非常显著（P=0．0000）;鳞癌与腺癌间的阳性率和阳性强度差异性显著（P=0．0131）,鳞癌高、中、低分化阳性率分别为87．10％、41．3％和11．11％,经Kruskal—WallisH检验差异性显著（P=0．0000）,腺癌的高、中、低分化的阳性率分别是100．0％、88．89％和31．58％,经检验差异性非常显著（P=0．0000）;鳞癌、腺癌的TNM分期Ⅰ、Ⅱa、IIb、IIIa、Ⅲb的阳性率有逐渐降低的趋势,经检验其差异性显著,P值分别为0．0005、0．0342。结论：NDRG2在NSCLC中低于相应正常组织中的表达,表达的高低与病理分级高低成正比、与TNM分期高低成反比,很可能对NSCLC发生、发展产生重要影响。     

NDRG2对A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对于肺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:将NDRG2基因转染进肺癌细胞系A549,采用G418筛选出稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag并将仅转染载体的A549/pcDNA3.1(+)作为阴性对照。Western blot检测NDRG2在转染细胞中的表达水平。MTT、平板克隆形成试验检测转染前后细胞增殖作用的差异,流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布状态。结果:成功构建高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag。证实了NDRG2的高表达能够抑制肺癌细胞系的增殖(P<0.01),使肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:NDRG2高表达后能够有效抑制肺癌细胞系A549增殖并阻滞细胞周期滞留在G0/G1期。     

三氧化二砷对人胃癌细胞诱导分化的实验

目的：在三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导凋亡的基础上,探讨低浓度Ａｓ２Ｏ３对胃癌细胞诱导分化的作用。方法：以０．５μｍｏｌ的Ａｓ２Ｏ３处理人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１和ＭＫＮ４５,观察癌细胞增殖情况;经流式细胞仪检测细胞周期;用免疫组化法检测部分基因表达变化。结果：Ａｓ２Ｏ３处理后：①癌细胞增殖减缓,传至１６代后停止增殖;②４８小时后开始,Ｇ１／Ｇ０期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少;③ｐ５３和ｂｃｌ－Ｘ     

热作用对人肝癌MHCC97细胞增殖、凋亡及NDRG2表达的影响

目的：探讨热作用对人肝癌细胞株MHCC97细胞的增殖、凋亡以及NDRG2蛋白表达的影响。方法：MHCC97细胞分为5组,43℃恒温分别加热0h（对照组）、0.5h、1h、1.5h、2h。各组热处理后继续37℃恒温培养。于3h、6h、9h、12h、24h,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测各处理组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测NDRG2蛋白量的表达。结果：热处理后,细胞形态出现明显改变,细胞体积缩小,部分细胞脱落,加热2h培养24h者最为显著;热处理后,细胞增殖受抑制,以加热1h培养24h者最为明显（67.1%）;流式细胞仪检测显示,凋亡百分比在加热2h培养12h者达最大值（58.4%）;Western blot检测提示,加热1h培养24h者,NDRG2蛋白表达量最低。结论：热疗对肿瘤细胞具有杀伤和增殖抑制作用,并且能够诱导其凋亡,降低NDRG2蛋白的表达,以加热1h后培养24h效果最明显。     

胶质瘤中PI3K、AKT2和NDRG2mRNA的表达及相关性

目的：研究胶质瘤中蛋白激酶P13K、AKT2 mRNA表达与NDRG2 mRNA表达的相关性，寻找与NDRG2相互作用的上下游分子。方法：用实时定量PCR技术检测29例脑胶质瘤及相应瘤旁组织中P13K、AKT2和NDRG2 mRNA表达量。结果：29例脑胶质瘤NDRG2 mRNA表达明显低于瘤旁组织（P〈0．05），且不同病理分级间表达有显著性差异（P〈0．05），其中Ⅳ级NDRG2 mRNA表达量明显低于Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤（P=0．007，P=0．03）；AKT2，P13K mRNA表达在胶质瘤及瘤旁组织之间无明显差异（P〉0．05）。AKT2，P13K mRNA表达与NDRG2 mRNA表达的相关性无统计学意义（P〉0．05）。结论：NDRG2可能与胶质瘤的发生发展及恶性演变有关，在mRNA表达水平，还不能认为P13K、AKT2与NDRG2之间有相关性。     

胃癌组织中MAT1及MCM2表达的临床病理意义

目的 探讨胃癌组织中相关基因1(MAT1)以及微小染色体维持蛋白2(MCM2)的表达及其临床意义.方法 选取95例胃癌患者,采用免疫组化法检测所有患者癌组织以及癌旁组织MAT1、MCM2的表达情况,分析胃癌组织表达中MAT1、MCM2与患者各临床指标的相关性.结果 ①胃癌组织表达MAT1、MCM2的阳性率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05).②MAT1表达与年龄、性别、体质指数、肿瘤分化程度无显著相关性(P＞0.05),与浸润深度、淋巴结转移、远处转移有显著相关性(P＜0.05).③MCM2表达与年龄、性别、体质指数、远处转移无显著相关性(P＞0.05),与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05).结论 胃癌组织中MAT1、MCM2表达与其临床指标密切相关,从而进一步影响患者的预后.     

NDRG2基因对结肠癌细胞SW620增殖和侵袭力的影响

目的 观察N-myc下游调节基因2(NDRG2)对结肠癌细胞SW620生长和侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 采用阳离子脂质体转染方法,分别将pcDNA3.1-NDRG2和siRNA-NDRG2转染入SW620细胞内,以空白组作为对照.Western blotting检测各组细胞NDRG2以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况;细胞侵袭试验对各组细胞侵袭能力进行分析;四甲基偶氮唑蓝法对各组细胞生长曲线进行测定.结果 pcDNA3.1-NDRG2转染入SW620细胞后,NDRG2蛋白表达升高,而MMP-2蛋白表达降低;siRNA-NDRG2转染入SW620细胞后,NDRG2蛋白表达降低,而MMP-2蛋白表达升高.pcDNA3.1组的穿膜细胞数(56.20±7.40)及siRNA组穿膜细胞数(94.20 ±9.23)分别与对照组(75.80 ±4.82)相比,差异具有统计学意义(t=13.102,P=0.000;t=11.820,P=0.000).生长曲线显示,转染后第5天,pcDNA3.1组细胞吸光度值(0.46 ±0.01)及siRNA组细胞吸光度值(0.91 ±0.02)分别与对照组(0.67 ±0.01)相比,差异具有统计学意义(t=9.561,P=0.000;t=10.922,P=0.000).结论 NDRG2能降低结肠癌细胞SW620的侵袭和增殖能力,其机制可能与下调MMP-2的表达有关.     

反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.     

NDRG2在热疗抗肝癌细胞作用中的影响

目的：探讨 NDRG2对热疗诱发的热应激抗肝癌细胞作用的影响。方法：分别给予肝癌HepG-2和Huh-7细胞37℃、39℃、41℃、43℃、45℃水浴30min的热刺激后,采用细胞划痕、Transwell和Western blot方法对各组细胞的迁移、侵袭能力和NDRG2、MMP-2/9蛋白表达量进行检测,同时应用流式细胞技术检测肿瘤细胞的坏死和凋亡情况。结果：与37℃（对照组）相比,45℃组HepG2和Huh-7细胞的迁移和侵袭能力均有显著降低 （P〈0.05）,细胞内MMP-2及MMP-9分泌量明显下降,同时伴随NDRG2表达量明显上升。通过比对NDRG2联合热作用对肝癌细胞的治疗效果,发现在正常表达NDRG2的对照组细胞（Cherry-HepG-2）的凋亡率会随着加热温度的增加而增加,同时坏死率显著增高 （P〈0.05）。然而,给予NDRG2过表达组细胞（NDRG2-HepG2）43℃热处理后,细胞凋亡率和抗细胞侵袭能力可高达45℃热作用于对照组细胞的水平,而细胞坏死率却没有增加。结论：45℃的热应激可明显抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力;NDRG2联合热作用可对肝癌细胞产生较好的促凋亡和抗侵袭效果。     

NDRG2基因在贲门腺癌中的甲基化状态及表达

目的： 探讨贲门腺癌(GCA)中NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2)基因启动子区的甲基化状态,并分析其甲基化与表达之间的相关性。方法：应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2基因的甲基化状态,应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2的mRNA和蛋白表达情况。结果：NDRG2基因启动子区在贲门腺癌组织中的甲基化率(49.5%)显著高于癌旁正常组织(5.1%)(P<0.05),且Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中NDRG2基因甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者,低分化组中NDRG2基因发生甲基化的比率显著高于高中分化组。贲门腺癌组织中NDRG2 mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达阳性率为44.3%(43/97),显著低于相应癌旁正常组织的蛋白表达94.8%(92/97)(P<0.01),且贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达缺失与其启动子区的甲基化有明显的相关性(r=-0.510,P<0.01)。结论：NDRG2基因启动子区的高甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌中此基因表达降低的机制之一。     

ABCG2及CD133在体内外不同分化胃癌中的表达水平研究

目的 研究ABCG2及CD133两种待定肿瘤干细胞标志物的表达与不同分化胃腺癌的数量关系。方法 (1)在78例人胃腺癌组织中以免疫荧光法检测ABCG2和CD133的表达;(2)以流式细胞技术对未分化胃癌细胞系HGC-27、低分化胃癌细胞系BGC-823及中-低分化胃腺癌细胞系SGC-7901中ABCG2、CD133的表达进行测定;(3)用上述三种细胞系建立裸鼠胃壁移植成瘤模型,采用免疫荧光染色的方法对体内环境下ABCG2和CD133在移植瘤中的表达情况进行检测。结果 (1)ABCG2和CD133的表达均与肿瘤分化程度相关。在人胃腺癌标本中,两种标志物的表达随着胃癌恶性程度的增加而增加,分化越差的胃癌ABCG2、CD133表达水平越高;并且根据Lauren分型,CD133在人弥散型胃癌中的表达高于肠型胃癌;(2)未分化细胞系HGC-27中ABCG2和CD133的表达要比中-低分化细胞系高;(3)三种胃癌细胞移植鼠模型中移植瘤组织ABCG2和CD133表达水平与人胃癌组织和不同分化胃癌细胞系的表达水平相似,低分化胃癌细胞株HGC-27移植瘤ABCG2、CD133表达水平最高。结论 肿瘤干细胞标志物ABCG2和CD133在不同分化胃癌中的表达有差异,且低分化胃癌其肿瘤干细胞标志物表达水平较高。     

康莱特对HL-60细胞诱导分化的研究

目的　探讨康莱特对HL 60细胞诱导分化的影响。方法　应用不同浓度康莱特作用对数生长期HL 60细胞 ,采用细胞计数法测HL 60细胞生长曲线 ,显微镜观察细胞形态 ,应用台盼蓝吞噬和硝基蓝四氮唑 (NBT )还原实验检测细胞分化程度。结果　 1mg/ml康莱特作用HL 60细胞培养第 6天 ,细胞计数 ( 10 .3± 1.1)× 10 5个 /ml ,较未加药组细胞计数 ( 2 0 .5± 3 .5 )× 10 5个/ml低 ,P <0 .0 5。 1mg/ml康莱特作用HL 60细胞 96h ,HL 60细胞台盼蓝吞噬率 ( 3 2 .0± 8.3 ) %较未加药组 ( 4 .0± 2 .7) %高 ,P<0 .0 5。HL 60细胞NBT阳性率 ( 5 0 .3± 5 .3 ) %较未加药组 ( 15 .0± 3 .7) %高 ,P <0 .0 5。结论　康莱特对HL 60细胞生长有抑制作用。康莱特可诱导HL 60细胞形态向成熟粒细胞转变 ,增强HL 60细胞对台盼蓝的吞噬功能及对NBT的还原能力。康莱特具有诱导HL 60细胞分化的作用