维生素E琥珀酸酯通过内质网应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:探讨内质网应激在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用。方法:分别采用Western blotting和RT-PCR检测VES不同剂量(0、5、10和20μg/ml)处理SGC-7901细胞24 h和20μg/ml VES处理SGC-7901细胞不同时间对内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)GRP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的蛋白和mRNA表达的影响;进一步采用RNA瞬时干扰阻断CHOP的表达后用20μg/ml VES作用SGC-7901细胞24 h,采用DAPI染色法观察细胞凋亡的改变。结果:20μg/ml VES组在mRNA水平卜均诱导GRP78、GRP94和CHOP的表达增加;在蛋白水平上20μg/ml VES显著增加GRP78和CHOP的表达,GRP94表达先降低,而后又升高;阻断CHOP后VES诱导的细胞凋亡由46.3%降低为27.9%(P0.05)。结论:内质网应激可能参与了VES诱导的SGC-7901细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯经由活性氧诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡

背景与目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)对人胃腺癌SGG7901细胞生长的抑制作用,探索VES诱导SGC-7901细胞凋亡情况及其可能机制.材料与方法:胃癌SGC-7901细胞分为VES不同浓度处理组和1 mmol/L甘露醇+20 μg/ml VES处理组(细胞先用1 mmol/L的甘露醇处理2 h后,加入20 μg/ml的VES处理),SGC-7901细胞经受试物处理24 h后,采用MTT、单细胞凝胶电泳方法和流式细胞技术,检测VES诱导SGC-7901细胞的氧化损伤及凋亡的情况,用相应的生化检测试剂盒检测细胞内活性氧及谷胱甘肽的含量变化. 结果:0、1.25、2.5、5、10、20 μg/ml的VES对胃癌细胞SGC-7901细胞的生长均有不同程度的抑制作用,其中20 μg/mlVES组抑制作用最大,其生长抑制率达76.91%.研究结果还显示随VES浓度的增加,细胞凋亡率呈现增加的趋势.彗星实验结果显示,各实验组随着VES浓度的增加,彗星尾长与彗星细胞率呈现增加的趋势.VES 10、20 μg/ml组与阴性对照组相比,SGC-7901细胞内谷胱甘肽含量显著下降(P<0.05),同时活性氧含量显著增加(P<0.05).1 mmol/L甘露醇+20μg/ml VES处理组与VE$20 μg/ml处理组比较:SGC-7901细胞DNA损伤程度较轻,细胞凋亡率明显低于YES 20 μg/ml处理组,其细胞内活性氧的生成减少,细胞内谷胱甘肽的消耗减少(P<0.05).绪论:VES可显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,且随VES剂量的增加,其抑制作用越强.细胞内活性氧含量增加、谷胱甘肽耗竭所导致的氧化损伤作用可能是VES诱导细胞凋亡的机制之一.     

维生素E琥珀酸酯诱导内质网应激激活JNK的表达对人胃癌SGC-7901细胞自噬的影响

目的:研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)激活内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬过程中发挥的作用.方法:用不同剂量VES(5、10、15、20μg/ml)分别处理SGC-7901细胞24 h,采...     

Bid在维生素E琥珀酸酯诱导SGC-7901细胞凋亡中的作用

背景与目的:研究Bid在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用.材料与方法:在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中,检测Bid蛋白的活化;用RNA瞬时干扰阻断Bid的表达,再用VES作用SGC-790细胞后,比较Bid阴性表达和Bid阳性表达细胞的凋亡率、线粒体膜电位(△Ψm)、胞浆中细胞色素C含量和PARP活化程度. 结果:VES作用细胞后Bid发生活化;Bid阴性表达细胞的凋亡率较Bid阳性表达细胞降低,线粒体膜电位升高,胞浆中细胞色素C含量减少,PARP活化减弱.结论:在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中,Bid可能发挥重要作用.     

维生素E琥珀酸酯通过氧化应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（vitamin E succinate,VES）是否可通过氧化应激来诱导胃癌细胞凋亡及其可能机制。方法：分别用5、10和20μg/ml的VES处理胃癌SGC-7901细胞24h,同时设阴性对照组和甘露醇（活性氧抑制剂）预处理组。通过流式细胞技术、共聚焦技术和Western blot方法,检测了VES诱导SGC-7901细胞线粒体氧化损伤及细胞凋亡的情况,用相应的检测试剂盒检测细胞内活性氧和Ca^2＋含量变化情况。结果：不同浓度的VES对SGC-7901细胞均有诱导凋亡的作用。表现为随VES浓度的增加,SGC-7901细胞凋亡数量呈现增加的趋势,且SGC_7901细胞内活性氧含量及钙离子水平呈现增加的趋势,而线粒体膜电位逐渐下降。活性氧抑制剂甘露醇（1mmol/L）对VES诱导的胃癌细胞凋亡,和细胞内活性氧、钙浓度的增高及膜电位的降低均有显著抑制作用（P〈0.05）。随VES浓度的增加,SGC7901细胞内Bax蛋白的表达呈现上升的趋势,而Bcl-2蛋白的表达呈现下降趋势。甘露醇可显著降低胃癌SGC-7901细胞Bax蛋白的表达水平,同时增加Bcl-2蛋白的表达（P〈0.05）。结论：VES可显著促进胃癌细胞凋亡,并且随着VES剂量的增加,VES诱导胃癌细胞凋亡的作用越强。细胞内活性氧含量增加、细胞内钙超载所导致的线粒体氧化损伤作用可能是VES诱导细胞凋亡的机制之一。     

维生素E琥珀酸酯通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞SGC-7901发生保护性自噬

目的： 观察维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)处理SGC-7901细胞后是否发生自噬,并探讨自噬在VES抑制细胞增殖中的作用。方法：用不同浓度 (0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理SGC-7901细胞24 h后,电子显微镜观察自噬体形态;VES处理转染GFP-LC3质粒后的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3,以及Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR活性变化;采用自噬抑制剂氯喹 (chloroquine,CQ)和3-甲基腺苷 (3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力。结果：电子显微镜观察显示经不同浓度VES处理后,细胞中出现了典型的自噬囊泡以及自噬溶酶体等自噬各阶段的形态变化;荧光显微镜观察显示GFP-LC3质粒转染后随VES处理剂量的增加,绿色点状荧光逐渐聚集增强;Western blot结果显示,VES可使LC3-Ⅱ蛋白表达增强;并下调Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR的活性;MTT结果显示VES+CQ组和VES+3-MA组的细胞增殖抑制率均明显高于VES单独处理组 (P均 <0.05),即自噬抑制剂CQ与3-MA预处理使细胞增殖率进一步下降,提示VES诱导的肿瘤细胞自噬对肿瘤细胞增殖具有保护作用。结论：VES可以通过抑制Akt/mTOR通路活性诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生自噬,且此种自噬为保护性自噬。     

维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用。方法:用不同剂量(0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3(LC3)荧光强度和分布情况,Western blot分别检测内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和LC3、Beclin-1的表达情况;在分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和氯喹(CQ)以及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理2 h后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,Western blot分别检测内质网应激标志物GRP78、GRP94及自噬标志蛋白LC3、Beclin-1的变化。结果:与阴性对照组比较,随着VES剂量的增加,激光共聚焦显微镜观察到LC3在细胞内点状分布逐渐聚集和增强,GRP78和GRP94表达先降低后升高(P均<0.05),LC3和Beclin-1表达逐渐升高(P均<0.05);VES+3-MA组及VES+CQ组的GRP78和GRP94蛋白表达均高于单独VES组(P均<0.05);VES+4-PBA组的LC3和Beclin-1蛋白表达均低于单独VES组(P均<0.05)。结论:VES处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激可以相互调节,具有交互作用。     

酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

目的： 探讨酸性神经磷脂酶 (acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法：常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明 (desipramine,DES)处理组 (12.5 μmol/L DES作用2 h),对照组 (含2％胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组 (用12.5 μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20 μg/mL VES)以及VES处理组 (20 μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果：VES (20 μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制 (P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组 (P均<0.05);细胞形态学显示20 μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为 39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%) (P均<0.05),VES+DES组 (19.47%±4.46%)较VES组明显降低 (P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低 (P均<0.05)。结论：ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。     

维生素E琥珀酸酯对胃癌抑制作用的研究进展

维生素E琥珀酸酯（Vitamin E Succinate;VES）或称d—α-生育酚琥珀酸酯是天然的维生素E衍生物。国内外报道其在体外对90％的人类恶性肿瘤细胞的生长有抑制作用,如大鼠神经胶质瘤细胞、人前列腺癌细胞、人早幼粒细胞、人乳腺癌细胞等。进一步研究发现VES对上皮细胞来源的肿瘤抑制效果更佳。自刘柏合首先报道VES对上皮细胞来源的胃癌SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,随后国内外学者进一步研究VES抑制胃癌细胞的可能机制。在此本文将对VES抑制胃癌作用的研究进展加以综述。     

线粒体复合物在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的： 探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌细胞凋亡过程中线粒体4种复合物的作用,并寻找对肿瘤细胞有抑制作用的关键酶。方法：体外常规培养SGC-7901细胞,分别加入线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ (complexⅠ~Ⅳ, CⅠ~Ⅳ)的抑制剂鱼藤酮(rotenone,ROT)、噻吩甲酰三氟丙酮 (thenoyltri?uoroacetone,TTFA)、抗霉素A (antimycin A,AA)和叠氮钠 (sodium azide,SA)2 h后以20 μg/ml VES诱导处理,并设阴性对照组(含0.1%乙醇的培养液),20 μg/ml VES单独处理组;MTT法测定细胞增殖情况,共聚焦显微镜观察活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞中细胞色素C和Caspase-3表达情况。结果：与VES对照组比较,在VES诱导SGC-7901细胞凋亡的过程中,添加5 μg/ml TTFA抑制线粒体复合物Ⅱ酶活性后,细胞增殖抑制率水平显著降低 (P<0.05)。4个线粒体复合物抑制剂处理组ROS水平均显著降低 (P<0.05),而细胞凋亡率显著升高 (P<0.05);但5 μg/ml TTFA处理组ROS及凋亡率的升高均显著低于其他3个处理组 (P均<0.05)。分别抑制CⅠ~Ⅳ酶活后,VES上调细胞中细胞色素C和Caspase-3的能力均受到抑制,其中VES+TTFA组抑制程度明显高于另外3组 (P均<0.05)。结论：VES处理SGC-7901细胞,可影响线粒体复合物Ⅱ中琥珀酸脱氢酶活性,致使线粒体中ROS堆积,这可能是VES诱导人胃癌细胞凋亡的机制之一。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生未折叠蛋白反应的研究

目的：探讨维生素E琥珀酸酯（VES）对人胃癌细胞未折叠蛋白反应的影响。方法：采用Western blot法分析VES不同剂量（0、5、10和20 μg/mL）处理人胃癌SGC-7901细胞24 h和20 μg/mL VES处理SGC-7901细胞不同时间（0、6、12、18和24 h）对内质网膜上的跨膜蛋白PKR样内质网蛋白激酶（PERK）磷酸化和活化转录因子6（ATF6）活化的影响;采用RT-PCR法检测VES不同剂量（0、5、10和20 μg/mL）处理SGC-7901细胞24 h和20 μg/mL VES处理SGC-7901细胞不同时间（0、3、6、9、12、15、18和24 h）对活化转录因子4（ATF4）mRNA表达和X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA剪切的影响。结果：在翻译水平上VES对磷酸化PERK的诱导作用具有时间依赖关系,与阴性对照组比较,10 μg/mL VES的诱导作用最强（P < 0.05）;在翻译水平上VES对ATF6活化片段的诱导作用具有时间依赖关系和剂量依赖关系;在转录水平上,随着作用时间的延长,VES对ATF4 mRNA的诱导作用也不断增强,18 h达到高峰,而XBP1 mRNA从VES作用6 h即开始出现剪切。结论：VES诱导人胃癌SGC-7901细胞发生内质网应激过程中,未折叠蛋白反应相关信号分子被活化。     

维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与活性氧蓄积的交互作用

目的：探讨维生素E琥珀酸酯（VES）处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与活性氧（ROS）蓄积是否存在交互作用。方法：不同剂量（0、5、10、15、20 μg/mL）VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,采用免疫荧光染色观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3（LC3）的荧光强度和分布情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,流式细胞术检测细胞内ROS水平;用ROS淬灭剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理2 h后以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,免疫荧光染色观察细胞内LC3荧光强度和分布情况,Western blot检测LC3和Beclin-1的表达情况;RNA瞬时干扰阻断BECN-1基因的表达后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,流式细胞术检测细胞内ROS水平。结果：与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,LC3的荧光强度逐渐增强;LC3和Beclin-1蛋白表达均逐渐升高;流式细胞术检测结果显示胞内ROS水平逐渐增强;淬灭ROS之后LC3荧光强度以及LC3和Beclin-1蛋白表达水平均明显低于VES单独处理组（P<0.05）;阻断自噬关键基因BECN-1后细胞内ROS水平高于VES单独处理组（P<0.05）。结论：VES可诱导人胃癌细胞发生自噬及ROS蓄积,并且VES处理人胃癌细胞过程中自噬与ROS水平可以相互调节,具有交互作用。     

内质网应激在芹菜素诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激在芹菜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。方法:采用Western blot方法检测不同剂最(0、20、40、60、80μmol/L)芹菜素作用48 h和60μmol/L芹菜素作用不同时间(0、12、24、48 h)后对胃癌SGC-7901细胞中内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)GRP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologousprotein,CHOP)表达的影响;并用DAPI荧光染色和流式细胞仪检测10 mmol/L内质网应激抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyrie acid,PBA)加入前后细胞凋亡情况的变化。结果:芹菜素可以诱导GRP78、GRP94蛋白的表达,并随着剂量和时间的增加蛋白表达量也呈增加趋势,但芹菜素不能诱导CHOP蛋白的表达;荧光染色和流式细胞术结果显示4-PBA与20μmol/L芹菜素联合作用组的细胞凋亡率明显增加,与20μmol/L芹菜素组及溶剂对照组间的差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:内质网应激在芹菜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中可能对细胞起到保护作用。     

Miconazole induces autophagic death in glioblastoma cells via reactive oxygen species-mediated endoplasmic reticulum stress

Miconazole is an antifungal agent that is used for the treatment of superficial mycosis. However, recent studies have indicated that miconazole also exhibits potent anticancer effects in various types of cancer via the activation of apoptosis. The main aim of the present study was to observe the effect of miconazole on autophagic cell death of cancer cells. Cytotoxicity was measured by viable cell counting after miconazole treatment in glioblastoma cell lines (U343MG, U87MG and U251MG). Induction of autophagy was analyzed by examining microtubule-associated protein light chain 3 (LC3)-II expression levels using western blotting and by detecting GFP-LC3 translocation using a fluorescence microscope. Intracellular ROS production was measured using a fluorescent probe, 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate. It was found that miconazole induced autophagic cell death in the U251MG glioblastoma cell line via the generation of reactive oxygen species (ROS) and endoplasmic reticulum (ER) stress response. An association between miconazole-induced ROS production and autophagy was also identified; in particular, pretreatment of the cells with a ROS scavenger resulted in a reduction in the levels of LC3-II. Miconazole-induced ER stress was associated with increases in binding immunoglobulin protein (BiP), inositol-requiring enzyme 1α (IRE1α) and CHOP expression, and phospho-eIF2α levels. The inhibition of ER stress via treatment with 4-phenylbutyric acid or BiP knockdown reduced miconazole-induced autophagy and cell death. These findings suggest that miconazole induces autophagic cell death by inducing an ROS-dependent ER stress response in U251MG glioma cancer cells and provide new insights into the potential antiproliferative effects of miconazole.     

Vitamin E succinate-induced apoptosis of SGC-7901 cells via endoplasmic reticulum stress

目的:探讨内质网应激在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用.方法:分别采用Western blotting和RT-PCR检测VES不同剂量(0、5、10和20μg/ml)处理SGC-7901细胞24 h和20 μ g/ml VES处理SGC-7901细胞不同时间对内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)G RP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的蛋白和mRNA表达的影响;进一步采用RNA瞬时干扰阻断CHOP的表达后用20 μg/ml VES作用SGC-7901细胞24h,采用DAPI染色法观察细胞凋亡的改变.结果:20μg/ml VES组在mRNA水平上均诱导GRP78、GRP94和CHOP的表达增加;在蛋白水平上20 μg/ml VES显著增加GRP78和CHOP的表达,GRP94表达先降低,而后又升高;阻断CHOP后VES诱导的细胞凋亡由46.3％降低为27.9％ (P＜0.05).结论:内质网应激可能参与了VES诱导的SGC-7901细胞凋亡.