三种实验室技术在涂阳患者中诊断肺结核及其耐药性的效能分析

目的 探讨BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和荧光PCR熔解曲线技术在涂阳肺结核患者中的检测效能和应用意义。方法 回顾性分析2016年10月至2018年2月沈阳市胸科医院收治的所有涂片阳性患者411例,经结核分枝杆菌抗原检测(MPB64检测)阳性并符合临床诊断标准,确诊肺结核患者392例,MPB64检测阴性且经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌感染患者19例,比较MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对涂阳肺结核患者的检测效能;以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为参考标准,分别比较三种方法对耐药表型和耐药基因的检测效能。结果 在临床确诊的392例涂阳肺结核患者中,MGIT 960培养、GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对痰标本检测的敏感度分别为96.17%(377/392)、99.74%(391/392)和92.09%(361/392),特异度均为100.00%(19/19)。以比例法药敏试验为参考标准,GeneXpert和荧光PCR熔解曲线技术对利福平(RFP)耐药检测的敏感度相同,均为94.44%(119/126);荧光PCR熔解曲线技术在异烟肼(INH)、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药检测上的敏感度分别为74.84%(116/155)、83.33%(75/90)、44.00%(22/50);MGIT 960培养对RFP、INH、Lfx和Am耐药检测的敏感度分别为96.03%(121/126)、98.06%(152/155)、100.00%(50/50)、96.67%(87/90)。结论 GeneXpert法简便、快捷、安全,能够快速诊断肺结核及检测RFP是否耐药。荧光PCR熔解曲线技术可检测4种药物耐药情况,检测时间短,临床快速诊断耐多药肺结核/广泛耐药结核病,对指导临床用药具有重要意义。MGIT 960培养与比例法药敏试验耐药检测的一致性极高,是目前快速诊断结核病及一线药耐药检测的常用方法,可以缩短表型药敏试验时间。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析

目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值。方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况。以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等。结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44%(135/158),特异度为94.01%(769/818),Kappa值为0.75,诊断符合率为92.62%(904/976)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33%(20/24),特异度为94.59%(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59%(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83%(23/24),特异度为95.50%(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56%(129/135)。结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查。     

腺苷脱氨酶检测对结核性腹膜炎的诊断价值

目的 评价腹腔积液腺苷脱氨酶(ADA)检测对结核性腹膜炎(TBP)的诊断价值。方法 回顾性分析2016年1月至2018年12月陕西省结核病防治院和北京胸科医院收治的203例疑似TBP患者腹腔积液标本的实验室检测资料,纳入同时采用抗酸杆菌(AFB)涂片镜检(简称“AFB涂片”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和ADA检测的119例疑似TBP患者,其中确诊TBP患者73例、非TBP患者46例。以临床确诊TBP患者为参考标准,评价AFB涂片、MGIT 960培养、GeneXpert和ADA检测对TBP的诊断效能,并以ROC曲线分析ADA检测的最佳临界值和曲线下面积(AUC)。结果 在119例疑似TBP患者中,AFB涂片、MGIT 960培养、GeneXpert和ADA检测的敏感度分别为4.1% (3/73)、11.0% (8/73)、12.3% (9/73)和86.3% (63/73),特异度分别为100.0% (46/46)、100.0%(46/46)、100.0% (46/46)和84.8%(39/46),符合率分别为41.2% (49/119)、45.4% (54/119)、46.2% (55/119)和85.7% (102/119)。ROC曲线分析显示,当区分TBP与非TBP的ADA检测最佳临界值为31.45U/L时,AUC为0.836。结论 AFB涂片、MGIT 960培养、GeneXpert检测腹腔积液结核分枝杆菌敏感度均很低,而ADA检测在早期诊断TBP时有较高的敏感度和特异度,检测效能良好,可作为临床诊断TBP的参考。     

The diagnostic value of GeneXpert MTB/RIF of the lapping suspension of the thoracoscopic biopsy tissue in tuberculous pleural effusions

目的 评价内科胸腔镜胸膜活检组织标本研磨悬液行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 选择2017年1月1日至12月31日在沈阳市胸科医院胸膜炎病房住院,行内科胸腔镜检查的不明原因胸腔积液患者51例,均未经过抗结核药物治疗。所有患者胸膜活检组织标本一部分行常规病理检查,另一部分研磨处理后制成悬液,行BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)及Xpert 检测。以MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌和胸膜组织活检病理肉芽肿性病变并抗酸染色阳性作为确诊标准,评价活检组织研磨悬液行Xpert检测在结核性胸膜炎诊断中的价值。结果 51例患者中有34例确诊为结核性胸膜炎,其中通过MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌而确诊者20例(39.2%,20/51),通过胸膜组织活检病理阳性而确诊者17例(33.3%,17/51),其中3例患者被2种检测方法同时确诊;17例(33.3%)诊断为非结核性胸腔积液。以最终诊断结果为金标准,Xpert法、MGIT 960培养法、病理检查诊断的敏感度和特异度分别为64.7%(22/34)和100.0%(17/17)、58.8%(20/34)和100.0%(17/17)、50.0%(17/34)和100.0%(17/17);Xpert 法检测的敏感度高于MGIT 960培养法和病理诊断,但差异无统计学意义(χ ²=1.53,P=0.466)。结论 内科胸腔镜直视下取胸膜组织活检标本,通过研磨后使其液化,再行结核分枝杆菌Xpert检测,敏感度及特异度均较高,对结核性胸膜炎的确诊具有一定的临床意义。     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的价值

目的 评估荧光PCR探针熔解曲线(MeltPro)技术检测涂阳患者痰标本中MTB耐药性的效能。方法 收集2016年9月至2018年8月西安市胸科医院500例痰涂片阳性患者的痰标本,分别进行痰涂片镜检、GeneXpert MTB /RIF检测、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养、表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”),并应用MeltPro法检测痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼、二线注射类和氟喹诺酮类等抗结核药物的耐药性,并以表型药敏试验为标准,评价MeltPro法的检测效能。结果 以表型药敏试验结果为标准,MeltPro法检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为98.7%(76/77)和94.2%(343/364),检测对异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为82.3%(102/124)和96.2%(304/316),检测对阿米卡星耐药性的敏感度和特异度分别为8/9和99.5%(432/434),检测对卷曲霉素耐药性的敏感度和特异度分别为6/7和99.1%(432/436),检测对左氧氟沙星耐药性的敏感度和特异度分别为90.6%(48/53)和99.2%(386/389),检测对莫西沙星耐药性的敏感度和特异度分别为88.1%(37/42)和96.5%(386/400)。以表型药敏试验结果为标准,GeneXpert MTB/RIF检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为94.8%(73/77)和94.0%(342/364)。GeneXpert-MTB/RIF和MeltPro法与表型药敏试验结果一致性均较好(Kappa值分别为0.81和0.84),但MeltPro法检测效能与表型药敏试验检测结果的一致性更高。结论 MeltPro法检测涂阳患者痰标本中MTB菌株对利福平、异烟肼,以及二线注射类和氟喹诺酮类抗结核药物耐药性有较好的效能。     

超声引导下获取标本行病理学与结核相关检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 比较分析超声引导下胸膜穿刺获取的病理组织及胸腔积液标本在疑似结核性胸膜炎中的诊断价值。方法 搜集2016年1月至2018年5月在西安市胸科医院初次就诊的298例疑似结核性胸膜炎患者,其中临床确诊结核性胸膜炎患者112例,非结核性胸膜炎患者186例。所有患者均通过超声引导下胸膜穿刺获取病理组织和胸腔积液标本,对活检组织进行病理学切片检查(简称“病理检查”),胸腔积液分别进行结核分枝杆菌培养(浓缩集菌法,采用液体培养BACTEC MGIT 960操作系统,简称“MGIT 960培养”)、全自动医用PCR分析系统(GeneXpert MTB/RIF,简称“GeneXpert检测”)和抗酸杆菌染色涂片检查(简称“涂片检查”)。上述各种方法以临床确诊患者为参考标准,得出各自的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数,以评价各种检测方法诊断结核性胸膜炎的效能。结果 病理检查、MGIT 960培养、GeneXpert检测、涂片检查以临床确诊结果为参考标准的诊断敏感度分别为41.96%(47/112)、73.21%(82/112)、58.93%(66/112)和2.68%(3/112);特异度分别为99.46%(185/186)、100.00%(186/186)、100.00%(186/186)、100.00%(186/186);约登指数分别为0.41、0.73、0.59、0.02。结论 超声引导下胸膜穿刺获取标本采用各种技术与方法进行检测,结果证明胸腔积液标本采用浓缩集菌法进行MGIT 960培养相对其他检测技术与方法具有较好的敏感度、特异度,约登指数最高,具有良好的临床诊断结核性胸膜炎的价值。     

三种分子生物学方法检测结核分枝杆菌耐药性的效能分析

目的 评价GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)、基因芯片检测及实时荧光定量PCR熔解曲线法(简称“PCR熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的价值。方法 选取2017年1月至2018年1月西安市胸科医院有表型药物敏感性试验(简称“表型药敏试验”)结果的痰MTB培养阳性的774例肺结核患者作为研究对象,收集其表型药敏试验、GeneXpert、基因芯片及PCR熔解曲线法检测结果。以表型药敏试验结果为参照标准,评估3种分子生物学方法检测MTB耐药性的效能;根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积比较3种分子生物学方法检测MTB对利福平(RFP)耐药性的准确度。结果 以表型药敏试验结果为参照标准,GeneXpert检测MTB对RFP耐药性的敏感度和特异度分别为95.6%(87/91)和93.6%(249/266);基因芯片检测MTB对RFP和异烟肼(INH)耐药性的敏感度分别为92.8%(90/97)和78.8%(130/165),特异度分别为96.8%(610/630)和99.1%(557/562);PCR熔解曲线法检测MTB对RFP、INH、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药性的敏感度分别为:94.4%(51/54)、82.4%(61/74)、87.1%(27/31)、75.0%(6/8),特异度分别为:93.9%(138/147)、95.3%(121/127)、98.8%(164/166)、99.5%(188/189)。以表型药敏试验结果为参照标准,GeneXpert检测MTB对RFP耐药性ROC曲线下面积为0.95±0.02,基因芯片法和PCR熔解曲线法检测MTB对RFP耐药性曲线下面积均为0.93±0.03。结论 GeneXpert、基因芯片及PCR熔解曲线法检测MTB培养阳性肺结核患者对一线抗结核药物耐药性均比较可靠;PCR熔解曲线法检测MTB对Lfx和Am耐药性比较可靠。     

四种结核分枝杆菌检测方法临床诊断效能的评价

目的 评估痰涂片抗酸染色镜检(简称“涂片法”)、L-J培养基(Lowenstein-Jenden medium)固体培养(简称“L-J法”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)等4种结核分枝杆菌检测方法检出结核病病原菌的能力。方法 搜集2018年1月1日至2018年12月31日北京结核病控制研究所451例疑似肺结核患者的痰标本,同时使用涂片法、L-J法、MGIT 960法及GeneXpert法进行检测。对上述4种方法的检测结果以临床诊断情况(总体分为“肺结核患者”与“非肺结核患者”)为参考标准,计算各种检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、一致率;同时计算4种方法联合检测结果的病原学阳性率(其中任何一种方法检测结果为阳性,即判断为联合检测结果为阳性)。结果 451例疑似肺结核患者中,临床最终诊断依据《WS 288—2017肺结核诊断》标准进行,诊断为肺结核患者227例(肺结核225例、肺结核并发结核性胸膜炎2例),非肺结核患者224例[非结核分枝杆菌(NTM)肺病11例,陈旧性肺结核6例,肺部阴影待查181例,胸腔积液3例,肺纤维化1例,肺炎3例,肺癌1例,密切接触者筛查18例]。以临床诊断结果为参考标准,涂片法、L-J法、GeneXpert法、MGIT 960法检测敏感度分别为22.5%(51/227)、32.2%(73/227)、37.9%(86/227)、43.2%(98/227),特异度分别为96.0%(215/224)、96.4%(216/224)、100.0%(224/224)、95.1%(213/224),一致率分别为59.0%(266/451)、64.1%(289/451)、68.7%(310/451)、69.0%(311/451)。涂片法和L-J法联合检测,以及涂片法、L-J法和GeneXpert法联合检测,4种方法联合检测的敏感度分别为34.8%(79/227)、43.6%(99/227)、49.8%(113/227),特异度分别为96.0%(215/224)、96.0%(215/224)、93.8%(210/224),一致率分别为65.2%(294/451)、69.6%(314/451)、71.6%(323/451)。结论 以临床诊断为参考标准,MGIT 960法检测的敏感度最高;GeneXpert法检测的特异度最高;4种方法联合检测能够显著提高诊断敏感度,与临床诊断的一致率也显著提高。     

KOD DNA聚合酶荧光PCR技术在肺结核诊断中的应用评价

目的 评估基于KOD DNA聚合酶的荧光PCR技术在肺结核诊断中的临床应用价值。方法 采集2019年10月至2020年4月疑似肺结核的住院患者痰标本,进行涂片抗酸染色、MGIT960液体培养、KOD DNA聚合酶荧光PCR和Taq DNA聚合酶荧光PCR检测。以临床诊断结果为参照,MGIT960液体培养法为金标准,荧光PCR与Taq DNA聚合酶荧光PCR法比较,评价KOD DNA聚合酶荧光PCR法检测MTB的效能。结果 共对337例临床样本进行检测,MGIT960液体培养法、Taq DNA聚合酶荧光PCR和KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度分别为71.56% (156/218)、76.15% (166/218) 和76.61% (167/218)。KOD DNA聚合酶荧光PCR与MGIT960液体培养检测敏感度差异无统计学意义 (χ²=1.445,P=0.229>0.05)。KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度和特异度分别为92.31% (144/156)和86.39% (146/169),涂阴患者中检测敏感度和特异度分别84.21% (64/76)和88.48% (146/165)。结论 KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB敏感度和特异度较高,能够为临床诊断肺结核提供依据,操作简便、快速,适合在我国各级结核病实验室推广。     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值

目的 评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称“探针熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌复合群对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的价值。方法 从2015年1月至2018年7月山东省菏泽市传染病医院收治的883例肺结核和耐多药结核病(MDR-TB)患者中,选择萋-尼染色结果为阳性的结核病患者的痰标本共215份(例)进行分离培养,对鉴定为结核分枝杆菌复合群(MTBC)的200株(例)菌株同时使用比例法药物敏感性试验(DST)和探针熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以DST检测结果为金标准,分析探针熔解曲线法检测RFP和INH的敏感度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果 200株(例)MTBC分离株中,以DST检测结果为标准,探针熔解曲线法检测RFP耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为96.4%(106/110;95%CI:90.7%~98.9%)、80.0%(72/90;95%CI:70.5%~87.1%)和89.0%(178/200);对INH耐药性检测的敏感度、特异度和符合率分别为85.4%(123/144;95%CI:78.6%~90.7%)、96.4%(54/56;95%CI:87.7%~99.6%)和88.5%(177/200)。探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP耐药性的Kappa值为0.78,对INH耐药性的Kappa值为0.74。结论 探针熔解曲线法检测MTBC对RFP和INH的耐药性均有较高的敏感度和特异度,且探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP和INH耐药性的一致性较高,有助于对耐药结核病患者的及早发现和治疗。     

MTBDRplus 2.0技术对疑似肺结核和耐多药结核病患者的诊断价值

目的评价二代线性探针(GenoType MTBDRplus VER 2.0,简称"MTBDRplus 2.0")技术快速检测疑似肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1 12月就诊于西安市胸科医院的1065例疑似肺结核患者的实验室检测结果,剔除耐药不确定及痰标本污染者96例,最后纳入969例疑似患者作为研究对象。每例患者用同一份痰标本分别进行GeneXpert MTB/RIF(简称"GeneXpert")检测、MTBDRplus 2.0检测、BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")液体培养,对培养阳性且鉴定为MTB的菌株进行MGIT 960药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验"),以MGIT 960液体培养结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测痰标本中MTB的检测效能;以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,评价MTBDRplus 2.0技术检测利福平和异烟肼耐药性的检测效能。结果969例疑似肺结核患者中.MGIT 960液体培养检测MTB阳性409例,阴性560例。以MGIT 960液体培养检测结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测疑似肺结核患者痰标本MTB的敏感度、特异度、Kappa值分别为91.0%(372/409)、93.8%(525/560)、0.848和92.9%(380/409)、92.5%(518/560)、0.850。以MGIT 960药敏试验结果为参考标准,MTBDRplus 2.0和GeneXpert检测利福平耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为89.8%(53/59)、95.8%(295/308)、0.817和91.5%(54/59)、95.8%(295/308)、0.828;MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度和Kappa值分别为80.4%(82/102)、96.3%(260/270)和0.791。结论 MTBDRplus 2.0技术对检出疑似肺结核患者痰标本中的MTB,以及对利福平和异烟肼的耐药性均具有较好的检测效能。     

微孔板法与GeneXpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的价值

目的探讨微孔板法和GeneXpertMTB/RIF(简称"GeneXpert")技术检测MTB对利福平(RFP)耐药性的价值。方法收集陕西省结核病防治院2017年收住入院和门诊诊治的疑似结核病患者6893例,按照临床诊断标准确诊为结核病患者6086例,同时使用BACTEC MGIT 960液体培养(简称"MGIT 960法")和GeneXpert技术检测上述确诊患者的425份临床标本;其中,痰标本217份、肺泡灌洗液标本170份、肺外标本(包括胸腹腔积液、脓液,脑脊液等)38份;排除3例报告错误或无法判读、2例培养结果污染的标本,有效标本份数为420份。对其中GeneXpert技术和MGIT 960液体培养均为阳性的372株临床分离株同时进行微孔板法、GeneXpert技术和MGIT 960耐药性检测,其中痰标本191例、肺泡灌洗液标本158例、肺外标本(包括胸腹腔积液、脓液及脑脊液等)23例,以MGIT 960检测结果为标准,分析微孔板法和GeneXpert技术检测结核分枝杆菌对RFP耐药性的诊断价值。结果GeneXpert技术、微孔板法和MGIT 960法对RFP耐药性检测总的阳性率分别为18.8%(70/372)、16. 7%(62/372)、16. 7%(62/372)。以MGIT 960法检测结果为标准,微孔板法和GeneXpert法对利福平耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为91. 9%(57/62)、98. 4%(305/310)、97. 3%(362/372)、0. 8,96. 8%(60/62)、96. 8%(300/310)、96. 8%(360/372)、0. 8;微孔板法和GeneXpert法对痰液、肺泡灌洗液、肺外标本利福平耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为96. 7%(29/30)、98.1%(158/161)、97. 9%(187/191)、0. 9,93.3%(28/30)、96.3%(155/161)、95. 8%(183/191)、0.9, 91. 7%(22/24)、98. 5%(132/134)、97. 5%(154/158)、0.9和100.0%(24/24)、97.0%(130/134)、97. 5%(154/158)、0.9,75.0%(6/8)、100.0%(15/15)、91. 3%(21/23)、0.8,100.0%(8/8)、100.0%(15/15)、100.0%(23/23)、1.0。结论以MGIT 960检测结果为标准,微孔板法和GeneXpert技术对利福平耐药性检测总的阳性率和不同标本对利福平耐药性检测的阳性率均具有较好的一致性。     

GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌对利福平耐药假阳性与标本低水平荷菌量的关系

目的对GeneXpert MTB/RIF检测(简称"GeneXpert检测")结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平耐药性的临床应用进行综合评价,并探讨GeneXpert检测MTB对利福平耐药假阳性与临床标本低水平荷菌量的关系。方法收集2016年4月至2017年9月在西安市胸科医院就诊的2707例疑似肺结核患者的临床标本,其中痰标本1945例,肺泡灌洗液标本762例,同时进行GeneXpert检测、BACTEC MGIT 960液体培养(简称"MGIT 960法")及药物敏感性试验(简称"药敏试验"),并将GeneXpert检测MTB对利福平耐药的标本进行GenoType MTBDRplus检测(简称"MTBDRplus检测")。结果GeneXpert检测临床标本的阳性率为39. 8%(1077/2707),对利福平是否耐药不确定者有7例,荷菌量水平均为"极低"。以MGIT 960药敏试验结果为标准,GeneXpert检测MTB对利福平耐药的敏感度和特异度分别为89. 4%(135/151)和94. 7%(721/761)。两种检测方法判断MTB对利福平耐药不一致的结果共56例,其中GeneXpert检测MTB对利福平耐药而MGIT 960药敏试验检测为敏感的40例患者中,处于"极低"、"低"、"中等"和"高"4个菌量水平的患者分别为10例、6例、14例和10例。以MGIT960药敏试验检测结果为标准,4个菌量级别中,GeneXpert检测MTB对利福平耐药的假阳性率分别为58.8%(10/17)、16.7%(6/36)、19.2%(14/73)和20.4%(10/49),差异有统计学意义(χ~2=13.981,P<0.05)。对40例患者进行MTBDRplus检测,结果显示,标本荷菌量水平为"低"、"中等"和"高"的30例标本均为对利福平耐药,与GeneXpert检测结果完全一致。标本荷菌量水平为"极低"的10例标本中,有2例MTBDRplus检测阴性,8例阳性;检测阳性的8例中有5例对利福平敏感,3例对利福平耐药。结论GeneXpert技术检测MTB是否对利福平耐药具有较高的敏感度和特异度,但在检测样本荷菌量极低时,可能会出现假耐药的情况。     

基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值

目的 探讨基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值。 方法 收集2017年6月至2018年6月厦门大学附属第一医院肺科门诊及住院的933例疑似肺结核患者初诊时采集的同一份晨痰标本,同时进行基因芯片法、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和BACTEC MGIT 960液体培养及其比例法药物敏感性试验(简称“MGIT 960及其比例法药敏试验”)3种方法进行结核分枝杆菌及其耐药性检测,对检测结果进行对比分析。 结果 933例患者的痰标本中,基因芯片法检测出阳性484例,GeneXpert检测出阳性462例,MGIT 960培养出阳性411例。三种检测方法均为阳性的标本有395例,采用Excel表通过完全随机的方式抽取232例进行耐药性检测,以比例法药敏试验结果为参考标准,基因芯片法检测出异烟肼耐药的敏感度为86.67%(26/30),特异度为96.53%(195/202),一致性为95.26%(221/232),Kappa值为0.798(0.682~0.914);检测出利福平耐药的敏感度为93.75%(30/32),特异度为97.00%(194/200),一致性为96.55%(224/232),Kappa值为0.862(0.768~0.956);GeneXpert检测出利福平耐药的敏感度为84.38%(27/32),特异度为97.00%(194/200),一致性为95.26%(221/232),Kappa值为0.803(0.691~0.915);基因芯片法与GeneXpert对利福平耐药检测的一致性为96.12%(223/232),Kappa值为0.847(0.749~0.945)。Kappa值均大于0.75,具有良好的一致性。 结论 以MGIT 960及其比例法药敏试验结果为标准,基因芯片法敏感度、特异度和一致性高,与GeneXpert也具有良好的一致性,有助于结核病的早期诊断及防控。     

Evaluation of gene chips for the rapid diagnosis of drug-resistance genes in Mycobacterium tuberculosis

目的 探讨基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值。 方法 收集2017年6月至2018年6月厦门大学附属第一医院肺科门诊及住院的933例疑似肺结核患者初诊时采集的同一份晨痰标本,同时进行基因芯片法、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和BACTEC MGIT 960液体培养及其比例法药物敏感性试验(简称“MGIT 960及其比例法药敏试验”)3种方法进行结核分枝杆菌及其耐药性检测,对检测结果进行对比分析。 结果 933例患者的痰标本中,基因芯片法检测出阳性484例,GeneXpert检测出阳性462例,MGIT 960培养出阳性411例。三种检测方法均为阳性的标本有395例,采用Excel表通过完全随机的方式抽取232例进行耐药性检测,以比例法药敏试验结果为参考标准,基因芯片法检测出异烟肼耐药的敏感度为86.67%(26/30),特异度为96.53%(195/202),一致性为95.26%(221/232),Kappa值为0.798(0.682~0.914);检测出利福平耐药的敏感度为93.75%(30/32),特异度为97.00%(194/200),一致性为96.55%(224/232),Kappa值为0.862(0.768~0.956);GeneXpert检测出利福平耐药的敏感度为84.38%(27/32),特异度为97.00%(194/200),一致性为95.26%(221/232),Kappa值为0.803(0.691~0.915);基因芯片法与GeneXpert对利福平耐药检测的一致性为96.12%(223/232),Kappa值为0.847(0.749~0.945)。Kappa值均大于0.75,具有良好的一致性。 结论 以MGIT 960及其比例法药敏试验结果为标准,基因芯片法敏感度、特异度和一致性高,与GeneXpert也具有良好的一致性,有助于结核病的早期诊断及防控。     

DNA微阵列芯片法检测耐药结核分枝杆菌的临床应用价值研究

目的 评价DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌及其对异烟肼和利福平耐药的检测效能。 方法 收集2011年1月至2017年5月间在江苏省灌云县疾病预防控制中心登记的814例涂阳肺结核患者的痰标本。利用传统罗氏培养法及比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和DNA微阵列芯片法,同时对患者的痰标本进行结核分枝杆菌检测,并检测其对异烟肼和利福平的耐药情况;分别以传统罗氏培养及比例法药敏试验为标准,评价DNA微阵列芯片法的检测效能。 结果 DNA微阵列芯片法对涂阳肺结核患者的结核分枝杆菌检出率为86.1%(701/814),高于传统罗氏培养法的82.4%(671/814),差异有统计学意义(χ ²=6.81,P<0.05)。以传统罗氏培养法为标准,DNA微阵列芯片法检测涂阳患者结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为92.4%(620/671)和43.4%(62/143),Kappa=0.39,阳性预测值和阴性预测值分别为88.4%(620/701)和54.9%(62/113)。以药敏试验为标准,对有完整的异烟肼和利福平耐药检测结果的620例患者进行分析,DNA微阵列芯片法检测初治涂阳患者是否对异烟肼与利福平耐药的敏感度分别为78.7%(37/47)和84.6%(22/26),阳性预测值分别为69.8%(37/53)和73.3%(22/30);检测复治涂阳患者是否对异烟肼与利福平耐药的敏感度分别为71.9%(23/32)和89.3%(25/28),阳性预测值分别为85.2%(23/27)和89.3%(25/28)。 结论 DNA微阵列芯片法对结核分枝杆菌的检出率高于传统罗氏培养;对结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药性检测效果理想,具有较好的应用价值。     

三种检测技术诊断老年肺结核效能的比较研究

探讨结核分枝杆菌及利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(GeneXpert MTB/RIF)技术,发光二极管(light emitting diode,LED)荧光染色法和BACTEC MGIT 960系统液体培养(简称“MGIT液体培养”)诊断老年肺结核的价值。     

DNA实时荧光恒温扩增法在结核病临床检测中的应用价值

目的 分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)在结核病临床检测中的应用价值。 方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。 结果 以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法 (95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ ²值分别为47.437、43.654、29.467,P值均<0.001)。GeneXpert MTB/RIF法的ROC曲线下面积最大(0.910),随后依次为恒温扩增法(0.860)、FQ-PCR法(0.854)、SAT-RNA法(0.789)。恒温扩增法阳性的核酸标本用熔解曲线法检测利福平ropB耐药基因,原核酸和稀释5倍后核酸荧光检测的dt值(探测时间,detection time,1dt=1min)在26~30时,ropB基因的检出率分别为93.55%(29/31)和90.32%(28/31);dt值在15~25时,ropB基因的检出率分别为94.44%(34/36)和100.00%(36/36)。结论 通过与各种检测技术比较,恒温扩增法具有临床应用价值,并适用于基层医院的结核病诊断。