Glarea lozoyensis发酵生产棘白菌素类化合物纽莫康定的研究进展

棘白菌素化合物纽莫康定B0(pneumocandin B0)是抗真菌药物卡泊芬净(caspofungin)的前体。棘白菌素类化合物可以通过非竞争性抑制真菌细胞壁中的β-1,3-D-葡聚糖合成酶活性而抑制真菌细胞壁的合成。纽莫康定B0的生产菌是丝状真菌Glarea lozoyensis。本文从化学结构和生物合成的角度出发,总结了纽莫康定B0的研究进展,主要包括综述了纽莫康定化合物的化学多样性、生物合成途径、优良菌株的选育以及在发酵生产中所面临的工程问题等。     

产纽莫康定B0丝状真菌Filamentous fungus的菌种选育和发酵工艺优化

纽莫康定B0(pneumocandin B0,PB0)是由丝状真菌Filamentous fungus产生的次级代谢产物,可用于合成抗真菌药物卡泊芬净.为提高PB0的产量,对丝状真菌SIPI 2776菌株进行亚硝基胍(NTG)、60Co伽马射线(60Co-y)、紫外(UV)和常压室温等离子体(ARTP)等诱变,获得突变...     

纽莫康定杂质C0的制备研究

摘要：目的 为控制纽莫康定B0的质量及为卡泊芬净的杂质传递研究提供物料,本研究对关键杂质纽莫康定C0进行了制 备。方法 通过发酵液提取工艺富集、高压液相制备色谱、减压浓缩、冷冻干燥,制备得到纽莫康定C0干粉,并对其进行紫外 吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振、质谱等分析和结构鉴定。结果 得到了色谱纯度99.19%、峰纯度999.4(DAD 检测器)、热 重3.05%的纽莫康定C0干粉1.7395 g,其结构经过确证为纽莫康定C0。结论 制备得到的纽莫康定C0,可作为质量研究对照品和 杂质传递研究用物料,并对纽莫康定其他杂质的制备具有重要参考价值。     

前体及真菌诱导子对银杏悬浮培养细胞产生银杏内酯B的影响

目的：探索前体及真菌诱导子对银杏悬浮培养细胞产生银杏内酯B的影响。方法：通过向培养基中补加前体及真菌诱导子,考察它们对悬浮培养细胞生物量及银杏内酯B产量的影响。结果：于培养基中添加100 mg.L^-1异戊二烯及低浓度(10 mg.L^-1,50 mg.L^-1)的　牛儿醇能提高GKB的产量,分别比对照增加了69%,13.8%和11.4%。从10种真菌诱导子中筛选出效果较好的日本根霉诱导子,当添加浓度为5 mg GE.L^-1,诱导培养3 d时,悬浮细胞的GKB产量比对照增加约1倍。结论：在银杏悬浮细胞培养过程中,添加前体物质及应用真菌诱导子是提高银杏内酯B的有效手段之一。     

他克莫司对体外培养的大鼠树突状细胞成熟过程及其同种免疫刺激活性的影响(英文)

目的研究他克莫司对体外培养的大鼠树突状细胞(DC)成熟过程和同种刺激活性的影响。方法20只大鼠随机分为对照组、他克莫司、脂多糖(LPS)及LPS+他克莫司组,分别取骨髓细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4(IL-4)培养6d,收集贴壁细胞即DC。对照组不再加其他试剂,他克莫司组在开始培养时即加入他克莫司10μg·L-1,LPS组在细胞培养结束前18h加入LPS100μg·L-1,他克莫司+LPS组分别按上述要求加入他克莫司和LPS。用流式细胞术测定DC表面CD80和CD86的表达,ELISA方法检测其培养上清IL-12的浓度,用混合淋巴细胞培养法观察其对同种T细胞的刺激能力。结果与对照组比较,LPS刺激后,DC表面CD80和CD86表达明显增加,培养上清中IL-12浓度升高,其刺激同种T细胞的能力增强。与对照组和LPS组比较,他克莫司可使DC表面CD80和CD86表达明显降低,IL-12分泌减少,刺激同种T细胞的能力减弱。结论他克莫司可抑制体外培养的DC成熟及其同种刺激活性。     

组织蛋白酶B对自发性高血压大鼠胸腺细胞凋亡的影响(英文)

目的:本实验研究自发性高血压大鼠胸腺机能异常的机制。方法:用原位杂交确定蛋白酶B的表达位置,Northern杂交分析组织蛋白酶B的表达水平,用TUNEL和流式细胞仪分别检测胸腺细胞的凋亡情况。结果:在离体和在体水平,胸腺组织蛋白酶B的表达与胸腺细胞凋亡伴行,在胸腺细胞的胞浆中检测到组织蛋白酶B的转录产物在6周和8周的自发性高血压大鼠胸腺中的表达高于WKY大鼠。结论:自发性高血压大鼠的胸腺细胞凋亡增加,与组织蛋白酶B的表达相关。     

前益母草素(prehispanolone)对小鼠T,B淋巴细胞的影响

用[~3H]-thymidine参入法表明:益母草半日花烷型双环二萜——前益母草素(prehi-spanolone,LC-5504)对由Con A活化的T淋巴细胞有较强的促进增殖作用。其作用是单独使用Con A的5～8倍。实验研究提示,前益母草素能够增强机体的细胞免疫功能。     

前益母草素(prehispanolone)对小鼠T,B淋巴细胞的影响

用[³H]-thymidine参入法表明:益母草半日花烷型双环二萜——前益母草素(prehi-spanolone,LC-5504)对由Con A活化的T淋巴细胞有较强的促进增殖作用。其作用是单独使用Con A的5～8倍。实验研究提示,前益母草素能够增强机体的细胞免疫功能。     

不同因素对O型血孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价及新生儿溶血病发生率的影响

目的 探讨不同因素对O型血孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价及新生儿溶血病(HDN)发生率的影响.方法 回顾性分析2019年1月至2020年6月进行产检(分娩后采集数据)的O型血孕妇283例及其新生儿作为本次的研究样本,采用微柱凝胶法检测孕妇血清ABO抗原和IgG抗体效价,并统计HDN的发生情况.对HDN发生率与血清Ig...     

四氧嘧啶对离体小鼠胰岛B细胞电活动的影响(英文)

记录细胞内电位发现四氧嘧啶具有激活和毒化胰岛B细胞的双相作用。在无或2.75mmol·L~(-1)葡萄糖时四氧嘧啶使B细胞膜去极化并诱发短暂的能被ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪阻断的放电;在葡萄糖5.5或11.0mmol·L~(-1)时作用减轻或不明显。提示四氧嘧啶的激活作用与关闭ATP敏感的钾通道有关,而高葡萄糖能保护B细胞免受四氧嘧啶的损伤。     

应用神经网络和遗传算法优化利福霉素B发酵培养基

对培养基进行优化时，会获得大量的实验数据，但这些实验数据往往不能被进一步利用。如果使用一些不同的方法对历史数据进一步挖掘就可能得出额外的规律。本文使用神经网络对历史数据进行处理，得到了利福霉素B培养基成份和发酵效价之间的关系；再以这个关系作为遗传算法的适应度函数，在一个相对大的空间内快速搜索最优解。优化的培养基使摇瓶发酵效价提高了17．9％，说明所建立的模型能够实现培养基优化的目的并具有数据挖掘的功能。     

海洋小单孢菌FIM02523产rakicidin B发酵工艺研究#br#

目的 提高海洋小单孢菌FIM02523发酵液中的生物活性成分rakicidin B含量。方法 采用单因素实验、正交设计实验等方法优化发酵培养基组成比例及培养条件。结果 确定了最优rakicidin B发酵培养基：可溶性淀粉4.0%,蔗糖1.0%,大豆蛋白胨1.0%,酵母粉2.0%,甘氨酸0.1%,NaCl 0.5%,MgSO4 0.05%,CaCO3 0.5%;最优摇瓶发酵条件：发酵周期为120h,接种量5.0%,500mL摇瓶装量100mL,摇床转速220r/min,发酵温度30℃,培养基初始pH值为7.5。结论 优化后发酵工艺rakicidin B的发酵效价较初始工艺提高了约7.3倍。     

Optimization of fermentation conditions for the production of epothilone B

Epothilone is a macrolide secondary metabolite which has the same anticancer effect as paclitaxel. Based on a series of single‐factor experiments, four factors, temperature, initial pH, rotation speed, and inoculum quantity, which have the greatest influence on yield, were determined. Four factors were designed and orthogonal experiments were carried out to optimize the fermentation conditions. Finally, the best experimental conditions were obtained as follows: 250 ml flapper triangular flask was used. The yield of epothilone B was 39.76 mg/L at 30℃, initial pH = 7.4, rotating speed 200 r/min, inoculation amount 10%, liquid loading amount 50 ml/250 ml, fermentation time 6 days and seed age 60 hr.     

A-40926混合物中B0组分的分离纯化

目的 开发一种高纯度A-40926混合物中B0组分(以下简称A-40926 B0)的分离纯化工艺。方法 采用中压色谱系统,以聚合物微球为载体,A-40926 B0的收率为指标,筛选聚合物微球的类型,优化洗脱条件。结果 型号为UniPS30-300的微球为最佳层析介质,上样量为10mg(每毫升填料),洗脱剂依次为体积分数30%,45%的乙醇溶液,流速为1.5BV/h(BV：层析柱体积);所得产品纯度大于95%,层析总收率大于75%。结论 此种高纯度A-40926 B0的分离纯化方法简单易行,收率稳定,适于工业化生产。     

Antibacterial activity of the enniatin B,produced by Fusarium tricinctum in liquid culture,and cytotoxic effects on Caco-2 cells

The enniatins (ENs) are bioactive compounds of hexadepsipeptidic structure produced by several strains of Fusarium sp. The EN B was purified from extracts of Fusarium tricinctum growth on liquid culture of potato dextrose broth (PDB), using a semipreparative liquid chromatography (LC) followed by an analytical LC. The purity and the structure of the isolated compound were confirmed by the determination of the extinction coefficient and with electrospray ionization–mass spectrometry (ESI-MS) study.

The pure fraction of EN B was utilized to determine the antibiotic effects on several bacterial strains that are considered normally pathogens of the intestinal tract: Escherichia coli, Enterococcus faecium, Salmonella enterica, Shigella dysenteriae, Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolitica, Clostridium perfringens, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus, and to study the cytotoxic effects on Caco-2 differentiated and undifferentiated cells.

The results obtained demonstrated that in several antibiograms, EN B induced the inhibition of the grown microorganisms tested and no significant differences over control were detected when Caco-2 cells were exposed to EN B, at any of the concentrations used.     

一株海洋真菌产青霉酸的发酵优化研究

目的 对一株海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6的青霉酸代谢产物进行发酵优化,以期获得足量的化合物研究青霉酸对水稻纹枯病菌的拮抗性。方法 采用正交实验设计对真菌HK1-6产青霉酸的土豆液体培养基进行优化,采用高效液相色谱法对青霉酸产量进行定量分析。结果 研究表明,真菌HK1-6高产青霉酸的土豆液体培养基各因素最优水平为葡萄糖30 g,土豆200 g,海盐10 g,pH为4,产量可达0.908 g/L,而原发酵条件下青霉酸产量约为0.423 g/L。结论 真菌HK1-6采用最优土豆液体培养基发酵后,青霉酸的产量显著提高,产量较原培养条件提高约2.1倍。     

In vitro and in vivo anti-tumour effects of MPT0B014, a novel derivative aroylquinoline,and in combination with erlotinib in human non-small-cell lung cancer cells

BACKGROUND AND PURPOSE

The purpose of the current study was to assess a novel anti-cancer drug, MPT0B014, which is not a substrate for the P-glycoprotein (P-gp) transporter, alone and in combination with erlotinib, against human non-small cell lung cancer (NSCLC).

EXPERIMENTAL APPROACH

Cytotoxicity in human NSCLC cell lines was assessed by sulforhodamine B and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assays. Cell cycle phase distributions were estimated with FACScan flow cytometry. Protein expression was detected by Western blotting analysis. Efflux of rhodamine 123 or calcein-acetoxymethylester was used to study the P-gp profile. The A549 xenograft model in mice was used to assess in vivo anti-tumour activity.

KEY RESULTS

MPT0B014 showed potent anti-proliferative activity against A549, H1299 and H226 cells. It induced G2/M arrest with down-regulation of Cdc (Tyr15) and Cdc25C, and up-regulation of cyclin B1, phospho-Cdc2 (Thr161) and Aurora A/B. P-gp-overexpressing National Cancer Institute/Adriamycin-Resistant cells were also sensitive to B014. B014-induced loss of Mcl-1 was accompanied by activation of caspases-3, -7, -8 and -9, and initiation of apoptosis. B014 in combination with erlotinib caused significant tumour inhibition in vitro and in vivo.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

MPT0B014 exerted cytotoxicity against human NSCLC cell lines with little susceptibility to P-gp. Combined with the EGF receptor inhibitor, erlotinib, MPT0B014 exerted significant growth inhibition of A549 cells both in vitro and in vivo. B014 could be useful as an anti-cancer agent.     

重型乙型肝炎血清铁蛋白水平分析

目的探讨重型乙型肝淼患者血清铁虿自（SF）水平与肝脏损害程度的关系,以及sF水平变化在判断预后等方面的临床意义。方法应用放射免疫法（mA）检测62例重型乙型肝炎患者sF,并与急、慢性乙型肝炎患者乙型肝炎肝硬化患者健康人sF水平进行对比研究。结果重型乙型肝炎患者sF显著高于急、慢性乙型肝炎乙型肝炎肝硬化患者及健康人sF。重型乙型肝炎患者sF水平与T—Bil、PT、TBA呈显著正相关,与A1b、ALT、AST、CHE呈显著负相关。重型乙型肝炎死亡患者sF水平显著高于存活者;存活者,随着病情逐渐好转,sF逐渐下降;死亡者随着病情逐渐恶化,sF逐渐升高。结论重型乙型肝炎患者sF水平与肝损害程度呈平行关系,肝细胞损害程度越严重,sF升高越明显;动态测定sF水平有助于判断重型乙型肝炎患者肝脏损害程度和预后。