Rakicidin B1发酵提取液活性炭脱色工艺的研究

目的 研究rakicidin B1发酵提取液的脱色工艺条件,提高纯化后rakicidin B1样品的质量。方法 以UV和HPLC为检测方法,以脱色率和rakicidin B1保留率为指标,先通过单因素实验考察活性炭用量、脱色时间、脱色温度以及pH值对指标的影响。在单因素基础上,采用4因素3水平正交试验分析各因素与两个指标的关系。结果 Rakicidin B1发酵提取液采用活性炭脱色最佳条件为活性炭用量0.5%、脱色时间40min、脱色温度50℃、pH7.0,在该条件下活性炭脱色率达74.53%,rakicidin B1保留率为85.66%。结论 该脱色工艺简单可靠,脱色效果较好,适合于工业化生产。     

抗MRSA海洋小单孢菌AM105发酵工艺的优化

从南海海域红树林根际淤泥中分离获得一株能有效抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的海洋小单孢菌AM105。以AM105为出发菌株,对其液体发酵工艺进行了研究。实验考察了碳源、氮源、盐度、无机盐、pH值及接种量等对AM105产抗生素的影响,并通过正交实验对培养基配比进行了优化。优化发酵条件下,5L发酵罐发酵6 d时发酵液抑菌圈直径可达36.5 mm。     

产纽莫康定B0丝状真菌Filamentous fungus的菌种选育和发酵工艺优化

纽莫康定B0(pneumocandin B0,PB0)是由丝状真菌Filamentous fungus产生的次级代谢产物,可用于合成抗真菌药物卡泊芬净.为提高PB0的产量,对丝状真菌SIPI 2776菌株进行亚硝基胍(NTG)、60Co伽马射线(60Co-y)、紫外(UV)和常压室温等离子体(ARTP)等诱变,获得突变...     

海洋小单孢菌株产抗肿瘤新化合物FW05-0328-1的诱变#br# 选育及发酵工艺研究

目的 获得抗肿瘤化合物FW05-0328-1高产菌株,提高其发酵产量。方法 采用紫外(UV)及常压室温等离子体技术(ARTP)复合诱变筛选化合物FW05-0328-1高产菌株,结合高产菌株摇瓶发酵特性,优化100L全自动发酵罐发酵工艺。结果 获得1株高产FW05-0328-1菌株Micromonospora sp. FIM0O123,其在100L全自动发酵罐发酵效价达187.3mg/L,较原始菌株提高了17倍。结论 高产菌株的筛选及100L全自动发酵罐发酵工艺优化能有效提高化合物FW05-0328-1产生能力。     

海洋小单孢菌株产抗肿瘤新化合物FW05-0328-1的诱变#br# 选育及发酵工艺研究

目的 获得抗肿瘤化合物FW05-0328-1高产菌株,提高其发酵产量。方法 采用紫外(UV)及常压室温等离子体技术(ARTP)复合诱变筛选化合物FW05-0328-1高产菌株,结合高产菌株摇瓶发酵特性,优化100L全自动发酵罐发酵工艺。结果 获得1株高产FW05-0328-1菌株Micromonospora sp. FIM0O123,其在100L全自动发酵罐发酵效价达187.3mg/L,较原始菌株提高了17倍。结论 高产菌株的筛选及100L全自动发酵罐发酵工艺优化能有效提高化合物FW05-0328-1产生能力。     

橄榄星小单孢菌发酵培养基及发酵条件的优化

本文对产福提霉素的橄揽星小单抱菌H3—25进行发酵培养基和发酵条件的优化,确定了发酵培养基的适宜配比为：可溶性淀粉4％。葡萄糖1％,酵母粉4％,硫酸镁0．1％．碳酸钙0．1％,氯化钴2μg·L^-1,甘氨酸0．1％;最佳发酵条件为：初始pH7．0,培养温度32℃,移种时间36h,移种量10％,摇瓶装量50mL／250mL,发酵周期8乩     

Rakicidin B药动学和安全性初步研究

目的 对海洋微生物来源的化合物rakicidin B开展药动学和安全性初步评价。方法 采用静脉和口服给药初步研究rakicidin B的药动学和急性毒性。鼠伤寒沙门菌回复突变试验检测rakicidin B的遗传毒性。结果 SD大鼠口服给予5.0mg/kg rakicidin B后血浆中基本检测不到药物;SD大鼠静脉0.2mg/kg,Cmax为490.67ng/mL,AUC(0~0.083)为376.07h·ng/mL;rakicidin B口服毒性低,大鼠口服最大耐受量MTD大于1000mg/kg;静脉毒性MTD大于1.0mg/kg;rakicidin B在本试验所确定的125μg/皿剂量范围内,对鼠伤寒沙门菌回复突变(Ames)标准试验菌株无明显致突变性。结论 Rakicidin B总体安全性好,无急性毒性作用及无遗传毒性。研究结果为rakicidin B进一步的临床前试验研究提供参考。     

应用响应面法优化rakicidin B的提取工艺

目的 建立小单孢菌FIM02523菌液中rakicidin B组分安全有效的提取方法。方法 在单因素试验以及稳定性研究的基础上，选取三因素三水平，采用Box-Behnken响应面法优化设计确定rakicidin B组分最佳提取条件。结果与结论 对rakicidin B提取率的主要影响因素依次为提取次数、料液比和提取溶剂的体积百分比浓度。优化修正后的提取条件为：常温下(4~40℃)、pH值6~7.5、提取溶剂为90%乙醇溶液、料液比1:3(V/V)、提取时间0.5h和提取次数2次，rakicidin B总提取率达到98.58%。     

Rakicidin B1酯化衍生物的体外抗肿瘤和抗菌活性

抗菌活性。方法 以rakicidin B1为原料,经与不同的氯甲酸酯反应,再经水洗、制备、冻干制得目标化合物,其结构经1H NMR,HR-ESI-MS确证。结果 对酯化反应的4个衍生物进行体外抗肿瘤及抗菌活性测定,结果表明,化合物1~4对常氧和乏氧培养下的人结肠癌细胞HCT-8和人胰腺癌细胞PANC-1均具有较好的体外抑制作用;总体上看化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、艰难梭菌和万古霉素耐药粪肠球菌等10株革兰阳性菌活性均低于对照品,活性较弱。结论 化合物1和3对人结肠癌细胞HCT-8和人胰腺癌细胞PANC-1具有较强的乏氧抗肿瘤活性,可作为新型的抗癌备选药物进行进一步研究。     

海洋小单孢菌来源的轻快菌素BFW523-3的体外抗肿瘤活性

目的考察轻快菌素B FW523-3的体外抗肿瘤活性。方法采用MTT比色分析法、流式细胞法和高内涵药物筛选的方法检测FW523-3对肿瘤细胞株细胞生长、细胞周期、肿瘤细胞骨架蛋白、线粒体膜电位的影响。结果FW523-3对肿瘤细胞株K562、L929的生长有明显抑制作用,IC50分别为500和400ng/ml。FW523-3处理后的K562肿瘤细胞阻滞在G0/G1期。FW523-3使L929肿瘤细胞的细胞核大小、细胞骨架纤维状肌动蛋白F-Actin量、线粒体膜电位明显减少。结论FW523-3有显著抗肿瘤活性。     

红霉素发酵培养基优化研究

对红霉素发酵培养基进行了优化，选用A粉和B粉代替原工艺中的淀粉及部分葡萄糖和豆饼粉。采用正交试验设计方法。确定最佳发酵培养基配方，并考察了中间补料方案。经10吨发酵罐连续8批验证，平均发酵效价提高6．11％，产品质量全部合格。原材料消耗成本可降低20％以上。     

培养基优化设计提升多拉菌素生物发酵水平

运用响应面法优化了多拉菌素生产菌的发酵培养基。首先通过单因素实验发现正效应因子;接着采用Plackett-Burman(P-B)设计确定了黄豆饼粉、麦芽糊精和MgSO4是影响多拉菌素产量的显著因素;然后利用最陡爬坡试验分别找到3个因素的合理浓度范围;并进一步利用中心组合设计优化了黄豆饼粉、麦芽糊精和MgSO4的最佳浓度配比。筛选并优化得到了最适的培养基浓度为黄豆饼粉17.30g/L,麦芽糊精77.30g/L,MgSO4     

抗艰难梭菌rakicidin B1新衍生物的设计、合成及生物学活性评价

目的 以rakicidin B1为起始原料,经2步反应合成得到4个全新结构的rakicidin B1衍生物,并对其进行生物学活性研究,以期获得低细胞毒、高效抗艰难梭菌活性的化合物。方法 课题组前期首次发现rakicidin B1具有较强的抗艰难梭菌活性,在其结构基础上进行修饰和优化,通过氨基甲酸酯连接基团引入含氮杂环,设计合成得到4个全新目标化合物。所有化合物结构经高分辩质谱和核磁确证,并经抗艰难梭菌活性测试和细胞毒性活性测试。结果 在合成的4个化合物中,有3个化合物具有与先导化合物更强或相当的抗艰难梭菌活性;同时,MTT测试结果表明,3个化合物的细胞毒性降低,以3b的细胞毒性降低最多。结论 通过对rakicidin B1母核结构进行修饰和优化,获得全新结构的rakicidin B1衍生物并对其进行抗菌和细胞毒活性筛选。其中,化合物3b保留潜在抗艰难梭菌活性且细胞毒性降低最多,作为全新结构类型的抗艰难梭菌活性化合物,有潜在的开发价值。     

培养基优化设计提升多拉菌素生物发酵水平

运用响应面法优化了多拉菌素生产菌的发酵培养基。首先通过单因素实验发现正效应因子;接着采用Plackett-Burman(P-B)设计确定了黄豆饼粉、麦芽糊精和MgSO4是影响多拉菌素产量的显著因素;然后利用最陡爬坡试验分别找到3个因素的合理浓度范围;并进一步利用中心组合设计优化了黄豆饼粉、麦芽糊精和MgSO4的最佳浓度配比。筛选并优化得到了最适的培养基浓度为黄豆饼粉17.30g/L,麦芽糊精77.30g/L,MgSO4 1.50g/L,基于此,效价达到了589.43mg/L,验证实验结果与模型预测基本吻合,优化后的培养基工艺能够提升多拉菌素发酵单位20.37%。5L反应罐上发酵过程生理代谢参数变化表明：优化的培养基能够加促菌体的比生长速率,维持较高的氧消耗速率和产物合成速率,大幅度提升了多拉菌素的发酵生产效率。