p,p’-DDE对大鼠睾丸支持细胞抑制素B表达的影响

目的研究p,p’-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞细胞内抑制素B的影响。方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,在细胞毒性试验的基础上确定受试物的剂量,以RT-PCR方法定量抑制素B在不同剂量受试物作用下的变化情况。结果p,p’-DDE中、高浓度组与溶剂对照组和低浓度组比较差异均有显著性(P<0.05)。抑制素B的灰度值随着p,p’-DDE浓度的增高逐渐降低,呈剂量依赖关系。结论p,p’-DDE对大鼠睾丸支持细胞分泌抑制素B表达可能存在着抑制作用。     

p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响

目的 研究p,p‘-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响.方法 通过离体培养SD大鼠支持细胞的四甲基偶氮唑盐(MTT)实验,确定后续实验的染毒剂量,p,p‘-DDE和β-BHC的染毒浓度均为10、30、50μmol/L,p,p‘-DDE β-BHC联合染毒浓度为10μmol/L p,p‘-DDE 10μmol/L β-BHC,30μmol/L p,p‘-DDE 30μmol/L β-BHC,50μmol/Lp,p‘-DDE 50μmol/L β-BHC,检测染毒后支持细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 50μmol/L的p,p‘-DDE、β-BHC均可使支持细胞的吸光度(A)值显著下降(P＜0.05).睾丸支持细胞LDH的漏出率随染毒浓度的增加而明显增加(P＜0.05),二者以不同浓度联合染毒时支持细胞LDH的漏出率均显著高于对应浓度的单独染毒(P＜0.05).不同浓度的p,p‘DDE、β-BHC及二者联合染毒均可使细胞内总SOD活力显著降低(P＜0.05)、MDA的含量增加(P＜0.05),且联合染毒时MDA的含量与二者单独染毒时相比均有显著增加(P＜0.05).结论 p,p‘-DDE、β-BHC单独和联合作用均可以引发睾丸支持细胞脂质过氧化,p,p‘-DDE和β-BHC对支持细胞的联合毒性作用具有一定的协同效应.     

p，p＇-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响

[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物（p，p＇-DDE）和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞（sertoli cell）FasL mRNA表达及NF—κB活性的影响。[方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d，以DMSO为溶剂对照，分别以终浓度为10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h，应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达；用激光共聚焦显微镜检测NF—κB的转位激活状况。[结果]10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后，FasL mRNA表达升高，50μmol／L剂量组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义（P〈0．05）；NF-κB活性明显增强。[结论]支持细胞经p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒后，FasL mRNA表达明显升高，NF—κB的活性随染毒剂量的增加而增强，且联合作用比单独作用更加明显。     

孕产妇血清中p,p’-DDE暴露水平及其影响因素

目的研究孕产妇血清中p,p’-DDE暴露水平并对其影响因素进行分析。方法于2010年选择某市一所医院妇产科的300名孕产妇作为研究对象,测定孕产妇静脉血清中p,p’-DDE的含量,并对相关影响因素开展问卷调查。结果p,p’-DDE在孕产妇血清中的检出率为89.47%(221/247),Speaman分析表明孕产妇BMI和年龄与其静脉血清中p,p’-DDE的含量呈正相关,且差异有统计学意义(P<0.05);多因素分析结果提示:孕产妇的年龄每增加1岁和体质指数(BMI)每增加1 kg/m2,孕妇血清中p,p’-DDE的含量分别相应增加29.01 ng/g(以脂计)和23.73 ng/g(以脂计),有妊娠史的孕产妇比无妊娠史的孕产妇静脉血中p,p’-DDE的含量低161.64 ng/g(以脂计)。结论孕产妇年龄的增加及BMI的增高可能会导致静脉血清中p,p’-DDE暴露水平的升高;有妊娠史的孕产妇血清中的p,p’-DDE含量可能较无妊娠史的孕产妇低。     

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在p,p’-DDE致青春期雄性大鼠生殖功能障碍中的作用

目的探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在p,p’-DDE对大鼠睾丸生精细胞脂质过氧化及诱导生精细胞凋亡中的作用。方法将20只健康清洁级50日龄雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组及低(20 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量p,p’-DDE染毒组,每组5只。采用腹腔注射方式染毒,注射容积为10ml/kg,每隔1 d染毒1次,连续进行10 d。测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)的含量。采用Western blotting方法和检测大鼠睾丸组织PHGPx蛋白相对表达情况,采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)测定大鼠睾丸组织PHGPx及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated protein X,Bax)、细胞色素C(Cyt C)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达水平。结果与对照组相比,60 mg/kg p,p’-DDE染毒组血清SOD、GSH-Px活力和睾丸组织PHGPx蛋白表达水平均降低,100 mg/kg p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织中PHGPx、Cyt C、Apaf-1 mRNA表达水平和60 mg/kg p,p’-DDE染毒组Caspase-3 mRNA表达水平较高,60 mg/kg、100 mg/kg p,p’-DDE染毒组Bax mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PHGPx在p,p’-DDE所致男(雄)性生殖功能紊乱中起拮抗作用。     

p,p′-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞MAPK通路的影响

目的　研究p ,p′ DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞内信号转导通路的影响。方法　从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养 ,以SABC方法来检测细胞内p ERK的表达。结果　发现支持细胞细胞内p ERK随p,p′ DDE剂量的增高而染色加深 ,而且胞浆胞核都表达。结论　p ,p′ DDE可导致支持细胞内ERK磷酸化 ,诱导ERK下游通路的激活 ,从而影响到基因的转录和表达。     

活性氧在P，P’-DDE诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

[目的]研究活性氧在2,2-双-（对氯苯基）-1,1-二氯乙稀（P,P’-DDE）诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用。[方法]从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养3d,用0、10、30、50μmol／L的p,p＇-DDE及加有300μmol／L的抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）的P,P’-DDE（50μmol／L）继续培养24h,应用流式细胞仪测定细胞内活性氧（ROS）水平、线粒体膜势能（Aym）、凋亡发生率。[结果]50μmol／L的P,P’-DDE可以诱导支持细胞ROS显著升高,10、30、50μmol／LP,P’-DDE处理组的线粒体膜势能下降,30、50μmol／L的P,P’-DDE可以诱导支持细胞凋亡,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;NAC有效抑制了ROS升高,削弱线粒体膜势能下降,减少了凋亡发生率,与50μmol／L的P,P’-DDE处理组相比,差异有显著意义（P〈0．05）。[结论]P,P’-DDE可以诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,ROS产生可能是其重要原因之一。     

p,p'-DDE对大鼠睾丸支持细胞细胞外信号调节激酶转导通路影响的机制研究

目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)内的细胞外信号调节激酶(ERK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路影响机制.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,分别以0、10、30、50μmol/L的p,p'-DDE染毒,用MTT比色法、SABC法和Western ...     

氟对人胚肝细胞DNA损伤及p53蛋白表达影响

过量氟不仅可引起大鼠肝、脑细胞DNA损伤[1-2],而且可以诱导细胞凋亡[3].为探讨过量氟可导致人胚肝细胞(L-02细胞)DNA损伤及影响p53表达,本研究采用不同浓度的氟化钠对L-02细胞进行体外染毒,观察过量氟对L-02细胞DNA的损伤作用及其对p53表达的影响,并探讨DNA损伤与p53表达之间的关系.     

氟致人胎肝细胞DNA损伤及其对细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的　研究氟对L 0 2细胞DNA的损伤作用及其对细胞凋亡和p5 3表达的影响 ,并探讨p5 3表达与细胞凋亡之间的关系。方法　体外培养的L 0 2细胞分别接触 0、4 0、80、1 6 0 μg ml氟化钠 (对照组、A、B、C组 ) 2 4h后 ,检测L 0 2细胞DNA损伤率、细胞凋亡百分率和p5 3蛋白表达水平。结果　染氟各组细胞DNA损伤率均明显高于对照组 (P <0 0 5 )。与对照组相比 ,B组和C组细胞凋亡百分率明显升高 (P <0 0 5 )。B组和C组细胞p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1 )。结论　氟可导致L 0 2细胞DNA损伤率上升 ,诱导细胞凋亡和p5 3表达 ,并且随着氟浓度的升高 ,细胞凋亡率和p5 3蛋白的表达量均随之升高     

p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞转铁蛋白表达的影响

目的研究P,P'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞转铁蛋白表达的影响.方法对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养,运用一步法RT-PCR检测给与P,P'-DDE后24 h支持细胞转铁蛋白mRNA水平.结果睾丸支持细胞转铁蛋白mRNA水平随P,P'-DDE所给剂量的增高而降低,且与对照组差异存在显著性(P＜0.05),呈剂量依赖关系.结论P,P'-DDE 可抑制睾丸支持细胞转铁蛋白的基因转录,从而抑制其合成,导致精子发生障碍和生殖功能紊乱.     

化学合成小干扰RNA体外转染大鼠支持细胞的实验研究

目的:观察化学合成siRNA阻断大鼠支持细胞内源性基因表达的可行性,并优化转染条件。方法:体外取SD大鼠睾丸,分离、培养支持细胞,应用化学合成的不同浓度siRNA在阳离子脂质体Lipofectamice TM 2000介导下转染原代支持细胞。RT—PCR检测大鼠支持细胞中GAPDH mRNA水平的变化,MTT法检测支持细胞的活性。结果:转染终浓度为150nmol/L的siRNA能特异性有效的阻断GAPDH基因的表达,细胞毒性随浓度提高而增强,终浓度为200nmol/L的siRNA对细胞有明显毒性。结论:siRNA能在大鼠支持细胞内启动RNA干扰,150nmol/L的siRNA能特异有效地阻断内源基因表达并保持较高的细胞活性。     

Fas／FasL参与热诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的调控

目的：探讨睾丸局部加热致大鼠睾丸生精细胞凋亡及Fas/FasL信号通路在生精细胞凋亡调控中的作用。方法16只成年SD雄性大鼠随机均分为加热组和对照组。加热组进行大鼠睾丸43℃水浴15 min;对照组行大鼠睾丸22℃水浴15 min。24 h后进行灌流和内固定,取睾丸。制作5μm的组织切片,采用睾丸原位末端标记法（TUNEL）和免疫组化分析,检测生精细胞凋亡及 Fas 和 FasL 表达。化学发光法检测大鼠血清睾酮水平。结果加热组睾丸生精细胞凋亡率（15.8％±1.6％）较对照组（2.2％±0.5％）显著增加;加热后Fas和FasL在生精细胞和支持细胞表达水平也明显升高;对照组和加热组血清睾酮（T）水平无差异。结论睾丸局部加热诱导生精细胞凋亡,Fas和FasL系统为该凋亡过程的信号通路之一。     

氯化饮水有机提取物诱导人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与RAS基因表达的研究

目的　研究武汉市主要水源D湖氯化饮水有机提取物对人胚肝细胞 (L 0 2 )DNA损伤与RAS基因表达的诱导 ,探讨氯化饮水有机提取物诱导遗传损伤的分子机制。方法　以L 0 2细胞作为靶细胞 ,应用单细胞凝胶电泳试验 (SCGE)测定DNA链断裂及用原位杂交试验 (ISH)测定RAS基因表达。氯化饮水有机提取物设 0 16 7、1 6 7、16 7、16 7水样ml ml培养液 4个剂量 ,DMSO(10ml L)为溶剂对照 ,B(a)P(2 0 0 μmol L)为阳性对照。结果　与溶剂对照相比 ,氯化饮水有机提取物在较高剂量组 (16 7和 16 7L L水样培养液 )能引起DNA链断裂程度的明显增加 ;不同浓度的氯化饮水有机提取物均可使RAS基因表达水平明显增加。氯化饮水有机提取物在 0 16 7、1 6 7、16 7L L水样培养液的浓度范围内 ,其RAS基因表达水平和DNA迁移度呈高度正相关 (r=0 99)。结论　氯化饮水有机提取物可诱导L 0 2细胞DNA损伤与RAS基因表达 ,RAS基因表达水平可能与DNA损伤程度有关     

镉致大鼠前体精原干细胞-支持细胞共培养系损伤的形态变化

[目的]通过对大鼠前体精原干细胞．支持细胞共培养系进行镉染毒,探讨镉对前体精原干细胞和支持细胞共培养系早期效应的形态学变化。[方法]从3天龄的SD大鼠睾丸中分离前体精原干细胞和支持细胞并进行24h共培养后,再分别给予0、2．5、5．0、10．0、20．0μmol／L的氯化镉（CdCl2）染毒12h,然后用碱性磷酸酶和油红O染色分别鉴定前体精原干细胞和支持细胞,观察不同细胞的形态,并用原位末端标识法（TUNEL方法）进行细胞凋亡的原位检测。[结果]2．5μmol／LCdCl2染毒未显著改变共培养中精原干细胞和支持细胞的形态。5．0μmol／L以上浓度CdCl2染毒可致支持细胞（由油红O染色确认）的结构呈现明显变化,具有浓度依赖趋势,用TUNEL法检测发现前体精原干细胞和支持细胞均发生凋亡,和对照组相比差别有统计学意义。[结论]CdCl2染毒12h可诱导支持细胞的形态改变,以及前体精原干细胞和支持细胞的凋亡。     

DDT induces DNA damage in blood cells. Studies in vitro and in women chronically exposed to this insecticide

In this study, DDT-induced DNA damage on blood cells was analyzed both in vitro and in vivo. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from healthy donors and incubated in the presence of three different concentrations (40, 80, and 100 microg/mL) of p,p'-DDT, p,p'-DDE, and p,p'-DDD at three different treatment times (24, 48, and 72 h). Then, DNA damage was assessed by the single-cell electrophoresis assay (comet assay) as well as by flow cytometry detection of hypodiploid cells (DNA content assay). All compounds induced significant DNA damage as shown by the comet assay. Accordingly, cells exposed to DDT, DDE, and DDD showed a significant increase in the percentage of hypodiploid cells compared with untreated PBMC. In agreement with the in vitro data, a significant correlation between blood levels of DDT, DDD, and DDE and DNA damage (comet assay) was found in women with different amounts of environmental exposure. This association remained significant after controlling for nutritional status, smoking habits, alcohol ingestion, and reported exposure to other pesticides. Although the precise biological importance remains to be explained, our results strongly suggest that DDT and its metabolites are able to induce DNA damage in PBMC both in vitro and in vivo.     

Hypergravity induces phosphorylation of p53 at serine 15, but not an expression of p53-downstream genes

We investigated the p53 signaling pathway induced by hypergravity in the human glioblastoma cell line A172. Hypergravity (20 x g) induced the accumulation of p53 and the phosphorylation of p53 at Ser-15. The phosphorylation of p53 with hypergravity was not inhibited by wortmannin, the PI3-kinase inhibitor. This indicated that the p53 signal pathway induced by hypergravity is different from other p53 signal pathways, such as that of the DNA damage signal. Hypergravity did not induce an expression of the genes Waf-1 or Bax, located downstream from p53. We also examined the expression of genes with hypergravity by using a DNA microarray containing oligo DNA from 30,000 human genes. Hypergravity (20 x g, 6 h) did induce the expression of some genes concerned with the cell signaling pathway and cytoskeleton of the cell, but not any of the p53-downstream genes. DNA microarray revealed the induction of many genes to enable the cells to adapt to the hypergravity environment.     

辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞DNA损伤、细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

目的研究辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)DNA的损伤作用及其对氧化损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达的影响。方法 Percoll离心法分离培养大鼠BMSCs,正常传代。取第3代BMSCs,调整细胞密度为1.0×106/瓶,当细胞至亚融合状态,分别以0(对照)、0.2、2和20μg/L的辛硫磷浓度染毒24h。采用MTT法检测BMSCs的存活率,分光光度比色法检测BMSCs超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,单细胞凝胶电泳检测BMSCs的DNA损伤,流式细胞术检测大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率,Western blotting检测BMSCs的P53蛋白表达水平。结果与对照组相比,0.2～20μg/L辛硫磷染毒24h,可诱发大鼠BMSCs的DNA损伤,且具有剂量-效应关系;各染毒组大鼠BMSCs的存活率、SOD和CAT活性均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率和MDA含量均显著升高(P<0.05);辛硫磷染毒可以诱导大鼠BMSCs P53蛋白表达水平的增加(P<0.05)。结论辛硫磷可诱导大鼠BMSCs氧化损伤、DNA损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达,且具有剂量-效应关系。