碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-I及其协同作用对牛晶体上皮细胞增殖的影响

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）、胰岛素样生长因子Ｉ（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒＩ,ＩＧＦⅠ） 及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞（ｂｏｖｉｎｅ ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＢＬＥＣ）增殖的影响。方法　ＢＬＥＣ原代培养,取第４ 代细胞种入２４ 孔板,加入不同浓度的ｂＦＧＦ、ＩＧＦⅠ、ｂＦＧＦ＋ ２０ μｇ／ＬＩＧＦⅠ,２０ ｈ 后加入３ＨＴＤＲ,１６ ｈ 后作液闪计数。结果　一定浓度的ｂＦＧＦ（１～１００ μｇ／Ｌ） 、ＩＧＦⅠ（２０～１００ μｇ／Ｌ） 在体外有促进ＢＬＥＣ 增殖的作用（ Ｐ＜ ０－０１ ） ,２０ μｇ／Ｌ的ＩＧＦⅠ可增加ｂＦＧＦ的促ＢＬＥＣ增殖作用。结论　生长因子及它们之间的协同作用在促进晶体上皮细胞异常增殖的过程中起重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对不同年龄白内障患者晶状？…

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞（ｈｕｍａｎ ｌｅｎｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ,ＨＬＥＣ）增殖的影响并探讨机制。方法 将白内障手术中取出的晶状体前囊膜在１０ｕｇ／ＬｂＦＧＦ中培养４８ｈ,免疫组织化学法染色后,采用医 功能图像分析软件测定增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉ９ｆｅｒａｔｉｎｇ     

碱性成纤维细胞生长因子及其对晶体上皮细胞增殖的促进作用

本介绍了碱性成纤维细胞生长因子的分布和来源，阐述其基本特性及主要的生物学功能。探讨ｂＦＧＦ对眼晶体上皮细胞的增殖促进作用和后囊混浊的发病机理以及ｂＦＧＦ的作用机制。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bF     

白喉毒素氨基端389个氨基酸-人碱性成纤维细胞生长因子靶向毒素的克隆表达及对人晶状体上皮细胞毒性研究

目的 为阻止白内障术后囊膜混浊寻找物质基础.方法 提取灭活的白喉杆菌DNA和12周胎脑皮质RNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出编码白喉毒素氨基端389个氨基酸(DT389)的基因片段及编码18kd人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的基因全序列,将两基因先后插入表达载体中,构建含有DT389-hbFGF融合基因的表达质粒,测序后,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,纯化鉴定表达产物,噻唑蓝(MTT)试验检测其对体外培养人晶状体上皮细胞(HLECs)的毒性作用,流式细胞术鉴定不同剂量融合毒素所致HLECs成活率及细胞死亡形式.结果 扩增得到DT389基因片段及hbFGF全基因序列;构建了DT389-hbFGF融合基因的原核表达载体并成功表达;表达的融合蛋白对HLECs有明显的毒性作用并在一定范围内呈明显剂量依赖性,半数致死量为3.8×10-11mol/L,所致细胞死亡方式主要以凋亡为主.结论 DT389-hbFGF免疫毒素克隆表达的成功为药物促晶状体上皮细胞的凋亡、抑制后发障的研究奠定了物质基础.     

碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA基因在人晶体上皮细胞内的检测研究

为研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理,采用原位杂交,用合成的寡核苷酸探针来检测人晶体上皮细胞内的ｂＦＧＦ高亲和力受体—成纤维细胞生长因子受体１（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅ－ｃｅｐｔｏｒ１,ＦＧＦＲ１）的ｍＲＮＡ基因,并用图像分析进行相对定量。结果：表明了人晶体上皮细胞表达ＦＧＦＲ１的ｍＲＮＡ基因。结论：人晶体上皮细胞存在ＦＧＦＲ１,当ｂＦＧＦ与其高亲和力受体结合后,对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊的形成具有重要作用。     

胰岛素样生长因子系统与白内障

胰岛素样生长因子系统是一类重要的多肽生长因子系统,对多种组织和细胞类型具有很强的代谢、增殖和分化作用.近年来研究发现,胰岛素样生长因子系统与白内障的发生发展有一定联系.现就这一系统的一般生物学特性、在眼内的分布、对晶状体生长发育和结构形态的影响以及其在白内障发病过程中的作用等作一综述.     

碱性成纤维细胞生长因子治疗点状角膜炎的临床研究

碱性成纤维细胞生长因子治疗点状角膜炎的临床研究中山医科大学中山眼科中心刘祖国，杜进发，张建浩，陈家祺碱性成纤维细胞生长因子（ＢａｓｉｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｔ，简称ｂＦＧＦ）是人体内一种微量物质，能促进上皮及内皮细胞的分裂，因而它...     

碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞增殖及移行作用的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养的人晶状体上皮细胞（HLEC）增殖及移行作用的影响.方法 在无血清培养液培养的HLEC中分别加入不同终浓度的bFCF（0.01、0.1、1、10及100 μg/L）,MTT法测定其促细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期;HLEC损伤愈合模型,观察不同终浓度bFGF处理24 h后HLEC的移行情况.结果 bFGF浓度为0.1、1、10、100 μg/L时,其对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,100 μg/L作用24 h增殖率最大,达112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性.bFGF通过促进细胞周期变化,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多,通过促进HLEC由G0向G1的转化来促进细胞的增殖;bFGF浓度1、10、100 μg/L作用24 h.可明显促进HLEC的移行,其移行能力分别为27.21%、154.42%、和238.77%,与阴性对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0.01）.结论 bFGF可促进HLEC的增殖和移行,是HLEC强有力的有丝分裂原和促移行因子.     

血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对兔角膜基质成纤维细胞体外增殖的影响

目的：探讨重组人血小板源性生长因子(rh-PDGF-BB)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhb-FGF)单独及联合应用对兔角膜基质成纤维细胞(RCF)增殖的影响。方法：采用细胞培养技术及噻唑蓝比色法(MTT)。结果：rhPDGF-BB和rhbFGF对RCF的促增殖作用较对照组有明显提高(P＜0．01)，rhPDGF-BB在10～100μg/L之间时对RCF有较强的促增殖作用(P＜0．01)，并呈剂量效应关系。rhb-FGF在0．1～10μg／L浓度范围内与RCF增殖呈剂量效应关系(P＜0．01)，当浓度增大到100μg／L促增殖作用减弱。rhPDGF-BB和rhb-FGF联合应用时其促增殖作用较两种因子在相同浓度单独应用时有显性差异(P＜0．05)。     

bFGF对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦＧ）在体系对人晶状体上皮细胞增殖的影响及机制探讨。方法 取人晶状前囊膜培养。加入不同浓度ｂＦＧＦ（１μｇ．Ｌ＾－１１０μｇＬ＾－１、１００μｇ．Ｌ＾－１）,４８ｈ后免疫组化测增殖核细胞抗原阳性面积率,取人晶状体前囊膜免疫组化测ｂＦＧＦ受体。结果 一定浓度（１～１００ｕｇ．Ｌ＾－１）的ｂＦＧＦ在体     

bFGF对人晶状体上皮细胞中FAK表达的影响

目的:观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)引起体外培养的人晶状体上皮细胞迁移和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)mRNA水平的动态变化.方法:体外培养的第3代人晶状体上皮细胞,建立细胞划痕损伤模型,经0,5,10,15μg/L bFGF作用8～16h后,电脑图像法测定细胞迁移距离,RT-PCR法检测0,1,4,8,16h FAK mRNA水平,免疫荧光法检测整合素β1和增殖细胞核抗原表达阳性率的变化.结果:与对照组比,5μg/L 组细胞迁移距离和FAK mRNA表达显著增加(P＜0.05):10μg/L 组细胞整合素β1表达阳性率显著增加(P＜0.05);15μg/L 细胞迁移距离和FAKmRNA显著降低(P＜0.05).结论:bFGF引起人晶状体上皮细胞迁移距离和FAK mRNA表达的变化.     

人原代晶体上皮细胞bFGF多肽和mRNA的表达

目的 为研究后发性白内障的发生机理,检测生长中人晶体上皮细胞（ＨＬＥＣｓ）自身是否表达碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）。方法 体外培养人晶体上皮细胞,用免疫细胞化学和原位核酸分子杂交的方法,检测ＨＬＥＣｓ中ｂＦＧＦ多肽和其ｍＲＮＡ的表达。结果 用免疫细胞化学和原位核酸分子杂交方法,可检测到生长中的人晶体上皮细胞自身表达碱性成纤维细胞生长因子。结论 结合碱性成纤维细胞生长因子促进人晶体上皮细胞生长     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸及其脂质体对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸及其脂质体对大鼠晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用。方法 体外培养大鼠LEC,细胞传代后分别加入bFGF反义和正义寡核苷酸及其脂质体,以营养液和无药脂质体为对照培养24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖情况,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞bFGF mRNA的表达情况。结果 大鼠LEC原代培养24 h可见细胞生长,形态为多边形,培养2-3周细胞汇合成片;传代培养细胞可在1～2周汇合成片。MTT法测定显示,bFGF反义寡核苷酸组(Ⅰ组)、正义寡核苷酸组(Ⅱ组)及营养液组(Ⅴ组)的吸光度(A值)分别为0.138±0.074、0.325±0.097及0.370±0.079,Ⅰ组A值显著小于Ⅱ和Ⅴ组(P=0.024,0.005);bFGF反义寡核苷酸脂质体组(Ⅲ组)、正义寡核苷酸脂质体组(Ⅳ组)及无药脂质体组(Ⅵ组)的A值分别为0.128±0.032、0.258±0.120及0.348±0.017,Ⅲ组A值显著小于Ⅵ组(P=0.000)。RT-PCR法检测结果显示,以2μg总RNA为模板,循环30次,bFGF反义寡核苷酸、bFGF正义寡核苷酸及营养液的扩增产物的量分别为0.33、0.99及0.85μg;:bFGF反义寡核苷酸脂质体、bFGF正义寡核苷酸脂质体及无药脂质体的扩增产物的量分别为0.23、0.48及0.56μg。结论大鼠LEC可在体外培养;bFGF反义寡核苷酸及其脂质体可     

Effect of heparin on proliferation of cultivated bovine lens epithelial cells]

The treatments proposed to date for the prevention of secondary cataract have shown limited efficacy or have not been satisfactory due to ocular toxicity. Since it has been demonstrated that heparin can inhibit the proliferative activity of smooth muscle cells and fibroblasts in vitro and in vivo, we examined the effect of heparin at concentrations ranging from 20 to 200 micrograms/ml on the proliferation of cultured bovine lens epithelial cells (BLEC) under various culture conditions: (1) serum-free medium (SFM); (2) SFM + aqueous humor 1:1; (3) SFM +1 and 10% fetal calf serum; (4) SFM +1% retinal extract; (5) SFM +50 micrograms/ml endothelial cell growth factor; (6) SFM +10 ng/ml epidermal growth factor; (7) SFM +10 ng/ml basic fibroblast growth factor. Heparin caused no cytotoxic effects in any of the experiments. With medium 2 and 3, heparin caused dose-dependent inhibition of cell proliferation at concentrations ranging from 10 to 50 micrograms/ml. Cells cultivated in medium 4-7 with the addition of 50 micrograms/ml heparin revealed increased proliferative activity when compared with the corresponding controls. The antiproliferative activity on BLEC in medium containing aqueous humor suggests that heparin is a valuable tool for the prevention of secondary cataract in vivo.     

Serum-free cultivation of bovine lens epithelial cells

Mammalian cells in culture have individual nutritional requirements which are mainly fulfilled by the addition of fetal calf serum to the basic culture medium. Since many of the serum components are as yet poorly understood or even completely unknown, a number of difficulties arise in the evaluation of the effect of exogenously added factors or drugs on the growth of the cells. This paper presents data demonstrating the successful adaptation, routine cultivation and cryopreservation of bovine lens epithelial cells (BLEC) under serum-free culture conditions by use of the commercially available serum substitutes BMS, BM 86 Wissler and Ultroser G. Moreover, a culture medium especially designed for cell quiescence, named LR-1, is presented. Cells cultivated in culture medium containing 10% fetal calf serum served as controls. While BM-86 Wissler caused significantly reduced growth rates within 2 days and, finally, cell death after 12 days of incubation, the use of BMS resulted in growth rates which did not differ from the corresponding controls. Ultroser G resulted in a significant increase of proliferative activity of BLEC. LR-1 medium caused cell quiescence and kept the cells alive for a number of days. Thus, LR-1 allowed evaluation of the response of the cells to a mitogenic mixture from bovine brain mainly containing endothelial cell growth factor. The results demonstrate that cultivation of BLEC is possible under serum-free culture conditions. Moreover, the medium LR-1, which causes cell quiescence, is useful for the evaluation of growth factor-induced effects in vitro.Presented in part at the symposium Growth Factors in Clinical and Experimental Ophthalmology of the Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft, Tübingen, April 1992.     

bFGF和顺铂、米托蒽醌及阿糖胞苷对兔晶状体上皮细胞的相互作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和顺铂（PDD）、米托蒽醌（Mit)及阿糖胞苷（Ara-C)对兔晶状体上皮细胞（RLECs)的相互作用。方法 分离兔晶状体囊膜行组织细胞培养,传代的2-3代RLECs在96孔板培养24h,然后分别用不同浓度的bFGF,PDD,Mit和Ara-c;以及bFGF合用PDD,Mit及Ara-C作用24h及72h,用（MTT）比色法测定对RLECs的影响。结果 bFGF可明显促进晶状体上皮细胞的增殖,而PDD和Mit明显抑制晶状体上皮细胞的增殖,在bFGF存在的情况下此两种药物仍能抑制晶状体上皮细胞的增殖,在本实验条件下Ara-C单用对兔晶状体上皮细胞无明显影响。而在bFGF存在时则表现出抑制作用。结论 bFGF是促进兔晶状体上皮细胞增殖的重要因子。并不能阻止抑制兔晶状体上皮细胞增殖药物对其的抑制作用。而对z细胞周期特异性药物的作用有增强效果。     

Calpain in cultured bovine lens epithelial cells

Calcium dependent proteolysis was examined in supernatant prepared from cultured bovine lens epithelial (BLE) cells. The presence of the calcium activated protease, calpain, was indicated by immunorecognition of 80 kDa and 30 kDa subunits of calpain in BLE cell supernatant. Degradation of 125I-alpha-crystallin and FITC labeled casein by BLE cell supernatant were shown to be calcium dependent. Inhibition of activity was achieved with EGTA, calpastatin or CbzValPheH. The data presented are the first measurement of calpain activity in cultured lens cells.     

转化生长因子-β、白细胞介素-1和碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞的影响

目的:研究体外细胞培养中转化生长因子-β(transforma-tion growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人晶状体上皮细胞(human lens epi-thelial cell,HLEC)的增生作用,对白内障术后晶状体后囊浑浊的预防提供依据。方法:首先进行人晶状体上皮细胞的原代培养,传代培养的晶状体上皮细胞分成各5个实验组,分别加入不同剂量的TGF-β、IL-1,设空白对照组,进行3H-TDR掺入实验,观察TGF-β、IL-1、bFGF对晶状体上皮细胞的作用。结果:TGF-β、IL-1、bFGF对在体外的HLEC增生均有促进作用,并随剂量增加而增强(P<0.05)。结论:TGF-β、IL-1、bFGF在白内障术后的后发性白内障的形成发展过程中起促进作用。     

奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响.方法 体外培养的兔晶状体上皮细胞分为对照组和实验组,其中对照组包括空白对照和bFGF对照组,实验组包括单独用奥曲肽和联合10 mg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)组,奥曲肽浓度分别为10-11mol·L-1、10-10 mol·L-1、10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1.加药后48 h用MTT比色法测定奥曲肽对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪分析细胞周期.结果 bFGF组与空白对照组相比,吸光度A值升高,加入奥曲肽作用48 h后,随着药物浓度增加,A值明显降低(P<0.05),抑制率增加,10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1奥曲肽组的抑制率分别为(24.7±3.6)%、(22.8 ±6.6)%.联合应用bFGF+奥曲肽组与仅用bFGF组相比,吸光度下降更明显(P<0.05),即抑制率增加更明显,10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1奥曲肽联合bFGF组的抑制率分别为(32.1±2.9)%、(33.6±3.3)%.流式细胞仪分析奥曲肽对兔晶状体上皮细胞的周期的影响与MTT法栓测结果呈现大致相同趋势,随着药物浓度的增加,处于静止期的细胞逐渐增加而增殖期细胞逐渐减少.结论 奥曲肽可明显抑制bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞的增殖,并呈剂量依赖性关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供一定的依据.