苦参素注射液联合顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响

目的:观察苦参素注射液联合顺铂(DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性、野生型p53(wtp53)、端粒酶逆转录酶(h TERT)m RNA表达的影响。方法:将Dulbecco改良Eagle培养基培养的人肝癌SMMC-7721细胞分为苦参素组、DDP组、联合组和对照组。苦参素组低、中、高质量浓度分别为0.75、1.5、3.0 mg/ml,DDP组低、中、高质量浓度分别为1、2、4 mg/ml,联合组浓度按两药联合用药1∶1的比例应用,对照组加入200μl磷酸缓冲盐溶液(PBS),不给予药物干预。观察4组人肝癌SMMC-7721细胞凋亡率及药物间的相互作用,端粒酶活性吸光度差值(ΔA),wtp53和h TERTm RNA相对表达量。结果:联合组人肝癌SMMC-7721细胞凋亡率>苦参素组>DDP组>对照组,4组比较差异有统计学意义(P<0.01),q值提示苦参素与DDP存在单纯相加或协同作用。苦参素组、DDP组及联合组SMMC-7721细胞端粒酶活性ΔA、h TERTm RNA均显著低于对照组,且联合组DDP组>苦参素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参素注射液联合DDP可增加人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡,其机制可能与wtp53表达上调、h TERTm RNA表达下调,从而影响端粒酶活性有关。     

蜗牛多糖对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的 探讨蜗牛多糖对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用. 方法将不同浓度的蜗牛多糖分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,48,72 h后,采用噻唑蓝法测定吸光度值(A),评定蜗牛多糖对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞周期的影响. 结果 不同浓度的蜗牛多糖作用SMMC-7721细胞24,48和72 h后,各组与细胞对照组比较,A值差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并显示出对时间和剂量的依赖性,蜗牛多糖对SMMC-7721细胞的半数抑制浓度分别为0.293,0.032和0.011 mg.mL^-1. 流式细胞术结果 表明,蜗牛多糖能将肝癌细胞株SMMC-7721阻滞在细胞的G2/M期. 结论 蜗牛多糖对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖有一定的抑制作用.     

葛根素对γδT细胞杀伤肝癌SMMC-7721细胞的影响

目的探讨葛根素对人γδT细胞杀伤肝癌SMMC-7721细胞的影响及机制。方法异戊烯焦磷酸法(isopentenylpyrophosphate,IPP)体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度葛根素作用于γδT细胞24,48,72 h,CCK8法检测葛根素对γδT细胞增殖率的影响,FCM检测γδT细胞穿孔素(perforin,PFP)、颗粒酶B(granzyme B,Gra B)及CD107a的表达情况,LDH释放法检测γδT细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤活性,Western blot法检测γδT细胞中P-ERK1/2和Bcl-2的表达情况。结果葛根素作用人γδT细胞48 h后,葛根素1.6~100μmol·L?1浓度组的γδT细胞增殖明显(P<0.05),葛根素12.5~50μmol·L?1浓度组人γδT细胞PFP、Gra B及CD107a表达明显高于对照组(P<0.05),葛根素3.125~50μmol·L?1浓度组人γδT细胞P-ERK1/2和Bcl-2表达显著增高(P<0.05),且葛根素3.125~50μmol·L?1浓度组人γδT细胞对肝癌SMMC-7721细胞杀伤活性较对照组明显增强(P<0.05)。结论葛根素能够促进人γδT细胞增殖,并能够提高γδT细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤活性,其机制可能与上调γδT细胞表面的PFP,Gra B和CD107a的表达及活化P-ERK1/2和Bcl-2的表达有关。     

参麦注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的作用

目的 观察参麦注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的作用.方法 采用MTT法检测参麦注射液对于人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的体外增殖抑制率,流式细胞仪检测参麦注射液作用后的SMMC-7721肿瘤细胞的细胞周期、凋亡率的变化.结果 参麦注射液0～250μl/ml作用48 h,人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞增殖的抑制率为9.0%～83.1%.随着浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐上升.参麦注射液终浓度200 μl/ml作用后的人肝癌SMMC-7721细胞G0～G1期明显增高,S期和G2～M期的细胞比例明显减少,凋亡率明显高于对照组(70.91%vs.7.57%).结论 参麦注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖具有明显的抑制作用.     

雷公藤内酯醇抗人肝癌SMMC-7721细胞活性研究

目的: 评价雷公藤内酯醇抗人肝癌SMMC-7721细胞的作用.方法: 采用体外细胞培养和SD大鼠体内肿瘤接种两种衡量方法,体外细胞培养检测指标包括细胞形态观察,台盼蓝染色,DAPI染色,DNA ladder;SD大鼠体内接种肿瘤指标检测用游标卡尺测量肿瘤体积大小.结果: 与对照组相比,体外培养肿瘤细胞在用药后活细胞大幅减少,体内接种肿瘤细胞在用药后,肿瘤块体积较小且增长缓慢,而对照组肿瘤体积却大幅增长.结论: 雷公藤内酯醇对体外和体内培养的人肝癌SMMC-7721细胞有明显的生长抑制作用和促凋亡作用.     

没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制的探讨

目的探讨没食子酸(gallic acid,GA)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其促凋亡的相关分子机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法观察细胞在GA作用24、48、72 h后的增殖情况;用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;透视电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;采用RT-PCR技术研究p53 mRNA的变化;应用Western blot法检测p53蛋白水平的表达。探讨GA对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用及机制。结果剂量为6.25⁵0μmol·L-1GA作用SMMC-7721细胞48 h有明显的增殖抑制活性,引起核固缩、凝聚、碎裂,诱导细胞凋亡,并呈剂量依赖性;RT-PCR和Western blot结果显示,GA能升高p53 mRNA水平和p53蛋白表达。结论 GA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导凋亡,可能与其上调肿瘤相关抑癌基因p53有关。     

党参总皂苷对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用及其机制

目的:研究党参总皂苷(TSC)对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测0、100、200、400、600、800、1 000、1 200、1 400、1 600、1 800、2 000 mg/L的TSC作用于SMMC-7721细胞72 h后的细胞活力,并计算生长抑制率和半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测911.0 mg/L的TSC作用于SMMC-7721细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况并计算凋亡率;采用酶标仪检测0(空白对照)、200、400、800、1 000 mg/L的TSC作用于SMMC-7721细胞72 h后半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-8、Caspase-9活性,并采用双抗体夹心酶联免疫法检测其p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p53蛋白表达。结果:100~2 000 mg/L TSC可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且与TSC给药浓度呈正相关,其IC50为911.0 mg/L;911.0 mg/L的TSC作用于细胞24、48、72 h的凋亡率分别为21.10%、30.20%、41.10%。与空白对照比较,200、400、800、1 000 mg/L的TSC能增强细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性与p38MAPK、p53蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且与给药质量浓度呈正相关。结论:TSC能有效抑制SMMC-7721细胞增殖,其机制可能是通过上调Caspase-8、Caspase-9活性与p38MAPK、p53蛋白表达,最终激活Caspase-3,从而诱导细胞凋亡。     

杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移及侵袭影响的研究

目的探讨杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响。方法以不同浓度杨梅素处理的肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,分别采用Wound healing实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭过程,用RT-q PCR和Western blot检测E-cadherin和N-cadherin的表达。结果杨梅素呈浓度依赖性(10~40μ mol · L~(-1))抑制肝癌SMMC-7721细胞活力;杨梅素还可以抑制SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程,并且随着杨梅素浓度的增加,细胞中丝状、片状伪足逐渐减少,细胞排列越来越紧密;RT-qPCR和Western blot结果均显示,杨梅素可以上调SMMC-7721细胞的E-cadherin表达,下调N-cadherin表达。结论杨梅素能抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移和侵袭过程,此作用的发生可能是通过上调E-cadherin、下调N-cadherin等EMT相关的信号通路以及肌动蛋白细胞骨架的重排实现的。     

小檗胺对肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移作用的影响及其可能的机制。方法 在体外用不同浓度小檗胺处理肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞活力的变化;采用细胞划痕试验、Transwell迁移和侵袭试验检测肿瘤细胞侵袭转移能力;采用Western blot法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果 MTT结果显示浓度<20 μmol·L^-1的小檗胺对SMMC-7721细胞存活率无显著影响。划痕试验和Transwell结果显示,小檗胺呈浓度依赖性抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程。Western blot结果表明,小檗胺显著增强SMMC-7721细胞中E-cadherin表达,而减弱Vimentin表达。结论 人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力可被小檗胺抑制,其机制可能与其调控上皮间质转化相关蛋白的表达有关。     

辛伐他汀对肝癌SMMC-7721增殖作用的初步研究

他汀类药物是临床上治疗高胆固醇血症的主要药物.研究发现他汀类药物具有抗肿瘤作用.实验室研究显示他汀类药物可抑制多种肿瘤得增殖,如乳腺癌[1]、结肠癌[2]、胰腺癌[3]、白血病[4]、恶性胶质瘤[5]等.有关他汀类药物对肝癌作用的实验室研究,笔者尚未见国内报道.本实验就他汀类药物对肝癌细胞增殖作用影响做一初步研究.     

蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:O...     

亚硝酸钠诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化

探讨亚硝酸盐诱导人肝癌SMMC-7721细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用。0.25～25 mmol·L-1亚硝酸钠处理细胞48 h后,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中的TGF-β1、IL-6和IL-8水平,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞移动和侵袭能力,同时采用Western blotting方法检测EMT相关标记蛋白和p-AKT及下游信号分子的蛋白表达水平。结果表明,亚硝酸钠处理人肝癌细胞48 h,可以引起TGF-β1的分泌显著升高,并呈现剂量依赖性。亚硝酸钠对IL-8及IL-6的分泌也具有一定的增加作用,但不具有剂量依赖性。0.25 mmol·L-1亚硝酸钠作用48 h,诱导细胞形态向间质转化,增强波形蛋白和p-AKT及其下游信号蛋白的表达,抑制E型钙黏素蛋白的表达,促进细胞迁移和侵袭能力。结果提示,亚硝酸钠可能通过促进细胞分泌TGF-β1和IL-8,诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化。     

Effects of inositol 1,2,6-triphosphate on human liver cancer SMMC-7721 cells

Phytic acid (myo-inositol hexaphosphoric acid) is present substantially in plant kingdom, and has striking anticancer effects. Phytic acid can be hydrolyzed into lower inositol phosphates by partial dephosphorylation during food processing. Inositol 1,2,6-triphosphate [Ins(1,2,6)P₃] is the derivative of phytic acid prepared by partial hydrolysis of phytic acid with Aspergillus terreus phytase. The effects of Ins(1,2,6)P₃ on the cell proliferation rate, cell cycle distribution, immunohistochemical staining of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and α-fetal protein (AFT) in human liver cancer SMMC-7721 cell line were investigated. Ins(1,2,6)P₃ inhibited cell proliferation of SMMC-7721 cells in a dose and time-dependent manner. Ins(1,2,6)P₃ induced an accumulation of cells in the G₀/G₁ phase of the cell cycle. AFT test and PCNA test indicated that the malignant expression of SMMC-7721 cells was reduced and the malignant cells differentiated toward normal cells. Results of these studies demonstrated that Ins(1,2,6)P₃ has obvious anticancer activities.     

联用莪术油和丝裂霉素对肝肿瘤细胞株SMMC-7721的作用研究

目的探讨复方莪术油微球对肝癌细胞株的抑制作用及其作用机制。方法采用莪术油和丝裂霉素微球制备方法联用莪术油和丝裂霉素;采用MTT法检测莪术油和丝裂霉素单用和联用对肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制作用,并用流式细胞仪检测两药单用和联用对肝癌细胞增殖周期和凋亡的影响。结果MTT结果表明,单用和联用莪术油和丝裂霉素均可抑制肝癌细胞株SMMC-7721的生长,但联用莪术油和丝裂霉素采用减半剂量抑瘤率仍明显高于单用莪术油和丝裂霉素;流式细胞仪检测结果表明,莪术油和丝裂霉素合用可增强对肿瘤细胞增殖的抑制和促进凋亡的发生,较单用莪术油和丝裂霉素有增效作用。结论联用莪术油和丝裂霉素对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制有增效作用,而诱导凋亡和阻滞细胞周期可能是其增效的重要机制。     

左氧氟喹诺酮查尔酮类衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究左氧氟喹诺酮查尔酮类衍生物6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-3-[2-(4-甲氧苯甲酰基)-乙烯-1-基]-喹啉-4-(1H)-酮(HGQ5)对人肝癌细胞凋亡和自噬的诱导作用.方法 采用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖,TUNEL法测定细胞的凋亡率,采用自噬抑制剂氯喹处理细胞来验证HGQ5对细胞增殖和凋亡的影响;用Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白LC3B的表达.结果 HGQ5对SMMC-7721细胞的增殖具显著抑制作用,24、48 h的IC50分别为5.0、4.8 μmol· L-;各给药组细胞经HGQ5作用24 h后,细胞凋亡率显著高于对照组的;HGQ5导致细胞中LC3B-Ⅱ的表达量增加,6～24 h达到最高,之后明显下降;氯喹可增强低剂量HGQ5(0.3～ 2.5 μmol·L-)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,但降低高剂量HGQ5(5～ 10 μmol·L-1)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.结论 HGQ5能够显著诱导SMMC-7721细胞的凋亡和自噬,低剂量HGQ5作用于SMMC-7721细胞时,自噬对细胞具有保护作用;高浓度HGQ5作用时,自噬作用则降低了细胞增殖率,促进了细胞凋亡.     

电子转移黄素蛋白A对肝癌细胞SMMC-7721恶性生长的影响

目的探讨线粒体β氧化关键蛋白电子转移黄素蛋白A(ETFA)对肝癌细胞SMMC-7721恶性生长的影响及潜在的调控机制。方法将携带对照短发夹RNA(shRNA)或人ETFA shRNA 1#和2#的pGPU6/Hygro载体转染SMMC-7721细胞,分别为对照组、ETFA-1#组和ETFA-2#组。通过潮霉素筛选得到稳定敲低ETFA的SMMC-7721细胞克隆,并用Western印迹法检测细胞中ETFA蛋白水平,对稳定敲低细胞进一步鉴定。将筛选得到的稳定细胞用于以下实验。将细胞与0.3%琼脂混匀,均匀铺于6孔板(每孔1×10³细胞),第10天观察集落形成并计数。每只裸小鼠皮下注射2×10⁶细胞进行皮下成瘤实验,于第14天开始每2 d测量1次瘤体体积,第28天测瘤重。将细胞接种于6孔板,用尼罗红染色法于激光共聚焦显微镜下观察细胞中脂质堆积。将细胞固定后,使用扫描电镜观察细胞超微结构的变化。结果Western印迹法结果显示,ETFA-1#和ETFA-2#组SMMC-7721细胞ETFA的表达水平明显低于对照组,表明稳定敲低ETFA的SMMC-7721细胞构建成功。集落形成实验结果显示,在细胞接种第10天,对照组细胞平均克隆数为99±7,ETFA-1#组为55±5(P<0.01),ETFA-2#组为24±12(P<0.01)。皮下成瘤实验结果显示,在裸小鼠皮下接种细胞28 d后,对照组瘤块平均体积(mm³)为1220±474,ETFA-1#组为671±246(P<0.01),ETFA-2#组为534±217(P<0.01);对照组瘤块平均质量(g)为0.65±0.21,ETFA-1#组为0.39±0.13(P<0.01),ETFA-2#组为0.40±0.15(P<0.01)。尼罗红染色结果显示,敲低ETFA的SMMC-7721细胞中可见大量红色斑点,而对照组未见此现象。在透射电镜下,敲低ETFA的SMMC-7721细胞中可见数量较多、体积较大的脂滴,而对照组未见明显脂滴。结论敲低ETFA可抑制SMMC-7721细胞体外非锚定生长能力和体内成瘤能力,其机制可能与脂质代谢障碍有关。     

小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用及其机制的初步研究

目的：研究小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用的影响及可能的机制。方法：经不同浓度小檗胺处理体外培养的肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖的变化;采用PI染色法检测肿瘤细胞周期分布的变化;采用RT-PCR和Western blot法检测肿瘤细胞中Cyclin B1、Cyclin D1、p21和p27的表达水平。结果：与溶剂对照组比较,不同浓度的小檗胺均可明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖。PI染色结果显示,小檗胺可明显地诱导肝癌细胞周期阻滞于G₀/G₁期（P<0.05）。RT-PCR和Western blot结果均显示,应用小檗胺处理肿瘤细胞后,p21和p27的表达明显升高,而Cyclin B1和Cyclin D1的表达水平明显下降（P<0.05）。结论：小檗胺能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并使其细胞周期阻滞于G₀/G₁期,其机制可能与其上调p21和p27的表达和下调Cyclin B1和Cyclin D1的表达有关。     

对甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用

目的探讨喹诺酮酰腙类化合物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙(FQ-10)与SMMC-7721细胞体外培养。MTT法检测FQ-10对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258/PI双染荧光染色法、TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡变化;高内涵活细胞成像系统测定细胞线粒体膜电位(△ψm)变化;Western blot方法测定caspase-9、caspase-8、caspase-3、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 FQ-10在0.625～10.00μmol.L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,呈时间、浓度依赖性;作用于细胞24 h的IC50值是4.40μmol.L-1;各组FQ-10作用24 h后,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带,并伴有线粒体膜电位降低。荧光染色观察细胞形态学变化,显示凋亡细胞染色质凝集,细胞核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化,晚期凋亡细胞可见特异性PI染色。与对照组比较,FQ-10作用后p53、Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达量增加,其中caspase-9、caspase-3活性裂解片段明显增加,caspase-8无变化,而Bcl-2蛋白表达水平下降。结论对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙能够激活线粒体凋亡通路,诱导人肝癌细胞凋亡。