应用PCR检测结核杆菌的临床分析

本文总结了一个病区１９９３～１９９５年５２例住院结核病人与３７例住院肺癌病人的ＰＣＲ结果，并与同期的痰涂片和／或ＢＡＣＴＥＣ培养结果进行了比较，结果显示ＰＣＲ阳性检出率为６１．５％，高于痰涂片（４６．１％）亦稍高于ＢＡＣＴＥＣ（５３．８％）在涂片阳性者结核病人中ＰＣＲ阴性检出率竟达４１．７％，而诊断未合并肺结核的肺癌病人中ＰＣＲ阳性率达３０．５％，作者分析了造成不一致的原因。     

五种结核菌培养方法对照观察

９０年代初ＢＡＣＴＥＣ－４６０－ＴＢ自动检测技术从欧洲引进我国，通过几年检测，已有很多文章报道ＢＡＣＴＥＣ法的优越性。本文报告对１４６例结核病人的痰标本分别作涂片、ＢＡＣＴＥＣ法检测和２％ＮａＯＨ碱处理后，吸取标本管内上清液体、中部液体、自沉淀液体和离心沉淀法后的村本，接种于酸性罗氏培养基几种方法分离对照结果。     

BACTEC法对涂片阴性肺结核的诊断价值

ＢＡＣＴＥＣ法对涂片阴性肺结核的诊断价值北京结核病控制研究所１０００３５安燕生，刘晓雪，郭立平，赵亭，盖亚茹本文报告１９８例临床诊断为痰涂片阴性肺结核患者治疗前３９６份标本同时进行ＢＡＣＴＥＣ法和改良罗氏（Ｌ－Ｊ）法分离培养的对照结果。材料和方法一、...     

二种结核菌耐药性测定方法的临床评价——BACTEC法和改良罗氏法

２４６例住院病初复治肺结核病人痰标本分离培养结核发支杆菌的耐药性测定结果，ＳＭ、ＩＮＨ、ＥＭＢ、ＲＦＰ各药耐药检出率和耐药病例出率及在耐ＨＲ病例检出率Ｌ－Ｊ法均高于ＢＡＣＴＥＣ法、总一致率为７２％。采用含ＩＮＨ和ＲＦＰ方案治疗２、３、６月痰菌阴转率和胸部Ｘ线好转率ＢＡＣＴＥＣ法和Ｌ－Ｊ法均敏感病例组高于ＢＡＣＴＥＣ法敏感而Ｌ－Ｊ法耐ＩＮＨ和ＲＦＰ病例。结果提示，药敏试验与临床一致性Ｌ－Ｊ法高于ＢＡ     

骨关节结核脓液结核分枝杆菌培养结果分析

７５例骨关节结核患者脓液用改良罗氏法及ＢＡＣＴＥＣ法行结核杆菌培养,并将培养结果与抗结核化疗时间及临床特征进行对比,结果：２阳性者２３例（３０．７％）,其中改良罗氏法阳性１０例（１３．３％）,ＢＡＣＴＥＣ法阳性２１例（２８．０％）,涂片阳性１６例（２１．３％）,涂阳培阴８例（１０．７％）,化疗时间越长,培养阳性率越低。涂阳培阴现象可能与疾病预后有关。     

哮喘患者外周血单个核细胞中白细胞介素—6mRNA表达与气道炎症的 …

目的 探讨外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中白细胞介素（ＩＬ）－６ｍＲＮＡ表达与血嗜酸细胞阳离子蛋白（ＥＣＰ）和１秒用力呼气容积占用力肺活量比值（ＦＥＶ１％）的关系。方法 对１２例过敏性哮喘发作期患者、８例缓解期患者及９例健康人，采用ＲＴ－ＰＣＲ法和图像分析半定量法检测ＰＢＭＣ中ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达水平及ＥＣＰ和ＦＥＶ１％。结果 发作期患者ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达明显高于缓解期患者和健康人（Ｐ〈０．０     

BACTEC法与PCR法在检测结核杆菌的对比

本文总结了１９９３－１９９５年３９例住院结核病人与２１例住院肺癌病人的ＰＣＲ结果，并与同期的ＢＡＣＴＥＣ培养结果进行比较，结果显示ＰＣＲ阳性检出率为６１．５％，稍高于ＢＡＣＴＥＣ结果５３．８％，而诊断未合并肺结核的肺癌病人中ＰＣＲ阳性率达２３．８。     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疬分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。认为三种方法在使用中各自有其优点，不可偏废。     

BACTEC－460临床应用与结果分析

应用ＢＡＣＴＥＣ法检测痰、胸水、脑脊液等７３２例临床标本,初代分离阳性率３９．２％,其中痰标本为４１．８％。培养报告时间３～２３天,平均９．５天,药敏平均报告时间为５天。经２７８例与Ｌ－Ｊ法培养对照结果,ＢＡＣＴＥＣ法比Ｌ－Ｊ法阳性率高９％,平均报告时间缩短２１．９天,药敏试验缩短２３天。８７例应用两法检出的耐药菌符合率为９４．４％,ＳＨＥＲ四种药敏试验的正符合率为９３．１％。由此可以认为ＢＡＣＴＥＣ法是目前一种比较理想的快速检测结核菌的方法。     

应用PCR技术检测孕早期绒毛组织弓形虫DNA的研究

应用ＰＣＲ技术检测２７０例孕６－１２周妇女外周血及相应绒毛组织中的弓形虫ＤＮＡ，结果弓形虫ＤＮＡ阳性２６例，相应的绒毛组织中检出８例，垂直传播率为３０．７７％，同时用ＥＬＩＳ法检测血清中弓形虫循环抗原、ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体，结果阳性率分别为３．７０％、７．０３％和１５．５％。ＩｇＭ和／或ＣＡｇ阳性者，外周血皆检出弓形虫ＤＮＡ。提示应用ＰＣＲ技术检测绒毛组织弓形虫ＤＮＡ结合ＥＬＩＳＡ进行筛选，可早期诊     

TaqMan-PCR技术诊断结核病的临床应用研究

目的　探讨TaqMan-聚合酶链反应 (TaqMan-PCR)技术在结核病快速诊断中的临床价值。方法 对 155例活动性肺结核患者的痰和外周血、130例结核性胸膜炎患者的胸腔积液和外周血以及 61例结核性脑膜炎患者的脑脊液和外周血应用TaqMan -PCR检测结核分支杆菌DNA ,痰、胸腔积液和脑脊液进行抗酸染色涂片检查 ,另外 ,痰标本还进行了BACTEC和改良罗氏培养；同期以52例肺癌患者的痰和外周血、50例恶性胸腔积液患者的胸腔积液以及 33例健康人的外周血作为对照进行TaqMan-PCR检测。 结果 155例活动性肺结核患者的痰和外周血、130例结核性胸膜炎患者的胸腔积液和外周血以及 61例结核性脑膜炎患者的脑脊液和外周血TaqMan-PCR的阳性率分别为 49.0%和 51.6%、45.4%和 38.5%以及 50.8%和 42.6% ,痰、胸腔积液和脑脊液TaqMan-PCR的阳性率显著高于抗酸染色涂片以及BACTEC和罗氏培养 (P＜0.05)。TaqMan-PCR检测痰、胸腔积液和外周血的特异性分别为 96.2%、98%和 96.5%。结论 TaqMan-PCR具有较高的敏感性和特异性 ,对结核病的快速诊断具有一定的价值。     

噬菌体裂解法与BACTEC-460法在结核分支杆菌快速检测中的比较

目的：比较噬菌体裂解法与BACTEC－460法在结核分支杆菌快速检测及鉴定中的价值。方法：应用噬菌体裂解法和BACTEC－460法分别检测30株结构分支杆菌临床分离株、10株非结核分支杆菌和7株非分支杆菌，以及60份临床确诊的肺结核患者的痰标本，结果：所有结核分支杆菌临床分离株噬菌体裂解试验均为阳性，而非结核分支杆菌和非分支杆菌均为阴性。41份BACTEC－460培养阳性和19份BACTEC－460培养阴性的痰标本中，噬菌体裂试验分别有34份（82．9％）和5份（26．3％）阳性。结论：噬菌体裂解法可以简便，快速地检测结核分支杆菌，并且具有较高的敏感性的特异性。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

BACTEC MGIT-960临床应用与结果分析

目的探讨BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术在结核病中的应用价值。方法用BACTEC MGIT-960对不同种类的标本进行分离培养及药敏试验．并与改良罗氏培养基法对比。结果BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术初代分离阳性时问平均为8．9天．药敏平均时间为7．1天。2152份各类标本总阳性率为29．23％．其中痰标本阳性率为31．22％。617株结核分枝杆菌的总耐药率为52．19％，其中初始耐药率为41．77％，获得性耐药率为74．24％，耐多药率(MDR)为17．02％。结论BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术是目前一种比较理想的快速检测结核菌的方法。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

肺结核患者外周血单个核细胞中miRNA-150的表达及意义

目的分析外周血单个核细胞(PBMC)中miRNA-150在肺结核患者(TB)及健康人群(HD)中的表达差异,探讨miRNA-150诊断活动性肺结核的应用价值。方法选择41例TB患者为实验组(其中19例为涂阳患者,22例为凃阴患者),同时选择35例HD为对照组。采集外周抗凝血利用密度梯度离心法分离PBMC,提取总RNA,利用Taq Man探针q PCR技术检测miRNA-150在各组人群中的相对表达量,以RNU6B作为内参基因。结果 miRNA-150在TB患者外周血PBMC中表达量为(8.74±1.36),显著高于健康对照组(3.544±0.59),差异有统计学意义(P0.05);应用ROC曲线分析表明,miRNA-150诊断TB的敏感性为61%,特异性为82%。痰涂片阳性TB患者中miRNA-150表达水平显著高于痰涂片阴性患者(12.30±2.43Vs 5.66±1.12),差异有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-150在TB患者PBMC中表达水平升高,尤其是涂阳患者,可以作为诊断TB的分子标识。     

应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价

目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果。 方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的粪便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例粪便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较。 结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68%(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率［23.68%(18/76)］明显高于涂片阳性率［6.58%(5/76)］,41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例)。 结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

Value of smear and PCR in bronchoalveolar lavage fluid in culture positive pulmonary tuberculosis.

At present, further investigations are needed in patients with suspected pulmonary tuberculosis (TB) and either negative sputum smear or without sputum. The aim of the present study was to analyse the yield of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) smear and PCR in patients with confirmed pulmonary TB. Patients with a positive culture for Mycobacterium tuberculosis complex in sputum or BALF were analysed over 5 yrs. In total, 90 out of 230 (39%) patients with culture-positive pulmonary TB had a positive sputum smear, and 120 patients underwent bronchoscopy. BALF smear was positive in 56 (47%), BALF PCR in 93 (78%) patients, and BALF smear and/or PCR was positive in 83%. In total, 71 patients who underwent bronchoscopy and had complete clinical records were further analysed. BALF (smear or Mycobacterium tuberculosis complex-PCR) allowed a rapid diagnosis in 10 (59%) out of 17 patients who had a negative sputum smear, and 49 (91%) out of 54 patients without sputum production. Of these 71 patients, 12 (17%) were only culture positive. Rapid diagnosis of pulmonary TB by smear and/or PCR was made in 190 out of 210 patients (90%) in sputum or BALF. In conclusion, combined use of bronchoalveolar lavage fluid smear and Mycobacterium tuberculosis complex-PCR has a good diagnostic yield in patients with sputum smear-negative tuberculosis or without sputum production.