腺病毒介导IL-24联合化疗药物增强对肝癌细胞PLC/PRF/5增殖的抑制

目的：研究腺病毒介导IL-24基因（Ad.IL-24）与化疗药物联用对肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖的抑制作用。方法：用Ad.IL-24分别联合化疗药物氟尿嘧啶（fluorouracil,5-Fu）和表柔比星（epirubicin,EPI）处理培养的肝癌细胞株PLC/PRF/5,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率。结果：10 MOI Ad.IL-24与25μg/ml5-Fu联合应用后72h,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率达（67.4±0.58）%,显著高于单用Ad.IL-24组的（46.8±0.74）%和5-Fu组的（29.3±0.60）%（均P〈0.05）;10MOIAd.IL-24与2.5μg/mlEPI联合应用后72h,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率达（72.5±0.92）%,显著高于单用Ad.IL-24组的（46.8±0.74）%和EPI组的（32.2±0.69）%（均P〈0.05）。流式细胞术检测结果显示,Ad.IL-24与5-Fu或EPI联合应用明显导致细胞在G2/M期阻滞;Ad.IL-24＋5-Fu组细胞凋亡率为（52.15±2.32）%,显著高于单用Ad.IL-24组的（28.36±3.49）%和5-Fu组的（8.27±2.61）%（均P〈0.05）;Ad.IL-24＋EPI组细胞凋亡率为（58.67±1.73）%,显著高于单用Ad.IL-24组的（28.36±3.49）%和EPI组的（11.82±1.91）%（均P〈0.05）。结论：Ad.IL-24与5-Fu或EPI联用能显著提高对肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖的抑制作用。     

高感染力嵌合型腺病毒载体的构建及其感染力的流式细胞术测定

目的构建1种35型腺病毒(Ad35)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒载体,探索该腺病毒载体感染肿瘤细胞的效率。方法PCR扩增Ad35腺病毒Fiber序列,插入并置换Ad5的Fiber序列,构建Ad5-F35嵌合型腺病毒载体,使之携带绿色荧光蛋白报告基因EGFP;以MOI=5的Ad5-F35EGFP病毒感染度感染淋巴瘤细胞raji和胃癌细胞SGC-7901,流式细胞术检测EGFP表达,借以判断病毒感染细胞的能力。结果成功构建携带EGFP的嵌合型腺病毒载体pAd5-F35EGFP,并在293细胞中重组出Ad5-F35EGFP嵌合型腺病毒,扩增纯化后病毒滴度达到3.4×109pfu/ml;流式细胞仪检测发现,Ad5-F35EGFP在淋巴瘤细胞raji和胃癌细胞SGC-7901内表达EGFP的强度明显比传统的Ad5-EGFP提高。结论Ad5-F35嵌合型腺病毒感染肿瘤细胞的能力明显增强,为提高腺病毒载体转染抗肿瘤基因的效率、改进肿瘤基因治疗的临床疗效奠定了基础。     

稳定表达sCD40L的CHO细胞系的建立和鉴定

目的：建立稳定表达sCD40L的CHO细胞系。方法：从含sCD40L的载体pDC316-sCD40L中,将sCD40L编码序列克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,获得重组质粒pIRES2-EGFP-sCD40L,酶切及测序鉴定。电穿孔转染CHO细胞,G418筛选抗性克隆,有限稀释法获取单克隆后扩大培养。流式细胞术、倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;使用PCR、RT-PCR、ELISA方法分别从DNA、mRNA、蛋白水平对sCD40L的表达进行检测。Westernblotting检测CHO-sCD40L分泌的sCD40L与膜型CD40的结合;将CHO-sCD40L与MDA-MB-231细胞共孵育24h后,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面分子Fas的表达变化;加入Fas激活性抗体（CH-11）后观察MDA-MB-231细胞的凋亡。结果：成功构建质粒pIRES2-EGFP-sCD40L,转染CHO细胞后经克隆化培养获得稳定表达sCD40L的细胞系CHO-sCD40L。流式细胞术、倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达高达90%以上;PCR检测证实sCD40L基因整合入细胞基因组DNA;RT-PCR检测到sCD40LmRNA的转录;ELISA法检测到细胞培养上清中有sCD40L蛋白表达,高达（4.5±2.1）ng/ml。Western blotting证实CHO-sCD40L分泌的sCD40L可与膜型CD40结合。CHO-sCD40L与MDA-MB-231细胞共培养后,MDA-MB-231细胞表面Fas表达由（3.0±1.02）%升高到（34.8±8.75）%;加入CH-1124h后,凋亡率由（5.4±1.32）%提高到（20.7±5.24）%（P〈0.01）。结论：成功获得稳定表达sCD40L的CHO细胞系,为研究CD40/CD40L途径在肿瘤免疫治疗中的应用提供了有用的工具。     

DN-hTERT对MCF7细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用

目的：观察端粒酶逆转录酶负突变体（DN-hTERT）对乳腺癌细胞MCF7端粒酶活性和恶性表型的抑制作用.方法：将带DN-hTERT基因的真核表达载体（DN-hTERT-IRES2-EGFP，DN）、IRES2-EGFP空载体（Ⅰ）通过脂质体2000（lipofectamine2000）介导转入MCF7细胞，以G418进行稳定筛选，得到阳性克隆 倒置荧光显微镜观察转染细胞的生长情况 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞hTERTmRNA的表达 TRAP-ELISA方法检测转染细胞端粒酶活性 流式荧光原位杂交法（FLOW-FISH）检测转染细胞端粒长度的变化 裸鼠肿瘤细胞移植观察转染细胞动物致瘤率.结果：MCF7细胞转染DN-hTERT后生长受到抑制 转染DN-hTERT的MCF7细胞（MCF7/DN）hTERT mRNA表达升高 TRAP-ELISA检测MCF7/DN细胞端粒酶活性（2.36±0.12）与转染空载体MCF7细胞（MCF7/I）（3.32±0.14）比较显著降低（P＜0.05） 反应端粒长度的荧光强度差比较中，MCF7/DN细胞（13.89±0.23）比MCF7/I（19.87±0.36）低，转染DN端粒长度出现缩短 裸鼠肿瘤细胞移植，2周动物致瘤率MCF7/DN为0，与MCF7/I的35%比较有极显著意义（P＜0.01）.结论：DN-hTERT能特异性抑制MCF7细胞生长和端粒酶活性.     

腺病毒载体介导人KDR胞外段诱导抗小鼠肝癌的免疫效应

目的：探讨复制缺陷型腺病毒载体（Ad）介导人血管内皮细胞生长因子受体-2（hVEGFR-2或hKDR）胞外段诱导抗小鼠肝癌血管免疫及打破免疫耐受的效果。方法：构建Ad hKDRE,用Ad hKDRE皮内免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞作为效应细胞（E）,Hepa1-6/mKDR作为靶细胞（T）,行乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测特异性CTL杀伤活性;给免疫小鼠接种肝癌细胞Hepa1-6,观察荷瘤小鼠成活情况。结果：Ad hKDRE免疫小鼠1周后,在E∶T为100∶1、50∶1和25∶1时,Ad hKDRE诱导的6hCTL杀伤率分别为（81.5±5.6）%、（68.4±5.5）%和（39.6±3.9）%。Ad hKDRE免疫小鼠1周后接种2×10^6 Hepa1-6肝癌细胞,观察2个月无小鼠成瘤;接种5×106 Hepa1-6细胞,小鼠无瘤成活率为60%。上述CTL效应和抗成瘤作用在清除CD8＋和CD4＋ T淋巴细胞后消失。结论：Ad介导异种（人）KDR胞外段能有效地打破小鼠肝癌的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,这种特异性细胞免疫反应是CD4^＋和CD8^＋ T细胞依赖性的。     

受体依赖性TRAIL重组腺病毒对人肺癌细胞凋亡的诱导作用

目的：观察重组TRAIL腺病毒（Ad5TRAIL及Ad5F35TRAIL）对人非小细胞肺癌（nonsmallcell lung cancer,NSCLC）原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种AdTRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法：采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z793、QG56和NCIH520及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平;分别以Ad5TRAIL及Ad5F35TRAIL重组腺病毒按MOI 10和50感染上述细胞,48 h后Annexin VFITC双标法流式细胞术检测细胞的早期凋亡。结果：A549、Z793、QG56和NCIH520 4株肺癌细胞中,CD46的表达均明显高于CAR表达。Z793、QG56细胞对Ad5TRAIL和Ad5F35TRAIL的作用较敏感, MOI=10感染后凋亡率分别为（11.76±2.10）%、（15.96±2.89）%和（6.05±158）%、（10.11±1.26）%,显著高于对照组\[（2.33±0.37）%和(5.95±1.89）%,P<0.05\];MOI=50感染时NCIH520细胞凋亡率分别为（12.89±3.2）%和（9.08±1.35）%,与对照组（7.04±2.17）%相比差异无统计学意义（P>0.05）;Ad5TRAIL和Ad5F35TRAIL均不能诱导A549细胞凋亡。10例原代肺癌细胞CD46表达也明显较CAR高;Ad5TRAIL或Ad5F35TRAIL 感染后,5例的原代肺癌细胞检测到凋亡;与Ad5TRAIL相比,Ad5F35TRAIL诱导的凋亡率更高。结论：两种TRAIL重组腺病毒对非小细胞肺癌细胞均有凋亡诱导作用,Ad5F35TRAIL的作用强于Ad5TRAIL,更适合于非小细胞肺癌的基因治疗。     

人骨髓瘤细胞RPMI 8226的生物学特性

目的观察人骨髓瘤细胞RPMI 8226的生物学特性。方法光镜下观察RPMI 8226细胞形态、生长特点、体外克隆形成率;流式细胞仪分析其免疫表型、周期分布、多药耐药蛋白P-170和ABCG2的表达情况;MTT法分析其药物敏感性;PCR-SSP法检测HLA-Ⅰ类分子基因型;动物实验观察成瘤情况。结果 RPMI 8226细胞呈圆形,悬浮生长,细胞体积较大,细胞群体倍增时间为24.48 h。14 d和21 d时的克隆形成率分别为（10.27&#177;1.38）%、（42.56&#177;2.98）%。RPMI 8226细胞表达CD38、CD138和CD49e,不表达CD20、CD19、CD11a、CD3、CD13、κ、λ。RPMI 8226细胞周期为：G0/G1期细胞占（57.64&#177;2.31）%,S期细胞占（35.75&#177;1.18）%、G2/M期细胞占（6.73&#177;0.21）%;P-170和ABCG2表达率分别为（2.27&#177;0.35）%、（1.33&#177;0.26）%。RPMI 8226细胞对ADM、VCR、DDP、VP16和MMC药物的IC50分别为（0.56&#177;0.06）、（0.92&#177;0.10）、（1.17&#177;0.32）、（1.83&#177;0.16）和（4.91&#177;0.84）μmol/L。染色体数目在43－49之间。HLA-Ⅰ基因型为A19,19;B 15,37;Cw02,02。BALB/c裸鼠皮下接种1&#215;107个细胞可以成瘤,病理证实为浆细胞瘤。结论 RPMI 8226细胞具有多发性骨髓瘤细胞的特点,可以用于基础和临床研究。     

人Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达及其对细胞生长的抑制

目的：研究外源性分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation3，Id3）基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法：构建磁，和EGFP的融合基因表达载体pEGFP／Id3，采用脂质体转染技术将pEGFP／Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞EGFP表达效率，荧光显微镜观察EGFP表达情况；半定量RT—PCR、免疫细胞化学分析转染后A549细胞Id3mRNA和蛋白的表达。MTT法检测转染后A549细胞生长抑制情况，FCM分析A549细胞周期进程，AnnexinV／7-AAD和Hoechst33258染色检测转染后细胞的凋亡情况。结果：成功构建入肚，与EGFP融合基因表达载体pEGFP／Id3；荧光显微镜和FCM观察到EGFP的有效表达，转染48—72h时EGFP表达率最高；Id3mRNA及蛋白在转染后的A549细胞中能有效表达。转染后48h和72h，pEGFP／Id3转染组A549细胞生长受到明显抑制（P〈0．01）；细胞周期分析表明，pEGFP／Id3转染组G0／G1期细胞显著高于对照组（P〈0．05）；AnnexinV／7-AAD双染结果显示，pEGFP／Id3转染组细胞的早期凋亡率[（10．67&#177;2．60）％]显著高于pEGFP组[（3．39&#177;2．21）％]和未转染组[（2．35&#177;0．95）％]（P〈0．05）；Hoechst33258染色结果也证实pEGFP／Id3组A549细胞出现明显凋亡形态特征。结论：外源性加基因在肺腺癌A549细胞中的表达能抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。     

含AFP基因调控序列的pAFP-P53-EGFP质粒诱导AFP阳性肝癌细胞凋亡

目的：观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用。方法：将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列,构建pAFPEGFP载体,分别转染人肝癌HepG2（AFP阳性）、人肝癌SMMC7721（AFP阴性）和人宫颈癌HeLa（AFP阴性）细胞,荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度。引入P〖STBX〗53〖STBZ〗基因片段,构建pAFPP53EGFP重组质粒,转染HepG2、SMMC7721和HeLa细胞,Western blotting检测各组细胞P53蛋白的表达,流式细胞术分析各组细胞凋亡率及细胞周期。结果：成功构建了pAFPEGFP和pAFPP53EGFP重组质粒。pAFPEGFP转染后,AFP阳性的HepG2细胞中EGFP荧光蛋白表达显著高于AFP阴性的SMMC7721和HeLa细胞。pAFPP53EGFP转染后,HepG2细胞中P53蛋白的表达量明显高于SMMC7721和HeLa细胞;HepG2细胞的G1期细胞及细胞凋亡率明显高于SMMC7721和HeLa细胞\[(66.7±0.25)% vs（50.5±0.18）%,（51.0±0.20）%,P<0.05;（2.65±008）% vs（0.42±003）%,（0.39±0.02）%,P<0.05\], 但S期细胞明显低于转染后SMMC7721和HeLa细胞\[(20.1±022)% vs（29.8±018）%,（37.8±0.21）%,P<0.05\]。结论：含AFP基因调控序列的pAFPP53EGFP载体可专一性地作用于AFP阳性肝癌细胞,引起肝癌细胞周期阻滞和凋亡。     

骨桥蛋白反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞SKOV3粘附侵袭的实验研究

目的研究骨桥蛋白（OPN）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）抑制人卵巢癌细胞株SKOV3粘附侵袭及诱导凋亡的作用。方法用脂质体将骨桥蛋白ASODN转染卵巢癌细胞SKOV3。实验分3组：对照组,随机序列寡核苷酸（random oligonucleotide,rODN）组和ASODN组。通过荧光定量RT-PCR、流式细胞仪检测法、黏附细胞计数法和Boyden小室法分别测定骨桥蛋白mRNA和细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达及癌细胞黏附力、侵袭力的变化。Annexin V染色法、DNA ladder法和Hoechst染色法检测凋亡。结果转染后ASODN组骨桥蛋白mRNA的相对定量比值较对照组显著降低（1.95&#177;0.81 vs 5.26&#177;0.66,P〈0.01）;流式细胞仪检测骨桥蛋白表达结果显示,转染后平均荧光指数明显降低,细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达下降（P〈0.01）;转染后ASODN组黏附力和侵袭力均较对照组显著下降（黏附细胞百分数值为16.97&#177;1.60 vs 36.14&#177;1.16,穿透聚碳酸酯膜细胞数为44.67&#177;2.08 vs 83.67&#177;4.51,P值均〈0.01）;经骨桥蛋白ASODN作用后SKOV3细胞发生凋亡。而rODN组上述各指标较对照组无明显变化。结论骨桥蛋白的表达与黏附侵袭能力密切相关,反义寡核苷酸能有效抑制卵巢癌细胞株SKOV3细胞骨桥蛋白基因的表达,从而抑制蛋白质的合成,降低其黏附侵袭能力,并能够诱导凋亡。     

多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究

目的 深入研究视网膜母细胞瘤（ＲＢ）内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用ＳＳＣＰ分析、ＤＮＡ序列测定以及多重ＰＣＲ等技术,检测分析ＲＢ肿瘤内Ｒｂ、ｐ５３,ｐ１６,ｐ１５及ｐ１２等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约７４％的ＲＢ肿瘤有Ｒｂ基因点突变,１６％显示,ｐ１６基因缺失,但ｐ５３及ｐ２１基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 ＲＢ的发病和病变的进展主要是由于以Ｒｂ基因为核心的代谢     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

Bcl-x Gene Expression in Hodgkin's Disease

Bcl-x is a Bcl-2-family protein that has been previously detected in cortical thymocytes, plasma cells, and activated lymphocytes. We report here on the high detection rate of the Bcl-x protein found in 86% of Hodgkin's disease samples and on the significance regarding its complex role among the Bcl-2-family of proteins: Bcl-x is known to heterodimerize with Bcl-2 (an anti-apoptosis protein) and with Bax, a potent inducer of cell death. Morover, recent evidences show that Bcl-x may induce multiple drug resistance in vitro, suggesting that chemical or biological interactions with this protein may have potential therapeutic value in Hodgkin's disease.     

Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。     

RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C—Met的免疫表达及其意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C—Met基因的表达情况。结果Hepsin、C—Met、RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70．1％、64．4％、65．5％,三者的阳性表达两两呈正相关（P〈0．01）,同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性（P〈0．01）。结论Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后。     

乙嘧酚磺酸酯诱发CHO和L5178Y细胞基因突变的研究

目的：采用体外培养细胞基因突变试验,评价乙嘧酚磺酸酯原药对中国仓鼠卵巢CHO细胞基因HPRT立点和小鼠淋巴瘤L5178Y细胞基因TK位点的诱变性。方法：使用乙嘧酚磺酸酯原药对CHO细胞和L5178Y细胞进行染毒,实验设置5、15、50、150μg/ml共4个浓度组,分别对CHO细胞进行集落形成率,HPRT位点突变频率的测定;对L5 178Y细胞进行接种效率,相对存活率,TK位点突变频率的测定。结果：随着乙嘧酚磺酸酯原药剂量的逐渐增高,CHO细胞的集落形成率较阴性对照组明显降低（P〈0.01）;L5178Y田胞的平板接种效率和相对存活率与阴性对照组相比均明显下降,但是设计的4个剂量组基因突变率与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：在本实验条件下,乙嘧酚磺酸酯原药对CHO细胞和L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,但其对细胞基因HPRT应点和TK位点的突变率无明显影响。     

人PTEN基因表达载体的构建及其在U251细胞中的表达

背景与目的:克隆人野生型和突变型PTEN的cDNA并构建其表达载体,探讨该表达质粒在人星形胶质瘤细胞U251中的表达情况.材料与方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆入pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析.再分别将两段基因定向克隆入pcDNA3.1( )载体中构建表达载体,转染入U251细胞.结果:成功克隆了人野生型及突变型PTEN cDNA并成功构建其表达载体,发现突变型PTEN蛋白对细胞生长无明显抑制作用,而野生型PTEN蛋白对细胞生长有明显抑制作用.结论:PTEN可能能抑制肿瘤细胞生长,为后进一步开展PTEN对肿瘤相关功能的研究奠定基础.     

Virulence Genes of Helicobacter pylori in Gastritis,Peptic Ulcer and Gastric Cancer in Laos

Background: Helicobacter pylori (H. pylori) infection is an established cause of peptic ulcers and gastric cancer.The aim of this study was to identify H. pylori genotypes and to examine their associations with geographicalregions and gastritis, peptic ulcers and gastric cancer in Laos. Materials and Methods: A total of 329 Lao dyspepticpatients who underwent gastroscopy at Mahosot Hospital, Vientiane, Laos during December 2010 - March 2012were enrolled. Two biopsy specimens (one each from the antrum and corpus) were obtained for CLO testing andonly CLO test-positive gastric tissue were used to extract DNA. PCR and sequencing were identified for variantsof the cagA and vacA genotypes. Results: Some 119 Laos patients (36.2%) were found to be infected with H. pyloriincluding 83 with gastritis, 13 with gastric ulcers (GU), 20 with duodenal ulcers (DU) and 3 with gastric cancer.cagA was detected in 99.2%. East-Asian-type cagA (62%) and vacA s1c (64.7%) were predominant genotypes inLaos. vacA s1c-m1b was significantly higher in GU than gastritis (53.8% vs. 24.1%; P-value=0.04) whereas vacAs1a-m2 was significantly higher in DU than gastritis (40.0% vs. 16.9%; P-value=0.03). East-Asian-type cagA andvacA s1c were significantly higher in highland than lowland Lao (100% vs. 55.8%; P-value=0.001 and 88.2% vs.61.5%, P-value=0.03 respectively). Conclusions: H. pylori is a common infection in Laos, as in other countriesin Southeast Asia. The cagA gene was demonstrated in nearly all Laos patients, cagA and vacA genotypes beingpossible important factors in explaining H. pylori infection and disease outcomes in Laos.     

肺癌组织中p16基因缺失的初步研究

目的　探讨p16基因缺失与肺癌发生的关系。方法　采用PCR方法检测 48例肺癌组织标本中p16基因缺失的情况 ,其中包括 2 3例原发性小细胞肺癌 (SCLC)和 2 5例原发性非小细胞肺癌 (NSCLC)。结果　在 2 3例SCLC中没发现p16基因缺失 ,而 2 5例NSCLC中 ,7例存在p16基因缺失 ,缺失率达 2 8%。结论　结果提示p16基因的变异与原发性非小细胞肺癌的发生及发展相关。