严重腹腔感染大鼠JAK/STAT通路活化与多器官功能损害的关系

目的观察Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路在腹腔感染所致脓毒症大鼠组织中的活化规律及其与多器官功能损害的关系.方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)模型,大鼠随机分为正常对照组、CLP组、JAK2抑制剂(AG490)组和STAT抑制剂(雷帕霉素,RPM)组.留取肝、肺、肾、肠组织测定STAT1/3活性,同时测定血清AST、BUN含量及肺组织髓过氧化物酶(MPO)和肠组织二胺氧化酶(DAO)活性.结果CLP后2h肝、肺、肠组织中STAT1均迅速活化,6～24h活化达到高峰,而肾组织STAT1活化相对迟缓.肝、肺组织中STAT3活性亦明显升高,但肾、肠组织中未检测到活化STAT3.AG490、RPM早期处理后,除肾组织外,其他组织STAT1活性均有不同程度下降(P<0.05或0.01),肝、肺组织STAT3活性也显著降低.同时,AG490、RPM处理组血清AST、BUN水平和肺组织MPO活性在24～48h均有不同程度地下降(P<0.05或.01),但小肠DAO活性无明显改变.结论STAT1、STAT3在脓毒症时高度活化,并参与了严重腹腔感染所致脓毒症的病理过程.抑制JAK/STAT通路活化有助于多器官功能损害的防治.     

脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达的信号转导机制

目的　探讨Janus激酶 (JAK ) /信号转导和转录激活因子 (STAT)通路对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的调节作用及其意义。方法　采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)模型造成脓毒症 ,98只动物随机分为正常对照组、脓毒症组、JAK2抑制剂AG490处理组和STAT抑制剂雷帕霉素 (RPM )处理组。采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)测定肺组织HMGB1mRNA表达水平 ,同时测定髓过氧化物酶 (MPO )活性。结果　与正常对照组相比(0 .2 0 7± 0 .0 19) ,CLP组 2、6、2 4h肺组织HMGB1mRNA均显著升高 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,分别为0 .471± 0 .0 3 5、0 .3 69± 0 .0 2 8、0 .491± 0 .0 42。AG490处理组 2h肺组织HMGB1mRNA表达明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,RPM处理组 2、6、2 4、48hHMGB1均显著下降 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。同时 ,AG490、RPM处理组 2 4、48h肺组织MPO活性显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论　JAK/STAT信号通路参与了脓毒症肺组织HMGB1mRNA表达的病理过程 ,抑制其活化有助于下调HMGB1mRNA表达并减轻肺损伤。     

IL-6/STAT3信号通路在脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达上调中的作用

目的 探讨白细胞介素6/信号转导及转录激活因子3(IL-6/STAT3),信号通路在脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达上调中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠90只,10～14周龄;体重250～300 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=30):假手术组(S组)、脓毒症组(CLP组)和抗IL-6单克隆抗体组(IL-6组).采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型.IL-6组于术前1h时腹腔注射抗IL-6单克隆抗体0.5 mg/kg,S组和CLP组给予等容量生理盐水.于术后6、12、24、48、72 h时分别处死大鼠6只,取肺组织,分别采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测肺组织HMGB1含量和HMGB1 mRNA表达;采用凝胶阻滞电泳分析技术检测肺组织STAT3 DNA结合活性.结果 与S组比较,CLP组和IL-6组肺组织HMGB1含量和HMGB1 mRNA表达、STAT3DNA结合活性升高(P＜0.05);与CLP组比较,IL-6组肺组织HMGB1含量和HMGB1 mRNA表达、STAT3 DNA结合活性降低(P＜0.05).结论 IL-6/STAT3信号通路参与了脓毒症大鼠肺组织HMGB1表达上调.     

内毒素受体Tlr4及CD14基因在脓毒症大鼠肺、肝组织中的表达及其意义

目的 采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型，探讨脓毒症时大鼠肺、肝组织内毒素受体Th4及CD14mRNA的改变及其意义。方法 50只SD大鼠，随机分为正常对照组（10只）、CLP组（40只），CLP后24、48、72和96h处死动物，留取肺、肝、肾及空肠组织，分别检测Tlr4、CD14mRNA的表达。CLP组24、48、72和96h肺、肝组织Tlr4及CD14mRNA的表达升高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），而肾、空肠组织Tlr4及CD14mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 提示肺、肝组织中Tlr4及CD14基因的表达改变与脓毒症的发生发展过程有密切的关系。     

JAK2激酶抑制剂AG490对结肠癌HT-29细胞侵袭性的影响

目的观察JAK2激酶抑制剂AG490对结肠癌HT-29细胞侵袭以及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响，探讨STAT3信号转导通路在结肠癌侵袭转移调控中的作用。方法应用JAK2激酶抑制剂AG490处理结肠癌HT-29细胞，Matrigel肿瘤体外侵袭模型检测肿瘤细胞侵袭；Western blot检测STAT3蛋白表达；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测MMP2mRNA表达。结果AG490可抑制JAK2／STAT3信号转导通路活化及结肠癌HT-29细胞侵袭，在此过程中AG490在mRNA水平抑制MMP-2表达。结论STAT3信号转导通路参与结肠癌细胞侵袭调控，阻断STAT3通路活化可抑制结肠癌细胞侵袭，这一作用可能是通过抑制MMP-2表达实现的。     

不同剂量利多卡因对脓毒症大鼠急性肝损伤的影响

目的 评价不同剂量利多卡因对脓毒症大鼠急性肝损伤的影响.方法 健康清洁级雄性Wistar大鼠50只,体重200 ～ 250 g,8-10周龄,采用随机数字表法将大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、模型组(CLP组)、不同剂量利多卡因组(L1-3组).采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型.于CLP术后即刻、1、2h时S组和CLP组分别腹腔注射生理盐水0.5 ml,L1-2组分别腹腔注射利多卡因5、10和20 mg/kg.于术后24h时采集血样测定血浆谷丙转氨酶(ALT)活性,处死后取肝组织检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)mRNA表达水平,光镜下观察肝组织病理学改变.结果 与S组比较,其余各组血浆ALT浓度升高,肝组织HMGBl mRNA表达上调(P＜0.05).与CLP组比较,L 1-3组肝组织HMGB1 mRNA表达下调,L2组和L3组血浆ALT浓度降低(P＜0.05).与L1组比较L2组和L3组血浆ALT浓度降低,肝组织HMGB1 mRNA表达下调(P＜0.05).与L2组比较L3组血浆ALT浓度降低,肝组织HMGB1 mRNA表达下调(P＜0.05).CLP组肝组织病理损伤严重,L1-3组肝组织病理损伤均减轻,且L3组最为明显.结论 利多卡因可减轻脓毒症大鼠急性肝损伤,且与剂最有关,其机制与抑制肝组织HMGB1 mRNA过表达有关.     

脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1基因表达及其与内毒素血症的关系

目的观察脓毒症时高迁移率族蛋白 1(HMG 1)基因表达的变化及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。 10 0只动物随机分为正常对照组 (10只 )、假手术组 (10只 )、CLP组 (6 0只 )及重组杀菌 /通透性增加蛋白 (rBPI2 1)治疗组 (2 0只 )。留取肝、肺及肾组织标本分别检测HMG 1mRNA表达及内毒素水平。结果CLP术后 6～ 72h肝、肺及肾组织HMG 1mRNA表达均不同程度增强 (P <0 0 5 )。rBPI2 1治疗后 12h肝、肺及肾组织内毒素水平分别为3 1± 0 8、2 6± 0 3、2 4± 0 4EU/g ,均明显低于CLP组 (5 2± 0 8、5 0± 0 8、14 2± 4 0EU/g ,P <0 0 5 ) ;同时 ,12h肝、肺、肾组织和 2 4h肝组织HMG 1mRNA表达明显受抑制 (P <0 0 5 )。CLP后肝、肺、肾组织HMG 1mRNA表达分别与相应组织内毒素水平呈显著正相关 (r =0 2 90 ,P <0 0 5 ;r =0 4 5 5 ,P <0 0 5 ;r=0 2 87,P <0 0 5 )。结论脓毒症时细菌内毒素持续侵入血循环 ,并蓄积于局部组织 ,参与了HMG 1的诱生 ,并可在基因水平调控其表达     

JAK/STAT通路在金属蛋白酶1组织抑制剂抑制肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的 探讨金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）抑制大鼠肾小球系膜细胞（RMC）凋亡与Janus激酶/信号转导和转录激活子（JAK/STAT）通路的关系。 方法 用无血清培养基体外培养pcDNA3空载体、人正义、反义TIMP-1基因重组真核表达载体转染RMC。根据是否加JAK2特异性抑制剂AG490刺激24 h,将细胞分为未转染组、未转染＋AG490组、空载体组、空载体＋AG490组、正义组、正义＋AG490组、反义组和反义＋AG490组。另外设正常培养条件下的RMC作为正常对照组。应用流式细胞技术检测各组RMC的凋亡率。RT-PCR检测TIMP-1、bcl-xl、cyclin D1、p27kip1和JAK2 mRNA的表达。Western印迹检测胞质中JAK2、STAT3、STAT5及其相应磷酸化蛋白(p-JAK2、p-STAT3、p-STAT5)的表达。 结果 未转染组、正义组及反义组RMC凋亡率分别为（10.59±0.96）％、（7.08±0.43）％和（21.91±0.25）％，各组间差异有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)。在未加AG490的各组RMC中,bcl-xl和cyclin D1 mRNA在正义组中表达最高，反义组中最低，p27kip1 mRNA在反义组中表达最高。加入AG490后，各组细胞的凋亡率均显著增加（P < 0.01）；TIMP-1、bcl-xl和cyclin D1 mRNA表达均减少；p27kip1 mRNA表达均增加。在未加AG490的各组细胞中，p-JAK2、p-STAT3和p-STAT5在正义组中表达最高，反义组中最低。加入AG490后上述蛋白表达均减少，且正义＋AG490组最高，反义＋AG490组最低。 结论 TIMP-1表达受JAK/STAT信号通路调控，后者可通过上调前者的表达抑制RMC凋亡；TIMP-1通过JAK/STAT信号通路抑制RMC凋亡。 bcl-xl、cyclin D1和p27kip1参与了上述过程。     

Janus激酶-信号转导及转录活化因子通路对内毒素/脂多糖体外诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1合成释放的调节作用

目的探讨Janus激酶(JAK)-信号转导及转录活化因子(STAT)通路对内毒素/脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)合成释放的调节作用。方法取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,培养3d后用LPS刺激,分别于刺激前及刺激10、30、60、120min时观察JAK2、STAT1以及STAT3的活化情况,每时相点重复测定4次,以积分吸光度(IA)值表示;另取细胞分为正常组、LPS刺激组、JAK2抑制组、STAT1抑制组、STAT3抑制组,培养3d后用LPS刺激后4组细胞,刺激前2h,后3组分别加入AG490、氟达拉滨及雷帕霉素,观察各组HMGB1基因表达及蛋白释放情况,每组重复测定4次。结果LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞JAK2、STAT1及STAT3在短时间(120min)内活化,其中STAT3活化最为迅速,10min即可达到峰值(7.47±0.56)。JAK2抑制组、STAT1抑制组、STAT3抑制组HMGB1基因表达均明显受抑制,其表达量均明显低于LPS刺激组(P<0.01),其中JAK2抑制组明显高于正常组(P<0.01),其余两个抑制组则与正常组相近(P>0·05);但3个抑制组HMGB1蛋白表达量与LPS刺激组基本相同,均明显高于正常组(P<0.01).结论JAK-STAT通路可在LPS刺激下早期活化,部分参与了诱导HMGB1合成的信号调控过程。     

不同剂量利多卡因对脓毒症大鼠小肠HMGB1表达的影响

目的 评价不同剂量利多卡因对脓毒症大鼠小肠高迁移率组蛋白B1( HMGB1)表达的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠50只,体重200～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(S组)不行盲肠结扎穿孔术;脓毒症组(Sep组)采用盲肠结扎穿孔术法制备脓毒症模型;不同剂量利多卡因组(L1～3组)于术后即刻、1、2h时分别腹腔注射利多卡因5、10、20 mg/kg,S组和Sep组分别给予等容量生理盐水.于术后24、48 h时各组随机取5只大鼠处死取小肠组织,光镜下观察小肠组织病理学形态,采用PCR技术检测HMGB1 mRNA的表达,ELISA法测定二胺氧化酶(DAO)活性.结果 与S组比较,Sep组和L1～3组各时点大鼠HMGB1 mRNA表达上调,DAO活性降低(P＜0.05);与Sep组比较,L1～3组大鼠HMGB1 mRNA表达下调,DAO活性升高(P＜0.05);各时点L1-3组大鼠HMGB1 mRNA表达依次下调,DAO活性依次升高(P＜0.05).L1-3组小肠组织病理学损伤较Sep组减轻.结论 利多卡因可呈剂量依赖性减轻脓毒症大鼠小肠损伤,其机制可能与抑制HMGB1表达上调有关.     

高迁移率族蛋白-1在脓毒症所致多器官功能损害中的作用

目的　观察高迁移率族蛋白 1(HMG 1)在脓毒症中的变化规律及其与多器官功能损害的关系。　方法　采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。动物分为正常对照组 ( 10只 )、假手术组 ( 10只 )、盲肠结扎穿孔组 ( 6 0只 )及正丁酸钠治疗组 ( 2 0只 )。留取组织和血标本分别检测HMG 1mRNA表达及器官功能指标。另设实验观察正丁酸钠对脓毒症大鼠的治疗效果 ( 5 7只 )。结果　CLP术后 6～ 72h肝、肺、肾及小肠组织HMG 1mRNA表达均显著增强 (P <0 0 5或P <0 0 1)。正丁酸钠处理可显著降低CLP术后 12及 2 4h动物各组织HMG 1mRNA表达 ,12h血清丙氨酸转胺酶、肌酐水平比未治疗组显著降低 (P <0 0 1) ,2 4h肺组织髓过氧化物酶活性亦明显下降 (P <0 0 1)。早期给予正丁酸钠治疗 ,大鼠 1～ 6d存活率显著高于未治疗组 (P <0 0 5或P <0 0 1)。　结论　HMG 1在诱导脓毒症动物过度炎症反应与多器官功能损害中具有重要作用。     

烫伤延迟复苏大鼠组织白细胞介素18mRNA表达的变化

目的 探讨烫伤延迟复苏后不同组织白细胞介素18（IL－18）mRNA的动态表达规律。方法 采用大鼠TBSAⅢ度烫伤延迟复苏模型,54只大鼠随机分为正常对照组、烫伤延迟复苏组、选择性消化道脱污染（SDD）预防组,分别在伤前及伤后2、8、16、24h,采用逆转录聚合酶链式反应,检测肠、肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA含量。结果 烫伤延迟复苏后体循环内毒素水平显升高,8、24h达高峰（P＜0．01）,给予SDD预防治疗可显降低内毒素峰值（P＜0．05）;另一方面,烫伤后2h,肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA含量表达较伤前值有显升高,烫伤后8h达高峰（P＜0．01）,且一直持续至伤后24h,给予SDD预防后可不同程度抑制IL－18 mRNA的表达（P＜0．05－0．01）。相关分析显示,体循环内毒素水平同肠、肺、肝组织IL－18 mRNA呈显正相关（r值分别为0．298、0．290、0．365,P＜0．05－0．01）。结论 肠、肺、肝、肾等组织IL－18 mRNA表达在烫伤早期即显增多,并呈逐渐升高的趋势,创伤后内毒素血症对机体多种组织IL－18 mRNA基因表达具有重要影响。     

Effects of Adiponectin on Mortality and Its Mechanism in a Sepsis Mouse Model

ABSTRACT

The mortality of sepsis is increasing and conventional therapies for it have no better therapeutic effects. We investigated the effects of adiponectin (APN) on mortality and high mobility group box 1 (HMGB1) in polymicrobial sepsis mouse models. Sepsis models were established by cecal ligation and puncture (CLP) in BALB/c mice. Animals were randomly divided into four groups including control group (C group), model group (CLP group), early APN treatment group (APN + CLP group), and late APN treatment group (CLP + APN group). Mice in each group were killed at 6, 12, 24, and 48 hr after CLP, respectively, to collect samples for determining the levels of serum interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), high mobility group protein-1 (HMGB1), and the expression of lung tissue HMGB1 mRNA. The survival curves in the four groups were drawn. The mortality rates were significantly lower in APN + CLP (30%) and CLP + APN (40%) groups than in CLP group (80%) seven days after CLP. Serum levels of cytokines (IL-6 and TNF-α) and HMGB1 were significantly reduced (p < .05) in APN + CLP and CLP + APN groups compared with those of CLP group. There was a significant correlation between serum HMGB1 and lung HMGB1 mRNA (r = 0.891). The levels of HMGB1 and HMGB1 mRNA were higher in CLP, APN + CLP, and CLP + APN groups than in C group (p < .01), but were lower in APN + CLP and CLP + APN groups than in CLP group (p < .01). APN can reduce the mortality rate and plays an anti-inflammatory role in polymicrobial sepsis mouse models through inhibiting HMGB1.     

丙酮酸乙酯对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1表达和急性肾损伤的影响

目的观察丙酮酸乙酯（EP）对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达及急性肾损伤的影响。方法采用30％体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏大鼠模型,78只大鼠随机分为假伤组（n=18）、烫伤组（n=30）和EP治疗组（n=30）;采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织HMGB1 mRNA表达,蛋白印迹法及免疫组化法检测。肾组织HMGB1蛋白表达;同时测定血尿素氮（BUN）含量并观察。肾组织病理变化。结果与假伤组比较,严重烫伤后。肾组织HMGBl基因／蛋白表达于伤后8～72h显著增强（P〈0．05）,BUN含量在伤后8h及24h显著升高（P〈0．05）。与烫伤组比较,EP治疗组肾组织8、24、72h时HMGBl表达均显著下调,BUN含量在8、24h时亦明显下降（P〈0．05）;光镜下观察烫伤组肾组织炎性细胞浸润,肾小管结构破坏出现浊肿、变性,而EP处理后。肾脏病理改变不同程度地减轻。结论HMGB1作为晚期炎性因子参与了烫伤后。肾组织炎症反应的病理过程,应用EP治疗可有效下凋。肾组织HMGB1表达,并显著减轻烫伤延迟复苏所致的急性肾损伤。     

休克期切痂对烫伤大鼠肝、肺组织高迁移率族蛋白B1表达及促炎/抗炎平衡的影响

目的 观察休克期切痂对烫伤大鼠组织早期和晚期炎症介质变化规律及相应器官功能的影响,探讨休克期切痂改善预后的分子机制。方法 Wistai大鼠30％Ⅲ度烫伤后随机分为24h切痂组和72h切痂组。分别检测肝、肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果烫伤后2d,肝、肺组织HMGB1、TNF-α mRNA表达增强,而IL-10mRNA伤后8d增强;24h切痂大鼠伤后4d肝、肺组织HMGB1和TNF-α mRNA表达下调,伤后8d其IL-10 mRNA表达恢复正常;72h切痂大鼠伤后8d肝、肺IL-10mRNA仍维持较高水平。伤后2．8d肝组织内TNF-α蛋白水平呈双峰改变,4d时减少;24h和72h切痂组肝TNF-α维持在正常范围;伤后2、4d肝TNF-α／IL-10比例升高,24h切痂可降低TNF-α／IL-10。此外,24h切痂组4、8d血浆天冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶含量及肺组织髓过氧化物酶活性显著降低。结论休克期切痂可阻断严重烫伤大鼠肝、肺组织早期和晚期炎症介质过度表达,维持促炎／抗炎介质平衡,改善多脏器功能。     

细胞外信号调节激酶在内毒素休克大鼠生物喋呤诱生中的作用机制探讨

目的观察细胞外信号调节激酶（ERK）通路抑制剂对生物喋呤（BH4）和一氧化氮（NO）表达及核因子-kB（NF-kB）活化的影响,探讨内毒素休克时ERK信号通路与NF-kB的交汇作用及其对BH4诱生NO的调控机制。方法采用内毒素休克模型,60只大鼠随机分为正常对照组（n=8）、内毒素休克组（n=32）和ERK抑制剂PD98059拮抗组（n=20）。留取动物肝、肺、肾组织进行NF-kB活性分析以及三磷酸鸟苷环水解酶I（GTP—CHⅠ）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达的检测,并测定组织及血浆中BH4、NO水平。结果内毒素攻击可导致动物肝、肺、肾组织GTP-CHⅠ基因表达和BH4水平明显升高,至伤后24h仍持续于较高水平;与之相应,组织iNOS基因表达和NO水平亦明显升高;各组织NF-kB迅速活化,并于2h达峰值。采用PD98059处理后,内毒素休克动物肾组织GTP—CHⅠ mRNA表达明显受抑,肝、肺组织GTP—CHⅠmRNA表达仅呈现降低趋势;血浆及肝、肾组织中BH4水平12h显著降低;同样,各组织iNOS mRNA表达及NO水平早期亦显著降低。此外,PD98059处理组动物肝组织2～6h、肺组织2h、24h和肾组织24h时相点NF-KB活性显著降低。结论内毒素休克时抑制ERK通路,能部分下调BH4和NO表达与NF-kB的活化,表明ERK与NF-kB通路间可能存在交汇作用,共同参与了BH4诱生NO的调控作用。     

不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1表达的影响

目的 评价不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响.方法 雄性SD大鼠,周龄8～12周,体重270～320 g,放血处死后,收集支气管肺泡灌洗液,分离、培养和传代肺泡巨噬细胞.将细胞接种于6孔培养板中,细胞浓度105/ml,培养48 h后,随机分为5组(n=6),对照组(C组)不施加机械牵张应力;S1-4组分别施加5%、10%、15%和20%机械牵张应力,牵张频率30次/min,牵张时间24 h.采用RT-PCR法测定HMGB1 mRNA表达;采用Western blot方法 测定HMGB1表达.结果 肺泡巨噬细胞给予机械牵张应力后,HMGB1及其mRNA表达随机械牵张应力的增大而上调(P<0.05或0.01).结论 大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1的表达与机械牵张应力呈强度依赖性.     

高迁移率族蛋白B1 mRNA在脓毒症大鼠脾脏中的表达

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA在脓毒症大鼠外周免疫器官脾脏的表达规律及其与血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的关系。方法：采用盲肠结扎穿孔（CLP）方法制备大鼠脓毒症模型。83只大鼠随机分为正常对照组（10只）、盲肠结扎穿孔组（38只）,盲肠结扎穿孔丙酮酸乙酯治疗组（35只）。分别于CLP术后4、12、24、48、72h或CLP术后丙酮酸乙酯治疗12、24、48、72h活杀动物,留取脾脏组织和血清标本,用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测脾脏组织HMGB1mRNA的表达规律,用放射性免疫方法检测血清TNF-α和IL-6的浓度。结果：HMGB1mRNA在正常大鼠脾脏组织有轻度表达,CLP术后表达显著增强（P〈0.05）。CLP术后24h和72h分别出现两个高峰。丙酮酸乙酯液治疗可显著降低CLP术后大鼠脾脏组织HMGB1mRNA的表达（P〈0.05）。CLP术后大鼠血清TNF-α和IL-6浓度显著增高（P〈0.05）,丙酮酸乙酯治疗可显著降低CLP术后大鼠TNF-α和IL-6的浓度（P〈0.05）。结论：HMGB1在脓毒症大鼠外周免疫器官脾脏的表达显著增高,并与血清TNF-α和IL-6等炎症因子的增高有重要关系;HMGB1参与了失控性炎症反应的发展过程。     

丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠组织保护和HMGB1表达的影响

目的:通过观察丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠组织HMGB1表达的影响,进一步揭示丙酮酸乙酯治疗脓毒症的分子作用机制。方法:将96只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、低剂量丙酮酸乙酯治疗组(LET组)、高剂量丙酮酸乙酯治疗组(ET组),以盲肠结扎穿刺法复制大鼠脓毒症模型。LET组(20 mg/kg)及ET组(40 mg/kg)即刻腹腔内注射EP注射液4 mL,每6 h重复注射一次,直至实验结束,假手术组及脓毒症组在相同时间用相同剂量的生理盐水腹腔内注射。各组大鼠分别于术后2 h、8 h、24 h、48 h 4个时间点随机处死6只大鼠,经腹主动脉取血,用ELISA方法检测血浆TNF-α、IL-6、HMGB1水平。术后24 h,取大鼠末端回肠,用RT-PCR法检测回肠组织HMGB1mRNA表达水平,用免疫组织化学两步方法观察肠组织HMGB1蛋白表达,在光镜下观察大鼠肠组织的病理变化。结果:与假手术组相比,脓毒症组血浆HMGB1在术后8 h、24 h、48 h显著增高,脓毒症组回肠组织HMGB1mRNA及蛋白表达在术后24 h显著增高(P0.05)。与脓毒症组相比,ET组、LET组血浆HMGB1在术后8 h、24 h、48 h显著降低,ET组、LET组回肠组织HMGB1mRNA及蛋白表达在术后24h显著降低(P0.05)。结论:脓毒症大鼠血浆HMGB1出现时间晚,作用时间长,提示HMGB1是脓毒症的重要晚期炎症介质。丙酮酸乙酯可抑制脓毒症大鼠血浆及肠组织HMGB1的表达,提示丙酮酸乙酯对脓毒症的治疗机制可能与其直接或间接抑制HMGB1的表达有关。