熟地黄的高效液相色谱／电喷雾电离-质谱分析

目的:建立熟地黄中化学成分的高效液相色谱-电喷雾-质谱分析方法。方法:液相色谱条件为:Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水二元高压梯度洗脱;流速:1 mL·min~(-1);二极管阵列检测器,设定波长:210 nm。质谱条件为:Agilent 离子阱质谱仪;ESI 离子源;负离子检出模式。结果:在负离子检出模式下,熟地黄的总离子流色谱图特征性很强,通过质谱中的主要碎片对梓醇、二氢梓醇、益母草苷、桃叶珊瑚苷以及地黄苷 A、B、C、D 共8种主要成分进行了结构解析。结论:在质谱负离子检出模式下,多数化学成分响应较好,又为熟地黄药材质量控制提供了一种方法。     

宁心安神颗粒定性定量方法研究

目的建立宁心安神颗粒的定性定量方法。方法采用薄层色谱法(TLC)对方中的炒酸枣仁、刺五加和夏枯草进行定性鉴别;以高效液相色谱法(HPLC)分别测定制剂中酸枣仁皂苷A和紫丁香苷的含量,酸枣仁皂苷A的含量测定采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水,流速为1.0 mL·min~(-1),蒸发光检测器,雾化温度60℃,柱温为25℃;紫丁香苷的含量测定采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水,流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长265 nm,柱温为25℃。结果炒酸枣仁、刺五加和夏枯草的TLC图斑点清晰,分离度较好且阴性样品无干扰;酸枣仁皂苷A、紫丁香苷的线性范围分别为72.1～1154.3μg·mL~(-1)(r=0.9999),4.5～90.8μg·mL~(-1)(r=0.9997),仪器精密度和重复性试验的RSD均小于2%,平均加样回收率分别为103.5%、95.6%。结论本试验所建立的方法专属性强,准确可靠,可用于宁心安神颗粒的质量控制。     

通脉颗粒的质量标准研究

目的研究通脉颗粒的质量控制标准。方法通过薄层色谱法(TLC)对通脉颗粒剂处方中的益母草、茵陈和当归3味药材进行定性鉴别;建立通脉颗粒中芍药苷高效液相色谱(HPLC)测定方法。结果在通脉颗粒薄层色谱鉴别中均能检出益母草、茵陈和当归;通脉颗粒高效液相色谱图中芍药苷色谱峰与其他组分峰分离良好,芍药苷质量浓度在3.6~144μg·mL~(-1)范围内线性关系良好,相关系数(r=0.999 8)符合要求,通脉颗粒的样品加样回收率为98.5%,RSD值为1.19%(n=5).结论建立的方法简便可行,该标准可作为通脉颗粒的质量控制方法。     

养血饮口服液的质量标准

目的:建立养血饮口服液的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对当归和大枣进行定性鉴别;用高效液相-蒸发光散射法测定黄芪甲苷的含量,选用的色谱柱为Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(38∶62),柱温为40℃,流速为0.8 ml·min-1,蒸发光散射检测器漂移管温度为85℃,气体流速2.0 L·min-1。结果:薄层色谱法检出了当归和大枣的特征斑点,黄芪甲苷的线性范围为0.522~4.176μg(r=0.999 8),平均加样回收率为97.9%,RSD为1.03%(n=6)。结论:该方法易于操作,结果准确,重复性良好,可用于的养血饮口服液质量控制。     

蒙药拉哈如各贡斯勒散的定性鉴别及含量测定

目的建立蒙药拉哈如各贡斯勒散的定性鉴别及含量测定方法。方法采用TLC法对方中栀子苷进行定性鉴别。运用HPLC法对紫草中左旋紫草素进行含量测定,色谱条件为Kromasil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.025 mol·L~(-1)磷酸溶液(85∶15)为流动相;检测波长为516 nm;流速为1.0 mL·min~(-1);进样量为20μL;柱温为30℃。结果薄层色谱中栀子苷斑点清晰,重复性好,易于鉴别。左旋紫草素质量浓度在0.61～39.00μg·mL~(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.3%(RSD=2.73%)。结论该法操作简便可行、重复性好、准确度高,可用于拉哈如各贡斯勒散的质量控制。     

乳痛宁颗粒的定性定量方法研究

目的:建立乳痛宁颗粒的定性定量方法。方法:用薄层色谱法对制剂中的赤芍和首乌藤进行鉴别,其中赤芍的薄层色谱鉴别采用赤芍为对照药材,芍药苷为对照品,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂;首乌藤的薄层色谱鉴别采用首乌藤为对照药材,以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30:10:0.5)为展开剂。用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量,高效液相的色谱条件为:用 Shimpack CLC-ODS 柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为0.7%(v/v)磷酸溶液-乙腈-三乙胺(75:25:0.02);流速为1.0 mL·min~(-1);检测波长为270 nm;柱温为40℃。结果:在薄层色谱中能准确鉴定出制剂中的赤芍和首乌藤;淫羊藿苷进样量在0.078～0.182μg范围内呈良好线性关系(r=0.9993);平均回收率为99.2%(n=9)。结论:本方法可作为乳痛宁颗粒的定性定量方法。     

红毛五加皮中刺五加苷E鉴别与测定及质量标准研究

目的:建立红毛五加皮中刺五加苷E的定性鉴别和含量测定方法,建立红毛五加皮的质量标准。方法:照2010年版中国药典方法检查红毛五加皮中总灰分和酸不溶性灰分,测定其浸出物含量。采用TLC法鉴别刺五加苷E,薄层色谱使用硅胶G薄层板,以三氯甲烷-甲醇-水(6∶3∶1)的下层溶液为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂;采用HPLC法测定刺五加苷E的含量,色谱柱为Welchrom C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸(13∶87),流速1 mL.min-1,检测波长207 nm,柱温35℃。结果:红毛五加皮中总灰分平均为6.69%,酸不溶性灰分平均为0.71%,浸出物平均含量为15.25%,刺五加苷E薄层斑点清晰,特征明显。刺五加苷E的线性范围为0.02696～1.0784μg(r=1.000),平均加样回收率(n=6)为97.2%(RSD=1.7%)。结论:本文建立的薄层鉴别方法特征明晰,液相色谱方法分离良好,经方法学验证,可用于红毛五加皮药材的质量检测。     

知柏地黄泡腾颗粒的质量标准研究

目的:建立知柏地黄泡腾颗粒的质量标准。方法:采用TLC方法对知柏地黄泡腾颗粒中牡丹皮、山茱萸、黄柏进行定性鉴别;采用HPLC法测定了马钱苷和丹皮酚的含量,色谱柱为Hypersil C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),马钱苷的流动相为乙腈-水(14∶86),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为240 nm。丹皮酚的流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(47∶53),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为274 nm。结果:TLC法可检出牡丹皮、山茱萸、黄柏,斑点清晰,阴性对照无干扰,专属性强。马钱苷的平均加样回收率为99.14%,RSD为0.87%。线性范围为0.181 2~1.359 0μg(r=0.999 9)。丹皮酚的平均加样回收率为101.21%,RSD为2.00%。线性范围为0.099~0.495μg(r=0.999 6)。结论:本方法准确可靠,可作为知柏地黄泡腾颗粒的质量控制方法。     

毒热清颗粒的质量标准研究

目的为新制剂毒热清颗粒建立质量标准。方法对制剂中连翘、紫花地丁、甘草采用薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定毒热清颗粒中黄芩苷、绿原酸的含量。色谱柱为Agilent ZORBAX XDB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相甲醇-0.4%磷酸(梯度洗脱),流速1.0m L/min,检测波长为316nm,柱温25℃。结果连翘、紫花地丁、甘草的TLC图斑点清晰,分离度好。黄芩苷、绿原酸检测进样量线性范围分别为0.4764~2.382μg(r=0.9999),0.4216~2.108μg(r=0.9999),加样回收率分别为98.8%(RSD=1.5%),99.1%(RSD=1.1%),精密度、重复性、稳定性实验的RSD2%,n均为6。结论所建质量控制方法科学合理,可作为毒热清颗粒的质量标准。     

荔大前合剂质量标准研究

目的:建立荔大前合剂的质量标准。方法:取荔大前合剂样品,采用薄层色谱(TLC)法对车前草做定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法[色谱柱:Agilent-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.5% 醋酸(55∶45);检测波长:326 nm;进样量:20 μL]测定蒙花苷含量。结果:荔大前合剂与车前草对照药材在TLC平板相应位置显现相同颜色的斑点,且阴性对照无干扰。蒙花苷在1.217~7.303 μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 6),加样回收率99.54%(RSD=1.5%,n=9)。结论:该方法简便易行,准确性和专属性好,可用于荔大前合剂的质量控制。     

HPLC法测定三才封髓丸中地黄苷A、地黄苷D、黄柏碱和木兰花碱

目的 建立HPLC法同时测定三才封髓丸中地黄苷A、地黄苷D、黄柏碱和木兰花碱的方法。方法 采用Phenomenex RP C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;0～28 min地黄苷A和地黄苷D检测波长为203 nm,28～60 min黄柏碱和木兰花碱的检测波长为225 nm;体积流量为1.0 mL/min;柱温为30 ℃;进样量20 μL。结果 地黄苷A、地黄苷D、黄柏碱和木兰花碱在4.52～90.40、4.10～82.00、5.35～107.00、5.28～105.60 μg/mL线性关系良好;平均回收率分别为98.86%、96.95%、99.15%、96.98%,RSD值分别为1.38%、1.24%、1.28%、0.85%。结论 建立的方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,可用于三才封髓丸的质量控制。     

双波长HPLC同时测定生地黄中6种化合物的含量

摘要： 目的：建立多波长高效液相法同时测定生地黄中6种化合物（梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷）的含量。方法：色谱柱：菲罗门Neptune C18（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速：1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长203nm（梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷）,334nm（毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷）。结果：6种化合物在各自的范围内呈现良好的线性关系(r>0.9990),回收率97.47%～98.61%,RSD为0.82%～1.27%。结论：该法简单快捷、稳定可靠,准确率高,重复性好,可用于生地黄质量评价。     

HPLC-ELSD测定地黄寡糖中地黄苷A含量

目的 建立测定地黄寡糖中地黄苷A的高效液相色谱法。方法 采用Agilent TC C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,柱温35℃,流动相：甲醇-水（10∶90）,流速1.0mL·min1;ELSD参数：漂移管温度110℃,载气流量3.2L·min1。结果 地黄苷A在0.2~1.2mg·mL1（r=0.9993）内线性关系良好,平均回收率为98.8%（RSD=1.6%）。结论 该方法准确、简便、专属性好,可用于地黄寡糖中地黄苷A成分的含量测定,为地黄寡糖的质量控制提供了依据。     

基于HPLC多波长融合指纹图谱及谱效关系的熟地黄活性成分研究

目的 建立熟地黄HPLC多波长融合指纹图谱并筛选抗糖尿病骨质疏松的活性成分。方法 采用HPLC建立10批熟地黄多波长(203,210,254,334 nm)融合指纹图谱;通过糖尿病骨质疏松大鼠模型药效评价,运用偏最小二乘回归法进行谱效分析,得到主要活性成分并以高糖成骨细胞模型验证其药效,并考察熟地黄的体内抗糖尿病骨质疏松作用。结果 10批熟地黄融合指纹图谱共确定26个共有峰,鉴定出的17个色谱峰与骨形成指标(血清碱性磷酸酶活性)呈正相关,其中峰8(梓醇)和峰12(地黄苷D)的标准回归系数和VIP值最显著,二者均能提高成骨细胞增殖活性和细胞碱性磷酸酶水平。结论 梓醇和地黄苷D具有显著抗糖尿病骨质疏松作用,为熟地黄主要活性成分。多波长融合指纹图谱结合谱效关系可作为活性成分筛选的有效策略。     

基于HPLC多成分定量控制联合化学计量学的妇科养荣胶囊质量评价研究

目的 建立HPLC法同时测定妇科养荣胶囊中梓醇、地黄苷D、益母草苷、棕矢车菊素、异泽兰黄素、洋川芎内酯 H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯的含量的方法,结合化学计量学对其质量进行评价。方法 采用Agilent Extend XDB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min;柱温30℃,检测波长210 nm（检测梓醇、地黄苷D和益母草苷）、345 nm（检测棕矢车菊素和异泽兰黄素）和280 nm（检测洋川芎内酯 H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯）;采用聚类分析、主成分分析等化学计量学方法对妇科养荣胶囊进行质量评价。结果 9种成分分别在5.53～110.60、1.97～39.40、2.29～45.80、0.66～13.20、1.74～34.80、1.36～27.20、2.68～53.60、3.41～68.20、9.27～185.40 μg/mL线性关系良好（r≥0.999 1）,平均加样回收率（RSD）分别为99.91%（0.67%）、98.67%（1.18%）、97.94%（1.07%）、96.76%（0.96%）、98.13%（1.32%）、97.97%（1.66%）、99.89%（0.87%）、100.11%（0.75%）、100.03%（0.84%）;10批样品聚类分析分为2类,各成分含量差异与生产阶段有关。结论 该方法操作简便、重复性好,可用于妇科养荣胶囊的质量控制。     

Efficacy of gut lavage,hemodialysis, and hemoperfusion in the therapy of paraquat or diquat intoxication

Clinical and in vitro investigations were carried out to test the efficacy of gut lavage, hemodialysis, and hemoperfusion in the treatment of poisoning with paraquat or diquat. In a patient suffering from diquat intoxication 130 times more diquat was removed by gut lavage 30 h after ingestion than was removed by complete aspiration of the gastric contents.Determination of in vitro clearances for paraquat and diquat by hemodialysis showed that, at serum concentrations of 1–2 ppm, such as are frequently encountered in poisoning in man, toxicologically relevant quantities of herbicide cannot be removed from the body. At a concentration of 20 ppm, on the other hand, hemodialysis proved to be effective, the clearance being 70 ml/min at a blood flow rate of 100 ml/min. The efficacy of hemoperfusion with coated activated charcoal was on the whole better. Especially at concentrations around 1–2 ppm, the clearance values for hemoperfusion were some 5–7 times higher than those for hemodialysis.In a patient suffering from paraquat poisoning, both hemodialysis as well as hemoperfusion were carried out. The in vitro results could be confirmed: At serum concentrations of paraquat less than 1 ppm no clearance could be obtained by hemodialysis while by hemoperfusion with activated charcoal quite high clearance values were measured and the serum level dropped down to zero.

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Zusammenfassung Klinische Untersuchungen und Laboratoriumsversuche wurden durchgeführt, um die Wirksamkeit von Darmspülung, Hämodialyse und Hämoperfusion bei Paraquat- und Deiquat-Vergiftungen zu prüfen.Bei einem Patienten wurde 30 Std nach Deiquat-Aufnahme durch Darmspülung 130mal mehr Deiquat entfernt als durch vollständige Aspiration des Mageninhaltes. In vitro-Versuche ergaben, daß bei Blutserumkonzentrationen von 1–2 ppm, die bei Vergiftungen oft gemessen werden, durch Hämodialyse keine toxikologisch relevanten Paraquat- oder Deiquat-Mengen entfernt werden können. Dagegen erwies sich die Hämodialyse bei 20 ppm und einer Blutumlaufgeschwindigkeit von 100 ml/min mit einer Clearance von 70 ml/min als wirksam. Die Hämoperfusion mit beschicheter Aktivkohle war in diesen Versuchen aber eindeutig überlegen, denn insbesondere bei Konzentrationen um 1–2 ppm waren die Clearance-Werte 5–7mal höher als bei der Hämodialyse.Die in vitro-Ergebnisse wurden bei einem Patienten mit einer Paraquat-Vergiftung bestätigt: Bei Konzentrationen unter 1 ppm war die Hämodialyse wirkungslos, während durch Hämoperfusion relativ hohe Clearance-Werte erreicht wurden, so daß der Serumspiegel rasch unter die Nachweisgrenze abfiel.

     

In vitro studies on sterically stabilized liposomes (SL) as enzyme carriers in organophosphorus (OP) antagonism

This study describes a new approach for organophosphorous (OP) antidotal treatment by encapsulating an OP hydrolyzing enzyme, OPA anhydrolase (OPAA), within sterically stabilized liposomes. The recombinant OPAA enzyme was derived from Alteromonas strain JD6. It has broad substrate specificity to a wide range of OP compounds: DFP and the nerve agents, soman and sarin. Liposomes encapsulating OPAA (SL)* were made by mechanical dispersion method. Hydrolysis of DFP by (SL)* was measured by following an increase of fluoride ion concentration using a fluoride ion selective electrode. OPAA entrapped in the carrier liposomes rapidly hydrolyze DFP, with the rate of DFP hydrolysis directly proportional to the amount of (SL)* added to the solution. Liposomal carriers containing no enzyme did not hydrolyze DFP. The reaction was linear and the rate of hydrolysis was first order in the substrate. This enzyme carrier system serves as a biodegradable protective environment for the recombinant OP-metabolizing enzyme, OPAA, resulting in prolongation of enzymatic concentration in the body. These studies suggest that the protection of OP intoxication can be strikingly enhanced by adding OPAA encapsulated within (SL)* to pralidoxime and atropine.