维甲酸抑制乳腺癌细胞生长与维甲酸受体α相关性研究

研究维甲酸抑制乳腺癌细胞生长的作用卫ＥＲ关系的同时研究维甲酸作用与其自身受体之间的关系。细胞生长抑制实验，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析法及基因转染技术。发现ＥＲ阳性的乳腺癌细胞的生长能被维甲酸抑制，而ＥＲ阴性的乳腺癌细胞生长不被甲酸抑制而且被维甲酸抑制的ＥＲ阳性的乳腺癌细胞中维甲酸受体αｍＲＮＡ表达明显高天ＥＲ阴性的细胞。     

维生素D3对人乳腺癌细胞株表皮生长因子受体mRNA表达的影响

目的 探讨维生素Ｄ３对人乳腺癌细胞株细胞增殖等生物学行为的影响。方法 选用两种人类乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７及ＺＲ－７５－１,应用细胞培养及核酸分子杂交方法,研究使用维生素Ｄ３以及并用三苯氧胺后,上述细胞株生长及表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）ｍＲＮＡ表达的改变。结果 （１０＾－１０～１０＾－７）ｍｏｌ／Ｌ维生素Ｄ３对ＭＣＦ－７及ＺＲ－７５－１细胞呈现明显的抑制生长作用,并能抑制（１０＾－９～１０＾－７）     

维甲酸核受体和维甲类X受体基因在乳腺癌中表达的研究

Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ能抑制包括乳腺癌在内的上皮源性肿瘤细胞的生长，但这种抑制作用主要表现在ＥＲ（＋）的乳腺癌细胞，而Ｅｍ（—）的乳腺癌细胞对Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ则无反应。Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ的核受体有两大类６种（ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ）。作者检测了６种不同的乳腺癌细胞株和１８例乳腺癌标本ＲＡＲｓ的ｍＲＮＡ表达，发现无论是细胞株还是肿瘤标本，ＥＲ（＋）的ＲＡＲαｍＲＮＡ的表达均要明显高于ＥＲ（—）者（Ｐ＜０．００５）；ＲＡＲβ　ｍＲＮＡ的表达则都很低，ＲＡＲγｍＲＮＡ的表达在肿瘤中都很高，和ＥＲ状态无关。ＲＸＲｓｍＲＮＡ的表达中，ＲＸＲα在所有的标本中都表达，ＲＸＲγ则几乎检测不到。实验结果提示了这样一种可能，即Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ抑制乳腺癌细胞生长主要通过ＲＡＲα所致。所以，检测肿瘤标本中的ＲＡＲα的水平对Ｒｅｔｉｎｏｄｓ的临床治疗具有指导意义。     

维甲酸α受体介导全反式维甲酸抑制胃癌细胞生长的作用机理

目的 探讨维甲酸α受体（ＲＡＲａ）介导全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）抑制胃癌细胞生长的作用机理。方法 应用Ｎｏｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析维甲酸受体在胃癌细胞中的表达水平,通过脂质体转染方法将ｓｅｎｓｅ ＲＡＲａ和ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＡＲａ分别转染到细胞中,通过ＭＴＴ方法和软琼脂集落形成实验分析ＡＴＲＡ对转染细胞生长和恶性程度的影响,瞬时转染和测定氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）活性,分析维甲酸应答元件（ＲＡＲ     

维甲酸核受体－β抑制乳腺癌细胞的生长

维甲酸核受体－β（ＲＡＲβ）在多种细胞的分化中已证实起着很重要的作用，在多种肿瘤细胞包括乳腺癌中发现ＲＡＲβ基因的表达很低或无表达，而在正常乳腺组织中，ＲＡＲβ基因的表达则明显升高。作者采用质粒转染技术将ＲＡＲβ基因转移至乳腺癌细胞中，发现ＲＡＲβ基因转移的细胞和对照组细胞相比，能明显降低肿瘤细胞的生长，表现在：（１）在软胶细胞生长中，和对照组细胞相比形成小而少的细胞克隆。（２）在裸鼠模型生长中，和对照组相比，亦形成体积小得多的肿瘤块。实验结果提示，在乳腺癌细胞中，ＲＡＲβ具有抑制肿瘤生长功能     

全反式视黄酸对癌细胞凋亡的诱导

探讨全反式视黄酸对乳腺癌细胞生长抑制对细胞凋亡诱导的机理。方法；采用荧光显微术，流式细胞，ＭＴＴ测定和ＲＮＡ印迹等方法，检测细胞凋亡，细胞生长和ｍＲＮＡ的表达水平。结果；１）ＡＴＲＡ能够有效地诱导ＺＲ－７５－１乳腺癌细胞凋亡，但不能诱导ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳腺癌细胞凋亡。２）ＡＴＲＡ能够有效地抑制ＺＲ－７５－１细胞的生长，但不能抑制ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞生长 ；３）ＡＴＲＡ能够诱导ＺＲ－７５－１     

维甲酸核受体—β抑制乳腺癌细胞的生长

维甲酸核受体－β（ＲＡＲβ）在多种细胞的分化中已证实起着很重要的作用，在多种肿瘤细胞包括乳腺癌中发现ＲＡＲβ基因的表达很低或无表达，而在正常乳腺组织中，ＲＡＲβ基因的表达则明显升高。作者采用质粒转染技术将ＲＡＲβ基因转移至乳腺癌细胞中，发现ＲＡＲβ基因转移的细胞和对照组细胞相比，能明显降低肿瘤细胞的生长，表现在：（１）在软胶细胞生长中，和对照组细胞相比形成小而少的细胞克隆。（２）在裸鼠模型生长中，     

肝癌多药耐药细胞株P—gp,MRP,GST—π表达水平的观察

为研究人肝癌多药耐药细胞株的耐药机理，应用ＢＥＬ－７４０２细胞株，通过不断提高培养液中阿霉素（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）的浓度，长期筛选培养，得到肝癌多药耐药株ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ。经ＭＴＴ法检测ＢＥＬ－７４０２对长春新碱（ＶＣＲ）等８种抗癌药的抗性提高了２７倍～１１００倍。采用流式细胞技术检测了细胞株表面ＭＤＲ１蛋白Ｐ－ｇｐ、多药耐药相关蛋白ＭＲＰ及谷脱甘肽硫转移酶ＧＳＴ－π的表达；用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了ＭＤＲ及ＭＲＰ基因表达水平。流式细胞分析发现，９３．５％～９７．４％的ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ细胞表面Ｐ－ｇｐ表达阳性；８４．７％～９０．２％的ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ细胞表面ＭＲＰ表达阳性；ＢＥＬ－７４０２细胞与ＢＥＬ－７４０２／Ｄｏｘ细胞ＧＳＴ－π的表达无明显变化。ＲＴ－ＰＣＲ证实此细胞株中有ＭＤＲ及ＭＲＰｍＲＮＡ的较高表达。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶2在乳腺癌细胞中的表达及其对SKBR-3细胞生长特性的影响

目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因在多种乳腺癌细胞株中的表达情况,以及外源性PRMT2基因过表达对乳腺癌SKBR-3细胞生长特性的影响.方法:采用real-time RT-PCR法检测PRMT2基因在不同乳腺癌细胞株中的表达,并建立稳定表达pcDNA3.1/NT-GFP-PRMT2的SKBR-3细胞株;激光共聚焦显微镜下观察外源性PRMT2蛋白在细胞中的定位,检测在雌激素和雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂4-OHT作用下过表达PRMT2基因对SKBR-3细胞增殖的影响.结果:PRMT2基因在ERα阳性乳腺癌细胞株中表达水平明显高于ERα阴性乳腺癌细胞株;在转染PRMT2基因的SKBR-3细胞株中,雌激素反应元件-荧光素酶报告基因(estrogen response elements-luciferase reporter,ERE-luc)的转录活性明显升高.在无处理因子情况下,外源基因PRMT2在SKBR-3细胞中的表达对细胞的形态及生长速度无明显影响.与未转染及转染GFP空载体的SKBR-3细胞相比,稳定转染PRMT2基因的SKBR-3细胞对雌激素的敏感性明显下降,但其对4-OHT处理的敏感性降低无明显差异.结论:PRMT2基因表达的多少及部位与乳腺癌细胞中ERα的表达密切相关.外源性PRMT2基因在乳腺癌SKBR-3细胞中稳定表达使细胞对雌激素的敏感性降低,但不增加细胞对ER拮抗剂4-OHT的耐药性.     

凋亡相关基因表达在乳腺癌细胞生长中的作用

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Ｃｋｉ′ｓ）ｐ２７ｋｉｐ１是ＣＤＫ２／ＣｙｃｌｉｎＥ的抑制蛋白,不仅使细胞周期停滞于Ｇ１期,还可诱导乳腺癌细胞凋亡。我们通过体外实验,分析凋亡相关基因ｂｃｌ２基因族、ｐ２７ｋｉｐ１的表达水平与乳腺癌细胞株生物特性的关系,探讨在阿霉素作用后其基因或蛋白产物表达水平的变化。材料与方法　应用体外细胞培养、细胞爬片技术,采用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ方法检测不同ＥＲ状态人乳腺癌细胞株ＭＣＦ７、ＭＤＡＭＢ２３１中ｂｃｌ２、ｂａｘ、ｐ２７ｋｉｐ１、ＰＣＮＡ蛋白表达…     

Antineoplastic action of 5-aza-2'-deoxycytidine and histone deacetylase inhibitor and their effect on the expression of retinoic acid receptor beta and estrogen receptor alpha genes in breast carcinoma cells

PURPOSE: During tumorigenesis several cancer-related genes can be silenced by aberrant methylation. In many cases these silenced genes can be reactivated by exposure to the DNA methylation inhibitor, 5-aza-2'-deoxycytidine (5-AZA-CdR). Histone acetylation also plays a role in the control of expression of some genes. The aim of this study was to determine the antineoplastic activities of 5-AZA-CdR and trichostatin A (TSA), either administered alone or in combination. in MDA-MB-231 breast carcinoma cells. The effects of these drugs (alone and in combination) on the expression of the tumor suppressor gene, retinoic acid receptor (RAR beta) and of the estrogen receptor alpha gene (ER alpha), whose expression is lost in the cell line used in the study, were also investigated. METHODS: MDA-MB-231 cells were treated with 5-AZA-CdR and TSA and the antitumor activity of these drugs was determined by clonogenic assay. Total RNA was extracted from the treated cells and RT-PCR was used to determine the effect of the treatment on the expression of RAR beta and ER alpha. Methylation-sensitive PCR analysis was used to confirm that lack of expression of both genes was due to hypermethylation of their promoter regions. A single nucleotide primer extension assay was also used to quantify the reduction in DNA methylation following drug treatment. RESULTS: Both 5-AZA-CdR and TSA alone showed significant antineoplastic activity. The combination of the two drugs was synergistic with respect to MDA-MB-231 cell kill. 5-AZA-CdR alone weakly activated the expression of both RAR beta and ER alpha. TSA alone only activated RAR beta, but not ER alpha. The combination of these agents appeared to produce a greater activation of both genes. CONCLUSIONS: The interesting interaction between 5-AZA-CdR and TSA in both cell kill and cancer-related gene reactivation provides a rationale for the use of inhibitors of DNA methylation and histone deacetylation in combination for the chemotherapy of breast cancer.     

A Novel All-trans Retinoid Acid Derivative Induces Apoptosis in MDA-MB-231 Breast Cancer Cells

Aims: To explore the effect and probable mechanism of a synthetic retinoid 4-amino-2-tri-fluoromethylphenylester (ATPR) on apoptosis of MDA-MB-231 breast cancer cells. Materials and Methods: MTT assayswere performed to measure the proliferation of MDA-MB-231 cells treated with different concentrations of alltransretinoic acid (ATRA) and ATPR. Morphologic changes were observed by microscopy. The apoptosis ratesand cell cycling of MDA-MB-231 cells treated with ATRA or ATPR were assessed using flow cytometry analysis.Expression of retinoic acid receptor and phosphorylation of ERK, JNK, p38 proteins were detected by Westernblotting. Results: Treatment of the cells with the addition of 15 μmol/L ATPR for 48 h clearly demonstratedreduced cell numbers and deformed cells, whereas no changes in the number and morphology were observedafter treatment with ATRA. The apoptosis rate was 33.2% after breast cancer MDA-MB-231 cells were treatedby ATPR (15 μmol/L) whereas ATRA (15 μmol/L) had no apoptotic effect. ATPR inhibited the phosphorylationof ERK, JNK, and p38 while ATRA had no significant effect. ATPR inhibited the expression of BiP and increasedthe expression of Chop at the protein level compared with control groups, ATRA and ATPR both decreasedthe protein expression of RXR α, ATPR reduced the protein expression of RARβ and RXRβ while ATRA didnot decrease RARβ or RXRβ. Conclusions: ATPR could induce apoptosis of breast cancer MDA-MB-231 cells,possible mechanisms being binding to RARβ/RXRβ heterodimers, then activation of ER stress involving theMAPK pathway.     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究

目的将雌激素受体ERβ1真核表达质粒转染到人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对E-cadherin、Vimentin等基因表达和细胞上皮间质转化的影响,探讨ERβ1在乳腺癌发生发展中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用实时荧光定量PCR、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达的变化;并用细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。所有数据以±s表示,多个样本均数间的比较用单因素方差分析,组间比较采用SNK法。细胞生长曲线变化采用重复测量方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、E-cadherin mRNA和蛋白水平明显增强（P〈0.010）,Vimentin mRNA水平明显减少（P〈0.010）,细胞增殖能力明显减弱。结论 ERβ1可能参与抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的上皮间质转化过程。     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的观察雌激素受体β1（ERβ1）被阻断后对Bax和Bcl-2表达的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法,将针对人ERβl基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MDA—MB-231。分别用Real time-PCR、Western Blot检测ERβ1被干扰前后细胞中ERβ1、Bcl-2、Bax等基因mRNA和蛋白表达水平的变化;通过细胞增殖曲线观察ERβ1基因被干扰后细胞增殖活性的变化;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。计量资料的比较采用t检验或单因素方差分析。结果RNA干扰技术阻断乳腺癌MDA—MB-231细胞ERβ1基因的表达后,ERβ1 mRNA和蛋白水平显著下降（P〈0．05）,生长曲线显示细胞增殖能力明显增强（P〈0．05）;pSilencer—ERβ1转染组细胞的Bax基因mRNA及蛋白水平显著下降（P〈0．01）,Bcl-2基因的表达未发生变化,Bcl-2／Bax比值明显上升;pSilencer-ERβ1转染组细胞凋亡率较未转染组明显减少（t=6．22,P=0．00）。结论ERβ1可通过调控细胞凋亡相关基因Bax而促进细胞的凋亡,是ERβ1抑制细胞增殖的原因之一。     

雌激素受体β1上调p21基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的将雌激素受体(ER)β1真核表达质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对p21基因表达和细胞增殖能力的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化;分别用实时聚合酶连锁反应(RT-PCR)、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、p21mRNA和蛋白表达的变化;细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。统计分析采用t检验和单因素方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、p21mRNA和p21蛋白水平明显增强(P0.010),细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率从1.4%升至6.14%(t=-7.960,P=0.001)。结论 ERβ1可以通过上调p21基因抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。