生长因子对人卵巢癌HO－8910细胞中基因表达的影响

为了解人卵巢癌ＨＯ－８９１０培养细胞体外受表皮生长因子（ＥＧＦ）或转化生长因子－ｂｅｔａ１（ＴＧＦβ１）作用后的生长调控机制，对细胞中原癌基因、生长因子／受体基因ｍＲＮＡ的表达动态进行了相对定量分析。结果表明：ＴＧＦβ１能明显抑制ＨＯ－８９１０细胞ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２、ＴＧＦ－β１及ＥＧＦＲ基因的表达。ＥＧＦ能显著增强ＥＧＦＲ基因的表达，同时对ｃ－ｍｙｃ及ｃ－ｅｒｂＢ２的转录亦有一定的促进作用，但对ＴＧＦβ１的表达有明显的抑制效应。ＥＧＦ及ＴＧＦβ１对细胞中基因表达的调节具有不同的时间效应，且这些基因表达的改变相互之间存在一定的相关性。实验结果在分子水平上佐证了体外接受生长因子调控信号后，细胞生长状态改变的观察结果     

生长因子对人卵巢癌HO—8910细胞中基因表达的影响

为了解人卵巢癌ＨＯ－８９１０培养细胞体外受表皮生长因子（ＥＧＦ）或转化生长因子－ｂｅｔａｌ（ＴＧＦβ１）作用后的生长调控机制，对细胞中原癌基因、生长因子／受体基因ｍＲＮＡ的表达动态进行了相对定量分析。结果表明：ＴＧＦβ１能明显抑制ＨＯ－８９１０细胞ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２、ＴＧＦ－β１及ＥＧＦＲ基因的表达。ＥＧＦ能显著增强ＥＧＦＲ基因的表达，同时对ｃ－ｍｙｃ及ｃ－ｅｒｂＢ２的转录亦有一定的促进作     

壮骨镇痛胶囊对乳腺癌细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因表达的影响

目的　观察壮骨镇痛胶囊对高转移人乳腺癌ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞抑癌基因ｎｍ２３-Ｈ１和原癌基因ｃ-ｍｙｃ表达的影响,探讨壮骨镇痛胶囊抑制ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞增殖和迁移的可能作用机制。方法　采用ＲＴ-ＰＣＲ法和免疫细胞化学法分别检测不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因ｍＲＮＡ及其蛋白表达的影响,并分析其对ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值的影响。结果　５％壮骨镇痛胶囊含药血浆显著抑制了ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因的转录和翻译;１.２５％壮骨镇痛胶囊含药血浆抑制了ｎｍ２３-Ｈ１的转录和翻译以及ｃ-ｍｙｃ基因的翻译,对ｃ-ｍｙｃ基因的转录无显著影响;０.６３％壮骨镇痛胶囊含药血浆对ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因的转录和翻译均无明显影响;５％和１.２５％壮骨镇痛胶囊含药血浆显著提高了ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值,０.６３％壮骨镇痛胶囊含药血浆对ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值无显著影响。结论　不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对乳腺癌ＭＤＡ-ＭＢ-２３１细胞ｎｍ２３-Ｈ１和ｃ-ｍｙｃ基因的表达具有不同的作用,该药可能通过降低癌细胞ｃ-ｍｙｃ基因表达继而提高细胞中ｎｍ２３-Ｈ１／ｃ-ｍｙｃ蛋白比值来降低癌细胞的增殖和迁移能力。     

nm23H1对肝癌细胞增殖及体内肿瘤形成能力的影响

目的 研究ｎｍ２３Ｈ１对肝癌细胞增殖、体内肿瘤形成和转移的影响。方法 构建正反义ｎｍ２３Ｈ１ ｃＤＮＡ表达载体并转染肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１,得到ｎｍ２３Ｈ１稳定最高和最低表达的两种细胞克隆,并进行细胞生长曲线测定、裸鼠皮下及脾包膜下移植试验。结果 转染反义表达载体后,肝癌细胞ｍＲＮＡ和蛋白表达下降,在体内、体外增殖加速;转染正义表达载体后,出现与之相反的结果。正义表达细胞接种组裸鼠肿瘤结节形成     

双甲基氨氯吡咪对人肺癌细胞的酸化作用及其意义

目的　研究Ｎａ＋／Ｈ＋ 交换蛋白１（ＮＨＥ１）在肿瘤细胞ｐＨ 调节和增殖／ 死亡调控中的作用，探索肿瘤治疗新策略。　方法　用荧光探针法检测经双甲基氨氯吡咪（ＤＭＡ） 处理后的ＰＬＡ８０１Ｄ 细胞内ｐＨ（ｐＨｉ），同时用活细胞计数法观察ＤＭＡ 对ＰＬＡ８０１Ｄ 细胞增殖的抑制作用。　结果　５０ μｍｏｌ／Ｌ ＤＮＡ 处理４ ｈ 后即能明显酸化ＰＬＡ８０１Ｄ细胞（ Ｐ＜ ０．０５ ～０．０１） 。ＤＭＡ 有显著抑制ＰＬＡ８０１Ｄ 细胞的增殖，并导致其死亡。　结论　ＮＨＥ１ 在肿瘤细胞ｐＨ 调节中起着重要作用，阻止这一调节能抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡     

外源野生型p53基因表达对人肺癌细胞药物敏感性影响

了解外源野生型ｐ５３（ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｐ５３,ｗｔｐ５３）基因表达对人大细胞肺癌８０１－Ｄ细胞对化疗药物敏感性的影响。方法选用Ｐ５３基因突为的人大细胞肺癌８０１－Ｄ系。用脂质体介导构建的含ｗｔｐ５３基因载体转染８０１－Ｄ细胞,ＰＣＲ检测外源ｗｔｐ５３在宿主细胞存在情况,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定８０１－Ｄ细胞转染ｗｔｐ５３后药物敏感性变化,流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞死亡情况。结果转染ｗｔｐ５     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β_2免疫抑制作用的抗肿瘤研究

目的：研究淫羊藿甙（ＩＣＡ）对ＰＧ细胞分泌转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦβ２）的影响、ＩＣＡ逆转ＴＧＦβ２介导的免疫抑制作用及其机制。方法：ＭＴＦ法检测细胞增殖、杀伤活性,ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＧＦβ２、穿孔素,流式细胞术检测ＴＧＦβ２、ＩＬ－２Ｒα水平。结果：ＩＣＡ可抑制ＰＧ细胞中ＴＧＦβ２的蛋白和ｍＲＮＡ表达,能够逆转受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ和ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性,并能部分恢复受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２Ｒα表达和ＣＤ３ＡＫ细胞内穿孔素ｍＲＮＡ水平,以及ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性。结论：淫羊藿甙通过抑制肿瘤细胞免疫抑制因子ＴＧＦβ２的产生,增强免疫效应细胞的杀伤活性等机制而发挥抗肿瘤作用。     

TGF-β1在肾癌中的表达与细胞凋亡及癌基因c-myc表达的关系

ＴＧＦβ１在肾癌中的表达与细胞凋亡及癌基因ｃｍｙｃ表达的关系赵忠文许宁石爱平马淑敏转生长因子ＴＧＦβ１具有多种生物学功能，目前国内外对ＴＧＦβ１在肾癌中的研究甚少。我们对肾癌中ＴＧＦβ１蛋白的表达及凋亡率和癌基因ｃｍｙｃ的表达进行了定性、...     

重组腺病毒介导反义c-myc基因对人肝癌细胞系的治疗作用

目的：探讨重组腺病毒介导反义ｃ－ｍｙｃ基因（Ａｄ－ＡＳｍｙｃ）治疗人肝癌细胞的作用。方法：观察Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系的转导效率,通过细胞生长曲线、克隆形成实验、ＤＮＡ片段化分析、ＲＴ－ＰＣＲ、裸鼠皮下移植瘤治疗实验,分析Ａｄ－ＡＳｍｙｃ对人肝癌细胞系Ｂｅｌ－７４０２、ＱＳＧ－７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１和ＨＣＣ－９２０４细胞生长和ｃ－ｍｙｃ基因表达及裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果：Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可高效转导人肝癌细胞系,抑制细胞生长;转染细胞克隆形成能力降低,克隆成活率为对照组的５３．９％～６９．１％,ｃ－ｍｙｃ基因表达下降;Ａｄ－ＡＳｍｙｃ处理肝癌细胞,ＤＮＡ凝胶电泳出现明显的梯形条带,瘤内注射Ａｄ－ＡＳｍｙｃ可抑制裸鼠皮下移植瘤生长。结论：重组腺病毒介导的反义ｃ－ｍｙｃ基因转移,有可能成为肝癌基因治疗     

二甲基甲酰胺对胶质瘤细胞基因蛋白水平表达的影响

目的：观察诱导分化剂二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）地胶质瘤细胞Ｃ６的增殖抑制作用,探讨作用机理中ＤＭＦ对ｃ－ｍｙｃ、ｐ１６基因蛋白水平表达的影响。方法：「＾３Ｈ」－Ｔ掺入法测增殖抑制率;免疫组化ＳＰ法测Ｃ－ｍｙｃ、ｐ１６基因蛋白水平的表达。结果：应用二甲基甲酰胺后,胶质瘤细胞ＣＰＭ值降低,ＤＮＡ合成总量减少。Ｃ－ｍｙｃ基因胞浆阳性表达下降,ｐ１６基因胞浆阳性表达升高。结论：二甲基酰胺对胶质瘤细胞增殖存在剂量依赖性抑制,作用机理与降低了癌基因Ｃ－ｍｙｃ对Ｃ６细胞恶性增殖的转录调节作用、增强了抑制基因ｐ１６活性有关。     

三氧化二砷对人肺巨细胞癌细胞系（PLA—801D株）运动能力、尿激酶的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对人肺巨细胞癌细胞系PLA－801D株细胞运动能力和尿激酶（uPA）、尿激素受体（uPAR)mRAN表达的影响。方法 采用0．5μmol/L、1．0μmol／L及2．0μmol／L三种浓度的As2O3处理人肺巨细胞癌细胞（PLA－801D株）,120h后收取细胞,分别采取Boyden小室测定细胞穿膜运动能力及ERT－PCR方法检测细胞uPA及uPARmRNA转录表达水平。结果 经As2O3处理的PLA－801D株细胞,穿膜运动能力和uPA及uPARmRNA转录表达水平均显著下降,As2O3作用呈剂量依赖方式。结论 As2O3可抑制肿瘤细胞的运动能力;可下调uPA、uPAR表达,可能影响肿瘤细胞基质降解过程。     

反义转化生长因子β1抑制人膀胱癌细胞体内外增殖的实验研究

目的 探讨反义转化生长因子β1(TGFβ1)对人膀胱癌细胞体内外增殖的抑制作用。方法 将携TGFβ1反义基因的逆转录病毒载体pRevTβ-AS转染膀胱癌EJ细胞,观察转染细胞体外及SCID小鼠皮下生长情况,通过免疫组化方法评价细胞增殖活性的改变;通过病理图像分析和电子显微镜技术观察体内生长的EJ细胞形态学和超微结构改变;采用流式细胞分析技术观察转染后细胞周期时相分布的变化。结果 pRevTβ-AS能有效抑制EJ细胞TGFβ1mRNA转录和蛋白表达。体外实验表明,转染反义TGFβ1可使EJ细胞体外增殖活性和S期细胞比例明显降低;体内实验证实,反义组种植肿瘤的形成和生长被有效抑制,DNA异倍体细胞比例和基因复制活跃程度明显低于对照组。结论 转染反义TGFβ1能明显减弱EJ细胞致瘤性,抑制肿瘤细胞体内外增殖活性。     

Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨

目的 研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法 用Smad7真核表达载体PCISmad7．neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c-myc顺式增强子元件pMyc-SEAP共转染,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT-PCR方法,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERF35T2细胞内c-myc、p15、p21表达水平的变化,调查Smad7基因对TGF-β介导的抗增殖基因反应的调控。结果 报告基因检测结果表明,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c-myc顺式增强子元件活性增强。RT-PCR结果表明,在稳定转染Smad7基因的细胞中,c-myc表达上调,p15表达降低,对TGV-β刺激的应答丧失,p21表达降低。结论 Smad7基因可通过调控TGF-β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长、增殖能力。     

靶向siRNA对人直肠癌Colo320细胞的抑制作用

目的:利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人直肠癌Colo320细胞c-my基因的表达,探讨c-myc基因在人直肠癌Colo320细胞中的作用.方法 :设计人直肠癌Colo320细胞基因特异性小分子干扰RNA,用体外转录方法合成人直肠癌Colo320细胞的小分子干扰RNA并转染该细胞,培养48～96 h后,收集细胞RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中c-myc基因mRNA水平变化,Western blotting检测c-myc表达的蛋白,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成试验检测细胞增殖活性.结果:转染siRNA后,与对照组相比,实验组pGensil-c-myc-1、2、3、4的c-myc基因mRNA水平明显降低,c-myc的蛋白表达也明显降低.MTT法和集落形成试验检测表明,实验组的细胞增殖速率明显低于对照组.结论:在人直肠癌Colo320 细胞中存在RNA干扰的机制,特异性siRNA能够有效地抑制c-myc基因的表达,从而抑制Colo320 细胞的增殖.     

Forced expression of antisense 14-3-3beta RNA suppresses tumor cell growth in vitro and in vivo

The 14-3-3 family proteins are key regulators of various signal transduction pathways including malignant transformation. Previously, we found that the expression of the 14-3-3beta gene is deregulated as well as c-myc gene in aflatoxin B1 (AFB1)-induced rat hepatoma K1 and K2 cells. To elucidate the implication of 14-3-3beta in tumor cell growth, in this paper we analyzed the effect of forced expression of antisense 14-3-3beta RNA on the growth and tumorigenicity of K2 cells. K2 cells transfected with antisense 14-3-3beta cDNA expression vector diminished their growth ability in monolayer culture and in semi-solid medium. Expression level of vascular endothelial growth factor mRNA was also reduced in these transfectants. Tumors that formed by the transfectants in nude mice were much smaller and histologically more benign tumors, because of their decreased level of mitosis compared with those of the parental cells. Frequency of apoptosis detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling assay was increased in the transfectant-derived tumors accompanying the inhibition of angiogenesis. In addition, over-expression of 14-3-3beta mRNA was observed in various murine tumor cell lines. These results suggest that 14-3-3beta gene plays a pivotal role in abnormal growth of tumor cells in vitro and in vivo.     

Modulation of epidermal growth factor receptor gene expression by transforming growth factor-beta in a human breast carcinoma cell line

Modulation of epidermal growth factor (EGF) receptor expression determines cellular responsiveness to EGF and might play an important role in growth inhibition. We have investigated the actions of EGF and/or transforming growth factor type beta (TGF beta) on EGF receptor gene expression in MDA-468 human breast carcinoma cell line, which responds to EGF and/or TGF beta with growth inhibition. Using the cDNA clone pE7, which encodes 2.4 kilobases of the human EGF receptor mRNA, as a hybridization probe, we have found that exposure of MDA-468 cells to EGF results in elevated levels of EGF receptor mRNA. This increase in mRNA accumulation showed time and dose dependence. Addition of TGF beta enhances the accumulation of EGF receptor mRNA induced by EGF. Under this condition, stimulation could be detected after 1 h exposure to TGF beta with a maximum at 6-8 h. A concentration of 10 pM TGF beta gave detectable stimulation with maximal stimulation occurring at 300 pM in the presence of EGF (50 ng/ml). In contrast, TGF beta alone had no significant effect on EGF receptor mRNA accumulation. In the presence of cycloheximide, the EGF receptor mRNA was super-induced in response to EGF. Treatment of the cells with TGF beta enhances the EGF-dependent superinduction of EGF receptor mRNA produced by cycloheximide, suggesting that the stimulatory action of TGF beta does not depend on continuous protein synthesis. The results described here are consistent with the hypothesis that the growth inhibitory action of TGF beta in MDA-468 cells may be mediated, at least in part, by modulation of EGF receptor gene expression.     

反义硫代寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系转化生长因子α基因表达 …

目的 研究转化生长因子α反义寡核苷酸对人脑胶质细胞系中核ＴＧＦα基因表达的作用。     

Smac基因过表达对胃癌细胞株 MKN-45 化疗敏感性的影响

背景与目的:细胞凋亡异常是肿瘤细胞产生耐药性的关键因素之一. Smac(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac或称 DIABLO)是新近发现的一种凋亡调节基因,在介导化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡中起重要作用.本研究旨在观察 Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响.方法:采用脂质体 GeneSHUTTLE-40介导的方法,将 Smac基因转入胃癌细胞 MKN-45, RT-PCR和 Western blot法检测癌细胞中 Smac的表达;选用顺铂 (1、 5、 10 μ g/ml)、丝裂霉素 (0.1、 1、 10 μ g/ml)和姜黄素 (10、 20、 40 μ mol/L)分别处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝( MTT)比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄影, Annexin V-FITC和碘化丙啶双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:同未转染对照组比较,转染外源性 Smac基因后 MKN-45细胞 Smac mRNA和蛋白表达水平显著增高( P< 0.01);各浓度顺铂、丝裂霉素和姜黄素处理 24 h后,细胞生长抑制率分别 增加 10.10%～ 23.80%( P< 0.01)、 10.01%～ 15.86%( P< 0.01)、 11.28%～ 22.12%( P< 0.01),细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,细胞凋亡率分别增加 6.7%～ 20.2%( P< 0.01)、 5.4%～ 13.2%( P< 0.01)、 10.6%～ 20.1%( P< 0.01).结论:转染外源性 Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达,能提高 MKN-45对化疗药物的敏感性.