幽门螺杆菌对CCAAT增强子结合蛋白α和Cx43表达的影响及其在胃癌发生中的作用

目的：探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein α,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达改变在H. pylori致胃癌中的作用。方法：扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集H. pylori感染慢性非萎缩性胃炎患者6例、胃癌前病变和胃癌患者各12例胃黏膜组织;采用real-time PCR法检测上述细胞和组织中C/EBPα和Cx43 mRNA的表达;同时将东亚型CagA+H. pylori与GES-1细胞共培养24和48 h为实验组,以不加H. pylori的GES-1细胞株为对照组,培养24和48 h;采用real-time PCR法和Western印迹检测C/EBPα和Cx43 mRNA和蛋白的表达。结果：C/EBPα和Cx43 mRNA在AGS细胞、SGC-7901细胞中的表达均显著低于GES-1细胞(均P<0.05),且两者在SGC-7901细胞中的表达量较AGS细胞更低(均P<0.05);C/EBPα和Cx43 mRNA在胃癌胃黏膜组织中的表达明显低于慢性非萎缩性胃炎(均P<0.05)和胃癌前病变(均P<0.05),C/EBPα与Cx43表达呈正相关(胃癌前病变：r=0.679;胃癌：r=0.792,均P<0.05);实验组24,48 h的 C/EBPα和CX43表达量在转录及蛋白水平均低于对照组(均P<0.05),且48 h表达量均低于24 h(均P<0.05)。结论：H. pylori感染可下调胃黏膜上皮细胞C/EBPα和CX43的表达,这可能与胃癌发生有关。     

胃癌和癌前病变患者Cx32,Cx43表达与幽门螺杆菌感染的相关性

目的 探讨胃癌和癌前病变患者Cx32,Cx43表达改变与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系.方法 采用前瞻性成组设计方法将33例慢性浅表性胃炎(CSG)、88例癌前病变、70例胃癌患者,用快速尿素酶试验、碱性品红染色和14C尿素呼气试验检测Hp感染,PCR法检测Hp细胞毒相关蛋白A(CagA)基因,组织免疫化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测胃黏膜Cx32,Cx43表达.结果 胃癌组Cx32、Cx43阳性表达率分别为15.7%与32.9%,癌前病变组分别为51.1%与54.5%,均低于CSG组(100.0%vs 93.9%,均P＜0.05).胃癌患者Hp感染组Cx32阳性表达率为16.7%,与无Hp感染组(13.6%)比较差异无统计学意义;Cx43阳性表达率低于无Hp感染组(25%vs 50%,P=0.039).癌前病变患者Hp感染组Cx32、Cx43阳性表达率和表达强度均低于无Hp感染组(均P＜0.05).Hp感染胃癌患者CagA+组Cx32阳性表达率与cagA-组比较差异无统计学意义(12.8%vs33.3%,P=0.159);Cx43阳性表达率低于Caga-组(17.9%vs 55.6%,P=0.027).Hp感染CSG患者CagA+组与CagA-组Cx32、Cx43阳性表达率均为100.0%,但CagA+组Cx43表达强度低于CagA-组(P=0.032).58例Hp感染癌前病变患者抗Hp治疗后48例Hp根除者Cx32、Cx43阳性表达率和表达强度均高于治疗前(均P＜0.05),而Hp未根除者与治疗前比较差异无统计学意义.结论 胃癌和癌前病变Cx32,Cx43表达降低,其中Cx43表达降低与Hp感染,特别是与Caga+Hp感染有关,Hp根除可上调癌前病变患者Cx32,Cx43表达.     

胃癌细胞系幽门螺杆菌感染对HIF-1α、HIF-2α及VEGF表达的影响

目的研究幽门螺杆菌对人胃癌细胞株BGC-823中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将不同浓度的H.pylori悬液与BGC-823细胞共培养24h后收集细胞,应用MTT法检测细胞存活率,RT-PCR和Western blotting技术检测HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达。对照组加稀释用培养液。结果与对照组比较,H.pylori可显著促进BGC-823细胞的增殖(P<0.05)并能显著提高细胞HIF-1α、HIF-2α及VEGF mRNA和蛋白的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论 H.pylori感染能够刺激BGC-823细胞VEGF的表达,其机制可能是通过HIF-1α、HIF-2α途径介导。这可能是其诱导胃癌血管生成和促进胃癌侵袭转移的机制之一。     

miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响

目的 观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响.方法 将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体;阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞.转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量;采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50).采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率.结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P＜0.01).在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P＜0.01);miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27 ±3.92) μg/mL降至(1.50 ±0.43) μg/mL(P ＜0.05).转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)％上升至(53.4±7.9)％(P＜0.01).结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力.     

胃癌前病变患者根除幽门螺杆菌后Cx32和Cx43的表达

目的:观察胃癌前病变(PL)患者幽门螺杆菌(H.pylori)根除前后Cx32,Cx43表达变化.方法:采用免疫组织化学SABC法检测33例慢性浅表性胃炎(CSG)、88例胃癌前病变(PL)患者H.pylo-ri根除前后胃黏膜活检标本Cx32,Cx43表达水平.结果:PL组Cx32,Gx43阳性表达率(分别为51.1%和54.5%)和阳性表达强度均低于CSG组(分别为100%和93.9%,P<0.05).胃癌前病变H.pyiori阳性组Cx32,Cx43阳性表达率(分别为41.4%和44.8%)和阳性表达强度均低于H.pylori阴性组(分别为70%和73.3%,P<0.05).胃癌前病变组H.pylori根除者Cx32,Cx43阳性表达率(分别为97.9%和91.7%)较治疗前升高(分别为41.4%和44.8%,P<0.05);未根除者治疗后(分别为40%和50%)与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:胃癌前病变患者Cx32,Cx43表达降低,H.pylori根除可上调Cx32,Cx43表达.     

幽门螺杆菌对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响及作用

目的探讨幽门螺杆菌超声裂解液对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响,以及Bcl-xl基因在胃癌BGC-823细胞增殖中所起的作用。方法分别用东亚型和西方型幽门螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达情况。设计特异的Bcl-xl shRNA阻断Bcl-xl基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖。结果螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h后,与对照组相比,处理组BGC-823细胞出现增殖(P<0.01),BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达也出现上调;并且东亚型螺杆菌超声裂解液处理组的促增殖作用强于西方型处理组(P<0.01),东亚型螺杆菌超声裂解液处理组细胞中Bcl-xl基因mRNA的表达水平也高于西方型处理组(P<0.01)。Bcl-xl shRNA可以下调Bcl-xl基因mRNA及蛋白水平的表达,同时抑制胃癌BGC-823细胞的增殖。结论 Bcl-xl基因对幽门杆菌感染相关性胃癌中癌细胞的增殖起了促进作用。     

复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞株增殖抑制作用研究

目的 探讨复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞株增殖的抑制作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞48 h增殖抑制作用,并求出其48 h半数抑制浓度(IC50);用流式细胞仪分析技术及琼脂糖凝胶电泳检测复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响.结果 复方苦参注射液能明显抑制人胃癌BGC-823细胞增殖并呈浓度依赖性,IC50为9/250原液稀释倍数;人胃癌BGC-823细胞经复方苦参注射液(终浓度为1/25.0原液稀释倍数)作用24 h、48 h及72 h后,流式细胞仪分析结果显示,其早期凋亡细胞率分别为(9.58±0.88)%、(20.41±0.77)%及 (60.30±3.19)%,明显高于空白对照组的(4.17±0.11)%,差异均有统计学意义(P＜0.05),并发现明显的细胞凋亡峰(Sub-G1);人胃癌BGC-823细胞经复方苦参注射液(终浓度为1/25.0原液稀释倍数)作用48 h和72 h后,可见明显的梯状条带形成.结论 复方苦参注射液可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,并诱导其凋亡.     

槲皮素对BGC-823胃癌细胞caspase-3、Bcl-2表达影响与抑癌作用研究

目的:研究槲皮素(quercetin,QUE)抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用四甲基噻唑氮蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同终浓度的QUE对BGC-823细胞增殖的影响及其细胞毒活性,流式细胞术(FCM)对不同浓度的QUE作用24 h的BGC-823细胞进行凋亡检测及其周期分析,用免疫组化法测定Bcl-2、caspase-3的表达率。结果:QUE对体外培养的BGC-823细胞具有明显的增殖抑制作用,在30~120μmol/L范围内可显著抑制BGC-823细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性。FCM检测后,BGC-823细胞周期阻滞于S期,药物浓度呈正相关。经QUE处理后BGC-823细胞株caspase-3蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达降低。免疫组化检测表明,用药组Bcl-2蛋白的表达下降,caspase-3蛋白的表达率增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:QUE诱导BGC-823细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于S期,抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调Bcl-2、上调caspase-3蛋白的表达有关。     

胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞增殖影响的实验研究

目的基于过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)、垂体肿瘤转化基因(PTTG)途径探讨胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞株增殖的影响。方法制备胃复方含药血浆,用不同浓度含药血浆作用人胃癌BGC-823细胞株,24 h、48 h、72 h后分别用MTS法检测细胞增殖抑制率并计算半数抑制率IC_(50)。并以1/4IC_(50)浓度胃复方含药血浆作用胃癌BGC-823细胞株72 h后,流式细胞术检测细胞凋亡变化、Western blot方法测定人胃癌BGC-823细胞中PPARγ、PTTG、原癌基因(c-Myc)、端粒酶亚单位(h TERT)蛋白表达情况。结果胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量及时间依赖性,5%、10%、20%浓度的药物干预后各组间比较差异有统计学意义(P 0. 05),而10%浓度以上的各药物组细胞生长大部分停滞,24 h、48 h各组间比较差异无统计学意义(P 0. 05),72 h各组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。胃复方含药血浆低、中、高剂量组IC_(50)分别为30. 32%、19. 37%、14. 69%。与空白组、PBS阴性对照组凋亡率比较,胃复方组凋亡率升高(P 0. 01)。与PBS阴性对照组比较,中剂量1/4IC_(50)含药血浆作用细胞72 h后,PPARγ蛋白表达升高(P 0. 05,P 0. 01),PTTG、c-Myc、hTERT蛋白表达下调(P 0. 01)。结论胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞有增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性;胃复方含药血浆可能通过上调PPARγ蛋白表达及下调PTTG、c-Myc、hTERT蛋白表达来抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,从而诱导细胞凋亡。     

Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用及其对Cx32和Cx43表达的影响

目的: 研究Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖、凋亡及间隙连接蛋白32(Cx32)和间隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨其在乳腺癌细胞增殖和转移中的作用机制。方法: 取对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为环巴胺组和空白对照组,环巴胺组分别以5、10、20、30和40 μmol·L^-1环巴胺处理MCF-7细胞24、48和72 h,应用MTT法测定各组MCF-7细胞增殖抑制率。以0(阴性对照组)和25 μmol·L^-1环巴胺处理MCF-7细胞48 h后,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率及Cx32、Cx43胞膜阳性表达率。结果: 与空白对照组比较,各剂量环巴胺组MCF-7细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),且随环巴胺剂量增加和作用时间延长其增殖抑制作用增强;与空白对照组比较,25 μmol·L^-1环巴胺组48 h时,MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,25 μmol·L^-1环巴胺组48 h时,MCF-7细胞胞膜Cx32和Cx43阳性表达率明显升高(P<0.05)。结论: Hedgehog通路可抑制乳腺癌细胞凋亡,并调节Cx43和Cx32的胞膜表达。     

不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞GJIC功能的影响

目的:观察不同类型幽门螺杆茵(Helicobacter pylori,H.pylori)对GES-1细胞间隙连接通讯功能(gap junction intercellular communication,GJIC)的影响,探讨与GJIC功能异常有关的H.pylori菌株类型.方法:将临床培养分离的不同H.pylori茵...     

幽门螺杆菌与胃癌BGC-823细胞凋亡

目的研究幽门螺杆菌（Halicobacter pylori,Hp）在胃癌细胞BGC-823凋亡中的作用及作用机制。方法将BGC-823细胞与Hp以不同浓度培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞凋亡及超微结构变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与对照组相比,低中浓度Hp作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到细胞增殖旺盛,并出现明显的凋亡抑制现象;电镜观察到细胞凋亡形态特征及凋亡数目减少。流式细胞仪检测结果：与对照组相比,中低浓度组凋亡率下降,有显著性差异（P〈0.05）,高浓度组细胞的凋亡率上升,有显著性差异（P〈0.05）,以上作用均呈细菌浓度和作用时间依赖性。结论 Hp可抑制胃癌细胞BGC-823凋亡,这可能与凋亡抑制基因上调有关。     

姜黄素对人胃癌BGC-823细胞体外生长的影响

目的:观察姜黄素(CCM)对人胃癌BGC-823细胞体外生长的影响。方法:将0、30、60、90、120μmol/L CCM分别与人胃癌BGC-823细胞共培养24、48 h。采用显微镜直接观察BGC-823细胞的形态变化,采用MTT比色法检测BGC-823细胞抑制率,流式细胞术(FCM)检测胃癌细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果:CCM作用后的BGC-823细胞伪足回缩,细胞变小、变圆,瘤巨细胞减少或不见瘤巨细胞。MTT检测显示CCM显著抑制BGC-823细胞的生长,FCM检测提示CCM影响胃癌细胞周期,使其阻滞于G2/M期。TUNEL法表明CCM可以诱导胃癌细胞出现凋亡(P0.05～P0.01)。结论:姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖,改变其细胞周期分布,诱导胃癌细胞凋亡。     

不同幽门螺杆菌临床菌株对人胃黏膜细胞系GES一1增殖和凋亡的影响及其致癌性的研究

比较不同幽门螺杆菌（H.pylori）临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1细胞增殖、凋亡的影响,了解不同毒力菌株对胃黏膜的影响及致癌性。方法：选用临床分离自胃癌、胃炎患者的菌株各10例分别与GES-1细胞以不同浓度比例共培养,在不同时间点进行MTT和流式细胞仪检测,筛选出对GES-1细胞的增殖影响最大（A菌株）和最小（B菌株）的两株菌株,利用蒙古沙土鼠感染模型了解其导致胃黏膜病变情况及致癌性。结果：当细肜细菌浓度比为1：1,1：50共培养12h和细胞／细菌浓度比为1：50共培养24h时,分离自胃癌患者的麒H.pylori临床菌株可以不同程度地促进GES-1细胞增殖,与胃炎菌株组的吸光度值比较差异有统计学意义（P〈0．05）。当细肜细菌浓度比为1：50,1：200共培养时,胃炎菌株纽和胃癌菌株纽细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．05）,胃炎菌株组与胃癌菌株组间差异无统计学意义（P〉0．05）。筛选出的2株菌株感染蒙古沙土鼠模型后28周,A菌株引起蒙古沙土鼠胃黏膜肠化及癌变,与B菌株组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：不同来源的Hpylori临床菌株对GES-1细胞的增殖影响具有差异性,分离自胃癌黏膜的菌株可明显促细胞增殖,并可以引起蒙古沙土鼠严重的胃黏膜癌前病变及胃癌发生。     

竹节香附素A对人胃癌细胞株BGC-823细胞周期及STAT3信号通路的影响

目的?研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)在体外对胃癌细胞BGC-823的周期阻滞作用及对STAT3信号通路的影响。方法?应用MTT法检测RA对人低分化细胞BGC-823细胞的增殖影响,应用流式细胞仪检测RA对BGC-823细胞周期的阻滞作用,细胞划痕实验检测RA对BGC-823迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测其对STAT3信号通路的影响。结果?RA在给药12、24、48h后,与对照组相比,对BGC-823细胞的增殖抑制有显著效果,呈现时间-浓度依赖关系。流式细胞周期结果显示,RA作用于人胃癌细胞BGC-823 12h后,S期比例与对照组相较显著上升,而G₂/M期比例下降,表明细胞被阻滞于S期。在浓度为8、16μmol/L时,镜下显示迁移过去的胃癌细胞数目均明显低于对照组,Western blot结果显示RA能下调p-STAT3蛋白的表达。结论?RA能有效抑制人胃癌细胞的增殖并阻滞其细胞周期于S期,并且抑制STAT3信号通路中p-STAT3的表达。      

ESM-1在低氧环境下胃腺癌细胞中的表达及意义

目的 研究用二氯化钴(CoCl2)模拟胃癌细胞缺氧微环境的合适浓度,探讨内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)在胃腺癌SGC-7901/BGC-823细胞缺氧环境中的表达情况.方法 以两种人胃腺癌细胞(SGC-7901/BGC-823)为研究对象,分别用不同浓度二氯化钴(CoCl2)处理人胃腺癌细胞后,用四唑化合物(MTS)法检测CoCl2对SGC-7901和BGC-823细胞增殖的影响;Western blot分析不同浓度CoCl2处理的人胃腺癌SGC-7901和BGC-823细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和ESM-1表达的变化.结果 ≤0.6 mmol/L浓度的CoCl2对胃腺癌SGC-7901和BGC-823细胞的增殖和细胞活力没有明显影响.在0.5、0.6 mmol/L CoCl2浓度时,HIF-1α蛋白表达明显增加,但ESM-1表达明显下降.结论0.5、0.6 mmol/L CoCl2可以模拟SGC-7901/BGC-823细胞的缺氧环境,在CoCl20.5、0.6 mmol/L模拟细胞缺氧环境中,ESM-1的表达量与HIF-1α呈负相关.     

幽门螺杆菌诱导人胃上皮癌细胞株BGC-823环加氧酶-2的合成

目的：研究幽门螺杆菌对人胃上皮细胞环加氧酶-1和环加氧酶-2合成的影响。方法：实验选用VacA(+)和CagA(+)的国际标准幽门螺杆菌菌株NCTC11637和人胃上皮癌细胞株BGC-823。环加氧酶的合成用免疫蛋白印迹法（Western Blotting）测定。结果：幽门螺杆菌菌体超声提取物对BGC-823细胞环加氧酶-2的合成有明显的诱导作用。BGC-823细胞环加氧酶-2的含量在幽门螺杆菌提取物作用1 h后明显增加,并持续至少6 h。幽门螺杆菌提取物对BGC-823细胞环加氧酶-1的合成没有影响。幽门螺杆菌脂多糖成分对BGC-823细胞环加氧酶-2的合成没有影响。结论：幽门螺杆菌可直接诱导BGC-823细胞环加氧酶-2的合成,这一作用与细菌的脂多糖成分无关。     

幽门螺杆菌L型感染与胃癌BGC-823细胞侵袭、转移关系的研究

目的：研究幽门螺杆菌L型（HelicobacterpyloriL—form,Hp—L型）感染对胃癌BGC-823细胞浸润、转移能力的影响,探讨Hp—L型在胃癌发展中的作用和可能机制。方法：将Hp—L型与胃癌BGC-823细胞按不同比例混合培养24h,并设置空白对照组,进行Transwell小室细胞侵袭实验,观察胃癌BGC-823细胞的侵袭能力。应用Western—blotting实验测定胃癌BGC-823细胞中ezrin的表达情况。结果：随胃癌BGC-823细胞与细菌共培养细菌含量增大,穿透重建基底膜的细胞数目明显增多（P〈0．05～P〈0．01）,胃癌BGC-823细胞中ezrin表达量逐渐增加（P〈0．01）。结论：Hp—L型感染增强了胃癌细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与胃癌细胞的ezrin表达量增加有关。