硒、碘对大鼠海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的 探讨硒、碘对培养大鼠海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响。方法 以无血清培养大鼠民神经细胞为实验对象,培养液中加入不同浓度的碘,硒,用盖玻片培养法。在培养的1,3,5,7和10d时对海马神经细胞进行c-fos、c-jun的mRNA原位分子杂交和蛋白产物的免疫组织化学SABC法染色,对杂交信号和免疫阳性产物进行计算机图像分析。结果 硒可明显促进海马神经细胞原癌基因c-fos、c-jun mRNA及其蛋白的表达。硒、碘合用的促进作用最明显,尤其是c-jun mRNA表达。结论 碘和硒可通过促进海马神经细胞即刻早期基因c-fos、c-jun表达,特别是c-jun表达,进而影响神经功能发育。     

流动力对细胞原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

目的研究流体力对脑微血管内皮细胞原癌基因c-fos和c-nyc表达的影响,为探索微血管疾病机理提供一定实验依据.方法获取Wistar大鼠脑微血管进行细胞培养,在平行板流动小室中对所培养的细胞施加力学作用,并应用免役组织化学技术观察微血管内皮细胞原癌基因c-fos和c-myc的表达.结果不同的流动力对体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞c-fos和c-myc蛋白表达产生了不同的影响.c-fos蛋白表达在静态时非常低,但在4dynes/cm2和10dynes/cm2的流体力的作用下可诱导c-fos蛋白水平迅速增加,尤其是10dynes/cm2的流体力,并随着时间的延长而增加,到1h时达到高峰,随后c-fos蛋白表达量出现下降,2.5h时接近基础水平.c-myc蛋白在静态时表达也非常低,经流体力作用后缓慢增多.结论流体力的大小会影响c-fos和c-myc的表达,血液的力学信号传入细胞内并引起细胞的一些应答,也印证了c-fos和c-myc是被血液流体力作用短暂上调的基因,流体力与内皮细胞生长、增殖、损伤也有直接关系.     

MM-1基因不参与儿童颅内室管膜瘤c-myc原癌基因高度表达

颅内室管膜瘤起源于室管膜细胞 ,在儿童常见脑瘤中占第 3位。应用核苷酸芯片 (oligonuleotidemicroarray)技术 ,我们已发现室管膜瘤的c -myc原癌基因呈高度表达。但利用比较基因组杂交 (CGH)和荧光原位杂交 (FISH)技术 ,没有检测到该基因的扩增现象。因此c-myc的高表达可能是其上游的某个抑制子发生基因突变所致。MM - 1(mycmodulator - 1)是最近发现的一个新的c -myc结合蛋白 ,具有抑制c-myc正常转录的功能。为验证MM - 1基因的突变可能参与c -myc在脑室管膜瘤的高表达 ,本实验以 11例儿童室管膜瘤患者的基因组DNA为模板 ,扩增MM - …     

红景天甙对缺氧状态下兔肺动脉平滑肌细胞增殖和c-fos、c-myc原癌基因表达的影响

目的:研究红景天甙(salidroside, Sal)对缺氧( 2%～3%)状态下兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖、DNA合成、细胞周期和c-fos,c-myc 原癌基因表达的影响.方法:应用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、[3H] -胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入、细胞周期测定和斑点杂交的方法.结果:发现缺氧24 h可直接刺激PASMC,使MTT之OD值增加95%(P＜0.05),[3H]-T dR的掺入量增加140%(P＜0.01);在缺氧的PASMC培养液中加入Sal(1200 μg/mL)可抑制缺氧的这种促增殖作用,PASMC的MTT之OD值与[3H]-TdR掺入量与缺氧组相比显著下降(P＜0.05);流式细胞分析显示缺氧24 h PASMC G2/M期细胞比例比常氧组明显增多(P＜0.01),G0/G1期细胞比例明显减少(P＜0.05),与缺氧组相比Sal可增多PASMC G0/G1期细胞比例,减少G2/M期细胞比例(P＜0.05);缺氧可促进c-fos,c-myc原癌基因表达,该效应可被Sal所抑制.结论:红景天甙可抑制缺氧所致的PASMC增殖、DNA合成、进入G2/M期的细胞比例和c-fos,c-myc原癌基因表达.     

TGFβ1 诱导 THP-1 细胞分化为巨噬细胞时原癌基因表达的变化

对重组转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）诱导前单核白血病细胞系ＴＨＰ－１细胞向巨噬细胞分化过程中核内原癌基因表达的动态变化进行了研究。结果发现，在诱导分化过程中不同的原癌基因表达变化不仅具有时序性，调节方式也呈多样性。ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ表达变化在时间上有一致性，诱导分化早期（２４小时）贴壁细胞的表达量明显增加，延长ｒｈＴＧＰ－β１作用时间至４８～７２小时时，这种上调作用消失，回复到对照组ＴＨＰ－１细胞原有的或低于原有的表达水平。ｃ－ｍｙｃ在细胞分化过程中表达逐渐降低，作用７２小时时表达量不足对照组细胞的１０％。而ｃ－ｓｉｓ在ｒｈＴＧＰ－β１作用７２小时内未发现其表达被调节。提示ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因在分化早期的表达上调，以及ｃ－ｍｙｃ基因在分化中期的表达被强烈抑制可能分别在分化进程中发挥重要作用。     

瘢痕疙瘩组织中c-myc、ras原癌基因的表达

目的 探讨c-myc、ras原癌基因表达与瘢痕疙瘩形成的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测c-myc、rasp21蛋白在30例瘢痕疙瘩组织和26例正常皮肤组织中的表达和分布。结果 c-myc蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中呈强阳性表达，与正常皮肤对照组相比，差异有显著性（P〈0．001），在瘢痕疙瘩的成纤维细胞中，rasp21蛋白缺乏表达。结论 瘢痕疙瘩中c-myc蛋白表达升高提示c-myc原癌基因的激活，c-myc原癌基因可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控，并导致瘢痕增生；ras原癌基因在瘢痕疙瘩形成中可能不突变或不起主要调控作用，这可能是瘢痕疙瘩较少癌变的原因。     

病毒性心肌炎原癌基因c-fos的表达

原癌基因c-fos参与了细胞的生长、分化和信息传递,它在某些疾病和病理生理过程中表达增加,可能参与其发生与发展.有关病毒性心肌炎（viral myocarditis,VMC）中c-fosmRNA的表达目前罕见报道.本研究就是利用免疫组化方法和原位杂交方法探讨原癌基因c-fos的mRNA及蛋白质在小鼠VMC心肌细胞中的表达.     

点燃癫癎模型大鼠皮层与海马c-fos、c-jun基因的表达

目的:通过点燃癫癎模型大鼠脑内c-fos、c-jun基因表达的观察以探讨癫癎的发病机理.方法:选用大鼠杏仁核快速点燃癫癎模型,应用免疫组织化学技术观察点燃癫癎大鼠的皮层与海马c-fos、c-jun基因的表达.结果:杏仁核点燃癫癎大鼠的皮层与海马c-fos、c-jun基因表达明显增强,阳性细胞数量显著增加.结论:c-fos、c-jun基因的表达与癎性发作的机制相关.     

hsp70与c-myc、c-fos和p53的结构及功能联系

热休克蛋白70(hsp70)基因启动子部位有myc原癌基因产物的两个结合位点,分别位于hsp70基因5’上游—160和—230碱基处,myc蛋白可以与其结合调节hsp70基因的转录活性。c-fos基因启动子与hsp70启动子区域存在着一种共同的反式作用因子结合区,可能受一种共同的特异性反式作用的调节。野生型P53对hsp70启动子的抑制可能与CCAAbox结合因子有关;hsp70参与突变型P53向野生型P53表型转变的调节。     

扎考比利改善压力超负荷致大鼠心室重构的作用

目的:研究扎考比利(zacopride,ZAC)对腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷性心室重构的改善作用。方法:通过腹主动脉缩窄构建大鼠压力超负荷心室重构模型,预防性给予ZAC、氯喹(chloroquine,Chlor)及ZAC+Chlor。连续给药8周,超声心动图评价心功能;计算心重/体重比(HW/BW)和左心室/体重比(LVW/BW);左心室心肌组织HE染色;透射电镜观察心肌细胞超微结构;Western blot检测大鼠心肌组织内向整流钾通道(IK1)蛋白表达;RT-PCR法检测心肌组织Kir2.1的mRNA表达。结果:与模型(vehicle)组相比,ZAC组大鼠心功能明显改善,LVEDS和LVEDD明显降低(P 0.05),LVEF和LVFS显著升高(P 0.01),HW/BW和LVW/BW显著降低(P 0.05),心肌肥大程度降低,心肌细胞横断面积明显减小(P 0.01),心肌超微结构明显改善。Chlor明显阻断了ZAC对腹主动脉缩窄所致压力超负荷大鼠心室重构的保护作用。与vehicle组相比,ZAC组大鼠心肌组织IK1蛋白表达和Kir2.1的mRNA显著升高(P 0.01)。结论:心肌IK1激动剂ZAC显著减轻大鼠左心室压力超负荷诱发的心室重构。     

实时荧光定量PCR检测WISP-1/NGX6基因体系与子宫颈癌细胞增殖转移的关系

目的探讨原癌基因WISP-1和抑癌基因NGX6与子宫颈癌细胞增殖转移的关系。方法参考人WISP-1、NGX6基因mRNA序列分别设计引物与探针。提取人正常子宫颈组织（30例）、子宫颈浸润癌（均为子宫颈鳞状细胞癌）组织未转移组及转移组（各30例）总RNA,采用实时荧光定量PCR技术分别检测各组标本组织中WISP-1、NGX6基因的表达量并进行对比分析。结果原癌基因WISP-1在子宫颈癌组织转移组及未转移组中的表达量均明显高于正常子宫颈组织（均P〈0．001）,在子宫颈癌组织转移组中的表达量明显高于未转移组（P〈0．001）。抑癌基因NGX6在子宫颈癌组织转移组及未转移组中的表达量均低于正常子宫颈组织（均P〈0．001）,在子宫颈癌组织转移组中的表达量明显低于未转移组（P〈0．05）。结论WISP-1／NGX6基因体系与子宫颈癌的细胞增殖有关,并且与子宫颈癌细胞的转移亦有相关性。     

Sex-specific pathways in early cardiac response to pressure overload in mice

Pressure overload (PO) first causes cardiac hypertrophy and then heart failure (HF), which are associated with sex differences in cardiac morphology and function. We aimed to identify genes that may cause HF-related sex differences. We used a transverse aortic constriction (TAC) mouse model leading to hypertrophy without sex differences in cardiac function after 2 weeks, but with sex differences in hypertrophy 6 and 9 weeks after TAC. Cardiac gene expression was analyzed 2 weeks after surgery. Deregulated genes were classified into functional gene ontology (GO) categories and used for pathway analysis. Classical marker genes of hypertrophy were similarly upregulated in both sexes (alpha-actin, ANP, BNP, CTGF). Thirty-five genes controlling mitochondrial function (PGC-1, cytochrome oxidase, carnitine palmitoyl transferase, acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate dehydrogenase kinase) had lower expression in males compared to females after TAC. Genes encoding ribosomal proteins and genes associated with extracellular matrix remodeling exhibited relative higher expression in males (collagen 3, matrix metalloproteinase 2, TIMP2, and TGFbeta2, all about twofold) after TAC. We confirmed 87% of the gene expression by real-time polymerase chain reaction. By GO classification, female-specific genes were related to mitochondria and metabolism and males to matrix and biosynthesis. Promoter studies confirmed the upregulation of PGC-1 by E2. Less downregulation of metabolic genes in female hearts and increased protein synthesis capacity and deregulation of matrix remodeling in male hearts characterize the sex-specific early response to PO. These differences could contribute to subsequent sex differences in cardiac function and HF.     

利用GeneHub软件多角度分析基因功能相关与表达相关的联系

我们研制的GeneHub软件可以用来评价基因功能分类体系中各个功能单元的表达相关性的显著性，从而筛选与实验条件相关的功能单元。采用不同的相似性测度与不同的数据集，使用GeneHub研究了分别按染色体定位、蛋白质细胞位置与互作、代谢通路、信号传导通路等五个方面分类的基因的表达相关性，结果显示按照这些不同的方面分类的基因显著共表达，并且这种共表达现象往往受相关实验条件影响。为基因表达谱分析中广泛采用的假设“功能相关的基因表达相关”提供了进一步的实验证据。     

Gax基因转染对低氧性PASMCs增殖及原癌基因表达的影响

目的： 探讨生长终止特异性同源盒Gax基因转染对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响。方法：腺病毒介导Gax基因(Ad-Gax)转染PASMCs。在常氧（21％O₂）和低氧（2.5％O₂）12 h条件下，利用RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定转染组和未转染组PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达，以及c-fos、c-jun mRNA表达变化；［³H］-TdR掺入法检测各组PASMCs增殖情况。结果：RT-PCR和免疫细胞化学法证实Gax基因转染后PASMCs中Gax能稳定过表达；转染组细胞c-fos、c-jun mRNA表达水平在常氧和低氧均低于未转染组细胞（P<0.05,P<0.01）；未转染组低氧时［³H］-TdR掺入量比常氧时高（P<0.01）；在常氧和低氧时转染组［³H］-TdR掺入量均低于未转染组（P<0.05，P<0.01）。结论：Gax基因过表达可能通过下调c-fos、c-jun基因的表达来抑制低氧性PASMCs的增殖。     

膀胱排尿肌超负荷与抑制性信号蛋白SOCS1表达的相关性研究

目的采用张力传感器及BL-420S系统加载膀胱排尿肌肌丝,观察不同程度牵拉负荷下的肌丝标本肌动波形变化,分析牵拉引起的超负荷状态下排尿肌抑制性蛋白(suppressor of cytokinesignaling 1,SOCS1)表达,探讨牵拉负荷与SOCS1蛋白表达之间的关系。方法排尿肌肌丝取自昆明小鼠膀胱壁,标本固定于微量定位装置上,松弛状态下微调整标本长度直至记录到被动张力1 g,以此作为初长度(initial length,L0)。间歇并牵拉标本10次(L0+1至L0+10),记录并测量肌动波形不同时相的波形特点。对牵拉后L0+5及L0+10的标本进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及印迹法分析,观察不同牵拉负荷后的SOCS1蛋白表达。结果(1)微量牵拉可经张力传感器记录到显著瞬间被动张力(passive tension,PT)及后续的应力波动曲线(subsequent vibration,Vib),不同预处理后的标本肌动波形特点各异;(2)高度牵拉后的超负荷标本SOCS1表达较正常标本显著增强。结论肌动波形可直观地表现排尿肌标本超负荷状态、瞬间被动张力变化及受力后适应性变化。超负荷可引起排尿肌抑制性蛋白分子SOCS1表达的加强,显示其对于超负荷排尿肌在重建中的保护具有一定意义。本实验通过建立排尿肌微调式牵拉体外实验模型,对于了解膀胱排尿肌超负荷状态下的失代偿及信号蛋白调节机制具有一定的意义。     

非诺贝特和吡格列酮对压力过负荷大鼠心室重塑的影响及作用机制

目的： 探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体（PPARs）的配体非诺贝特和吡格列酮对压力过负荷大鼠心功能、心室重塑的影响及其作用机制。方法： 取雄性Wistar大鼠腹主动脉缩窄致压力过负荷模型，术后48 h存活的40只随机分成：手术组（CAA组）、非诺贝特干预组（F组）、吡格列酮干预组（P组）及非诺贝特和吡格列酮联合干预组（F＋P组）。另以10只雄性Wistar大鼠为假手术对照。在给药处理12周后检测血流动力学参数、心室重塑指标、血浆和心肌肾素活性、血管紧张素Ⅱ、醛固酮及心肌的1型血管紧张素Ⅱ受体（AT1）mRNA表达变化。最终36 只大鼠获完整资料，上述各组分别为7、8、7、6和8只。 结果： F组、P组及F＋P组的左室湿重/体重、平均动脉压、左室收缩压、左室舒张末期压及心率低于CAA组，而左室压力上升、下降最大速率（±dp/dtmax）高于CAA组；F组、P组、F＋P组及CAA组间血浆和心肌肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮活性无显著差异。P组和F+P组大鼠心肌AT1 mRNA 的表达水平低于F组。 结论： 尽管PPARα配体（非诺贝特）和PPARγ配体（吡格列酮）对血浆和心肌肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮无明显影响，但PPARs信号通路激活能抑制压力过负荷大鼠心室重塑，降低前后负荷，并提高±dp/dtmax。PPARγ途径激活可抑制心肌AT1 mRNA的表达。     

白细胞介素-13对巨核细胞系-HEL细胞原癌基因c-mpl表达的影响

目的：研究重组人白细胞介素-13（rhIL-13）刺激巨核细胞系-HEL细胞的增殖是否与原癌基因c-mpl表达有关。方法：用MTT比色法和RT-PCR法分别观察了rhIL-13对HEL细胞增殖的影响和对c-mpl mRNA表达的影响。结果：rhIL-13促进了HEL细胞的增殖,上调了HEL细胞c-mpl mRNA的表达。结论：rhIL-13促进巨核细胞系-HEL细胞增殖,其部分机制可能是通过上调c-mpl的表达来实现。     

心肌梗塞大鼠心肌间质胶原重构与血流动力学改变的相关研究

目的：研究心肌梗塞后细胞外间质重构和心功能改变之间的关系。方法：在结扎左冠状动脉的大鼠心肌梗塞模型上动态观察梗塞区（IZ）和非梗塞区（NIZ）胶原含量及胶原I/III比值的变化及其与左室收缩和舒张功能参数的相关性。结果：心梗3 d以后IZ和NIZ胶原含量均明显大于假手术组相应时间的测值（P<0.05,P<0.01）。IZ胶原I/III比值3 d时低,7 d以后明显高（P<0.01）。NIZ在14d时I/III比值明显高。将心梗后42 d时IZ和NIZ胶原含量和Ⅰ/Ⅲ比值与+P'_max和-P'_max进行相关分析表明,NIZ胶原含量与+P'_max和-P'_max均呈负相关,r=-0.589,P>0.05和r=-0.788,P<0.01;NIZ胶原I/III比值与+P'_max和-P'_max亦呈负相关（r=-0.504,r=-0.545,P>0.05）。IZ胶原含量与+P'max呈正相关,r=0.70,P<0.05与-P'_max无相关性（r=-0.29）。IZ 胶原I/III比值与+P'_max和-P'_max均无相关性。结论：心梗后梗塞区胶原沉积有助于改善收缩功能,而非梗塞区的胶原增生则损害收缩和舒张功能.     

星形细胞瘤p16与Rb蛋白的表达及其相关性研究

目的检测ｐ１６与Ｒｂ蛋白在原发性星形细胞瘤中的存在状况，以探讨不同病理类型星形细胞瘤中ｐ１６与Ｒｂ蛋白表达及其相关性。方法使用抗ｐ１６及Ｒｂ蛋白抗体对１０２例星形细胞瘤手术标本进行免疫细胞化学检测。结果低度恶性星形细胞瘤（ＷＨＯⅠ～Ⅱ级）中ｐ１６及Ｒｂ蛋白均为阳性表达，在高度恶性星形细胞瘤（ＷＨＯⅢ～Ⅳ级）中其阳性表达分别为４８．１％（２６／５４）和５７．４％（３１／５４）。在３１例Ｒｂ蛋白阳性标本中，有２４例（７７．４％）显示ｐ１６蛋白表达缺失或低表达，而在２３例Ｒｂ蛋白阴性标本中却有１９例（８２．６％）显示ｐ１６蛋白阳性或强阳性。结论（１）ｐ１６及Ｒｂ蛋白参与星形细胞瘤细胞增殖过程并影响其细胞分化；（２）ｐ１６与Ｒｂ蛋白之间阳性表达的相互抑制，可能是高度恶性星形细胞瘤的标志之一。     

重组人胰岛素原基因在培养的大鼠肝癌细胞中基因转移和表达

目的： 探讨含有葡萄糖反应元件的重组人胰岛素原基因在培养的大鼠肝癌细胞中基因转移及表达情况。方法: 将含有3点突变及2点突变的人胰岛素原基因转染至大鼠肝癌CBRH7919细胞，测定不同葡萄糖浓度下瞬时及用G418筛选稳定表达后胰岛素的分泌量，并检测基因整合情况。结果： ① 转染后38 h及1个月，不同葡萄糖浓度下，含有3点突变胰岛素原基因的肝癌细胞胰岛素分泌量不同; 含有2点突变胰岛素原基因的肝癌细胞，只有在25 mmol/L的葡萄糖浓度培养液中，才能测出胰岛素分泌量；② 阳性克隆细胞基因组扩增出特异目的电泳条带，未转染细胞无此条带。结论: ①用逆转录病毒为载体能将重组人胰岛素原基因转染到肝癌细胞中,并使之稳定表达。② 所构建的重组人胰岛素原基因能指导靶细胞随葡萄糖浓度的变化调节胰岛素分泌。