龙牙楤木总皂苷对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究龙牙楤木总皂苷(AS)对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法分次消化法分离原代培养的乳鼠心肌细胞,建立H2O2诱导心肌细胞损伤模型;MTT法检测不同浓度AS对细胞保护作用的量效、时效关系;倒置显微镜下观察AS对细胞形态学和细胞搏动频率的影响;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量及丙二醛(MDA)含量,检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果不同浓度H2O2处理心肌细胞2 h,100～400μmol.L-1对心肌细胞具有明显的损伤作用,呈剂量依赖性;LDH漏出量增加,MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低。而12.5～25 mg.L-1AS预处理8、12 h可明显地减轻损伤,有效保护心肌细胞。明显减少LDH的漏出,降低MDA含量,提高SOD、CAT、GSH-Px活力;12.5～25 mg.L-1 AS于给药后4h明显减慢心肌细胞的搏动频率,并呈剂量依赖性,表明在该剂量范围内AS具有明显的负性频率效应。结论 AS对H2O2致心肌细胞氧化损伤具有明显的保护作用,呈时间、剂量依赖性。其作用机制可能与其清除自由基,提高心肌细胞的抗氧酶活力有关;同时提示AS的心肌保护作用可能与其减少心肌做功、降低心肌耗氧量、增加心肌细胞稳定性有关。     

黄芪苷Ⅳ对阿霉素损伤培养乳鼠心肌细胞保护作用机制研究

目的：研究黄芪苷Ⅳ（astragaloside Ⅳ，AST）对阿霉素所致培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用，并从乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，△ψm）、肌浆网钙泵（sarcoplasmic reticulum Ca^2＋-ATPases，SERCA）和凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax四方面探讨其作用机制。方法：采用体外培养乳鼠心肌细胞，用阿霉素（adfiamycin，ADR）制备心肌细胞损伤模型。心肌细胞随机分为四组：空白对照组（C组）；ADR组在培养液中加入ADR2mg／L，作用3小时；AST组在培养液中加入AST20mg／L，作用4小时；AST＋ADR组为在加入ADR2mg／L前1小时给予AST20mg／L，继续作用3小时。     

云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

摘 要 目的：研究云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的机制。方法: 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,并采用云南鼠尾草提取物进行干预。将体外培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为6组：正常对照（C）组、缺氧/复氧模型（H/R）组、缺氧/复氧模型+维拉帕米阳性对照（H/R+V）组、缺氧/复氧模型+云南鼠尾草低（H/R+L, 0.01 mg·L^-1）、中（H/R+M, 0.1 mg·L^-1）、高（H/R+H, 1.0 mg·L^-1）剂量组。采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,利用检测试剂盒测定丙二醛（MDA）的含量和乳酸脱氢酶（LDH）的活性,通过荧光酶标仪测定荧光吸光度（A）值反映细胞内活性氧 （ROS）水平。结果: 与模型组比较,云南鼠尾草低、中、高剂量组均能显著提高心肌细胞存活率（P＜0.05或P＜0.01）,云南鼠尾草高剂量组显著减少细胞内LDH漏出量（P＜0.05或P＜0.01）、胞浆内MDA的含量（P＜0.01）和细胞内ROS水平（P＜0.05）。结论: 云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其相关作用机制可能与其减少脂质过氧化物和清除细胞氧自由基有关。     

诃子提取物对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究诃子提取物对过氧化氢（H2O2）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法采用H2O2处理体外培养心肌细胞,造成氧化应激模型,通过检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）漏出量,丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性来反映诃子提取物对H2O2氧化模型的影响,并采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞的代谢率。结果与模型组相比,诃子提取物能显著减少LDH和CK漏出量（P〈0.01）,升高A值（P〈0.01）,降低培养液中MDA含量（P〈0.05,P〈0.01）,升高SOD活性（P〈0.01）。结论诃子提取物可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关。     

乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用

目的 研究乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用.方法 分离培养SD乳鼠心肌细胞,给予100.0、10.0、1.0、0.1 μg·ml-1的乌头碱染毒后,观察乳鼠心肌细胞的形态及细胞搏动的情况,测定丙二醛(MDA)的含量,并采用MTT法检测细胞存活率.结果 随着乌头碱浓度的增加,心肌细胞存活率下降.与对照组相比,乌头碱浓度＞1.0 μg·ml-1时,心肌细胞的存活率显著降低(P＜0.01),MDA的含量随剂量的增加而明显升高(P＜0.01).结论 乌头碱浓度＞1.0 μg·ml-1时,对乳鼠心肌细胞有明显的氧化损伤作用,同时表现出较强的细胞毒性.     

血府逐瘀汤对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的影响

目的为探讨血府逐瘀汤对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的影响。方法应用培养的乳鼠心肌细胞造成缺血再灌注损伤的动物模型,观察心肌细胞中超氧化物岐化酶(SOD)的水平,推断细胞内活性氧的生成量;观察培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性改变以判断细胞损伤情况;并进行DNA琼脂糖凝胶电泳及末端脱氧核苷酸介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL),以判断细胞死亡类型及程度。结果血府逐瘀汤可显著升高缺血再灌注时SOD的水平,显著降低LDH的水平。DNA电泳图谱表明:血府逐瘀汤可使DNA的拖尾基本消失;TUNEL显示血府逐瘀汤可显著减少缺血再灌注所致的心肌细胞死亡。结论血府逐瘀汤有保护缺血再灌注时心肌细胞免于死亡之功效。     

昆布多糖硫酸酯对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用Δ

目的研究昆布多糖硫酸酯(LAPS)对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法分次消化法分离原代培养的乳鼠心肌细胞,建立H2O2诱导心肌细胞损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度LAPS对心肌细胞的保护作用;试剂盒检测LAPS对细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量的影响;利用荧光探针二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果100μmol/L的H2O2能明显造成心肌细胞损伤,LAPS能改善H2O2所造成的心肌细胞损伤;LAPS能够明显降低的过氧化损伤心肌细胞外液中LDH和CK含量、明显降低过氧化损伤心肌细胞内MDA和活性氧(ROS)的含量、明显提高过氧化损伤心肌细胞内SOD、GSH-Px和CAT的活力。结论 LAPS对心肌细胞的过氧化损伤有保护作用,与其降低或阻断脂质过氧化反应,降低细胞内ROS含量,进而阻断因ROS对细胞造成的损害,及时修复受损细胞有着密切关系。     

蛇床子素对乳鼠心肌细胞钠通道的影响

目的:研究蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钠通道电流的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术,首先在乳鼠心肌细胞上诱导出钠电流,然后观察蛇床子素对钠电流的影响。结果:蛇床子素可以浓度依赖性抑制心肌细胞钠通道,抑制的半有效浓度为110.3±6.5μM。蛇床子素对钠电流的激活阈电位和峰电位没有影响,但是其对钠电流的抑制表现出电压依赖性。蛇床子素使钠通道稳态失活曲线向超极化方向漂移。此外,蛇床子素对钠电流的抑制是快速可逆的,这种抑制具有使用依赖性。结论:蛇床子素以浓度依赖和使用依赖的方式抑制乳鼠心肌细胞钠通道电流。     

丹红注射液预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨丹红注射液(DH)预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其相关机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分离培养SD乳鼠心肌细胞,在培养3d后随机分为5组(每组实验重复6次):正常对照(control)组、缺氧/复氧(A/R)组,丹红注射液低剂量(终浓度为0.2μmol/ml)(DHL+A/R)组,丹红注射液中剂量(终浓度为0.6μmol/ml)(DHM+A/R)组,丹红注射液高剂量(终浓度为1.8μmol/ml)(DHH+A/R)组。测定各组心肌细胞存活率,培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,以及细胞内ATP水平。结果与对照组比较,A/R组心肌细胞存活率、细胞培养液中SOD活性和细胞内ATP水平均明显降低(均P<0.01),而培养液中LDH水平明显增加(P<0.01)。与A/R组比较,DH+A/R各剂量组心肌细胞存活率、细胞内SOD含量和细胞内ATP水平均明显增加(均P<0.01),而培养液中LDH水平均明显降低(P<0.01);其中又以DHH+A/R组细胞的存活率升高明显,与DHL+A/R组比较有显著差异(P<0.05)。结论丹红注射液预处理可减轻心肌细胞A/R损伤,其机制可能为丹红注射液增加了细胞的内源性抗氧化剂活性,改善了心肌细胞能量代谢;且在一定范围内呈剂量依赖性,随着剂量的升高,保护作用更明显。     

姜黄素对乳鼠心肌细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的 探讨姜黄素对过氧化氢(H2O2)刺激下的乳鼠心肌细胞是否具有作用.方法 培养乳鼠心肌细胞,建立H2O2损伤模型,姜黄素组按12.5、25、50 μmol/L三种浓度给药,分别测定各组心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;分析心肌细胞凋亡情况.结果 除低剂量姜黄素组外,其它剂量姜黄素组均能显著地提高H2O2所致心肌细胞损伤的心肌存活率(P<0.05);所有剂量姜黄素组均能减少H2O2损伤的心肌细胞LDH和MDA的生成,提高SOD的活性(P<0.05);与H2O2损伤无姜黄素对照组比较,50μmol/L姜黄素组心肌细胞凋亡率显著下降(P<0.01).结论 姜黄素对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用,并呈剂量依赖性,其作用机制可能与姜黄素清除氧自由基有关.     

H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

摘要 目的 探讨H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧引起H9C2细胞凋亡的影响。方法 大鼠心肌细胞系（H9C2）经体外培养扩增,使用对数生长期细胞做实验处理。分别使用0、5、10、20、50、100μmol/L浓度 H2O2处理H9C2细胞,流式细胞仪（FCM）、MTT法和免疫印迹法（Western blot法）检测不同浓度H2O2处理对H9C2细胞凋亡率、增殖活性和STAT3磷酸化水平的影响,以确定最佳H2O2预处理浓度。观察低浓度H2O2预处理对缺氧/复氧所引起细胞损伤的影响,细胞随机分为4组,①对照组：常规培养;②缺氧／复氧组：预先在 5％CO2,95%N2培养箱中培养 120min,复氧30min ;③H2O2预处理组：给予H2O2处理90min换液,24h后缺氧/复氧处理;④AG490+ H202组：在H2O2预处理前10min给予10μmol/L AG490处理,其余处理同H2O2预处理组。AnnexinV-FITC/PI双染法及流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡,MTT法检测H9C2细胞增殖活性,免疫印迹法（Western blot法）检测STAT3磷酸化水平。结果20μmol/L组的STAT3磷酸化水平明显高于其他各浓度组（P<0.01）,心肌细胞凋亡率亦明显低于50μmol/L及100μmol/L浓度组（P<0.01）,而其心肌细胞增殖活性及细胞凋亡率与5μmol/L及10μmol/L浓度组无明显差异; H2O2预处理能降低大鼠心肌细胞凋亡率（P<0.05）,增加心肌细胞活性（P<0.05）上调P- STAT3水平（P<0.05）。缺氧损伤后给予AG490处理可使H2O2预处理保护作用消失。结论20μmol/L H2O2预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有适应性保护作用。可能机制是激活 JAK2-STAT3通路发挥抑制细胞凋亡作用。     

银杏提取物对过氧化氢损伤的培养大鼠心肌细胞的保护作用

探讨银杏叶提取物对过氧化氢损伤的培养心肌细胞的保护作用及其机制。方法；比色法测定乳酸脱氢酶活性；戊巴比妥酸法测定细胞内质质过氧化物含量；透射电镜下观察细胞超微结构。结果：过氧化氢导致心肌细胞ＬＤＨ释放从（２１６６±２４７）Ｕ．Ｌ＾－１增至（５１８０±６４８）Ｕ．Ｌ＾－１ＭＤＡ含量从每１０＾６细胞９３．５±０．２）ｎｍｏｌ增至（７．２±０．４）ｎｍｏｌ；．心肌细胞超微结构受到严重损伤。     

乳鼠心肌细胞的原代培养方法改良

目的探讨乳鼠原代心肌细胞分离、培养和纯化的方法,得到存活率高、搏动频率强、纯度高的心肌细胞。方法采用0.08%胰蛋白酶及0.05%Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,差速贴壁60 min,加入终浓度为0.1 mmol·L~(-1)的5-Brdu纯化心肌细胞。倒置显微镜下观察不同时间心肌细胞形态学变化;记录心肌细胞搏动频率;台盼蓝染色,测定心肌细胞存活率。结果心肌细胞生长状态良好,4 h开始贴壁,48~72 h基本完全贴壁,形成放射状排列的细胞簇,同步搏动;5~9 d心肌细胞搏动频率在80~110次·min~(-1),活力好且稳定;采用台盼蓝染色法测得心肌细胞平均存活率为97.7%。结论此方法可得到存活率高、搏动频率强、纯度较高的心肌细胞,可为科研研究提供良好的实验模型。     

香菇多糖对H2O2损伤神经细胞保护作用的研究

目的研究香菇多糖(lentinan)对H2O2损伤体外原代培养大鼠皮层神经细胞的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养胚胎大鼠大脑皮层神经细胞,建立H2O2氧化应激损伤模型,观察香菇多糖的保护作用。结果香菇多糖能显著提高氧化损伤神经细胞的生存率,降低培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量和一氧化氮(NO)含量,抑制细胞内丙二醛(MDA)的生成,提高细胞内超氧歧化酶(SOD)的活性。结论香菇多糖对H2O2损伤神经细胞具有显著的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

阿魏酸预处理对阿霉素诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的研究阿魏酸(FA)对阿霉素(DOX)诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法 1μmol·L-1DOX处理H9c2细胞24 h,建立心肌损伤模型。FA预处理组,10、20、40μmol·L-1FA预处理2 h后,再与DOX共培养24 h。CCK-8比色法测定细胞生存率;相差显微镜观察细胞形态学改变;生化试剂盒检测LDH、CK、MDA、SOD;DCF-DA荧光染色流式细胞术检测细胞内活性氧;AO-EB染色、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot法测定caspase-3、Bax、Bcl-2表达。结果 DOX降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤和细胞凋亡。FA预处理剂量依赖性提高细胞生存率,减轻LDH、CK外漏和损伤细胞形态学改变。FA减少ROS生成,降低细胞MDA水平,增加SOD酶活性,抑制DOX诱导的氧化应激。FA下调促凋亡蛋白caspase-3和Bax,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。结论 FA可抑制DOX诱导的氧化应激和心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤。     

姬松茸多糖对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的 考察姬松茸多糖(Agaricus blazei polysaccharide,ABPS)对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤的影响及潜在机制.方法 分别用H2O2(200 μmol·L-1)、ABPS(0.5、1.0、2.0 g·L-1)、LY294002(10 μmol·L-1)处理心肌细胞 H...     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的改善作用

目的:研究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的的改善作用及机制.方法:将H9c2心肌细胞为正常对照组、模型组和荭草花提取物低、中、高浓度组(20、40、80μg/mL),除正常对照组外,其余各组细胞以800μmol/L CoCl2复制缺氧复氧损伤模型,然后观察细胞凋亡情况,并分别检测细胞中ROS水平、钙离子水平...     

阿魏酸甲酯对缺氧损伤H9c2心肌细胞的线粒体保护作用研究

目的探讨阿魏酸甲酯对H9c2心肌细胞缺氧损伤后线粒体功能的影响。方法将细胞分为正常组(不给药、不造模),缺氧模型组(仅造模),阿魏酸甲酯高、中、低(40、20、10μmol/L)剂量组,阳性对照药组(环孢菌素A,1μmol/L)。各给药组细胞经药物预处理及缺氧损伤造模后,检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)、三磷酸腺苷(ATP)水平,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位、线粒体膜通透性转换孔开放情况的变化。结果与缺氧模型组比较,阿魏酸甲酯高、中、低剂量组H9c2心肌细胞中LDH、MDA、CK水平和ROS荧光强度均显著降低,ATP水平均显著升高(P<0.01或P<0.05);线粒体膜电位红/绿荧光强度比值和线粒体膜通透性转换孔绿色荧光强度均显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论阿魏酸甲酯能逆转缺氧损伤H9c2心肌细胞的生化指标水平,稳定线粒体膜电位,降低线粒体膜通透性转换孔的开放程度,对缺氧损伤H9c2心肌细胞线粒体功能具有明显的保护作用,且这种保护作用呈剂量依赖趋势。