复方天麻蜜环菌糖肽片对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 观察复方天麻蜜环菌糖肽片对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质缺血灶周围区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子(AIF)时相表达及对神经细胞凋亡的影响.方法 应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察梗死灶的分布,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察模型组、复方天麻蜜环菌糖肽片治疗组和对照组(生理盐水干预组)大脑中动脉栓塞90 min再灌注6 h、24 h、72 h时缺血灶周围脑区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子和TUNEL阳性细胞的时相表达.结果 脑缺血再灌注后在缺血灶周围区均出现三者的表达,且表达有几乎一致的规律性.栓塞90 min再灌注24 h、72 h,复方天麻蜜环菌糖肽片治疗组与其他两组比较,caspase-3、凋亡诱导因子阳性细胞和TUNEL染色阳性细胞的数量均明显减少(P＜0.01).结论 AIF、caspase-3参与了局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡过程,复方天麻蜜环菌糖肽片可以减少AIF、caspase-3蛋白的表达,减轻迟发性神经元死亡,对缺血性脑组织有保护作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的表达及其与神经细胞凋亡的关系

目的观察大鼠脑缺血再灌注(I/R)后凋亡诱导因子(AIF)的表达,探讨I/R脑区AIF变化与神经细胞凋亡的关系。方法应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的形成,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察大鼠假手术组、MCAO90min再灌注0、3、6、12、24、48、72h时额顶叶皮层缺血脑区AIF表达及神经细胞凋亡程度的变化。结果脑I/R24h,TTC染色见明显的梗死灶形成。除缺血90min凋亡细胞数量与假手术组比较无统计学意义外,其余各指标与假手术组相比均有统计学意义(P<0.01),除6与12h以及24与48hAIF含量的差异无统计学意义,24与48h凋亡细胞数量的差异无统计学意义外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论I/R可诱导AIF阳性细胞表达增加,并引起神经细胞凋亡。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血caspase-3活性和神经细胞凋亡的影响

目的 探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血脑梗死体积、脑缺血半暗带半胱天冬酶一3(caspase-3)活性和神经细胞凋亡的影响。方法 大鼠腹腔注射3-NPA 3d后制作大脑中动脉闭塞模型，采用TTC染色、TuNEL法、流式细胞术和荧光测定法，观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24h脑梗死体积、神经细胞凋亡和caspase-3活性的影响。结果 缺血2h再灌注24h，3-NPA预处理组脑梗死体积减小22．3％，caspase-3活性降低13．9％，TUNEL阳性细胞数和细胞凋亡百分率分别减少47．0％和43．9％，与对照组比较差异有显著性。结论 3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受，降低caspase-3活性，抑制神经细胞凋亡可能是其机制之一。     

海风藤提取物对脑缺血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位变化的干预作用

目的观察脑缺血再灌注2h后大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化及海风藤提取物的干预作用。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,流式细胞术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜组和海风藤组缺血灶周神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果与模型组神经细胞凋亡率(72.7%±6.5%)和线粒体膜电位(0.117±0.011)比较,海风藤组神经细胞凋亡率(47.0%±3.8%)明显下降(P<0.01),线粒体膜电位(0.182±0.023)明显升高(P<0.01);而假手术组神经细胞凋亡率(5.8%±1.8%)和线粒体膜电位(0.331±0.016)与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论海风藤可以减轻脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡,并对线粒体膜电位有稳定作用,可以保护缺血脑组织。     

芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因的影响

目的 探讨芍药苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血区神经元凋亡的影响.方法 建立大鼠MCAO模型模拟局灶性脑缺血再灌注损伤,观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤后动物的神经行为学评分;TUNNEL法检测神经元凋亡的数量改变;用WESTERBLOT法及免疫组化法检测β-P38、Fas的表达改变.结果 假手术组无神经行为改变,各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组(P<0.01),用药组间无统计学意义.与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性细胞及Fas阳性细胞增多(P<0.01).与模型组相比,各用药组TUNEL阳性神经细胞及Fas阳性细胞表达明显减少(P<0.01).大鼠脑缺血再灌注后脑组织磷酸化P38蛋白表达明显增加,注射药物后蛋白磷酸化被抑制,表达减少.结论 芍药苷可改变大鼠脑缺血后的神经行为,抑制P38蛋白的表达,下调Fas蛋白表达,有抗神经元凋亡作用.     

海风藤对局灶性脑缺血治疗作用的实验研究

目的：探讨海风藤提取物对老龄大鼠局灶性脑缺血的治疗作用。方法：建立光化学诱导的老龄大鼠局灶性脑缺血模型，利用TTC染色、HE染色、TUNEL标记、原位分子杂交观察海风藤提取物对缺血灶大小、血脑屏障、缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞及P53基因表达变化的影响。结果：海风藤治疗组大鼠局灶性脑缺血后血脑屏障破坏明显减轻，缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞及P53阳性细胞的数量较未干预组显著减少，梗死灶直径也有减少的趋势。结论：海风藤具有抵抗缺血后神经细胞DNA损伤，减轻迟发性神经元死亡及神经细胞坏死．对缺血性脑组织有保护作用。     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的影响

目的 研究丹红注射液对脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(AIF)表达及神经元凋亡的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、局灶性脑缺血再灌注组(对照组)、丹红注射液治疗组(治疗组),改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,各组分别于1 d、3 d、5 d取脑组织,测定AIF及神经元凋亡的变化.结果 治疗组大鼠脑组织AIF及神经元凋亡在造模后的1 d、3d、5 d均明显低于对照组(P<0.05).结论 丹红注射液可通过抑制AIF的表达,减少神经元的凋亡,对大鼠脑缺血再灌注具有脑保护作用.     

脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡与Bcl-2和caspase-3的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及其与Bcl-2和caspase-3基因表达的关系。方法应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化与Bcl-2mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果(1)脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24h达高峰，2d开始下降，14d时仍高于假手术组。(2)脑缺血再灌注2h后，神经细胞Bel-2 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，12～24h达高峰，2d后逐渐下降，至14d略高于假手术组。(3)脑缺血再灌流后，神经细胞caspase-3 mRNA的表达与Bcl-2m RNA的表达规律相似，但于再灌流24h达高峰。结论脑缺血再灌流后，缺血周围区神经细胞的凋亡是-个动态的渐进过程，Bel-2基因表达可能抑制细胞凋亡，caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。     

瑞舒伐他汀对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及凋亡诱导因子表达的影响

目的观察瑞舒伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响,探讨瑞舒伐他汀的神经保护机制。方法选择健康雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、模型组(缺血再灌注损伤)和瑞舒伐他汀组,每组24只,每组又分为脑缺血再灌注后12、24、72h3个时间点,剔除造模过程中死亡的大鼠,每个时间点随机选取6只大鼠。分别取大鼠脑组织,检测神经细胞凋亡数和AIF蛋白阳性细胞数。结果模型组和瑞舒伐他汀组大鼠再灌注12、24、72h神经细胞凋亡数和AIF蛋白阳性细胞数表达较假手术组明显增加,而瑞舒伐他汀组神经细胞凋亡数[(47.12±6.15)个vs(67.31±20.12)个,(34.94±8.47)个vs(62.03±8.71)个,(24.02±7.02)个vs(56.63±6.72)个]和AIF蛋白阳性细胞数[(31.01±10.22)个vs(45.12±8.54)个,(22.93±6.97)个vs(37.34±8.38)个,(15.92±6.01)个vs(30.71±4.86)个]较模型组明显降低(P<0.01)。结论瑞舒伐他汀对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其作用机制可能与抑制AIF蛋白、对抗细胞凋亡有关。     

脑缺血再灌注后bcl-2、caspase-3 mRNA水平表达与大脑皮质及纹状体区炎性细胞浸润

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后bcl-2蛋白、caspase-3 mRNA的表达及炎性细胞浸润与神经细胞凋亡的关系。方法将54只Wistar大鼠随机分为二组：假手术组，缺血再灌注组。采用原位末端标记(TUNEL)、免疫组化和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌注后不同时间点神经细胞凋亡及损伤的变化与bcl-2、caspase-3 mRNA表达。结果bcl-2表达于缺血再灌注12～24h达高峰，再灌注2—4d呈下降趋势，至16d略高于假手术组；caspase-3 mRNA于缺血再灌注12—24h达高峰，2—4d呈降低趋势，至16d略高于假手术组。结论脑缺血再灌注后细胞凋亡介导神经细胞损伤、坏死是一个渐进的动态演变过程。bcl-2蛋白、caspase-3 mRNA表达在抑制细胞凋亡和介导神经细胞损伤等方面起非常重要的作用。