白念珠菌菌血症诱导小鼠皮质胸腺细胞凋亡

采用白念珠菌诱导小鼠胸腺内细胞凋亡 ,对其发生部位和累及的胸腺内细胞表型进行了研究。结果发现 :静脉注射白念珠菌入小鼠体内 6h后 ,开始出现胸腺细胞凋亡 ;1 2h ,1 8h和 2 4h胸腺凋亡细胞百分率不断增加 ;CD3+和CD8+细胞百分率均较对照组有明显的下降 ;胸腺内细胞凋亡主要发生在皮质区 ,而髓质区则少。表明白念珠菌能诱导小鼠胸腺细胞凋亡 (主要是未成熟CD3+CD4+CD8+细胞及少量成熟的CD3+CD4- CD8+细胞 )     

糖皮质激素诱导特发性血小板减少性紫癜患儿外周血淋巴细胞凋亡的体外研究

为探讨糖皮质激素对儿童急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用,对6例初诊儿童AITP外周血淋巴细胞进行糖皮质激素、糖皮质激素受体拮抗剂(RU486)等体外干预培养,用流式细胞术检测细胞凋亡,以凋亡率为定量指标,用DNA电泳对细胞凋亡进行定性分析.结果显示糖皮质激素组的淋巴细胞凋亡率明显高于对照组和经RU486预处理组,具有显著性差异;糖皮质激素组细胞的DNA电泳呈现清晰的"梯状"(1adder)条带,而对照组和RU486预处理组均未出现,提示糖皮质激素可诱导淋巴细胞凋亡,这一作用可被其受体拮抗剂阻断,说明糖皮质激素诱导AITP外周血淋巴细胞凋亡可能是通过糖皮质激素受体途径来实现的.     

糖皮质激素诱导特发性血小板减少性紫癜患儿外周血淋巴细胞凋亡的体外研究

为探讨糖皮质激素对儿童特发性血小板减少性紫癜（AITP）外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用。对6例初诊儿童ATIP外周血淋巴细胞进行糖皮质激素、糖皮质激素受体拮抗剂（RU486）等外体干预培养,用流式细胞术检细胞凋亡,以凋亡率为定量指标,用DNA电泳对细胞凋亡进行定性分析。结果显示：糖皮质激素组的淋巴细胞凋亡率明显高于对照组和经RU486预处理组,具有显著性差异;糖皮质激素组细胞的DNA电泳呈现清晰的“梯状”（ladder)条带,而对照组和RU486预处理组均未出现,提示糖皮质激素厅诱导淋巴细胞凋亡,这一作用可被其受体拮抗剂阻断,说明糖皮质激素诱导ATIP外周血淋巴细胞凋亡可能是通过糖皮质激素受体途径来实现的。     

鼠源性单克隆抗体F(ab′)2片段制备工艺

目的制备符合临床应用质量标准的鼠源性mAb F(ab′)2片段.方法采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体,疏水作用色谱法纯化F(ab′)2片段的新工艺,替代原有的木瓜蛋白酶消化IgG,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺.结果新工艺所制备的F(ab′)2 片段经SDS-PAGE检测纯度达98%以上,ABC免疫组化法测定免疫活性为1∶8000,回收率大于 50%,核酸含量及热原均合格,整个工艺流程可在48 h内完成.结论新工艺制备人用鼠源性mAb F(ab′)2片段更简便高效、安全实用,能够适应中试放大及大规模生产的要求.     

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2 F(ab')2片段的特性

目的:研究经无花果蛋白酶酶切后所得的抗总黄曲霉毒素单抗2G2F(ab′)2片段的特性,为研制开发特异性、灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型单克隆、多克隆抗体提供科学依据。方法:在制备出抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2株及其2G2F(ab′)2片段的基础上,采用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(非还原SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)对单抗2G2及其F(ab′)2片段的特性进行研究并加以比较。结果:单抗2G2F(ab′)2片段和单抗2G2的相对分子质量分别为105000和180000。单抗2G2F(ab′)2片段和单抗2G2的比效价分别为3.33和1.25。单抗2G2F(ab′)2片段的最低检出限和达到50%竞争抑制率时的检出限分别为0.17μg/L和0.67μg/L,单抗2G2的分别为0.47μg/L和1.92μg/L。单抗2G2F(ab′)2片段的亲和力常数为2.95×10-9mol/L,单抗2G2的亲和力常数为1.52×10-10mol/L。结论:单抗2G2F(ab′)2片段灵敏度优于完整抗体,可利用其生产特异性和灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型多克隆和单克隆抗体。     

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2 F(ab'')2片段的特性

目的:研究经无花果蛋白酶酶切后所得的抗总黄曲霉毒素单抗2G2 F(ab′)2片段的特性,为研制开发特异性、灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型单克隆、多克隆抗体提供科学依据.方法:在制备出抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2株及其2G2 F(ab′)2片段的基础上,采用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(非还原SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)对单抗2G2及其F(ab′)2片段的特性进行研究并加以比较.结果:单抗2G2 F(ab′)2片段和单抗2G2的相对分子质量分别为105 000和180 000.单抗2G2 F(ab′)2片段和单抗2G2的比效价分别为3.33和1.25.单抗2G2 F(ab′)2片段的最低检出限和达到50%竞争抑制率时的检出限分别为0.17 μg/L和0.67μg/L,单抗2 G2的分别为0.47 μg/L和1 92 μg/L.单抗2G2 F(ab′)2片段的亲和力常数为2.95×10-9 mol/L,单抗2G2的亲和力常数为1.52×10-10 mol/L.结论:单抗2G2 F(ab′)2片段灵敏度优于完整抗体,可利用其生产特异性和灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型多克隆和单克隆抗体.     

抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其F(ab′)_2与Fab′片段的抗肿瘤作用

目的研究抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其F(ab′)2、Fab′片段对小鼠肝癌22(H22)及小鼠Lewis癌肺转移的治疗作用。方法ELISA实验检测3G11及其片段与多种肿瘤细胞及Ⅳ型胶原酶的免疫反应性,明胶酶谱法测定其对HT-1080细胞分泌Ⅳ型胶原酶活性的影响,MTT法测定其对H22细胞的细胞毒作用。用小鼠肝癌22及小鼠Lewis肺癌模型评价单抗3G11及其片段抑制肿瘤生长及抗肿瘤转移活性。结果单抗3G11及其片段对多种肿瘤细胞及Ⅳ型胶原酶均呈阳性反应,单抗3G11抑制肿瘤细胞HT-1080分泌Ⅳ型胶原酶的活性。单抗3G11对H22细胞有微弱的细胞毒作用。单抗3G1130mg/kg对小鼠移植性肝癌的抑制率为51·8%,F(ab′)210mg/kg为49·9%,Fab′20mg/kg为39·3%。F(ab′)2片段10mg/kg对小鼠Lewis癌肺转移的抑制率为76%。结论抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其片段对小鼠移植性肝癌22生长以及对小鼠Lewis癌肺转移有中度抑制作用,可能用于研制抗体靶向药物。     

米非司酮对体外培养人蜕膜细胞的影响

米非司酮（mifepristone，RU486）是一种强有力的抗孕激素和抗糖皮质激素的甾体化合物，主要应用于终止妊娠、避孕和抗肾上腺皮质功能亢进等方面。目前认为RU486对孕激素受体有较强的亲和力，形成RU486-孕激素受体复合物，在受体水平特异性阻断孕酮的作用，引起蜕膜退变。我们动物实验结果显示了RU486强有力的抗妊娠作用，尤其是抗中期妊娠效果更显著，并提示蜕膜组织可能是RU486抗妊娠作用的主要靶器官和细胞[1]。为进一步证实上述观点，本工作应用体外细胞培养方法研究RU486对人蜕膜细胞的影响，为进一步阐明药物作用机制提供依据。…     

131I标记的一种抗植物蛋白抗体及其片段在荷瘤小鼠体内的分布

目的研究131碘标记的抗植物蛋白抗体(131I-anti-plant protein antibody,131I-APPAb)及其片段[131I-F(ab′)2]在荷瘤小鼠体内的生物学分布.方法氯胺-T法将131I标记于APPAb及F(ab′)2分子上.成年昆明种小鼠,于前肢根部皮下接种H22肝癌瘤细胞使其荷瘤,随机分组.尾静脉注射131I-APPAb或131I-F(ab′)2 185KBq(0.2ml*每鼠).于注药后12、24和48 h分别处死动物,取血液、心、肝、脾、肾、肌肉和肿瘤组织,用r计数器测量各组织放射性.结果各组织中以肿瘤组织放射性摄取率(%ID*g-1)最高,不同组不同时相131I-F(ab′)2的%ID*g-1均高于131I-APPAb,而且131I-F(ab′)2的摄取速度也较131I-APPAb快,12 h即达到最大值,131I-APPAb则需48 h.肿瘤组织对正常组织的摄取比值(T/NT)在3～6之间.血液中的放射性浓度较高,T/NT比值也低.结论肿瘤组织中131I-APPAb和131I-F(ab′)2的摄取明显高于正常组织,131I-F(ab′)2的摄取速度快,这为肿瘤的免疫诊断和免疫治疗研究提供一种新途径.     

^131Ⅰ标记的一种抗植物蛋白抗体及其片段在荷瘤小鼠体内的分布

目的研究131碘标记的抗植物蛋白抗体(131I-anti-plant protein antibody,131I-APPAb)及其片段[131I-F(ab′)2]在荷瘤小鼠体内的生物学分布.方法氯胺-T法将131I标记于APPAb及F(ab′)2分子上.成年昆明种小鼠,于前肢根部皮下接种H22肝癌瘤细胞使其荷瘤,随机分组.尾静脉注射131I-APPAb或131I-F(ab′)2 185KBq(0.2ml*每鼠).于注药后12、24和48 h分别处死动物,取血液、心、肝、脾、肾、肌肉和肿瘤组织,用r计数器测量各组织放射性.结果各组织中以肿瘤组织放射性摄取率(%ID*g-1)最高,不同组不同时相131I-F(ab′)2的%ID*g-1均高于131I-APPAb,而且131I-F(ab′)2的摄取速度也较131I-APPAb快,12 h即达到最大值,131I-APPAb则需48 h.肿瘤组织对正常组织的摄取比值(T/NT)在3～6之间.血液中的放射性浓度较高,T/NT比值也低.结论肿瘤组织中131I-APPAb和131I-F(ab′)2的摄取明显高于正常组织,131I-F(ab′)2的摄取速度快,这为肿瘤的免疫诊断和免疫治疗研究提供一种新途径.     

含有RU486诱导系统的IL-2基因表达质粒的构建及功能鉴定

目的： 构建含有RU486诱导系统的小鼠白细胞介素2 (IL-2) 基因表达质粒,研究RU486系统对IL-2基因表达的调控作用。方法： 用限制性内切酶Cla Ⅰ处理含有RU486诱导系统的质粒pRS17和编码IL-2基因的质粒pUC57-IL-2,将IL-2基因插入到pRS17构建pRS-IL-2;通过PCR及限制性酶切鉴定重组质粒;将重组质粒体外转染SMMC-7721细胞,用不同浓度的RU486进行处理;将重组质粒通过水流动力学注射法注射到小鼠体内,腹腔注射RU486进行诱导;通过ELISA方法检测细胞上清及血清中IL-2基因的表达。结果： 重组质粒pRS-IL-2经过限制性内切酶消化及PCR分析,显示了预期的片段。细胞在1×10-8 mol?L-1的RU486诱导下,IL-2表达水平最高,是无RU486组的1.95倍（P<0.001）。注射质粒后,接受RU486诱导的小鼠血清中IL-2水平较诱导前升高320倍,而未接受RU486的小鼠血清未检测到IL-2的表达。结论：成功构建了含有RU486诱导系统的IL-2基因表达质粒,IL-2基因的表达依赖于诱导剂RU486的存在。     

BABL/c小鼠腹腔B-1a细胞对抗原刺激的增殖和凋亡反应

 目的 研究Babl/C小鼠腹腔B-1a细胞对抗原F(ab’)2GαMIgM刺激的增殖和凋亡反应。方法 腹腔灌洗获得Babl/C小鼠腹腔细胞，CD90免疫磁珠阴性选择继以CD5免疫磁珠阳性选择纯化B-1a细胞，以不同浓度的F(ab’)2GαMIgM（0，5，10，20，40μg/mL）处理，分别培养24h,48h,72h后，用噻唑蓝测定其增殖反应，Annexin－Ⅴ法测定其凋亡。结果 与空白对照组相比，接受抗原刺激的B-1a细胞的增殖反应明显减弱，同时凋亡增加，抗原F(ab’)2GαMIgM浓度20μg/mL时的效应趋向最大，并且在24h，48h，72h各个时间段无明显区别。结论Babl/C小鼠腹腔 B-1a细胞接受抗原刺激后，不表现出增殖反应，反而启动凋亡。     

~(99m)Tc-C_(50)-F(ab′)_2放射免疫显像早期诊断卵巢癌的实验研究

【目的】探讨单克隆抗体 (McAB)的F(ab′) 2 片段在卵巢癌放射免疫显像诊断中的应用价值。【方法】利用胃蛋白酶消化抗癌胚抗原单克隆抗体 (C50 ) ,酶切产物经SDS PAGE电泳鉴定后 ,经SephadexG 10 0凝胶柱纯化 ,获得F(ab′) 2 片段。分别将99mTc标记的C50 ,F(ab′) 2 及正常鼠IgG行荷人卵巢癌裸鼠移植瘤放免显像 ,并比较其结果。【结果】①片段F(ab′) 2 的产率为 33%± 3 2 % ,其最大理论产率的 49%。酶联免疫吸附方法和免疫细胞化学染色均证实其保留较好的免疫活性。② 2 4h放射免疫显像可见片段组移植瘤部位有较高浓度的放射性物质聚集 ,肿瘤与非肿瘤组织放射性活度之比 (T/NT)片段组最高。【结论】利用单克隆抗体片段进行放免显像 ,效果优于全抗体。     

抗内毒素鸡蛋黄抗体F(ab′)_2制备

目的研究抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白(IgY)用胃蛋白酶切后提取的F(ab′)2片段,探索防治内毒素血症的新途径。方法用内毒素(LPS)作抗原免疫25周龄leghorn鸡,改良水溶法提取抗内毒素IgY,胃蛋白酶切后提取IgY F(ab′)2段,光密度法测抗内毒素IgY F(ab′)2浓度和含量、ELISA检测抗内毒素IgY F(ab′)2效价,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度。结果抗内毒素IgY F(ab′)2含量为1.04mg/ml蛋黄液,效价为1∶25600,纯度为90%,相对分子质量为24000。结论抗内毒素IgY F(ab′)2产量大、效价高、特异性强。     

地塞米松对人卵巢癌细胞糖皮质激素受体的调节

目的：观察地塞米松调节人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖分化的作用机制及3AO细胞中糖皮质激素受体（GR）的表达。方法：①采用氨基安替比林法测定糖皮质激素受体拮抗剂（RU486）作用3AO细胞后阻断糖皮质激素的效应；②采用放射配体结合分析法检测3AO细胞中GR的表达；③采用定量RT-PCR法检测地塞米松对3AO细胞中GR的调节作用。结果：①RU486可完全阻断地塞米松对3AO细胞活性的诱导作用；②3AO细胞中存在高亲和力、低容量糖皮质激素受体；③地塞米松使GR结合活性明显降低，且具有时间依赖性。结论：3AO细胞中存在GR，地塞米松调节3AO细胞增殖分化的作用由GR介导，地塞米松可向下调节3AO细胞GR的结合活性，且具有时间依赖性。     

抗HCG抗体IgG-F(ab’)_2对HCG所致小鼠子宫效应的中和作用

以小鼠子宫增重法及子宫的组织学检查对抗HCG抗体IgG—F(ab’)_2对HCG的中和作用进行了研究。当用低稀释度F(ab’)_2片段进行中和时,子宫未出现有意义的子宫增重及内膜增生,当用较高稀释度F(ab’)_2片段进行中和时,子宫内膜呈高度水肿、充血及炎细胞浸润,腺体也未见明显增生。本文结果指出,抗HCG抗体与HCG发生中和作用时,抗体的Fc段是不需要的。     

抗抗总黄曲霉毒素单抗F(ab’)2多克隆抗体的制备及特性

目的:以抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段作为免疫原制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。方法:制备抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段,分别用F(ab’)2片段和F(ab’)2-KLH免疫日本大耳白兔,制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。采用ELISA检测该抗体替代黄曲霉毒素B1(AFB1)的情况,并分析与其他单克隆抗体的交叉反应情况。用该多克隆抗体免疫BALB/C小鼠,采用间接非竞争ELISA检测小鼠血清,鉴定该抗体的亚型。结果:由2G2株F(ab’)2片段所得的抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体纯化后,替代游离AFB1达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和25mg/L,分别相当于0.47、2.74和16.00μg/L游离AFB1;该抗体替代AFB1包被抗原达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和19mg/L,分别相当于0.33、1.35和5.45μg/L游离AFB1。小鼠生物鉴定显示该多克隆抗体为Ab2β型。结论:成功制备了抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体,为研制AFB1无毒检测试剂盒提供了依据。     

同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植诱导T细胞免疫耐受的实验研究

目的 探讨同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植诱导移植免疫耐受而不发生自身免疫性疾病的可行性。方法 BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺建立异种、同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。4个月后，用流式细胞仪技术检测受者裸小鼠外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞，用单向混合淋巴细胞培养了解受者T细胞对ConA以及同种异种淋巴细胞的反应性，异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。用ELISA法检测受体血清中抗DNA自身抗体。结果 胎胸腺移植4个月后，受者裸小鼠中CD3^＋CD4^＋T细胞重建良好；T细胞对ConA以及无关的SD鼠异种淋巴细胞的反应性强，而对移植胸腺供体来源的淋巴细胞不发生增殖反应；受者对移植胸腺供体来源鼠皮肤移植物不发生排斥，而对无关的SD鼠皮肤移植物发生排斥。异种胸腺移植组发生消耗性疾病死亡高，抗DNA自身抗体明显高于混合胸腺移植组。结论 同系或同种异种胎胸腺混合移植可诱导受者T细胞对供者移植物的免疫耐受。     

移植免疫耐受中调节性B细胞与调节性T细胞的依赖性关系研究

目的 探讨在联合抗Tim-1/抗CD45RB抗体诱导的移植耐受中调节性B细胞(Bregs)与调节性T细胞(Tregs)的关系.方法 建立BALB/c小鼠到C57BL/6小鼠的同种胰岛移植长期耐受模型,将长期耐受小鼠(LTS)的B细胞过继输注至接受胰岛移植的B细胞缺陷小鼠(μMT-/-)体内,或加用抗CD25抗体(PC61)去除CD25+ Treg细胞,观察移植物的存活时间,用流式细胞仪检测Foxp3+ Treg数量变化.将CD4+ Foxp3-GFP-T细胞与Bregs细胞联合过继输注RAG小鼠体内,检测Foxp3+GFP+T细胞的扩增情况.建立小鼠皮肤移植模型,在双抗体治疗的同时加用抗CD20抗体祛除B细胞,观察对Tregs数量的影响.结果 继承性转移长期耐受小鼠的Bregs可诱导83.3％的小鼠长期耐受,但加用抗CD25单抗后,胰岛移植物在较短时间(MST=20 d)内全部被排斥;继承性转移长期耐受小鼠Bregs可使Tregs数量明显增加(P＜0.01),并且可诱导CD4+ Foxp-T细胞表达Foxp3;用抗CD20抗体祛除B细胞后,双抗体诱导的皮肤移植受体小鼠体内Tregs数量明显减少(P＜0.01).结论 在双抗体诱导的移植耐受中,Bregs可能通过促进Tregs生成而延长移植物的存活.     

抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2的制备

目的：制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F（ab′）2。方法：以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F（ab′）2片段,以免疫扩散实验检测抗体F（ab′）2片段的特异性,以小鼠中和试验测定其中和竹叶青蛇毒的能力。结果：纯化得到的F（ab′）2活性片段纯度可达90%;F（ab′）2冻干品与竹叶青蛇毒在8∶1时出现免疫沉淀线,在20∶1时可保护小鼠100%存活。结论：纯化得到的抗体F（ab′）2活性片段对竹叶青蛇毒具有较好的中和能力。